养细胞的心得
细胞培养毕业实习报告总结

毕业实习报告总结:细胞培养首先,我要感谢我的导师和实验室的同事们,他们在我的实习期间给予了我无私的帮助和指导。
通过这次实习,我对细胞培养这一领域有了更深入的了解,也积累了宝贵的实践经验。
细胞培养是生物医学和生物技术领域中重要的实验技术,它通过模拟细胞在体内的生长环境,使细胞在体外继续生长和繁殖。
在实习期间,我学习了细胞培养的基本原理和操作技术,包括细胞的复苏、传代、胰蛋白酶消化、细胞计数、铺板等步骤。
我也了解了细胞培养中常用的仪器设备,如二氧化碳培养箱、显微镜、细胞计数仪等。
在实习过程中,我不仅掌握了细胞培养的基本技能,还参与了一些具体的实验项目。
我参与了一项关于细胞凋亡的研究,通过细胞培养技术,我成功地培养了所需细胞,并进行了凋亡实验。
通过观察细胞形态的变化和流式细胞术的分析,我得出了实验结果,并协助导师进行了数据分析和论文撰写。
这个过程中,我不仅学习了实验设计和数据分析的方法,还提高了自己的实验操作能力。
在实习期间,我也遇到了一些挑战和困难。
例如,细胞培养过程中细胞的生长速度较慢,有时需要耐心等待。
另外,细胞的复苏和传代过程中,也有一些技巧需要掌握。
通过请教导师和同事,我逐渐克服了这些困难,并取得了较好的实验结果。
通过这次实习,我不仅学到了专业知识和技能,还锻炼了自己的团队合作和沟通能力。
在实验室中,我与同事们共同合作,互相学习和帮助。
我们也定期进行实验室会议,分享实验进展和心得体会,这让我感受到了团队合作的重要性。
总之,这次细胞培养实习是一次非常宝贵的学习经历。
我不仅掌握了细胞培养的基本技能,还参与了一些具体的实验项目,并取得了较好的研究成果。
同时,我也学会了团队合作和沟通的能力。
我相信这次实习对我未来的学术研究和职业发展将产生积极的影响。
细胞实训报告心得体会

一、前言细胞是生物体的基本结构和功能单位,是生命现象的基础。
细胞生物学是研究细胞的结构、功能、发生、发育和相互作用的科学。
细胞实训作为生物学专业学生的必修课程,旨在让学生通过实践操作,加深对细胞生物学知识的理解和掌握。
本文将从实训过程、收获体会和反思改进三个方面,详细阐述细胞实训的心得体会。
二、实训过程1. 实训准备在实训开始前,我们首先对细胞生物学的基本概念、细胞结构、细胞功能等理论知识进行了复习和预习。
同时,我们了解了实训所需的仪器设备、试剂和实验步骤,为实训做好充分准备。
2. 实训操作(1)细胞观察在实训过程中,我们首先进行了细胞观察实验。
通过使用显微镜观察各种细胞样本,如口腔上皮细胞、红细胞、白细胞等,我们对细胞的基本结构有了直观的认识。
在观察过程中,我们学会了如何调整显微镜的焦距和光圈,以及如何观察细胞的形态、大小、结构等特征。
(2)细胞培养接着,我们进行了细胞培养实验。
在无菌操作条件下,我们接种了细胞,观察了细胞的生长、分裂和衰老过程。
通过实验,我们掌握了细胞培养的基本操作,如培养基配制、细胞接种、细胞传代等。
(3)细胞分子生物学实验在细胞分子生物学实验中,我们进行了DNA提取、PCR扩增、Western blot等实验。
通过这些实验,我们了解了细胞内DNA、RNA、蛋白质等分子的提取、纯化和检测方法,以及基因表达调控的分子机制。
3. 实训总结在实训结束后,我们进行了实验报告的撰写,总结实训过程中的收获和体会。
同时,我们还对实验中遇到的问题进行了讨论和交流,为今后的学习和研究奠定了基础。
三、收获体会1. 提高了实验技能通过细胞实训,我们掌握了细胞生物学实验的基本操作,如细胞观察、细胞培养、细胞分子生物学实验等。
这些实验技能对于今后从事生物学研究具有重要意义。
2. 深化理论知识细胞实训使我们对细胞生物学的基本概念、细胞结构、细胞功能等理论知识有了更深入的理解。
通过实验操作,我们将理论知识与实际应用相结合,提高了学习的兴趣和效果。
细胞治疗感悟心得体会(3篇)

第1篇随着科技的飞速发展,医学领域也取得了显著的进步。
近年来,细胞治疗作为一种新兴的治疗方法,逐渐受到了广泛关注。
我有幸参与了一次细胞治疗的实践,这次经历让我对细胞治疗有了更深刻的认识,以下是我的一些感悟和心得体会。
一、细胞治疗的神奇魅力细胞治疗是一种利用患者自身或异体的正常细胞,通过体外培养、扩增、诱导分化等手段,使细胞具有特定的生物学功能,从而修复受损组织、治疗疾病的方法。
在这次实践中,我见证了细胞治疗的神奇魅力。
1. 治疗效果显著细胞治疗具有高度的针对性和个性化特点,能够针对患者的具体病情制定治疗方案。
在实践过程中,我们观察到许多患者在接受细胞治疗后,病情得到了明显改善,生活质量得到了提高。
这让我深刻认识到,细胞治疗在治疗某些疾病方面具有独特的优势。
2. 安全性高与传统治疗方法相比,细胞治疗具有较低的不良反应和副作用。
这是因为细胞治疗主要利用患者自身的细胞,避免了免疫排斥等风险。
在实践过程中,我们发现患者在接受细胞治疗后,并未出现明显的副作用,安全性较高。
3. 潜在应用前景广阔细胞治疗具有广泛的应用前景,包括神经系统疾病、心血管疾病、免疫系统疾病、肿瘤等。
随着研究的深入,细胞治疗有望在更多领域发挥重要作用,为患者带来福音。
二、细胞治疗实践中的感悟1. 团队协作的重要性细胞治疗是一个复杂的系统工程,涉及细胞培养、基因工程、免疫学等多个领域。
在实践过程中,我深刻体会到团队协作的重要性。
只有各个部门紧密配合,才能确保细胞治疗的成功。
2. 科学严谨的态度细胞治疗是一门严谨的学科,要求研究人员具备扎实的理论基础和丰富的实践经验。
在实践过程中,我学会了如何严谨对待每一个实验步骤,确保实验结果的准确性和可靠性。
3. 患者关爱细胞治疗旨在为患者带来福音,因此,关爱患者是每位研究人员应尽的责任。
在实践过程中,我学会了如何与患者沟通,了解他们的需求,为他们提供心理支持和帮助。
三、细胞治疗的未来展望1. 技术创新随着科学技术的不断发展,细胞治疗技术将不断优化,如基因编辑、干细胞培养等技术将为细胞治疗提供更多可能性。
细胞培养心得

养了很久的细胞,有一些经验和体会总结一下,和大家分享一下。
关于如何把细胞养的形态很好更漂亮。
1.不同的细胞,喜欢的环境是不一样的。
这个不仅仅是说培养基的不同,还有就是细胞生长的空间密度问题。
有一些细胞是数量多一点比较好生长,生长状态也比较好。
这种一般是属于生长速度慢的细胞。
譬如内皮细胞。
而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好,譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。
尤其是巨噬细胞,生长速度非常得快,贴壁速度很快,所以传代时就应该留很少量的细胞,这样细胞状态会比较好。
并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长,而堆与堆之间是有空间的。
如果长成相连在一起的一满片的时候,细胞形态基本上就会差了,老化的会比较多,对后期实验结果是不好的。
所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。
2.对于有些人总是会遇到养的细胞形态怎么都不好的问题。
这个其实是有一个方法可以改善的。
对于贴壁细胞,如果细胞形态不好,(或者细胞形态不清晰,表面似有异物等)可以在传代的时候进行如下操作:首先,倒掉旧的培养基,加入3ml新的培养基(有无血清的都可)洗涤一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培养基,进行预吹打,控制吹打力度,轻轻地大概沿着瓶底过一遍,然后吸走。
这时侯再开始正式的消化、吹打。
(巨噬细胞我们只吹打,不消化的)其次,把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内,培养瓶事先加入培养基,放入培养箱内培养,按时间点观察细胞贴壁情况。
10分钟观察一次,20分钟,30分钟观察一次。
选择一个时间点,已经有部分细胞贴壁的情况下,重新置于洁净台,底面朝上迅速倒出其中的培养基,加入3ml 新培养基再轻轻洗一次。
然后加入完全培养基培养。
后续观察细胞生长情况以及形态。
我称之为“二传”。
呵呵。
如果一次效果还不理想,可重复多次。
直到找到细胞完美形态。
其中要注意,结合细胞喜欢的生长情况。
喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。
反之亦然。
这个是我师兄发明的,谢谢他了。
细胞培养心得

目录293和293T293T细胞的培养心得293T细胞的培养与传代Jurcat细胞的传代悬浮细胞培养方法Jurcat细胞培养方法293T细胞的培养心得点击次数: 12 发表于:2008-08-24 23:25转载请注明来自丁香园来源:丁香园293T细胞差点被我养死,幸好我又将它起死回生,一点心得。
细胞传代:当细胞在细胞培养瓶内长满达到80%时就要传代,一传二,24小时后再传代。
48小时传就不好了,如果在24小时后细胞没有长到80%,应该换新的培养基,不然,培养基变黄,细胞脱落。
细胞消化:将细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清),混匀,不能吹打,分装2瓶,如果细胞没长满就脱落,则只需加入5mlMEM,不分装。
如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固,培养基上清没有细胞脱落碎片,且细胞长满达到80%以上,吸走培养基,加入5ml 的PBS+EDTA(0.02%),迅速轻微晃动,竖立培养瓶,吸走,加入1ml0.05%胰酶,37度消化不超过3min,细胞完全消化脱壁,取出加入10ml培养基轻微吸打混匀,分装2瓶。
培养基:MEM(GIBCO)+10%胎牛血清(杭州四季青)+双抗293T细胞的培养与传代点击次数: 24 发表于:2008-08-25 20:47转载请注明来自丁香园来源:丁香园293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。
大家注意293T细胞的一个重要特性:室温下不贴壁,但37度时可以重新贴壁。
我的293T细胞时老板从美国千里迢迢带回来的,当时正是冬天,老板把瓶子放在大衣口袋里在飞机上折腾了两天,等拿到实验室已经看不到贴壁的细胞了。
HEK293细胞培养心得

HEK293细胞培养心得首先,为了成功培养HEK293细胞,一个优良的细胞培养基是必不可少的。
一般来说,培养基应包含必需的营养物质,比如氨基酸、维生素、糖类和无机盐等。
同时,培养基还应该含有足够的抗生素以预防细菌和真菌的污染。
最好使用无血清的培养基,以避免动物源性成分对细胞培养的影响。
其次,准备一个合适的细胞培养环境也是至关重要的。
温度、湿度和二氧化碳浓度等条件应符合HEK293细胞的生长要求。
一般来说,细胞应在37°C的温度下培养,在5%的二氧化碳气氛中保持培养皿内的湿度。
细胞的传代是维持细胞活力和健康状态的重要步骤。
对于HEK293细胞,通常使用胰酶进行消化和洗涤来分离细胞。
对于细胞的新鲜分离,可以将细胞培养皿放入冰箱中进行预冷却,然后使用含有胰酶的PBS缓冲液进行洗涤。
定期检查细胞的密度和健康状况,并及时进行传代是非常重要的。
在培养细胞的过程中,细胞污染是一个常见的问题。
为了避免细菌和真菌的污染,可以在细胞培养过程中添加抗生素。
此外,操作时应注意细胞培养器具的无菌性,使用经过消毒的培养器具并保持培养环境的清洁是必要的。
细胞的冻存是为了保存和传递细胞的重要方法。
在将细胞冻存之前,应通过使用逐渐降低培养基中血清含量的方法适应细胞在无血清条件下生长。
然后使用冷冻保护剂配制适当的冻存液,将细胞分装到冻存管中,并使用液氮罐进行快速冷冻。
最后,定期检查细胞的健康和生长状态是维持细胞培养的重要步骤。
观察细胞的形态和贴壁情况,并使用显微镜检查细胞的活力和细胞数目。
如果细胞出现异常形态或生长减慢,可能是因为细菌或真菌污染,应及时采取相应的措施。
总之,HEK293细胞的培养需要一定的技巧和经验。
通过优化培养基、培养条件和消毒措施,加强细胞观察和细胞传代,可以有效地培养和维持HEK293细胞的活性和生长。
这些心得经验将有助于研究人员在实验室中更好地使用HEK293细胞进行相关研究。
细胞培养的注意事项

相关疾病:每天对待细胞比孝敬爹妈还用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丢了,培养细胞时有哪些惨痛经验教训可以分享呢?早走早脱身,从此专注黑生物1. 严格无菌操作,多喷喷酒精,要是对灭菌的东西不放心,自己包自己送自己烘干。
2. 不要和别人共用试剂耗材,自己准备一套。
3. 有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测。
4. 水浴锅很脏,生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏,勤换(灭菌水加进去)。
5. 晚上离开的时候最好给细胞房照紫外,超净台是用完就开。
6. 最好的是同一时间就你一个人在用细胞房在养细胞。
非科班出身经验分享1. 别怕浪费。
枪头什么的只要有可能污染就换,如果用酒精灯就什么都稍微烤一下,别直接放到火上,离一段距离。
2. 动作要既轻柔又有力。
动作太重会有一堆一堆的气泡,动作太轻就吹不下来... 刚开始的时候吹细胞太痛苦了,稍微一下就起泡。
后来就是吹的时候枪里的培养基不要一次全都压出来,留一点,枪的最头部尽量深的在液面以下。
3. 离开过操作台的东西再进操作台之前一定要用酒精喷一遍,包括一切实验耗材、仪器、以及你带着手套的手。
4. 实验结束后对实验台的消毒。
紫外什么的,用前用后都照个30 分钟。
5. 身体的各个部分尽量的少接触不需要接触的地方的地方。
比如实验台,又比如培养箱内部。
6. 细胞的密度根据细胞的性质、传代的时间以及自己的心情来定。
培养基的话最多最多不要超过2 天就要换一次。
细胞可以不传代,但是培养基是一定要换的。
大概就是,不该碰的地方不碰,有影响的地方少碰; 该使劲的时候绝对不含糊,不该使劲的地方一定忍住。
如果是比较简陋的操作台就一定要摆个酒精灯,所有操作紧密围绕在酒精灯周围进行。
如果是高级台子就多用酒精喷喷。
感觉生物的实验,心疼钱就还是不要做了。
最后一点点绝对非科班的经验。
癌细胞真是坚挺。
有一次实在是不想传了,放了 5 天吧,感觉都长了几层出来,培养基都黄了。
细胞培养入职培训心得体会

细胞培养入职培训心得体会细胞培养是生物医学实验中非常重要的一个环节,它对实验结果的准确性和可重复性有着至关重要的影响。
在我入职的第一个月,我接受了公司的细胞培养入职培训,通过授课和实际操作,我对细胞培养有了更加深入的认识和了解。
在培训的过程中,我不仅学到了细胞培养的基本理论和技术,还体会到了团队合作和沟通的重要性。
在这篇文章中,我将分享我在细胞培养入职培训中的心得体会。
在第一次接触细胞培养的时候,我对这个过程感到非常陌生。
虽然在学校里学过相关理论知识,但在实际操作中还是感到非常吃力。
因此,我对细胞培养的重要性产生了更加深刻的认识。
这也激发了我对细胞培养的学习热情,我希望通过这次培训,能够掌握细胞培养的基本技术,为日后实验工作的顺利开展打下坚实的基础。
培训的第一天,我们就开始了理论知识的学习。
导师详细讲解了细胞培养的流程、原理和注意事项,并且配以图文并茂的PPT,使我们更加直观的了解了这方面的内容。
在理论课上,我学到了许多新知识,例如:细胞的培养条件、培养环境的要求、细胞培养的基本流程等。
这些知识的学习使我对细胞培养有了一个全面的认识,也为后续的实际操作打下了良好的基础。
除了理论课,我们还进行了细胞培养实操课。
导师为我们带来了不同种类的细胞,通过操作视频和实际操作,在导师的指导下,我们逐步学会了细胞培养的基本技术。
例如:细胞的传代、培养基的配制、细胞的分离和传代等。
通过实操,我进一步加深了对细胞培养技术的理解,并且掌握了细胞培养的基本操作流程。
在实操课中,我最大的收获就是学会了严格控制细胞培养的条件。
比如,细胞培养必须在无菌操作条件下进行,培养皿和器具都必须经过高温高压消毒,培养基和培养液的配制也需要按照一定的比例和方法进行。
这些细节性的操作确保了细胞培养的可靠性和准确性。
此外,在细胞培养中,对于细胞的分代和传代也有着严格的要求。
要注意细胞的数量和活力,不可使细胞过度密集或过度释放,要及时传代,保证细胞在健康状态下进行培养。
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我养细胞1个月了,经历了失望-绝望-希望的过程,现在把学到的几点注意问题跟大
家分享一下,希望能够对新手们稍有帮助,也欢迎高手指教:
1. 细胞不要过度消化,有些贴壁不牢的如293T,加入胰酶在台子里晃晃就可以了,不用放到温箱中;
2. 传代时,细胞分的稀了或者分的不均匀,形成单细胞的克隆群,细胞就会长成密密麻麻的一群,如293T会成为小方块状,而不是正常的不规则形状,这时候,即使没有长满盘,也应该消化重新铺板。
3. 贴壁细胞的上清看起来清亮、颜色正常时,即使在镜下检测有些悬浮物,一般不是污染而是死细胞,尤其是复苏的细胞,由于有死细胞,会有很多悬浮物。
(我以前看
到有悬浮物就以为污染了,还倒掉了好不容易借来复苏的一盘细胞,后悔中)。
污染
了会看到明显的悬浊液。
4. 不能让培养基变色,稍微变黄就应该传代,如果没有长满,可以换液,但是如果变黄了,细胞就会皱缩,或者死亡,大批量的浮起来。
这时候就别挽救了。
5. 关于污染,刚开始做的时候,无论怎么小心,还是会莫名其妙的污染。
师姐说是人生必经阶段。
现在我也很赞同这个理论。
所以,绝望后别放弃才会有希望!
祝新手同志们都能顺利的迈出养细胞的第一步!
1、把泡玻璃器皿的酸配好,把装培养基的瓶子、移液管等都找齐,刷净,泡酸后,
再高压灭菌备用;细胞培养室、培养箱和超净台也要擦净,紫外线照过;
2、把培养基和胎牛血清准备好,如果是养原代的话,虽然成纤维细胞很好养,
但还是用进口的FBS比较好,成功率高;
3、如果是做原代的话,可以先练习取细胞的过程,熟练掌握,严格无菌;
4、把你实验所需的培养瓶、培养皿、或其他特殊需要的试剂都要事先找公司订
好,因为如果是进口试剂的话,国内代理那里又没有现货,则至少要一个月才能
到货。
2、细胞可是许多生物学实验的主角。
如果细胞心情不好,那么实验的结果也
不会好到哪儿去。
如何让细胞快乐?Enzo Life Sciences的科学家可有一套。
资深应用科学家Morgan Mathieu在此介绍了让细胞快乐的十个诀窍。
3、1.确保所有实验室材料都无菌
4、交叉污染是细胞培养的大敌。
即使是最轻微的污染,也可能毁了几个星期
的成果。
因培养箱内温暖潮湿,真菌极易生长,因此必须注意定期清洁。
此外,在将培养瓶、移液管及其他的相关物品放入超净台之前,应用酒精擦拭干净,以避免污染。
5、2.小心处理您的培养物
6、细胞培养的脆弱性怎么强调也不为过。
剧烈摇晃,或连续的温度波动可能
会对生长产生不利的影响。
确保培养箱是水平的,温度均一,且远离电动仪器。
此外,尽量避免一次处理多个细胞系,因为它可能会影响细胞的基因型和表型。
您还应定期完成STR图谱分析,以确认细胞系的身份。
7、3.在使用前正确解冻细胞
8、尽管解冻看起来是个简单的步骤,但必须操作得当,以免伤害细胞。
长时
间暴露在高温条件下会使细胞无法铺板。
因此,冻存管应当在37°C水浴中放置2分钟,然后用条件培养基稀释,以避免DMSO造成直接伤害。
9、4.使用对数生长期的细胞
10、细胞培养过程共有3个阶段:停滞期、对数期和平台期,分别代表了低
细胞生长、高细胞生长和无细胞生长。
最有活力的细胞是健康的,快速分裂的,在对数期以70-80%的汇合度存在。
11、 5.在传代之前不要让细胞完全汇合
12、汇合度是指贴壁细胞占据培养瓶表面积的比例。
完全汇合意味着100%
的表面都被贴壁细胞覆盖。
一定要避免这种状态,因为它意味着细胞不能继续生长。
不过,当务之急是使用活跃生长的细胞。
13、 6.选择最佳的培养基开发策略
14、在细胞培养过程中,培养基是控制产品质量、产量和成本的最重要因
素。
必须针对每种培养物来定制培养基,以优化实验结果。
在决定以哪种方式来开发您的培养基时,您有几个选择。
您可以购买现成的,自己开发,也
可以与另一家公司合作开发特定的培养基。
在这个过程中,您需要考虑时间和成本等因素。
15、7.配制干粉培养基时评估水的质量
16、液体培养基往往会带来比干粉培养基更高质量的结果。
这可能与水的质
量有关。
由于细菌在水中迅速生长,故需要监控内毒素及其他污染物。
商业公司有资源来监控和控制细菌生长,比如过滤器。
因此使用商业化生产的液体培养基会更加可靠一点。
17、8.利用细胞的代谢特性来优化培养基
18、分析使用过的培养基,有助于鉴定必要成分的代谢速率,包括氨基酸和
维生素。
从细胞生长阶段和蛋白生产阶段收集到的动态代谢图谱可用来平衡基础培养基和添加培养基,指导培养基的重点,有助于蛋白质的生产。
19、9.避免细胞的过度消化
20、胰蛋白酶通过消化负责让细胞与容器结合的蛋白质,而实现贴壁细胞的
传代。
如果细胞暴露在胰酶中时间太长,则胰酶将开始切割细胞表面蛋白,这会影响细胞行驶正常功能的能力。
21、10.培养基中不要一直使用抗生素
22、随着细胞培养物更加频繁地暴露在抗生素中,对抗生素有着天然耐药性
的菌株将开始出现。
这种现象可掩盖潜在的污染,这对实验是非常有害的。
23、本文转载自其他网站,不代表健康界观点。
养了很久的细胞,有一些经验和体会总结一下,和大家分享一下。
关于如何把细胞养的形态很好更漂亮。
请大家尊重自己的权利,请勿外传,外转!谢谢!
1.不同的细胞,喜欢的环境是不一样的。
这个不仅仅是说培养基的不同,还有就是细胞生长的空间密度问题。
有一些细胞是数量多一点比较好生长,生长状态也比较好。
这种一般是属于生长速度慢的细胞。
譬如内皮细胞。
而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好,譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。
尤其是巨噬细胞,生长速度非常得快,贴壁速度很快,所以传代时就应该留很少量的细胞,这样细胞状态会比较好。
并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长,而堆与堆之间是有空间的。
如果长成相连在一起的一满片的时候,细胞
形态基本上就会差了,老化的会比较多,对后期实验结果是不好的。
所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。
2.对于有些人总是会遇到养的细胞形态怎么都不好的问题。
这个其实是有一个方法可以改善的。
对于贴壁细胞,如果细胞形态不好,(或者细胞形态不清晰,表面似有异物等)可以在传代的时候进行如下操作:
首先,倒掉旧的培养基,加入3ml新的培养基(有无血清的都可)洗涤一次,用滴管吸走,然后再加入3ml 的培养基,进行预吹打,控制吹打力度,轻轻地大概沿着瓶底过一遍,然后吸走。
这时侯再开始正式的消化、吹打。
(巨噬细胞我们只吹打,不消化的)
其次,把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内,培养瓶事先加入培养基,放入培养箱内培养,按时间点观察细胞贴壁情况。
10分钟观察一次,20分钟,30分钟观察一次。
选择一个时间点,已经有部分细胞贴壁的情况下,重新置于洁净台,底面朝上迅速倒出其中的培养基,加入3ml新培养基再轻轻洗一次。
然后加入完全培养基培养。
后续观察细胞生长情况以及形态。
我称之为“二传”。
呵呵。
如果一次效果还不理想,可重复多次。
直到找到细胞完美形态。
其中要注意,结合细胞喜欢的生长情况。
喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。
反之亦然。
这个是我师兄发明的,谢谢他了。
这个方法真的很好用!
3.关于培养瓶内加入培养基的量的问题。
这个是要靠自己去摸索你所养的细胞的。
并不是小的玻璃方瓶12ml,大方瓶14ml的。
有些细胞反而是培养基少一点相反细胞形态会长得比较好。
(可能也是竞争很大,有优胜劣汰吧。
呵呵。
)对于生长速度快的细胞,易生长的细胞加少一点培养基细胞形态会更好。
但是要注意换液掌握。
4.关于选择培养瓶的问题。
个人发现生长速度快的细胞在玻璃瓶内生长的状态会比一次性塑料瓶相对好一些。
而对于同一种细胞,在其生长旺盛快速的时期在玻璃瓶内的生长状态也比塑料瓶内好。
这可能是因为塑料瓶比玻璃瓶更容易贴壁。
生长速度快的细胞在塑料瓶这种相对“更安逸”的环境里反而长得状态不如玻璃瓶好。
所以对于生长速度慢的细胞如果想要更漂亮的细胞状态,塑料瓶比玻璃瓶会好,对于生长速度慢的细胞,玻璃瓶则会更好。
同样,对于同一种细胞,在其生长速度慢的时候,塑料瓶会好一点,比如刚刚复苏的时候,或者原代培养的时候。
而在其生长旺盛的时候,玻璃瓶则相对会好一点。
呵呵,暂时有这么些经验总结,再想到的话会补充的。
有不对的地方还请斧正啊。
:-)。