噬菌斑测病毒滴度
噬菌斑测病毒滴度
⑤为当量浓度的二十分之一。在制碱与制碳酸氢铵中用以表示氨水的浓度。
⑥在免疫学中，指通过血清学方法能显示一定反应的抗体或抗血清的最高稀释倍数；如终点稀释度为1/100，则血清的效价（每1ml的血清中抗体效价）为100抗体单位。
⑦在病毒学中，指用噬菌斑方法测得的噬菌体浓度。 噬菌体的效价（滴度）就是一毫升培养液中所含活噬菌体的数量。
中文名：滴度
英文名：titer；titre
同义名：效价
符号：tt
效价测定的方法：
一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，噬菌体产生肉眼可见的噬菌斑，因此，能进行噬菌体的计数。但因噬菌斑计数方法其实际效率难以接近100%(一般偏低，因为有少数活噬菌体可能未引起感染)，所以为了准确地表达病毒悬液的浓度(效价或滴度)一般不用病毒粒子的绝对数目而是用噬菌斑形成单位(Plague-forming units，简写成pfu)表示。
6.6
弃6孔板内上清，快速加2ml上层琼脂，以防菌层干燥，静置10-20min使其凝固；
7.7
将6孔板放入27℃培养箱，培养4－10天；
8.8
计数板中噬菌斑，直至连续两天无变化，加1mg/ml中性红0.5ml，室温孵育2h后计数噬菌斑。
END
注意事项
病毒滴度（pfu/ml）=1/稀释倍数×噬菌斑数×1/每孔接种体积
杆状病毒滴度检测
实验概要
本实验介绍了检测病毒滴度的方法。
实验原理
根据噬菌斑数计算病毒滴度。
工具/原料
1. 4% agarose gel：2g agrose 50ml 水，高压灭菌
2×Grace（unsupplemented）：9.14g粉末（invitrogen） 0.07gNaHCO3 H2O，调PH6.1，定容至100ml，无菌过滤
噬菌体效价的测定
（4）为什么选用双层琼脂平板法测定噬菌体效价？
七.实验关键问题，注意事项及实验要求
1.关键问题：稀释，温度，倒板
2.注意事项：移液器使用及登记，
3.实验要求
4.预习报告（写清具体实验步骤），试管清洗，Tip回收，实验室卫生，保持安静，结果观察请于实验后第二日观察。
5.实验报告要求（清晰简洁，记录关键内容）
6.实验过程，实验报告及实验考核综合评定此次实验成绩。
八.物品准备
1.ER2738菌液：每组～10ml（注意保持无噬菌体污染）
2.M13KE：每组一只（1ml）
3.稀释用培养基：无菌水替代（TBS）
4.实验操作无需在超净台进行（原因，另外是否所有测定滴度的实验都可以）
5.EP管，Tip头用量
噬菌体效价的测定
一.目的要求
1.学习噬菌体效价测定的基本方法。
2.掌握双层琼脂平板法测定噬菌体效价的基本方法。
二、基本原理:
噬菌体的效价就是一毫升培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法，一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，一个噬菌体产生一个噬菌斑，因此，能进行噬菌体的计数。但因噬菌斑计数方法其实际效率难以接近100%(一般偏低，因为有少数活噬菌体可能未引起感染)，所以为了准确地表达病毒悬液的浓度(效价或滴度)一般不用病毒粒子的绝对数量而是用噬菌斑形成单位(Plaque-forming units,简写成pfu)表示。
(2)凝固后，倒置37℃培养。记录培养时间
5．观察平板中的噬菌斑，将每一稀释度的噬菌斑数目记录于实验报告表格内，并选取 30～300个噬菌斑的平板计算每毫升未稀释的原液的噬菌体数（效价）。
噬菌体滴度测定方法
噬菌体滴度测定方法
噬菌体滴度测定是一种用于测定噬菌体（一种寄生于细菌的病毒）浓度的方法。
这种方法通常用于实验室中对噬菌体的研究和生产中的质量控制。
噬菌体滴度测定可以通过以下步骤来进行：
1. 制备宿主细菌，首先，需要培养并生长宿主细菌，通常是大肠杆菌等细菌。
这些细菌将被用作噬菌体的寄主。
2. 制备稀释系列，将噬菌体样品进行一系列的稀释，通常是1:10的稀释系列，以便在测定时得到合适的滴度范围。
3. 混合噬菌体和宿主细菌，将每种稀释倍数的噬菌体样品与宿主细菌混合，并在琼脂平板上均匀涂布。
4. 孵育，将含有噬菌体和宿主细菌的琼脂平板在适当的温度下孵育一段时间，通常是在37摄氏度下孵育。
5. 计数形成的克隆，在孵育后，观察并计数每个琼脂平板上形成的克隆（也就是细菌克隆）。
根据稀释倍数和克隆的数量，可以计算出噬菌体的滴度。
噬菌体滴度测定的结果通常以噬菌体的孔径形成单位（PFU）表示，这是一种衡量噬菌体浓度的常用单位。
这种方法对于确定噬菌体溶液的浓度以及在实验室中进行噬菌体相关实验和研究中都具有重要的意义。
除了上述步骤外，还有一些改进的噬菌体滴度测定方法，如双层琼脂平板法和流式细胞术等，可以根据具体实验需求选择合适的方法进行测定。
总的来说，噬菌体滴度测定方法是一种重要的实验技术，对于噬菌体研究和应用具有重要意义。
病毒滴度的测定
病毒滴度的测定病毒感染的测量方法–直接计数法将病毒与乳胶颗粒混合电子显微镜观测缺点是无法判断病毒的感染性–间接计数法空斑形成单位plaque forming unitsPFUs 50终点法血凝试验干扰滴定第一节空斑形成单位法一、基本原理原理–空斑形成单位plaque forming unitsPFUs试验将不同稀释倍数的病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合当病毒感染时会造成宿主细胞溶解而形成空斑每个空斑系由一个病毒颗粒引起计数空斑数目再乘稀释倍数得病毒感染的浓度–病毒空斑—蚀斑将病毒稀释后移入单细胞培养瓶中吸附1h后覆盖营养琼脂病毒在琼脂中只感染临近的细胞形成空斑的退化细胞区中性红染色活细胞染红色死细胞无色产生CPU的病毒均可用此方法二、方法与步骤测定病毒空斑的试验方法–病毒杀死感染细胞的检测产生细胞病变效应中型红活细胞染红色台盼兰死细胞染蓝色MTT溴化二苯基四氮唑将活细胞染成深蓝色易于计数易分离病毒转化或有抵抗力的细胞–未能杀死细胞可产生血凝素因能吸附红细胞空斑用血吸附显出用显微镜计数吸附红细胞的空斑–细胞融合病毒感染细胞与临近的未感染细胞融合形成多核细胞用显微镜观查合胞体空斑–空斑中含有病毒的抗原免疫荧光分析–免疫组化技术生物素-抗生物素-过氧化物酶染色技术间接免疫过氧化物酶染色三、空斑形成单位法测定病毒滴度的计算空斑形成单位试验技术–传代细胞平皿法单层细胞浓度为2×106培养液为RPMI1640EagleMEM 病毒液稀释在冰浴盘作10倍稀释每个稀释度培养2瓶每加一次样时要新吸管来回吸三次加至培养瓶无细胞层的瓶壁底角再倾斜来回摇动使病?揪 ? CO2孵箱吸附90min后再用营养琼脂覆盖培养58d后加入0.01的中性红染色计数空斑病毒滴度的计数–按以下公式计算空斑形成单位PFUs/ml dvnn21X1、X2、Xn表示同一稀释度在不同培养孔板实验单位中数得到的空斑数n表示计数空斑的培养板孔数v表示病毒量mld表示稀释倍数例以稀释成10-4的病毒悬液感染细胞四个培养板孔中的空斑数分别为113及5个接种量为0.2 ml 空斑形成单位PFUs/ml 4100.245311 1.25×105PFUs/ml 空斑形成单位PFUs与重复感染数M.O.I –重复感染数Mutiplicity of InfectionM.O.I是指感染一个细胞的病毒颗粒的平均数–一般来说M.O.I值越大则实验细胞被感染的比例越大–若某病毒的PFUs 已经测得要按一定量的M.0.I进行感染细胞时则所需的病毒量可按公式1和2计算公式1实验细胞数×所需的M.O.I值所需的PFUs 公式2所需的PFUs/实际病毒的PFUs需要加的病毒量例已知某病毒的滴度为1.3×1011 PFUs/ml试验细胞数为每孔1.8 ×106计划M.O.I值为200。
噬菌体空斑实验
噬菌体空斑实验
实验目的：了解M13噬菌体感染特征
实验原理：一个M13噬菌体的病毒颗粒感染1个细菌后形成1个噬菌斑。
从感染细菌释放出来的子代病毒颗粒感染临近细菌，后者又可释放下一代病毒颗粒；如果细菌在半固体培养基上生长，自带病毒颗粒的扩散受到一定限制，诸如M13等丝状噬菌体并不裂解细菌，但可以使细菌生长速度降低至原来的1/2，在上层琼脂中生长的菌台的背景下，生长缓慢细菌形成了一个不断扩大到肉眼可见的噬菌斑。
材料与试剂：待测菌种、对应培养基
四、实验步骤
1.取5ml对应液体培养基于10ml的试管中，加入5ul 四环素（20mg/ml），将待测接入，
37℃震荡（80-100rpm）培养过夜（12h）
2.将2ml培养液转入20ml的培养基中（1:10稀释），继续37℃震荡（80-100rpm）培养
4.5h（不宜过快，否则，细菌性毛被破坏，噬菌体无法导入），
3.室温静置5min左右使平板冷却凝固，将培养皿倒置37℃培养过夜
4.第二天观察平板，对培养皿中的噬菌斑进行计数，计算约含有10-100个数量级的平板
噬菌斑的具体数目（y），计算噬菌体效价（pfu/ml）噬菌体效价=y*10x+2puf/ml。
流感病毒滴定,噬斑和血凝抑制
流感病毒滴定，噬斑和血凝抑制实验血凝滴定法在血凝试验中，将连续的病毒稀释液与恒定量的RBC混合。
如果病毒浓度足够高，RBC包含许多血细胞凝集素受体，就会发生凝集。
如果添加血清，流感病毒对红细胞的凝集将被阻止；这是HAI分析的基础。
每种HAI分析中均应包括对照抗血清和抗原，以验证测试的特异性。
实验材料：1，96孔微滴定板：V底板用于鸟类红细胞RBC（erythrocyte/red blood cell），U底板用于哺乳动物RBCs。
2，0.01M的磷酸盐buffer：Ph7.2-7.4.3,标准的RBCs：禽类0.5%，哺乳动物0.75%，通过无菌纱布过滤RBCs，200g在4-8℃离心10min，吸出血浆，加入PBS离心重复两次，用PBS重悬RBCs 和调整到需要的浓度，储存在4-8℃。
鸡红细胞1000rpm/5min。
看是否有沉淀，如果有，就说明这个变质不能用，用PBS洗一次，1000rpm/5min。
用PBS稀释到10mL，滴定板中先加入PBS，再加入病毒，最后加红细胞。
如果对照组有纽扣形成，看实验组。
，在HA测试期间将病毒库存保存在冰上，以保持病毒的感染性。
实验方法：1，将在组织培养或鸡胚鸡蛋中分离的每种流感病毒的等分试样（100μL）放在96孔微量滴定板第一行的孔中。
在第2行至第12行中加入50 μL PBS。
在96孔板上向下进行一系列2倍稀释，将50 μL从第1行转移到第2行，依此类推。
从最后一个孔中取出最后的50 μL。
向所有孔中添加50μL标准RBC。
轻轻拍打板以混合或使用机械摇板。
在室温（20–25°C）下孵育平板30min。
2，培养期后，观察到HAU的凝集终点（图2）。
在阴性样品中，RBC将沉降到V孔微量滴定板的底部，而在阳性样品中，它们将凝集。
第8列中的孔不包含病毒。
凝集的RBC将均匀地分布在孔中，而不凝集的RBC将在V孔底部形成一个纽扣。
HA滴度是显示完全血凝活性的最后稀释液以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒血凝价，即为一个凝集单位。
病毒感染力的滴定
二、病毒蚀斑技术 病毒蚀斑（plaque) 又称空斑，指病毒在已长成的单层细胞上形
成的局限性病灶。
原理：适当稀释的病毒悬液接种经长成单层的敏感
细胞后，在覆盖的固体或半固体介质（琼脂糖、甲基 纤维素）的作用下，病毒在最初感染的细胞内增殖后， 只能进而感染并破坏临近的细胞，经过几个增殖周期 后，形成一个局限性的肉眼可见的病变细胞区，即局
每毫升病毒悬液中所含的蚀斑数，即病毒悬液
中的感染性病毒浓度。 计算方法： 如用PRV接种PK-15细胞，每孔接种了0.4ml，结 果10-5孔形成了208个空斑，而10-6孔形成了22个空斑，
则该病毒在PK-15细胞上的空斑形成单位（PFU）为：
22×106/0.4ml=5.5×107个/ml。
一、病毒TCID50的测定 操作步骤
在青霉素瓶中将病毒作连续 10倍的稀释，从10-1-
10-10。
将稀释好的病毒接种到 96孔微量培养板中，每一
稀释度作8孔，每孔接种100µ l。
在每孔加入细胞悬液100µ l，使细胞量达到3×105 个/ml。
设正常细胞对照，正常细胞对照作两纵排。
将培养板臵37℃ 5% CO2培养箱吸附1h，吸弃病毒液， 用含钙、镁的PBS（pH7.4）洗3次。 取1.6%-2%的低熔点琼脂糖，融化后降温至38-42℃，
与等量预热至38-42℃含6%-10%犊牛血清的无酚红
DMEM混合，注入细胞培养板中。
室温放臵直至琼脂糖凝固，或于4℃冰箱放臵几
分钟至琼脂糖凝固，然后于37℃ 5% CO2培养箱
获得高滴度的病毒，扩大培养后作种用。
• 筛选重组病毒：收集病变的细胞或病毒悬液，
通过PCR或其它方法进行鉴定，取阳性者再作下 一轮空斑纯化。如此3-5轮空斑纯化后即可得到 纯化的病毒粒子。
病毒滴度测定方法
病毒滴度测定方法
病毒滴度测定是一种用于确定病毒在溶液中的浓度的方法。
它通常用于病毒学研究、疫苗生产和药物研发等领域。
正确的病毒滴度测定方法可以帮助科研人员准确地评估病毒的活性和浓度，从而为相关研究工作提供可靠的数据支持。
下面将介绍几种常用的病毒滴度测定方法。
一、细胞培养法。
细胞培养法是一种常用的病毒滴度测定方法。
首先，将待测病毒样品与细胞培养基混合，然后在培养皿中接种一定数量的细胞，并将混合液加入培养皿中。
接下来，将培养皿放入恒温培养箱中，培养一定时间后观察细胞的感染情况，根据感染细胞的数量可以计算出病毒的滴度。
二、血凝法。
血凝法是另一种常用的病毒滴度测定方法。
这种方法利用病毒对红细胞的凝集作用来确定病毒的滴度。
首先，将一定浓度的病毒样品与红细胞混合，然后在琼脂培养皿中进行凝集反应。
根据凝集的程度和范围可以计算出病毒的滴度。
三、动物接种法。
动物接种法是一种直接将病毒样品接种到动物体内，通过观察动物的感染情况来确定病毒滴度的方法。
这种方法通常用于病毒毒力的测定。
通过确定50%动物传染单位（TCID50）或50%致死剂量（LD50）来表示病毒的滴度。
总结。
以上介绍了几种常用的病毒滴度测定方法，每种方法都有其特点和适用范围。
在进行病毒滴度测定时，需要根据实际情况选择合适的方法，并严格按照操作规程进行操作，以确保测定结果的准确性和可靠性。
希望本文对您有所帮助。
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和半数致死量（ LD50 ），其中以 LD50 最常用。它是指在一定时间内能使半数 实验动物 致死
的病毒量。 然而， 病毒对实验动物的致病作用不一定都以死亡为标志，
例如以感染发病作指
标，则可以 半数感染量 （ ID50）测定；此外，当实验的材料是鸡胚时则用鸡胚半数致死量
（ ELD50）或鸡胚半数感染量（ EID50）表示；实验的材料是细胞时则用组织细胞培养半数
⑦在 病毒学 中，指用 噬菌斑 方法测得的噬菌体浓度。 噬菌体的效价（滴度）就是一毫升培
养液中所含活噬菌体的数量。
中文名：滴度
英文名： titer ；titre
同义名：效价
符号： tt
效价测定的方法：
一般应用双层琼脂平板法。 由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上， 噬菌体产生肉眼可见的
噬菌斑，因此，能进行噬菌体的计数。但因噬菌斑计数方法其实际效率难以接近
6. 6 弃 6 孔板内上清，快速加 2ml 上层琼脂，以防菌层干燥，静置 10-20min 使其凝固；
7. 7 将 6 孔板放入 27℃培养箱，培养 4 － 10 天；
8. 8 计数板中噬菌斑， 直至连续两天无变化， 加 1mg/ml 中性红 0.5ml ，室温孵育 2h 后计数噬菌 斑。 END 注意事项
对这些词的使用已规范化，但在不少书刊的文章中常见误用，如称效价
1 ： 40 之类。
④在学反应中，指产生某一结果所需标准试剂的量。
⑤为 当量浓度 的二十分之一。在制碱与制 碳酸氢铵 中用以表示氨水的浓度。
⑥在免疫学中， 指通过 血清学 方法能显示一定反应的抗体或抗血清的最高稀释倍数；
如终点
稀释度为 1/100 ，则血清的效价（每 1ml 的血清中 抗体效价 ）为 100 抗体单位。
100%(一般
偏低，因为有少数活噬菌体可能未引起感染 )，所以为了准确地表达病毒悬液的浓度 (效价或
滴度 )一般不用 病毒粒子 的绝对数目而是用噬菌斑形成单位 (Plague-forming units ，简写成
pfu) 表示。
病毒滴度
也即病毒的毒力，或毒价，衡量病毒滴度的单位有最小致死量（
MLD ）、最小感染量（ MID ）
感染量（ TCID50）表示。
4. 4 弃 6 孔板内上清，快速加入稀释好的病毒， 1ml/ 孔，复孔，室温孵育 1h。
5. 5 配置上层琼脂：加 20ml 高温灭活 FBS到 2×Grace 100ml ，25ml 2 ×Grace（含 FBS） 12.5ml
噬菌斑测病毒滴度 无菌水 12.5ml 4% agarose gel ，至预热的 100ml 无菌瓶，轻轻混匀，放入 37℃水浴锅备用；
? 病毒滴度（ pfu/ml ） =1/ 稀释倍数×噬菌斑数× 1/ 每孔接种体积
滴度
噬菌斑测病毒滴度
①某一物质与一定容量的另一物质产生反应所需的量。
②所谓滴度即病毒悬液的浓度，就是指 pfu 的数值。
③滴度是稀释度的倒数。例如上例中的
1 ： 180 的稀释度，其滴度就是 180 。
效价是滴度的同义词。 效价即滴度， 两者通用。 当前虽然专业的化学和免疫学词典和专著中
噬菌斑测病毒滴度
杆状病毒滴度检测
实验概要 本实验介绍了检测病毒滴度的方法。 实验原理 根据噬菌斑数计算病毒滴度。 工具 / 原料
? 1. 4% agarose gel ： 2g agrose 50ml 水，高压灭菌 ? 2×Grace（ unsupplemented ）： 9.14g 粉末（ invitrogen ） 0.07gNaHCO3 H2O ，调
PH6.1，定容至 100ml ，无菌过滤 ? supplemented Grace ：1×Grace 添加 3.33mg/ml Lactalbumin ，3.33mg/ml yeastolate ，
无菌过滤 ? 4. 高温灭活 FBS ? 主要设备 1. 6 孔板 2. 12ml 离心管 3. 100ml 无菌玻璃瓶 4. 无菌吸管 5. 70 ℃水浴锅 ? 实验材料 杆状病毒， SF9： 5×105cells/ml 方法 / 步骤 1. 1 无菌条件下， 2ml/ 孔细胞（ 5×105cells/ml ）种入 6 孔板，室温孵育 1h 使其贴壁，孵育后镜 检其贴壁程度； 2. 2 将 4% agarose gel 放入 70℃水浴锅融解， 空 100ml 无菌瓶与 2×Grace 放入 40℃水浴锅预热； 3. 3 将杆状病毒用无血清 supplemented Grace 梯度稀释： 10-1~10-8 。