结核病痰涂片及质量保证

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痰涂片抗酸杆菌检验的室内质量控制

痰涂片抗酸杆菌检验的室内质量控制痰涂片抗酸杆菌检验主要用于对肺结核病人的诊断、化疗效果评价及为流行病学疫情评价服务，其检验的质量保证对于持续提高实验室痰涂片抗酸杆菌检验的工作效率和可信性非常重要。

质量保证包括室内质控、室间质量评估及质量提高，其中室内质控是质量保证的基础。

抗酸杆菌痰涂片检验的室内质量控制包括：实验室内部的操作规程、设备及耗材，痰标本收集、染色液制备、涂片制备和染色、显微镜维护、显微镜镜检结果登记和报告以及痰片保存等整个过程的内部检查及监测。

具体操作如下：1 标本的收集1.1容器用直径4cm高度2cm的蜡纸盒收集痰标本，盒上标明病人姓名、日期编号和容器序号1、2、3（1为当日即时痰，2为夜间痰，3为次日晨痰）。

1.2痰标本性质干酪痰、血痰、粘液痰为合格标本、唾液或口水除照常进行涂片检查外，应要求患者重新送检。

1.3初诊病人收集3份痰标本（当日即时痰、夜间痰和次日晨痰），随访病人或治疗中病人按期每次收集2份痰标本（夜间痰及次日晨痰）。

1.4不能当日及时涂片检查的标本置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。

2 抗酸染色液制备2.1配制染色液的实验室必须按标准浓度和步骤配制染色液，实验室要有染色液制备配方和配制记录。

2.2染色液试剂瓶需标明染色液名称、浓度和制备时间。

2.3染色液置于棕色瓶或不透明塑料瓶内存放，避光保存。

2.4每次制备一批新的染色液后，需使用未经染色的已知阳性和阴性涂片进行染色镜检，并记录结果，以保证染色液的质量。

3 涂片制备3.1新载玻片应经95%乙醇脱脂，无划痕。

3.2一张载玻片只能涂抹一份痰标本，且一次性使用，不可重复使用。

3.3铅笔在磨砂面玻片的磨砂面上注明实验序号及标本序号，若使用无磨砂面的玻片，则使用玻璃刻刀在玻片一端的1/3处进行标注。

3.4取大约0.05ml痰标本，在玻片正面右侧2/3的中央处均匀涂抹面积为10×20mm的卵圆形痰膜。

3.5将已干燥的玻片放置在报纸上，如果透过痰膜不能分辨报纸上的5号字，则表明该玻片涂抹过厚。

痰涂片合格标准

痰涂片合格标准痰涂片是临床上常用的一种检查方法，通过对痰涂片的制备和染色，可以观察痰液中的细菌、真菌、寄生虫和白细胞等情况，对于呼吸道感染、肺结核等疾病的诊断具有重要意义。

因此，痰涂片的合格标准对于临床诊断具有重要意义。

首先，痰涂片的制备要符合一定的标准。

在采集痰液样本后，应立即将样本涂抹于玻璃载玻片上，然后用火焰烘烤至干燥。

制备过程中需要注意避免细菌污染，保持无菌操作。

制备完成后，应及时进行染色处理，确保染色效果清晰，有利于后续观察和分析。

其次，痰涂片的染色质量也是衡量其合格与否的重要标准之一。

染色是痰涂片制备的关键环节，染色效果的好坏直接影响到检查结果的准确性。

常用的染色方法有革兰氏染色、抗酸染色等，不同的染色方法适用于不同的病原体检测。

在进行染色时，应严格控制染色时间和染色剂的浓度，确保染色效果清晰、准确。

此外，观察痰涂片的过程也需要遵循一定的标准。

在观察痰涂片时，应使用高倍镜进行观察，以便更清晰地观察细菌、真菌等微生物的形态和分布情况。

观察过程中需要耐心细致，确保不遗漏任何细微的异常情况。

最后，对于痰涂片的结果判读也需要专业的医学人员进行。

医学人员应具备丰富的临床经验和专业知识，能够准确判断痰涂片中各种微生物的数量和种类，为临床诊断提供可靠依据。

总之，痰涂片的合格标准涉及到制备、染色、观察和结果判读等多个环节，每个环节都需要严格依照标准操作，确保痰涂片的质量和可靠性。

只有在每个环节都符合标准的情况下，才能得到准确可靠的检查结果，为临床诊断提供有力支持。

因此，医务人员在进行痰涂片检查时，务必严格按照规范操作，确保检查结果的准确性和可靠性。

肺结核病人痰涂片镜检不同质控方式效果评价

结果
1.不同督导方式、不同地理条件下四次质控结果的各项指标差异无显著意义(P>0.05)，见表1。
2.针对痰涂片及其质控的有关问题，对痰检人员进行了培训，并在质控前、后进行了两次问卷考核，22名地(市)及县级痰检人员质控后的答对率(90%)明显高于质控前(53%)。
表1 不同地理条件及督导方式痰片复检符合率
4 100.0 100.0 96.3 94.4 90.7 95.3 96.3 98.0 99.5 95.3 89.6 91.8 95.0 96.9
3.费用：表2显示2个省16个县4次督导总的经费消耗，直接督导(包括督导员差旅费、食宿费等)明显高于间接督导(包括包装邮寄费、复印费等)(P<0.05)；山区督导费高于平原(P<0.05)。
4 100.0 99.2 97.8 96.3 94.0 98.1 94.5 99.4 99.6 95.9 92.5 90.2 94.6 97.7
1 100.0 97.2 88.6 91.9 86.3 90.5 91.9 96.8 98.9 91.1 84.8 85.1 89.6 96.3
2.复检痰片数直接督导组：每次每个实验室抽取阳性涂片20张，阴性涂片30张。间接督导组：每次每个实验室抽取阳性涂片20张，阴性涂片60张。
3.复检的痰涂片分别按“镜下观察”和“肉眼观察”进行评价并按统一表格记录。镜下观察：包括阳性、阴性符合情况及镜下每视野痰细胞数是否≥10个。肉眼观察：包括痰膜面积、厚薄、染色情况、痰膜脱落情况等，合格标准以“结核病诊断细菌学检验规程”［3］为准。
地理
条件质控
次数直接督导间接督导
镜下观察肉眼观察镜下观察肉眼观察

痰涂片检查与质量控制

—省参比室在对地(市)和/或县(市)直接质控时，宜采用地(市)质控的同批县(市)涂片，填写“痰涂片室间质控记录表”(表 4)。
(二) 室间质控：
质控模式：
跨国参比实验室
每年每省抽查一个县
国家结核病参比实验室
省(市、>1 次/年地(市)
自治区)
细菌学
参比实验室
实验室
2 次/
每年抽查每地(市)一个县
县(市) 细菌学实验室
质控范围： 1. 督导内容： —实验室布局 —实验室安全防护和污染物处理
—涂片、染色操作 —显微镜维护状况 —抽取痰涂片复验 —实验室日常工作记录(包括室内和室间质控) 2. 督导方式： —现场督导上级实验室检验人员赴基层实验室现场指导，抽取痰片复验。 —非现场督导基层实验室将保存近期 3 个月的全部痰片，及实验记录，送上级实验室复验。国家参比实验室以非现场督导为主。省级参比室应进行现场和非现场督导，但每年应对一定比例的地(市)和县(市)实验室，作现场督导。地(市)对县(市)实验室的督导，原则采取现场督导形式。 3. 痰涂片室间质控： —范围、内容同室内质控。 —痰片抽取方式现场和非现场督导均抽取 30 份痰片，包括 20 份涂阴、10 份涂阳痰片。对一些特定的项目和课题，可按其规定进行痰片复验。但送国家参比实验室年报表中仍按本规定执行。 4. 评价标准：评价分为痰菌镜检结果和制片质量两方面。 —痰片镜检：阳性片符合率≥98%，阴性片符合率≥96%。 —制片质量：痰细胞，痰膜面积、厚薄、脱落合格率应≥90%，染色合格率≥95% 。
(3)痰标本性质：按脓样痰、干酪样痰、血性样痰、脓性粘液痰和水样痰分类登记。
(4)“标本镜检结果”中的“日期”为实际镜检日期。

痰涂片镜检质量保证(EQA)手册修改研讨会会议纪要

的要求及中国国情给予合理建议。各代表的建议和意见使各议题的细节问题得到深入全面的考虑，提高了第二版修订稿的质量，达
床中心付瑜主任、办公室李亮主任、国家参比室赵雁林主任，中国ＣＣ结核病预防Ｄ
控制中心国际合作部何广学主任以及来自辽宁、山东、湖南、湖北、广西、甘肃、贵州七省（自治区）的参比室专家和国家
起为学员们颁发了结业证书并合影留念。（中心游永红）临床
痰涂片镜检质量保证（Ｑ手册修改研讨会会议纪要ＥＡ）
中国结核病防治规划・痰涂片镜检质量保证手册（Ｑ） “ ＥＡ修改研讨会于２００７年５１～５日在北京北苑宾馆召开，与会代月４１表包括ＷＨ驻华代表处官员ＣｒｅａＯｏｌｎｉＨｎｉｇｅｎｎ、刘宇红女士，ＷＨＯ顾问ＳｎａａｇＪｅＫｍ博士，香港跨国参比实验室主任ＫｉｉａＭｎＫｍ博士，卫生部结核病专家咨询委ａａ员会专家潘毓萱、端木宏谨、王民、梅
张本处长对本次培训班给予积极的肯定；徐
广保主任对培训的成效表示满意。张本处长、
从课后的培训评估调查中可以看到，学员们都感到受益匪浅，通过这次培训开阔了眼界，尤其是在临床的诊断技能方面有明显的提高，会在在今后的工作中加以运用。工
徐广保主任，以及临床中心的左恩雄书记、童奔副主任、广西ＣＣ的刘飞鹰主任助理一Ｄ
维普资讯
结核病健康教育２００７年第１期
专家从结核病的诊断、鉴别诊断、结核病的化疗、结核病合症以及不良反应的处理、结核病的影像学诊断及其鉴男嵫澌等方面进行了理

痰涂片镜检实验室质量保证手册

质量提高（Quality Improvement ，QI）是通过分析痰涂片镜检诊断服务的各组成部分，寻找能永久清除障碍成功的过程。数据收集、分析、创意思路都是这一过程的重要部分。它涵盖了连续监测、明确缺陷及后续改正措施，如必要时重新培训以杜绝问题再次发生。 QI 常依赖于有效的现场评估访视。
现场评价（On-site evaluation）国家或地区结核病规划下的地区督导员的常规对下级实验室的督导检查和高水平实验室督导员的年度督导检查。
图 2 标本容器（二）标本的性状：
合格的痰标本应是患者深呼吸后，由肺部深处咳出的分泌物。 1、干酪痰：标本外观以黄色（或奶酪色）脓样、团块状的肺部分泌物为主，粘度较粘液痰低，制片时较易涂抹；涂片染色后镜检，可见大量脓性炎症细胞、肺上皮脱落细胞。由于此类标本是由肺部深处咳出，对肺结核的诊断最有价值，故 AFB 的检出率较高。 2、血痰：此类标本是因粘液痰或干酪痰标本中混有血液而形成，颜色为褐色或深褐色、鲜红色或伴有血丝；涂片染色后镜检除能够观察到粘液痰或干酪痰的细胞特征外，含新鲜血液的标本中还可见到被染色的红细胞。由于含血标本易干扰 AFB 镜检的结果，故在制片时应尽量避免挑取含血标本。 3、粘液痰：标本外观以白色、粘稠度较高的肺部和支气管分泌物为主，制片时需仔细涂抹；涂片染色后镜检时，镜下可见支气管内膜纤毛柱状上皮细胞（细胞较长且形态不规则、细胞核和细胞质着色均较深，细胞一端可见着色较浅的纤毛），伴有少量肺上皮脱落细胞（多数为圆形，细胞核较小，且着色较细胞质深，核质比＞1:3）、脓性炎症细胞（卵圆形、细胞核占细胞比例较大且着色较深，核质比＜1:1）、口腔脱落细胞及口腔寄生菌。此类标本的 AFB 检出率较唾液高。 4、唾液：目视观察标本外观，以透明或半透明水样、粘度较低的口腔分泌物为主，标本中有时伴有气泡；涂片染色镜检时，镜下可见少量口腔上皮脱落细胞（形态不规则、细胞核

肺结核病患者痰涂片镜检结果分析

肺结核病患者痰涂片镜检结果分析分析南充市2023年肺结核登记病例痰涂片状况，为保证痰检质量供应借鉴。

方法按中国结核病防治规划《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》进行痰涂片镜检。

结果2023年南充市初诊肺结核患者6439人，其中检出涂阳患者2382人，涂阳检出率为37%,不同性质的痰标本中干酪痰检出率最高62.9%。

不同留样时间痰标本中晨痰检出率最高为35.6%。

结论不同性质、不同留样时间的痰标本阳性检出率不同，应指导患者留取正确的痰标本，提高阳性检出率。

肺结核是种古老的全球流行的慢性传染病。

在我们国家结核病的发病率和死亡率均居各类传染病的首位，并且农村疫情高于城市。

痰涂片镜检是世界卫生组织推举的全球结核病掌握策略中的五大要素之一,痰涂片镜检在结核病掌握工作中起着特别重要的作用，通过痰涂片检查是发觉传染源的重要手段，是确诊结核病、选择治疗方案、考核疗效的主要依据［1］。

现将2023年南充市肺结核病患者痰涂片镜检结果报告如下。

1.材料与方法1.1标原来源2023-01-01/12-30,南充市各县疾病预防掌握中心结防所初次就诊的可疑肺结核患者送检的准时痰、夜间痰、晨痰共3份痰标本。

标本量为3~5m1°1.2资料来源2023年各县结防所的月报表、季报表、《肺结核病人登记本》、《细菌试验室登记本》及相关资料。

1.3方法采纳痰直接涂片抗酸染色后镜检，用新竹签挑取痰标本约0.05~0.10m1涂片。

固定、染色（抗酸染液在有效期内使用）、镜检均按《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》⑵进行，每个患者3份痰中有1份及以上查出抗酸杆菌者为涂阳肺结核患者。

1.4结果推断按中国结核病防治规《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》（1）报告抗酸杆菌阴性：连续观看300个视野、未发觉抗酸杆菌。

（2）报告抗酸杆菌数是：1~8条抗酸杆菌/300视野。

（3）抗酸杆菌阳性（1+）：3~9条抗酸杆菌/100个视野，连续观看300个视野。

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常见类型可能原因
假阳性（FP）
1.例如染料沉渣或结晶等被误识为抗酸杆菌
2.原始报告后着色的抗酸杆菌退色
假阴性（FN）
1.观察涂片的视野数量不够 2.镜检技术能力差 3.染色操作不规范 4.显微镜存在问题 5染液质量差
量化误差 1.观察涂片的视野数量不够（QE） 2.阳性涂片的分级报告标准掌
如需焚烧处理，须置于焚烧炉内彻底焚化。焚化不彻底或暴露焚烧是危险的；
专业处理：
试验操作工作面应以3%石炭酸或其他可靠的消毒液擦拭，再用紫外线灭菌灯照射 30分钟。
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二、痰涂片镜检的实验室质量保证
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按照世界卫生组织（World Health Organization)和国家结核病防治规划 (Nationaltuberculosis programme）的要求，在我国已全面推行DOTS策略或DOTS策略得到良好的贯彻执行的地区，为了持续提高结核病实验室痰涂片检查的工作效率和可靠性，必须建立我国结核病实验室质量保证系统网络。在实验室内部质量控制的基础上，应用实验室间质量检查和评估的方法，进行实验室检查系统的评价，并通过采用一系列措施改进和不断提高实验室业务总体水平。
结核ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 痰涂片检查及
质量保证
一、痰涂片检查
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（一）结核病细菌实验室布局原则
1、结核病细菌学检查要有独立的实验室，不得与其他实验室混用，最好为P3级实验室；
2、培养基制备、洗刷等相对洁净的操作与涂片镜检、培养前处理、药敏试验等污染操作要有独立分开的场所，最好分别在专用的房间进行；
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3、基层只从事涂片镜检的实验室只拥有一间独立房舍的情况下，相对洁净区（镜检区、登记区）与污染区（涂片、染色区）要有明显区分。
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（二）痰标本的收集和运送
干酪痰、血痰或粘液痰为合格标本，量应为3-5毫升。
难以获得合格标本时，也应进行细菌学检查，但应注明标本性状，以供分析结果时参考。
显微镜检报告方式： 0条/300视野：萋-尼氏抗酸杆菌阴性 1-8条/300视野：实报菌数并重检 3-9条/100视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（+） 1-9条/10视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（2+） 1-9条/1视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（3+） ≥ 10条/1视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（4+）
握差
3.镜检技术能力差医学课件ppt
4.显微镜存在问题
建议 1.对技术人员复训 2.对假阳性涂片重新染色并复检
1.2.3.对技术人员复训 4.现场检查显微镜状态 5.重新购置质量合格的染料并重新配制染液
1.2.3.对技术人员复训 4.现场检查显微镜工作状态
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(六)废弃标本和污染物的处理
废弃标本、痰盒和污染物均须经高压蒸汽灭菌后方能丢弃或清洗；
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（一）室内质量控制
室内质量控制(Quality
Control,QC)指实验室内部的操作规程、
设备和耗材、痰标本收集、染色剂制备、
涂片制备和染色、显微镜维护、显微镜镜
检、结果登记和报告、以及痰片保存等整
个过程的内部检查和监测。
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1、痰标本的收集
（1）容器：采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰瓶，或可密封塑料盒、蜡纸盒收集痰标本（参考规格：直径4厘米，高度2厘米）。痰容器应标明病人姓名、日期、编号（初诊病人门诊序号或随访病人登记号）和容器序号1、2、3（1=当日即时痰，2=夜间痰，3=次日晨痰）。
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（四）细菌学常规检查的注意事项
选择痰标本中脓性、血样、干酪样的部分涂片阳性率较高；
一张玻片只涂一份标本，玻片一次性使用，防止交叉污染；
打开痰盒、涂抹痰膜、烧灼接种环时容易产生气溶胶，应注意正确操作和自身防护；
石炭酸复红初染时必须加温。
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常见误差原因
见下表
（2）痰标本性质：干酷痰、血痰、粘液痰为合格标本；唾液或口水为不合格标本，除照常进行涂片检查外，应要求患者重新送检。
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（3）初诊病人应收集3份痰标本（当日即时痰、夜间痰或次日晨痰），治疗中或复诊随访病人按期每次收集2份痰标本（当日即时痰、当日痰或次日晨痰）。
（4）对当日不能进行涂片检查的痰标本，须置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或污染。
收集标本的容器应采用国家参比室推荐的标准痰瓶，或采用直径4厘米、高2厘米的广口塑料（或蜡纸）的或密闭容器。
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容器上应注明与检验单一致的病人姓名、编号及日期。
需送上一级实验室检查的痰标本应置4℃冰箱保存，外送前认真核对检验单与痰瓶上标注，放专用的冰盒内运送，或用纸袋、塑料袋封扎牢后顺序放入包装盒，盒外注明请勿倒置标志。
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（三）痰涂片操作流程及显微镜检报告方式
直接涂片法操作流程：
1、涂痰膜（大小10×20㎜），自然干燥
2、复红加热初染5分钟
3、流水冲洗
4、盐酸酒精脱色3分钟(必要时重复脱色，但不要过度）
5、流水冲洗
6、美兰复染30秒
7、流水冲洗
8、自然干燥，镜检
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（3）染色后的痰膜脱落部分应小于整个涂抹面积的10%。
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5、镜检要求
（3）载玻片只允许一次性使用，严禁清洗后重复使用。
（4）载玻片只允许左侧1/3处标注实验室序号。
（5）载玻片正面右侧2/3中央处均匀涂抹成面积为10× 20mm的卵圆形痰膜。
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4、染色
（1）肉眼观察染色后的痰膜应呈均匀亮蓝色，无红色斑块。
（2）将染色后的玻片放置在报纸上，如果透过痰膜不能分辨报纸上的文字，则表明该玻片涂抹过厚。
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2、抗酸染色液制备
（1）有染色液制备配方和配制纪录。（2）染色液试剂瓶须标明染色液名称、浓
度和制备时间。（3）染色液置于棕色瓶内存放，避光保存。
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3、载玻片
（1）新载玻片应经95%乙醇脱脂，检查无划痕后，方可使用。
（2）一张载玻片只能涂抹1份痰标本。