版药典培养基适用性验证
版药典培养基适用性验证
造就基验证文件制Array药有限公司制药有限公司验证立项申请表验证计划的审批验证方案目录1.概述2.验证目标3.验证规模4.验证项目小构成员及职责5.验证及格尺度6.实验材料7.菌液制备8.实用性检讨9.验证记载10.验证结论及分解评价计数造就基实用性检讨的验证计划1. 验证目标：需氧菌.霉菌及酵母菌计数用的造就基应进行造就基的实用性检讨.本次验证的目标是确认胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基是否合适需氧菌.霉菌及酵母菌总数测定.2. 参照尺度：《中国药典》2015年版四部1105非无菌产品微生物限度检讨法.3. 验证项目：胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基的实用性检讨.4.验证小组人员及职责：～2规模内,且菌落形态大小与对比造就基上的菌落一致.6. 实验材料：6.1. 被验证产品：胰酪大豆胨琼脂造就基.沙氏葡萄糖琼脂造就基.6.2. 仪器装备：6.2.1. YXQ-LS-100G型立式压力蒸汽灭菌器6.2.2. GHT-00双人净化工作台6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安然柜6.2.4.MJ-250I型霉菌造就箱 (20～25℃)6.2.5.LRH-250生化造就箱 (30～35℃)6.3. 验证用造就基6.4. 验证用菌株：(第代)7. 菌液制备按6.4划定程序造就各实验菌株.取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌.白色念珠菌的新颖造就物,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml的菌悬液;取黑曲霉的新颖造就物参加3约为50~100cfu∕ml的黑曲霉孢子悬液.8. 实用性检讨：8.1. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,每株实验菌平行制备2个平皿,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）1ml,注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.8.2. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.9. 验证记载10. 验证结论及分解评价评价人：日期：附表1：计数造就基实用性检磨练证记载实验时光年代日完成时光年代日复核人实验人复核人实验人验证陈述的审批验证报告1. 验证目标：需氧菌.霉菌及酵母菌计数用的造就基应进行造就基的实用性检讨.本次验证的目标是确认胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基是否合适需氧菌.霉菌及酵母菌总数测定.2. 参照尺度：《中国药典》2015年版四部1105非无菌产品微生物限度检讨法.3. 验证项目：胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基的实用性检讨.4.验证小组人员及职责：～2规模内,且菌落形态大小与对比造就基上的菌落一致. 6. 实验材料：6.1. 被验证产品：胰酪大豆胨琼脂造就基.沙氏葡萄糖琼脂造就基. 6.2. 仪器装备：6.2.1. YXQ-LS-100G 型立式压力蒸汽灭菌器 6.2.2. GHT-00双人净化工作台 6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安然柜 6.2.4.MJ-250I 型霉菌造就箱 (20～25℃) 6.2.5.LRH-250生化造就箱 (30～35℃)6.4. 验证用菌株：(第 代)7. 菌液制备按6.4划定程序造就各实验菌株.取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌.白色念珠菌的新颖造就物,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml 的菌悬液;取黑曲霉的新颖造就物参加3约为50~100cfu∕ml的黑曲霉孢子悬液.8. 实用性检讨：8.1. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,每株实验菌平行制备2个平皿,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）1ml,注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.8.2. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.9. 验证记载10.验证结论及分解评价附表1：计数造就基实用性检磨练证记载实验时光年代日完成时光年代日复核人实验人复核人实验人制药有限公司验证证书。
版药典微生物限度检查方法验证方案
版药典微生物限度检查方法验证方案验证微生物限度检查方法的方案一、实验目的：验证药典中的微生物限度检查方法的准确性、可靠性和可行性。
二、实验材料：1.药典中规定的微生物限度检查方法；2.待验证的药品样品；3.适用的培养基和培养条件；4.培养基的质量控制菌种。
三、实验步骤：1.制备适用的培养基：按照药典中规定的方法和成分制备适用的培养基，并进行批次记录。
2.准备质量控制菌种：3.制备菌液悬液：从购买的质量控制菌种中，挑取一株菌种进行连续传代培养至活性最佳的生长阶段。
然后制备菌液悬液，以备后续试验使用。
4.扩大悬液应用范围：从第3步得到的菌液悬液中，取适量接种于适用培养基上，培养出代表性的细菌菌液悬液。
然后，通过菌液的光学检测、显微镜检查和菌落计数，确定菌液的细菌浓度。
5.验证方法的准确性：将待验证的药品样品加入培养基，根据药典中的方法将培养基分成不少于3组。
每组培养基中分别加入一定量的菌液悬液，并在药典规定的温度和时间下培养。
同时，设置对照组，只加入菌液悬液和培养基。
6.菌落计数：取适量的培养基样品，分别进行菌落计数，并根据培养基的数量、培养基总菌落数、对照组的菌落数等数据，计算菌落形成单位。
7.验证方法的可靠性：将待验证的药品样品按照药典中的方法进行连续验证，至少重复3次。
然后，对比不同验证结果的一致性和稳定性，评估方法的可靠性。
8.验证方法的可行性：根据实际的样品情况和验证结果，评估方法在操作上和技术上的可行性。
如，是否存在样品的特殊要求，检测方法是否能满足检测要求等。
四、数据处理与分析：根据实验结果的菌落计数和验证的次数，进行数据处理和统计分析。
评估验证结果的一致性、可靠性和可行性。
五、结论：根据实验结果和数据分析，得出关于药典中微生物限度检查方法的准确性、可靠性和可行性的结论。
如果验证结果与药典一致，说明方法可靠并可以使用。
如果验证结果与药典不一致，需要进一步分析原因和进行修正或优化。
培养基适用性检查
培养基适用性检查▪计数实验的培养基适用性➢该部分内容均为新增➢规定了该内容的应用范围➢采用标准菌种计数，回收率以及形态比较的判定方法➢标准菌种为：大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉；规定了稀释后的工作菌液的保存条件和保存期限➢引入了对照培养基的概念➢判定的依据：回收率大于70％，且形态一致▪控制菌检查的培养基适用性➢该部分内容均为新增➢规定了该部分内容的应用范围以及检查的项目➢采用标准菌种比较的判定方法➢根据培养基的用途不同，分为增菌培养基的促生长能力、固体培养基的促生长能力、培养基的抑制能力、固体培养基的指示能力、液体培养基的指示能力等5种检查方法➢在检查中引入了涂布接种的概念1.概述培养基质量是影响微生物检验结果的重要环节。
计数测定用培养基的促生长能力是微生物限度检查结果判断的重要影响因素，控制菌检查用培养基也可能由于其促生长能力、指示能力、抑制能力的差异，从而对菌落颜色、形态等指标存在较大差异，影响结果判断的客观性。
培养基适用性检查是通过检验用培养基与对照培养基的比较，以阳性菌的生长状态或特征来评价拍段检验用培养基是否符合检验要求。
微生物限度检查用培养基主要分为细菌、霉菌及酵母菌计数测定用培养基和控制菌检查用培养基两部分。
2010《版中国药典》微生物限度检查法中收载了“适用性检查”对培养基质量进行控制。
2、培养基适用性检查实验的一般要求2.1培养基适用性检查适用范围2010版《中国药典》规定微生物限度检查中成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
培养基使用性检查试验可用于确定实验室所用培养基(包括购置的不同批号的成品培养基、不同批号的脱水培养基干粉、按处方自行配制培养基不同批次的原材料等)、制备程序（包括水质控制、配制方法、灭菌程序等）、保存条件（温度、湿度、时间及盛装培养基的容器条件等）等是否满足微生物限度检查用要求。
即上述影响培养基质量的各关键控制点应通过培养基使用性检查试验确定，如果任一控制点发生变化应重新进行培养基适用性检查。
培养基灵敏度及适用性检查操作规程
培养基灵敏度及适⽤性检查操作规程1. ⽬的：通过培养基适⽤性检查，确保购买的培养基符合实验要求。
2. 范围：本规程适⽤于技术质量部实验员对培养基适⽤性的检查。
3. 职责：质量部实验员负责执⾏此规程。
4. 内容：4.1 检验依据：《中华⼈民共和国药典》2015版4.2 试验⽤具：烧杯、三⾓瓶、酒精灯、接种环、平⽫、试管、吸管、移液枪、滴管、电⼦天平、电热恒温培养箱、⽣化培养箱或恒温恒湿培养箱、单⼈净化⼯作台、⾼压蒸汽灭菌器、微⽣物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查⽤培养基等。
4.3 ⽆菌培养基适⽤性检查：本检查可在供试品的⽆菌检查前或与供试品的⽆菌检查同时进⾏。
4.3.1 培养基：硫⼄醇酸盐流体培养基、胰酪⼤⾖胨液体培养基或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。
4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备⽅法稀释液、冲洗液配制后应采⽤验证合格的灭菌程序灭菌。
a) 0.1%⽆菌蛋⽩胨⽔溶液取蛋⽩胨1.0g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值⾄7.1±0.2，分装，灭菌。
b) pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液取磷酸⼆氢钾3.56g，⽆⽔磷酸氢⼆钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋⽩胨1.00g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。
c) 根据供试品的特性，可选⽤其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%⽆菌氯化钠溶液）。
如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加⼊表⾯活性剂或中和剂等。
4.3.3 ⽆菌性检查：每批培养基随机取不少于5⽀（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应⽆菌⽣长。
4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所⽤的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中⼼获得的⼲燥菌种为第0 代），并采⽤适宜的菌种保藏技术进⾏保存，以保证试验菌株的⽣物学特性。
⾦黄⾊葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕⽣孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕⽩⾊念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕⿊曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种⾦黄⾊葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄胰酪⼤⾖胨液体培养基中或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基上，接种⽣孢梭菌的新鲜培养物⾄硫⼄醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24⼩时；b) 接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄沙⽒葡萄糖液体培养基中或沙⽒葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48⼩时，上述培养物⽤pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液或0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。
培养基适用性检查验证方案
编号: AB/06-31-B培养基适用性验证方案计数培养基****药厂有限公司标题培养基适用性验证方案编号AB/06-31-B页码共5页、第1页执行200 年月日颁发部门GMP综合办公室分发部门行政管理办公室分发数起草人起草日期审核人审核日期批准人批准日期目录1. 概述 (2)2. 验证目的 (2)3. 验证的范围 (2)4. 验证人员及职责 (2)5. 验证程序和方法 (2)6. 验证可接受的标准 (3)7. 验证步骤 (3)8. 结果分析及评价： (4)9. 验证报告 (5)10. 建议 (5)11. 最准批准 (5)12. 所使用的记录 (6)1. 验证目的：细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。
本次验证的目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。
2. 参照标准：2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。
3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查。
4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
4.2.2认真观察并做好验证原始记录。
4.2.3对实施验证的结果负责。
4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。
4.3.1.3负责验证方案的批准工作。
4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
4.3.1.5负责验证报告的批准工作。
4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。
4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
4.3.2.3负责验证方案的实施。
4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。
4.3.2.5参与验证结果的评价工作。
4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。
4.3.3.2负责验证方案的审核工作。
4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。
药典增补本 培养基适用性检查(限度)
菌种→沙氏葡萄糖琼脂或马铃薯葡萄糖琼脂(20～25℃/5～7天)→加入3～5ml含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱→吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05％聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
适用性检查
胰酪大豆胨琼脂
培养基适用性检查（限度）
菌悬液制备
金黄色葡萄球菌
菌种→胰酪大豆胨琼脂或胰酪大豆胨肉汤(30～35℃/18～24小时)→用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
白色念珠菌
菌种→沙氏葡萄糖琼脂或沙氏葡萄糖肉汤(20～25℃/ 2～3天)→用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成适宜浓度的菌悬液
白色念珠菌
黑曲霉
加入菌悬液(≤100cfu)→培养(20～25℃/不超过5天)
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
加入菌悬液(≤100cfu)→培养(30～35℃/不超过3天)
白色念珠菌
黑曲霉
加入菌悬液(≤100cfu)→培养(30～35℃/不超过5天)Fra bibliotek胰酪大豆胨肉汤
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
枯草芽孢杆菌
加入菌悬液(≤100cfu)→培养(30～35℃/不超过3天)
沙氏葡萄糖琼脂
培养基适用性检查验证方案
培养基适用性验证方案编制:审核:批准:1.验证目的：本次验证的目的是确认无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基应进行培养基的适用性检查，符合灵敏度要求。
2.参照标准2010版中国药典二部附录：XII A无菌检查法和XI G微生物限度检查法。
3.验证项目无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基的适用性检查。
45.前提条件确认5.1所有本次验证实施过程中用到的仪器都已经过计量并且在计量有效期内。
5. 2所有参与本次验证的公司人员均进行相关培训6.接受标准6.1.液体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。
6.2.液体培养基指示能力桧查：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。
6.3.固体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。
6.4.固体培养基指示能力检査：被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。
6.5.培养基抑制能力检査：试验菌应不得生长。
6.6.无菌性检查：应不得有菌生长。
6・7・被检培养基上的菌落数不小于对照培养基上的菌落平均数的 生长的菌落大小、形态特征应一致。
7. 验证实施7.1 •试验用仪器和物料所用培养皿、移液管、工器具均应严格按照相关的灭菌程序灭菌；生物安全柜、灭菌器、霉菌培 养箱、生化培养箱、水浴锅、电热鼓风干燥箱等。
72验证用培养基及试剂适用性检查:70%,且74测试菌悬液菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30〜35 ° C培养18〜24小时。
分别取上述新鲜培养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50^100cful的菌悬液。
接种生抱梭菌至硫乙醇酸盐流体培养基中，30〜35 C培养18〜24小时。
上述新鲜培养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数lO^lOOcfu的菌悬液。
培养基适用性验证
.培养基适用性验证方案起草人：方案审核人：方案批准人：XXXXX药业股份有限公司目录1. 验证目的 (2)2. 参照标准 (2)3. 验证项目 (2)4. 验证小组人员及职责 (3)5. 验证可接受的标准 (3)6. 验证步骤 (3)7. 菌液制备 (6)8. 适用性检查 (6)9. 控制菌检查 (7)10. 操作方法 (8)11.结论 (11)1. 验证目的：需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基及控制菌培养基应进行培养基的适用性检查。
本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数及测定和控制菌适用性检查。
2. 参照标准：2015版中国药典微生物限度检查法。
3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查和控制菌适用性检查。
4.验证小组人员及职责：4.14.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
4.2.2认真观察并做好验证原始记录。
4.2.3对实施验证的结果负责。
4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。
4.3.1.3负责验证方案的批准工作。
4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
4.3.1.5负责验证报告的批准工作。
4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。
4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
4.3.2.3负责验证方案的实施。
4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。
4.3.2.5参与验证结果的评价工作。
4.3.3质量部职责4.3.3.1负责验证方案的审核工作。
4.3.3.2负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。
4.3.3.3负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。
4.3.3.4负责验证资料和报告的审核工作。
4.3.3.5负责验证文件回收、归档管理工作。
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版药典培养基适用性验
证
公司内部编号：（GOOD-TMMT-MMUT-UUPTY-UUYY-DTTI-
培养基验证文件
药
有
限
公司
制药有限公司
验证立项申请表
验证方案的审批
验证方案目录
1、概述
2、验证目的
3、验证范围
4、验证项目小组成员及职责
5、验证合格标准
6、试验材料
7、菌液制备
8、适用性检查
9、验证记录
10、验证结论及综合评价
计数培养基适用性检查的验证方案
1. 验证目的：
需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。
本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基是否适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数测定。
2. 参照标准：《中国药典》2015年版四部1105非无菌产品微生物限度检查法。
3. 验证项目：胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基的适用性检查。
4.验证小组人员及职责：
5. 合格标准：被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。
6. 试验材料：
6.1. 被验证产品：胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基。
6.2. 仪器设备：
6.2.1. YXQ-LS-100G型立式压力蒸汽灭菌器
6.2.2. GHT-00双人净化工作台
6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安全柜
6.2.4. MJ-250I型霉菌培养箱 (20～25℃)
6.2.5. LRH-250生化培养箱 (30～35℃)
6.2.6. 电热恒温干燥箱
6.2.7微波炉
6.3. 验证用培养基
6.4. 验证用菌株：(第代)
7. 菌液制备
按6.4规定程序培养各试验菌株。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3～5ml含
0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml的黑曲霉孢子悬液。
8. 适用性检查：
8.1. 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌液（50～
100cfu/ml）各1ml，每株试验菌平行制备2个平皿，分别注入2个无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，并作阴性对照，混匀，凝固，置30～35℃培养24小时，计数；取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml，分别注入2个无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，并作阴性对照，混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计数；取黑曲霉菌的菌液（50～
100cfu/ml）1ml，注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，并作阴性对照，混匀，凝固，置20～25℃培养168小时，计数。
8.2. 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌液（50～
100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，并作阴性对照，混匀，凝固，置30～35℃培养24小时，计数；取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，并作阴性对照，混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计数；取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，并作阴性对照，混匀，凝固，置20～25℃培养168小时，计数。
9. 验证记录
10. 验证结论及综合评价
评价人：日期：
附表1：
计数培养基适用性检查验证记录
试验时间年月日完成时间年月日
复核人试验人复核人试验人
验证报告的审批
验证报告
1. 验证目的：
需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。
本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基是否适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数测定。
2. 参照标准：《中国药典》2015年版四部1105非无菌产品微生物限度检查法。
3. 验证项目：胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基的适用性检查。
4.验证小组人员及职责：
5. 合格标准：被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5～2范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。
6. 试验材料：
6.1. 被验证产品：胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基。
6.2. 仪器设备：
6.2.1. YXQ-LS-100G 型立式压力蒸汽灭菌器 6.2.2. GHT-00双人净化工作台 6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安全柜 6.2.4. MJ-250I 型霉菌培养箱 (20～25℃) 6.2.5. LRH-250生化培养箱 (30～35℃) 6.2.6. 电热恒温干燥箱 6.2.7
微波炉
6.3. 验证用培养基
6.4. 验证用菌株：(第 代)
7. 菌液制备
按6.4规定程序培养各试验菌株。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入3～5ml含
0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml的黑曲霉孢子悬液。
8. 适用性检查：
8.1. 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌液（50～
100cfu/ml）各1ml，每株试验菌平行制备2个平皿，分别注入2个无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，并作阴性对照，混匀，凝固，置30～35℃培养24小时，计数；取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml，分别注入2个无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，并作阴性对照，混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计数；取黑曲霉菌的菌液（50～
100cfu/ml）1ml，注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，并作阴性对照，混匀，凝固，置20～25℃培养168小时，计数。
8.2. 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的菌液（50～
100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，并作阴性对照，混匀，凝固，置30～35℃培养24小时，计数；取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2
个平皿，并作阴性对照，混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计数；取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，并作阴性对照，混
匀，凝固，置20～25℃培养168小时，计数。
9. 验证记录
10. 验证结论及综合评价
附表1：
计数培养基适用性检查验证记录
试验时间年月日完成时间年月日
复核人试验人复核人试验人
制药有限公司验证证书。