培养基适用性操作方法
控制菌检查用培养基适用性检查操作规程
控制菌检查用培养基适用性检查操作规程一、引言本操作规程旨在规范采用适用性检查方法验证控制菌检查用培养基的适用性的操作过程，确保检查结果准确可靠，提高微生物控制的有效性。
二、范围本操作规程适用于生物药品、食品、化妆品等行业的微生物控制实验室。
三、设备和试剂准备1.培养皿和管子：采用符合国家标准的试剂器皿。
2.培养基：根据实际需要选择合适的培养基，确保培养基的质量符合相关标准。
3.培养基密度标准液：用于调整培养基的密度。
4.液体融化装置：用于融化固体培养基。
5.无菌纸片和无菌棒：用于为菌液接种提供无菌工具。
6.灭菌器：用于灭菌培养器皿和试剂。
7.放射源：用于灭菌工作区域。
8.荧光显微镜：用于观察菌落生长。
9.消毒液和洗涤剂：用于清洗工作台和培养器皿。
四、操作步骤1.准备工作台和操作区域，进行必要的消毒和清洁。
2.准备所需的培养基和试剂。
3.确保培养基质量合格，根据需要使用培养基密度标准液调整培养基的密度。
4.打开培养基瓶盖，将培养基倒入清洁的培养皿或管子中，尽量避免有气泡产生。
5.放入灭菌器中进行灭菌，确保培养器皿和试剂的无菌状态。
6.露肩接种法将待测菌液接种于培养皿表面，接种菌液的体积应适量，避免过多或过少。
7.使用灭菌的无菌棒均匀涂抹接种菌液，确保菌液均匀分布在培养基表面。
8.均匀涂抹后，用无菌纸将菌液多余部分吸干。
9.将接种好的培养皿密封，放入恒温培养箱中进行培养，温度和时间根据具体培养基要求确定。
10.培养箱内的培养皿应避免震动和突然变化的温度。
11.培养一定时间后，取出培养皿进行观察。
12.使用荧光显微镜观察菌落生长情况，记录菌落数量和形态特征。
13.根据培养基的功能和使用要求，进行结论判断。
14.清洗灭菌培养器皿和试剂，彻底清洗工作区域，确保无菌状态。
五、质量控制1.确保培养基和试剂的质量符合相关标准。
2.使用灭菌的无菌器皿和试剂，避免污染。
3.严格控制接种菌液的体积，避免过多或过少的接种量。
控制菌检查用培养基适用性检查操作规程
1目的2适用范围控制菌检查中用的培养基。
检查项目包括培养基的促生长、指示和抑制特性能力。
3发放范围质量部4职责5.1菌种和菌液制备5.1.1控制菌检查用培养适用性检查试验用菌株。
大肠埃希菌（Escherichia coli) [CMCC(B0 44102]金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B0 26003乙型副伤寒沙门菌铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [CMCC(B) 10104生孢梭菌(Clostridium sporgenes) [CMCC(B) 64941]白色念珠菌Candida albicans) [CMCC(B) 98001]5.1.2将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或在胰酪大豆胨琼脂培养基上，30-35℃培养18-24小时，将白色念珠菌接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基上或沙氏葡萄糖液体培养基中，20-25℃培养2-3天，将生孢梭菌接捉于梭菌增菌培养基中置厌氧条件下30-35℃培养24-48小时或接种于硫乙醇酸盐液体培养基中30-35℃培养18-24小时。
5.2各种培养基需要测试的能力及判断指标5.2.1液体培养基促生长能力检查，取不大于100cfu的试验菌分别接种于被检查培养基和对照培养基中，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短培养时间下培养。
增菌培养基多澄清液体培养基，与对照培养基比较，被检查培养基中试验菌应生长良好，表现为液体培养基浑浊。
固体培养基促生长能力检查：取试验菌液（含菌数不大于100cfu）分别涂布于被检查培养基和对照培养基上，在相应控制菌检查规定的培养温度及不大于规定的最短时间下培养，与对照培养基比较，被检查培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。
若被检查培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落数的比值应在50-200%，且菌落形态、大小与对照培养基上的菌落一致，则判断该培养基的适用性检查促生长能力符合规定。
培养基适用性检查标准操作规程
培养基适⽤性检查标准操作规程培养基适⽤性标准操作规程1⽬的规范培养基适应性检查的标准操作。
2范围本规程适⽤于《中华⼈民共和国药典》2010年版⼆部规定微⽣物限度检查中成品培养基、由脱⽔培养基或按处⽅配制的培养基均应进⾏培养基适⽤性检査。
3责任3.1本规程由质量保证中⼼主任指定⼈员起草。
3.2与本⽂件相关的部门负责⼈参与审阅，企业质量负责⼈批准本⽂件。
3.3质量控制中⼼负责具体实施本规程。
4内容4.1依据4.1.1《药品⽣产质量管理规范》（2010年修订）4.1.2《中华⼈民共和国药典》2010年版⼆部4.2试验⽤菌株及培养基4.3试验⽤仪器设备4.3.1恒温培养箱（30～35℃）、霉菌培养箱（23～28℃）、蒸汽压⼒灭菌器、净化⼯作台、电热⼲燥箱、恒温⽔浴锅、振荡器、电冰箱、天平4.3.2锥形瓶、培养⽫（9cm）、量筒、试管及塞、吸管（1ml分度，10ml分度）4.3.3接种环、⼄醇灯、⼄醇棉球或碘伏棉球、⽕柴、记号笔、灭菌镊⼦、不锈钢药匙、⽩瓷盘。
4.4操作步骤4.4.1菌液的制备接种⼤肠埃希菌、⾦黄⾊葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄营养⾁汤培养基中，于30～35℃培养18～24h。
取30～35℃培养18～24h的⼤肠埃希菌、⾦黄⾊葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养⾁汤新鲜培养物1ml，⽤%⽆菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml 含菌数50～100cfu的菌悬液，备⽤。
接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄改良马丁培养基上，于23～28℃培养24～48h。
取于23～28℃培养24～48h的⽩⾊念珠菌新鲜培养物1ml，⽤%⽆菌氯化钠溶液10倍递增稀释每1ml含菌数50～100cfu的菌悬液备⽤。
接种⿊曲霉菌的新鲜培养物⾄改良马丁琼脂斜⾯培养基上，于23～28℃培养5～7天，加⼊3～%（ml/ml)聚⼭梨酸酯80的%⽆菌氯化钠溶液，将孢⼦洗脱，然后，⽤适宜的⽅法吸出孢⼦悬液⾄⽆菌试管内，⽤含%（ml/ml)聚⼭梨酸酯80的%⽆菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含孢⼦数50～100cfu的孢⼦悬液备⽤。
103培养基的适用性检查和方法适用性试验操作规程
103培养基的适用性检查和方法适用性试验操作规程一、适用性检查操作规程1.目的适用性检查的目的是评估103培养基在特定微生物种类的培养和生长方面的适用性。
该操作规程旨在确保试验能够准确、可靠地评估103培养基的适用性。
2.实验器材和试剂-103培养基-微生物种类样品-混合废液-恒温培养箱-离心机-吸管或移液管-培养皿或试管3.实验步骤3.1.将103培养基根据要求制备好，确保无菌。
3.2.取微生物种类样品分别接种到103培养基上。
3.3.按照正常培养条件进行孵育，如温度、湿度和气氛条件等。
3.4.观察培养基上的微生物生长情况，记录并比较不同菌株之间的差异。
3.5.对比观察培养基和其他培养基的结果，评估103培养基在不同微生物种类上的适用性。
4.结果与分析4.1.分析培养基上不同微生物种类的生长情况，评估培养基的适用性。
4.2.根据观察结果，可以得出结论，103培养基是否适用于特定微生物种类的培养和生长。
5.结论和建议根据实验结果，验证103培养基的适用性并给出相应的结论和建议，如培养基的优点、缺点、适用范围和注意事项等。
1.目的方法适用性试验旨在评估103培养基在特定微生物检测方法中的适用性，确保能够准确、可靠地检测目标微生物的存在。
2.实验器材和试剂-103培养基-微生物样品-培养皿或试管-移液管或吸管-离心机-过滤膜3.实验步骤3.1.根据目标微生物的检测方法要求，准备好所需的实验器材和试剂。
3.2.用103培养基制备好所需的培养基和培养条件。
3.3.取微生物样品，按照检测方法要求处理样品。
3.4.将处理后的样品分别接种到103培养基上，确保无菌。
3.5.按照检测方法要求进行培养和检测。
3.6.观察培养基上的微生物生长情况，并比较不同微生物检测方法的结果。
4.结果与分析4.1.分析不同微生物检测方法的结果，评估103培养基在特定检测方法中的适用性。
4.2.根据实验结果，可以得出结论，103培养基是否适用于特定微生物检测方法。
实验用培养基适用性检查标准操作规程讲述
起草人Prepared by:起草日期Date: _____________________ QC审核人Reviewed by:审核日期Date: _____________________ QC审核人Reviewed by:审核日期Date: QA批准人Approved by:批准日期Date:质量部QD目的Purpose为保障微生物检验的准确性及相关工作特制定本规定。
范围Scope本程序适用于微生物限度测定培养基的适用性检查及相关工作。
职责Responsibility分析员：严格按照本操作规程执行。
及时完成各类相关记录。
在主管的指导下进行任何可能的OOS及偏差调查。
主管：监督本操作规程的执行。
对检验员进行必要的培训。
指导任何可能的OOS和偏差调查。
内容procedure1检验员应根据培养基配制程序或培养基各自的说明书配制培养基。
2试验用菌种及培养基2.1菌种:2.1.1培养基灵敏度测试所用的菌株传代次数不得超过5代，从国家药检所或菌种保藏中心购买。
2.1.2枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[ATCC 6633]2.1.3大肠埃希菌(Escherichia coli) [ATCC 8739]2.1.4金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [ATCC 6538]2.1.5白色念珠菌(Candida albicans) [ATCC 10231]2.1.6黑曲霉(Aspergillus niger)[ATCC 16404]2.1.7伤寒沙门菌(Salmonella) [ATCC 14028]2.1.8铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) [ATCC 9027]2.2培养基2.2.1按照培养基说明书进行配制灭菌。
2.2.2大豆酪蛋白消化肉汤Soybean-Casein Digest Broth2.2.3大豆酪蛋白消化琼脂Soybean-Casein Digest Agar2.2.4沙氏葡萄糖琼脂Sabouraud Dextrose Agar2.2.5肠道菌增菌肉汤Enterobacteria Enrichment Broth Mossel2.2.6紫红色胆汁葡萄糖琼脂Violet Red Bile Glucose Agar2.2.7麦康凯肉汤MacConkey Broth2.2.8麦康凯琼脂MacConkey Agar2.2.9RV沙门氏菌富集肉汤Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth2.2.10木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂Xylose Lysine Deoxycholate Agar2.2.11甘露醇氯化钠琼脂培养基Mannitol Salt Agar2.3微生物计数培养基的适用性检查2.3.1微生物计数用的成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基适用性检查。
(精选)无菌检查法培养基的适用性检查
(精选)无菌检查法培养基的适用性检查无菌检查法是一种用于检测生物培养基中是否存在细菌、真菌等微生物的方法。
对于无菌检查法培养基的适用性检查，其主要目的是通过一系列实验探究不同基质中培养基的适用性，并验证其能否满足质量控制要求。
关于无菌检查法培养基适用性检查，其需要考虑以下几个方面：1. 检测的菌种无菌检查法的适用性检查主要是针对检测的菌种进行的。
在检查培养基适用性时，应选取常见的菌种，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等，以测试其在不同基质中生长情况。
2. 基质的选择适用性检查需要考虑基质的选择。
一般情况下，培养基要适应于常见的基质中，如水、空气、土壤等。
同时，针对基质特性有所不同的检测培养基，还需要进行不同基质特性的适用性测试，如pH值、含盐量等。
3. 实验室条件在进行无菌检查法培养基适用性检查时，还需要考虑实验室条件。
一般情况下，必须要有一定的实验室基础设施和操作规范，如洁净室、灭菌设备等。
4. 实验材料适用性检查还需要考虑实验材料的选择。
一般情况下，适用性检查需要使用经过严格检测和认证的实验材料，如蒸馏水、洗涤剂、试管等。
需要注意的是，在进行无菌检查法培养基适用性检查时，需要进行详细的实验记录，并对实验结果进行分析和总结，以便更好地指导检测实际生产和应用过程中的无菌检测工作，确保其可靠和稳定。
总之，无菌检查法培养基适用性检查，是一项非常重要的质量控制工作。
只有通过严格的实验探究和检测，才能保证培养基在实际应用过程中具有较好的适应性和稳定性，积极促进无菌检测工作的提高和优化，更好地维护人类的健康与安全。
培养基灵敏度及适用性检查操作规程
1. 目的：通过培养基适用性检查，确保购买的培养基符合实验要求。
2. 范围：本规程适用于技术质量部实验员对培养基适用性的检查。
3. 职责：质量部实验员负责执行此规程。
4. 内容：4.1 检验依据：《中华人民共和国药典》2015版4.2 试验用具：烧杯、三角瓶、酒精灯、接种环、平皿、试管、吸管、移液枪、滴管、电子天平、电热恒温培养箱、生化培养箱或恒温恒湿培养箱、单人净化工作台、高压蒸汽灭菌器、微生物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查用培养基等。
4.3 无菌培养基适用性检查：本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。
4.3.1 培养基：硫乙醇酸盐流体培养基、胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。
4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备方法稀释液、冲洗液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
a) 0.1%无菌蛋白胨水溶液取蛋白胨1.0g，加水1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值至7.1±0.2，分装，灭菌。
b) pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，无水磷酸氢二钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋白胨1.00g，加水1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。
c) 根据供试品的特性，可选用其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%无菌氯化钠溶液）。
如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。
4.3.3 无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应无菌生长。
4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的干燥菌种为第0 代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕生孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕白色念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕黑曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时；b) 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48小时，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。
培养基使用性检查操作规程
培养基适用性检查操作规程编制人：日期：部门：微生物室审核人：日期：替代：批准人：日期：执行日期：1、目的建立一个培养基适用性检查操作规程。
2、适用范围微生物限度及无菌检查的成品培养基，由脱水培养基或按处方配置的培养基均应进行培养基适用性检查。
3、检验依据按2010年版《中国药典（一、二部）》附录无菌方法进行测试检查。
4、试验所需菌种大肠埃希菌；金黄色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；生孢梭菌；白色念珠菌；黑曲霉。
5、标准规定5.1 无菌培养基使用性检查5.1.1 无菌性：每批培养基随机取不少于5支（瓶），经培养14天应无菌生长。
5.1.2 灵敏度：经培养对照管应无菌生长，试验管接菌小于100cfu均应生长良好。
5.2 微生物限度使用性检查5.2.1 细菌、霉菌和酵母菌计数检查取标准菌株大肠、金葡、枯草、白念、黑曲霉菌50～100cfu,分别接入于测试与对照培养基，经规定温度、时间培养，测试结果测试与对照培养基平均菌落数比不应小于70%。
5.2.2 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌检查取新鲜标准菌株大肠、金葡、铜绿假单胞菌制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试，结果被测培养试验菌的生长反应情况与对照培养基一致。
（液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长；固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征）。
5.2.3 大肠埃希菌、大肠菌群检查取新鲜标准菌株大肠、金葡球菌制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养基进行促生长能力、抑制能力即指示能力测试，结果被测培养基试验菌的的生长反应情况应与对照培养基一致。
（液体培养基应记录为生长良好/生长微弱/未生长；固体培养基应记录为符合xx菌特征/不符合xx菌特征）。
5.2.4白色念珠菌、梭菌检查取新鲜标准菌株大肠、白念、生孢梭制备使成10～100cfu菌悬液，分别对测试与对照培养进行促生长能力、抑制能力及指示能力测试，结果被测培养基试验菌的生长反应情况应与对照培养基一致。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
序号 分类
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 备注： 1、菌种接种量（50~100cfu）：除MUG培养基加入菌液量为0.2ml、EMB接种量为0.1ml、胆盐硫乳琼脂培养基0.1ml外，其余加入量为1ml； 2、特殊制备：曙红亚甲蓝（EMB）、胆盐硫乳琼脂培养基需35℃预培养8h； 3、液体培养基体积：胆盐乳糖培养基100ml、MUG培养基5ml、乳糖胆盐发酵培养基10ml、乳糖发酵培养基10ml、营养肉汤100ml、四硫磺酸钠亮绿培养基10ml、改良马丁培养基9ml； 4、培养基适应性参见《中国药典》及中检院SOP；菌种传代：中检院SOP第340页到341页 沙 门 菌 大肠 埃希 菌 大肠 菌群 细菌 霉菌
大肠埃希菌 大肠埃希菌 白念 白念
金葡球菌 枯草杆菌 枯草杆菌 黑曲 空白 / 空白 / / 空白 空白 / / 空白 / / 空白 / / / / / / / / / / / / / / / / /
大肠埃希菌 铜绿假单胞菌 金葡球菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌 空白
大肠埃希菌 大肠埃希菌 乙型副伤寒 乙型副伤寒 大肠埃希菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌 乙型副伤寒 金葡球菌 金葡球菌 空白 空白 金葡球菌 空白 / 黑曲 / / / 金葡球菌 / / 金葡球菌 / / 黑曲 / / /
平皿 数 培养基
营养琼脂培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 胆盐乳糖培养基 MUG 曙红亚甲蓝（EMB） （沙门菌必须） 乳糖胆盐发酵培养基 乳糖发酵培养基 营养肉汤
1
2
3金葡球菌 黑曲来自456
7
空白 / / / / / / / / / / / / / /
结果判定
30~35℃/48h，与对照培养基同步操作，菌落数不 小于对照培养基的70%且形态一致 23~28℃/72h，与对照培养基同步操作，菌落数不 小于对照培养基的70%且形态一致 按规定温度培养18h，与对照比较，应生长良好； 48h，空白和金葡球菌瓶应不得浑浊（100ml） 按规定培养5h（可延长24h）与对照比较，被被检 培养基生长良好，并在366nm显荧光 按规定培养18h，与对照培养基比较，形态等一 致；培养24h，空白应无菌生长 按规定培养18h，与对照培养基比较，应浑浊、产 气，空白应不变色、不得浑浊 按规定培养18h，与对照培养基比较，应浑浊、产 气，空白应不变色、不得浑浊 按规定培养18h，与对照培养基比较，应浑浊，48h 空白应不得浑浊 临用时加0.2ml碘试液和0.1ml亮绿试液；按规定培 养18h，与对照培养基比较，应浑浊，24h，空白和 金葡球菌管应不得浑浊 按规定培养18h，与对照培养基比较，形态一致， 48h空白无菌生长 药典无方法 增菌用：培养5天，逐日观察结果 菌种传代：药典只有改良马丁培养基的SOP 甘油菌：与菌悬液等体积的20%无菌甘油的TSB 环境监测：药典无方法
四硫磺酸钠亮绿（TTB） 乙型副伤寒 乙型副伤寒 胆盐硫乳琼脂培养基 （DHL） 三糖铁琼脂培养基 改良马丁培养基 改良马丁琼脂培养基 胰酪胨大豆肉汤培养基 （TSB） 胰酪胨大豆琼脂培养基 乙型副伤寒 乙型副伤寒 / 白念 / / / / 白念 / / /
/ / / /
马丁培养基9ml；