培养基适用性验证
版药典培养基适用性验证
造就基验证文件制Array药有限公司制药有限公司验证立项申请表验证计划的审批验证方案目录1.概述2.验证目标3.验证规模4.验证项目小构成员及职责5.验证及格尺度6.实验材料7.菌液制备8.实用性检讨9.验证记载10.验证结论及分解评价计数造就基实用性检讨的验证计划1. 验证目标：需氧菌.霉菌及酵母菌计数用的造就基应进行造就基的实用性检讨.本次验证的目标是确认胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基是否合适需氧菌.霉菌及酵母菌总数测定.2. 参照尺度：《中国药典》2015年版四部1105非无菌产品微生物限度检讨法.3. 验证项目：胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基的实用性检讨.4.验证小组人员及职责：～2规模内,且菌落形态大小与对比造就基上的菌落一致.6. 实验材料：6.1. 被验证产品：胰酪大豆胨琼脂造就基.沙氏葡萄糖琼脂造就基.6.2. 仪器装备：6.2.1. YXQ-LS-100G型立式压力蒸汽灭菌器6.2.2. GHT-00双人净化工作台6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安然柜6.2.4.MJ-250I型霉菌造就箱 (20～25℃)6.2.5.LRH-250生化造就箱 (30～35℃)6.3. 验证用造就基6.4. 验证用菌株：(第代)7. 菌液制备按6.4划定程序造就各实验菌株.取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌.白色念珠菌的新颖造就物,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml的菌悬液;取黑曲霉的新颖造就物参加3约为50~100cfu∕ml的黑曲霉孢子悬液.8. 实用性检讨：8.1. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,每株实验菌平行制备2个平皿,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）1ml,注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.8.2. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.9. 验证记载10. 验证结论及分解评价评价人：日期：附表1：计数造就基实用性检磨练证记载实验时光年代日完成时光年代日复核人实验人复核人实验人验证陈述的审批验证报告1. 验证目标：需氧菌.霉菌及酵母菌计数用的造就基应进行造就基的实用性检讨.本次验证的目标是确认胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基是否合适需氧菌.霉菌及酵母菌总数测定.2. 参照尺度：《中国药典》2015年版四部1105非无菌产品微生物限度检讨法.3. 验证项目：胰酪大豆胨琼脂造就基和沙氏葡萄糖琼脂造就基的实用性检讨.4.验证小组人员及职责：～2规模内,且菌落形态大小与对比造就基上的菌落一致. 6. 实验材料：6.1. 被验证产品：胰酪大豆胨琼脂造就基.沙氏葡萄糖琼脂造就基. 6.2. 仪器装备：6.2.1. YXQ-LS-100G 型立式压力蒸汽灭菌器 6.2.2. GHT-00双人净化工作台 6.2.3. BSC-110011A2-X 生物安然柜 6.2.4.MJ-250I 型霉菌造就箱 (20～25℃) 6.2.5.LRH-250生化造就箱 (30～35℃)6.4. 验证用菌株：(第 代)7. 菌液制备按6.4划定程序造就各实验菌株.取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌.白色念珠菌的新颖造就物,用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成约为50~100cfu∕ml 的菌悬液;取黑曲霉的新颖造就物参加3约为50~100cfu∕ml的黑曲霉孢子悬液.8. 实用性检讨：8.1. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,每株实验菌平行制备2个平皿,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入2个无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）1ml,注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.8.2. 取金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.枯草芽孢杆菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻胰酪大豆胨琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置30～35℃造就24小时,计数;取白色念珠菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就72小时,计数;取黑曲霉菌的菌液（50～100cfu/ml）各1ml,分离注入无菌平皿中,立刻倾泻沙氏葡萄糖琼脂对比造就基,每株实验菌平行制备2个平皿,并作阴性对比,混匀,凝固,置20～25℃造就168小时,计数.9. 验证记载10.验证结论及分解评价附表1：计数造就基实用性检磨练证记载实验时光年代日完成时光年代日复核人实验人复核人实验人制药有限公司验证证书。
控制菌检查用培养基适用性检查操作规程
控制菌检查用培养基适用性检查操作规程一、引言本操作规程旨在规范采用适用性检查方法验证控制菌检查用培养基的适用性的操作过程，确保检查结果准确可靠，提高微生物控制的有效性。
二、范围本操作规程适用于生物药品、食品、化妆品等行业的微生物控制实验室。
三、设备和试剂准备1.培养皿和管子：采用符合国家标准的试剂器皿。
2.培养基：根据实际需要选择合适的培养基，确保培养基的质量符合相关标准。
3.培养基密度标准液：用于调整培养基的密度。
4.液体融化装置：用于融化固体培养基。
5.无菌纸片和无菌棒：用于为菌液接种提供无菌工具。
6.灭菌器：用于灭菌培养器皿和试剂。
7.放射源：用于灭菌工作区域。
8.荧光显微镜：用于观察菌落生长。
9.消毒液和洗涤剂：用于清洗工作台和培养器皿。
四、操作步骤1.准备工作台和操作区域，进行必要的消毒和清洁。
2.准备所需的培养基和试剂。
3.确保培养基质量合格，根据需要使用培养基密度标准液调整培养基的密度。
4.打开培养基瓶盖，将培养基倒入清洁的培养皿或管子中，尽量避免有气泡产生。
5.放入灭菌器中进行灭菌，确保培养器皿和试剂的无菌状态。
6.露肩接种法将待测菌液接种于培养皿表面，接种菌液的体积应适量，避免过多或过少。
7.使用灭菌的无菌棒均匀涂抹接种菌液，确保菌液均匀分布在培养基表面。
8.均匀涂抹后，用无菌纸将菌液多余部分吸干。
9.将接种好的培养皿密封，放入恒温培养箱中进行培养，温度和时间根据具体培养基要求确定。
10.培养箱内的培养皿应避免震动和突然变化的温度。
11.培养一定时间后，取出培养皿进行观察。
12.使用荧光显微镜观察菌落生长情况，记录菌落数量和形态特征。
13.根据培养基的功能和使用要求，进行结论判断。
14.清洗灭菌培养器皿和试剂，彻底清洗工作区域，确保无菌状态。
五、质量控制1.确保培养基和试剂的质量符合相关标准。
2.使用灭菌的无菌器皿和试剂，避免污染。
3.严格控制接种菌液的体积，避免过多或过少的接种量。
培养基适用性检查方法的验证.
培养基适用性检查方法的验证文件编号制订日期审核日期批准日期云南云科药业有限公司A：验证方案方案制订制订日期方案编号方案审核审核日期方案批准批准日期云南云科药业有限公司目录1．验证项目名称2．验证组织3．概述4．验证目的5．参照标准6．验证程序7．验证报告、评价及批准1．验证项目名称：培养基适用性检查方法的验证2．验证组织：姓名部门职务分工3．概述：通过验证以确认所采用的方法适合于培养基适用性检查。
根据培养基及菌的特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。
若符合，按验证的方法和条件进行培养基适应性检查；若不符合，重新建立制订检验方法和检验条件，再进行验证，直至验证结果符合设立的验证标准。
4．验证目的：细菌、霉菌及酵母菌计数用培养基应进行培养基的适用性检查。
验证的目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。
（确认所采用的方法适合于培养基适应性检查，为了保证检验结果的准确性，对现有的检验方法进行验证。
）5．参照标准：2010年版《中国药典》二部附录ⅪJ 计数培养基的适用性检查。
6.验证程序：6.1适用范围：适用于培养基适用性检查。
6.2被验证产品：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基。
6.3试验材料：6.4试验菌株：6.5合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。
6.6验证方法：培养基在使用前应进行适用性的检查，通过对被检培养基上的菌落与对照培养基上的菌落比较，以确认所采用方法的可行性。
6.6.1菌液的制备：6.6.1.1 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24小时。
取上述营养肉汤新鲜培养物1ml加入9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5～10-7约为50～100cfu/ml的菌悬液备用。
培养基适用性验证ppt课件
b．适用性检查：接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯 草芽孢杆菌各50-100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾 入营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备3个平皿，混匀， 凝固，置30~35℃培养48h，计数；取白色念珠菌、黑曲 霉各50-100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红 钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备3个平皿，混匀，凝 固，置23~28℃培养72h，计数。同时，用相应的对照培 养基替代被检培养基进行上述试验。
5）黑曲霉菌液的制备
接种黑曲霉的新鲜培养物于改良马丁培养基上, 30℃、 150\min培养2天
4.2 适用性检查 4.2.1 试验步骤 a．菌液制备：按稀释度10-5,10-6,10-7等依次类推稀释
菌悬液，接种培养后取50～100cfu计数。接种金黄色葡 萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营 养琼脂培养基上；至硫乙醇酸盐流体培养基中，30~35℃， 培养18~24小时；接种白色念株菌的新鲜培养物至改良马 丁培养基上25~28℃，培养24~48小时，上述培养物用 0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数为50~100CFU的菌 悬液，备用。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂 斜面培养基上，23~28℃，培养5~7天，加入3-5ml0.9%无 菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液（用 管口带有薄的无菌棉花或纱布能通过滤菌丝的无菌巴氏 吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含孢子数50～100cfu的孢子悬液。菌液制备后在室温2h 内使用，在2~8℃可再24h内使用。
结果判定：若被检培养基上得菌落平均数不小于对照培 养基上得菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养 基上得菌落一致，判改培养基的适用性检查符合规定。
培养基灵敏度及适用性检查操作规程
培养基灵敏度及适⽤性检查操作规程1. ⽬的：通过培养基适⽤性检查，确保购买的培养基符合实验要求。
2. 范围：本规程适⽤于技术质量部实验员对培养基适⽤性的检查。
3. 职责：质量部实验员负责执⾏此规程。
4. 内容：4.1 检验依据：《中华⼈民共和国药典》2015版4.2 试验⽤具：烧杯、三⾓瓶、酒精灯、接种环、平⽫、试管、吸管、移液枪、滴管、电⼦天平、电热恒温培养箱、⽣化培养箱或恒温恒湿培养箱、单⼈净化⼯作台、⾼压蒸汽灭菌器、微⽣物限度仪、漩涡混合器、试验菌种、检查⽤培养基等。
4.3 ⽆菌培养基适⽤性检查：本检查可在供试品的⽆菌检查前或与供试品的⽆菌检查同时进⾏。
4.3.1 培养基：硫⼄醇酸盐流体培养基、胰酪⼤⾖胨液体培养基或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基（培养基的配制按《培养基配制操作规程》配制）。
4.3.2 稀释液、冲洗液及其制备⽅法稀释液、冲洗液配制后应采⽤验证合格的灭菌程序灭菌。
a) 0.1%⽆菌蛋⽩胨⽔溶液取蛋⽩胨1.0g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，调节pH值⾄7.1±0.2，分装，灭菌。
b) pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液取磷酸⼆氢钾3.56g，⽆⽔磷酸氢⼆钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋⽩胨1.00g，加⽔1000ml，微温溶解，滤清，分装，灭菌。
c) 根据供试品的特性，可选⽤其他经验证过的适宜的溶液作为稀释液、冲洗液（如0.9%⽆菌氯化钠溶液）。
如需要，可在上述稀释液或冲洗液的灭菌前或灭菌后加⼊表⾯活性剂或中和剂等。
4.3.3 ⽆菌性检查：每批培养基随机取不少于5⽀（瓶），置各培养基规定的温度培养14天，应⽆菌⽣长。
4.3.4 灵敏度检查4.3.4.1 菌种培养基灵敏度检查所⽤的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中⼼获得的⼲燥菌种为第0 代），并采⽤适宜的菌种保藏技术进⾏保存，以保证试验菌株的⽣物学特性。
⾦黄⾊葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）〔CMCC（B）26 003〕铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa ）〔CMCC（B）10 104〕枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）〔CMCC（B）63 501〕⽣孢梭菌（Clostridium sporogenes）〔CMCC（B）64 941〕⽩⾊念珠菌（Candida albicans）〔CMCC（F）98 001〕⿊曲霉（Aspergillus niger）〔CMCC（F）98 003〕4.3.4.2 菌液制备a) 接种⾦黄⾊葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物⾄胰酪⼤⾖胨液体培养基中或胰酪⼤⾖胨琼脂培养基上，接种⽣孢梭菌的新鲜培养物⾄硫⼄醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24⼩时；b) 接种⽩⾊念珠菌的新鲜培养物⾄沙⽒葡萄糖液体培养基中或沙⽒葡萄糖琼脂培养基上，20～25℃培养24～48⼩时，上述培养物⽤pH7.0⽆菌氯化钠-蛋⽩胨缓冲液或0.9%⽆菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数⼩于100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。
培养基适用性检查验证方案
编号: AB/06-31-B培养基适用性验证方案计数培养基****药厂有限公司标题培养基适用性验证方案编号AB/06-31-B页码共5页、第1页执行200 年月日颁发部门GMP综合办公室分发部门行政管理办公室分发数起草人起草日期审核人审核日期批准人批准日期目录1. 概述 (2)2. 验证目的 (2)3. 验证的范围 (2)4. 验证人员及职责 (2)5. 验证程序和方法 (2)6. 验证可接受的标准 (3)7. 验证步骤 (3)8. 结果分析及评价： (4)9. 验证报告 (5)10. 建议 (5)11. 最准批准 (5)12. 所使用的记录 (6)1. 验证目的：细菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基应进行培养基的适用性检查。
本次验证的目的是确认营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基适合细菌、霉菌及酵母菌数测定。
2. 参照标准：2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。
3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查。
4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
4.2.2认真观察并做好验证原始记录。
4.2.3对实施验证的结果负责。
4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。
4.3.1.3负责验证方案的批准工作。
4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
4.3.1.5负责验证报告的批准工作。
4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。
4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
4.3.2.3负责验证方案的实施。
4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。
4.3.2.5参与验证结果的评价工作。
4.3.3质量部职责4.3.3.1负责公司验证日常管理工作。
4.3.3.2负责验证方案的审核工作。
4.3.3.3负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。
培养基适用性验证方案
培养基适用性验证方案培养基适用性验证是指在培养基的研发过程中，通过实验验证培养基的适用性和质量。
这一过程对于生物学、医学等领域研究以及工业生产来说非常重要。
本文将介绍一个基本的培养基适用性验证方案，以确保培养基的质量和有效性。
一、实验目的1.验证培养基中各种成分的适用性和稳定性；2.测试培养基对细胞或微生物的生长和增殖的支持程度；3.评估培养基对细胞或微生物的表型和基因表达的影响；4.了解培养基的理化指标，如pH值、渗透压等。
二、实验步骤1.准备培养基和试样：根据所研究的生物体或微生物的需要，准备相应的培养基，包括成分和浓度。
同时，准备不同的试样，如细胞或微生物的悬浮液或分离物等，用于验证培养基的适用性。
2.测定培养基理化指标：测定培养基的理化指标，如pH值、渗透压、离子浓度等，确保其在范围内。
3.测定培养基对细胞或微生物的生长和增殖的支持程度：将细胞或微生物接种于培养基中，通过监测生物体的生长曲线、增殖速率等参数来评估培养基对其的支持程度。
可以使用细胞计数仪、显微镜等工具进行观察和计数。
4.评估培养基对细胞或微生物的表型和基因表达的影响：通过观察生物体的形态、结构、活力等方面，了解培养基对其表型的影响。
同时，可以通过转录组分析、蛋白质组分析等手段，评估培养基对基因表达的影响。
5.验证培养基的稳定性：将培养基保存一段时间后，再次进行生物体的培养和生长实验，以验证培养基的稳定性和持久性。
6.数据分析和结果呈现：对实验结果进行统计分析，包括均值、标准差等指标，通过图表、表格等形式呈现实验结果。
三、实验注意事项1.实验室条件要符合要求，包括洁净无菌、合适的温度和湿度等；2.培养基的配制要精确，注意称量和混合时间；3.使用无菌技术和条件进行细胞或微生物的接种和培养；4.实验过程中要使用适当的控制组和重复实验，以确保实验结果的可靠性和准确性；5.实验过程中要严格按照操作规程和实验流程进行，避免误操作和实验结果的偏差。
培养基适用性检查验证方案
培养基适用性验证方案编制:审核:批准:1.验证目的：本次验证的目的是确认无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基应进行培养基的适用性检查，符合灵敏度要求。
2.参照标准2010版中国药典二部附录：XII A无菌检查法和XI G微生物限度检查法。
3.验证项目无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基的适用性检查。
45.前提条件确认5.1所有本次验证实施过程中用到的仪器都已经过计量并且在计量有效期内。
5. 2所有参与本次验证的公司人员均进行相关培训6.接受标准6.1.液体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。
6.2.液体培养基指示能力桧查：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。
6.3.固体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。
6.4.固体培养基指示能力检査：被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。
6.5.培养基抑制能力检査：试验菌应不得生长。
6.6.无菌性检查：应不得有菌生长。
6・7・被检培养基上的菌落数不小于对照培养基上的菌落平均数的 生长的菌落大小、形态特征应一致。
7. 验证实施7.1 •试验用仪器和物料所用培养皿、移液管、工器具均应严格按照相关的灭菌程序灭菌；生物安全柜、灭菌器、霉菌培 养箱、生化培养箱、水浴锅、电热鼓风干燥箱等。
72验证用培养基及试剂适用性检查:70%,且74测试菌悬液菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30〜35 ° C培养18〜24小时。
分别取上述新鲜培养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50^100cful的菌悬液。
接种生抱梭菌至硫乙醇酸盐流体培养基中，30〜35 C培养18〜24小时。
上述新鲜培养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数lO^lOOcfu的菌悬液。
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培养基适用性验证方案起草人：方案审核人：方案批准人：XXXXX药业股份有限公司目录1. 验证目的 (2)2. 参照标准 (2)3. 验证项目 (2)4. 验证小组人员及职责 (3)5. 验证可接受的标准 (3)6. 验证步骤 (3)7. 菌液制备 (6)8. 适用性检查 (6)9. 控制菌检查 (7)10. 操作方法 (8)11.结论 (11)1. 验证目的：需氧菌、霉菌及酵母菌计数用的培养基及控制菌培养基应进行培养基的适用性检查。
本次验证的目的是确认胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基适合需氧菌、霉菌及酵母菌总数及测定和控制菌适用性检查。
2. 参照标准：2015版中国药典微生物限度检查法。
3. 验证项目：营养琼脂培养基和玫瑰红钠琼脂培养基的适用性检查和控制菌适用性检查。
4.验证小组人员及职责：4.1验证小组人员:4.2验证人员职责及要求4.2.1按验证方案及相关文件实施验证。
4.2.2认真观察并做好验证原始记录。
4.2.3对实施验证的结果负责。
4.3验证中各部门的职责4.3.1验证领导组职责4.3.1.1制订验证总计划，负责全公司验证工作的管理。
4.3.1.2确定验证项目及验证项目负责人。
4.3.1.3负责验证方案的批准工作。
4.3.1.4负责验证资料及结果的审核工作。
4.3.1.5负责验证报告的批准工作。
4.3.2验证工作小组职责4.3.2.1负责验证方案的起草工作。
4.3.2.2参与验证方案的讨论、确认工作。
4.3.2.3负责验证方案的实施。
4.3.2.4负责验证结果的分析、统计、报告工作。
4.3.2.5参与验证结果的评价工作。
4.3.3质量部职责4.3.3.1负责验证方案的审核工作。
4.3.3.2负责验证过程中仪器、仪表、计量器具的校验工作。
4.3.3.3负责验证中各项检测工作，提供验证的检验记录、检验报告，对验证过程中的各项检验工作负责。
4.3.3.4负责验证资料和报告的审核工作。
4.3.3.5负责验证文件回收、归档管理工作。
5. 合格标准：被检培养基上的菌落平均数不小于对照培养基上的菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。
6. 试验材料：6.1. 被验证产品：溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基、肠道菌增菌液培养基、RV沙门菌增菌液培养基、麦康凯琼脂培养基、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基、甘露醇氯化钠琼脂培养基、麦康凯液体培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基、紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基6.2. 仪器设备：6.2.1. LXD型压力蒸汽灭菌器6.2.4.JMP-250霉菌培养箱(20～25℃)6.2.5. SHP-250生化培养箱(30～35℃)6.2.7 101-1电热鼓风干燥箱6.4. 验证用菌株：(第代)7. 菌液制备7.1. 取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、沙门菌的新鲜培养物胰酪大豆胨液体培养基中，于30～35℃培养18～24小时。
取经30～35℃培养18~24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、沙门菌的新鲜培养物胰酪大豆胨液体新鲜培养物1ml加入到9mlPH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，10倍稀释至10-6~10-7不大于100cfu∕ml的菌悬液备用。
7.2.取白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基中，于20～25℃培养48~72小时。
取经20～25℃培养48~72小时的白色念珠菌用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中，10倍稀释至10-5不大于100cfu∕ml的菌悬液备用。
7.3.取黑曲霉菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基上，于20～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。
然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨脂80的PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液制成每1ml含孢子数不大于100cfu∕ml的菌悬液备用。
8.适用性检查：8.1.取铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养72小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置20～25℃培养120小时，计数。
8.2取铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养70小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（不大于100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂对照培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置20～25℃培养120小时，计数。
试验时间年月日完成时间年月日复核人试验人9.控制菌检查控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。
常用培养基适用性检测项目及所用菌株见下表。
10、操作方法10.1 RV沙门菌增菌液培养基适用性检查分别接种不大于100cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。
促生长能力检查标准：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管和对照培养基管试验菌应生长良好。
检验结果：分别接种不少于100cfu的金黄色葡萄球菌于被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。
抑制能力检查标准：被检培养基管和对照培养基管试验菌均不得生长检验结果：10.2木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基适用性检查分别用涂布法接种不大于100cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。
促生长能力+指示能力检查标准：被检培养基与对照培养基平板比较，被检培养基平板和对照培养基平板试验菌的菌落大小、生长情况、形态特征、指示剂反应与对照培养基一致。
检验结果：10.3三塘铁琼脂培养基适用性检查分别用涂布法接种不大于100cfu的乙型副伤寒沙门菌于被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。
指示能力检验标准：被检培养基平板和对照培养基平板试验菌的菌落大小、形态特征及指示剂反应均一致。
检验结果：10.4肠道菌增菌液培养基适用性检查分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌于铜绿假单胞菌被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。
促生长能力检查标准：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管和对照培养基管试验菌应生长良好。
检验结果：分别接种不少于100cfu的金黄色葡萄球菌于被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。
抑制能力检查标准：被检培养基管和对照培养基管试验菌均不得生长检验结果：10.5紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基适用性检查分别用涂布法接种不大于100cfu的大肠埃希菌于铜绿假单胞菌被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。
促生长能力+指示能力检查标准：被检培养基与对照培养基平板比较，被检培养基平板和对照培养基平板试验菌的菌落大小、生长情况、形态特征、指示剂反应与对照培养基一致。
检验结果：10.6麦康凯液体培养基适用性检查分别接种不大于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。
促生长能力检查标准：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管和对照培养基管试验菌应生长良好。
检验结果：分别接种不少于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。
抑制能力检查标准：被检培养基管和对照培养基管试验菌均不得生长检验结果：10.7麦康凯琼脂培养基适用性检查分别用涂布法接种不大于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。
促生长能力+指示能力检查标准：被检培养基与对照培养基平板比较，被检培养基平板和对照培养基平板试验菌的菌落大小、生长情况、形态特征、指示剂反应与对照培养基一致。
检验结果：10.8溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基适用性检查分别用涂布法接种不大于100cfu的铜绿假单胞菌于被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。
促生长能力检查标准：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管和对照培养基管试验菌应生长良好。
检验结果：分别接种不少于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。
抑制能力检查标准：被检培养基管和对照培养基管试验菌均不得生长检验结果：10.9甘露醇氯化钠琼脂培养基适用性检查别用涂布法接种不大于100cfu的金黄色葡萄球菌于被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。
促生长能力+指示能力检查标准：被检培养基与对照培养基平板比较，被检培养基平板和对照培养基平板试验菌的菌落大小、生长情况、形态特征、指示剂反应与对照培养基一致。
检验结果：分别接种不少于100cfu的大肠埃希菌于被检培养基和对照培养基中，35℃条件下培养24h，并将被检培养基与对照培养基管比较，观察被检培养基和对照培养基的变化及实验菌的生长情况。
抑制能力检查标准：被检培养基管和对照培养基管试验菌均不得生长检验结果：11. 结论：实验人：复核人：年月日年月日Page 11 of 11。