扫描电子显微镜生物样品制备与观察-细胞生物学实验报告
电子显微镜样品制备与观察电子显微镜样品制备[1]
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电子显微镜样品制备与观察电子显微 镜样品制备[1]
2 支持膜的制备
（1）将玻璃条、250ml烧杯洗净，玻璃条先用纱 布擦干，然后再用绸布用力反复擦净，250ml烧 杯装满蒸馏水；
（2）将玻璃条放入0.2~0.3%聚乙烯醇缩甲醛的氯 仿溶液中2~4cm深，停留3~5s后提出，在空气 中自然干燥；
2 放入样品：按程序放入样品。 3 加高压：有下列几档可选 40KV、60KV、
80KV 、100KV，若需高压应先加低压。选择 加速电压原则：电压越高，分辨率越高，反差 越小；反之，电压越低分辨率越低，反差越大。
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电子显微镜样品制备与观察电子显微 镜样品制备[1]
4 加灯丝电源：顺时针旋转至限位处（加灯丝电 源必须有高压存在），此时应看到图象，若不 能看到图象，请与专职人员联系，切勿随意调 整各旋钮。 5 观察:调整放大倍数、亮度、样品 XY平移、焦距进行观察。
（五）实验要求 1 所用器具、工具保持清洁干燥； 2 手上若沾有环氧树脂，用丙酮棉球擦去； 每人包埋2～3个样品块。
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电子显微镜样品制备与观察电子显微 镜样品制备[1]
三、修快与支持膜的制备
（一）实验目的 1 掌握超薄切片包埋块修快的方法； 2 掌握支持膜制备的方法。 （二）实验原理 见理论部分 （三）实验材料 上次实验包埋的材料
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电子显微镜样品制备与观察电子显微 镜样品制备[1]
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2020/11/28
电子显微镜样品制备与观察电子显微 镜样品制备[1]干燥
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细胞生物学实验报告[1]
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细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告细胞生物学实验报告动物细胞融合【实验目的】⒈了解动物细胞融合的常用方法。
⒉学习化学融合的基本操作过程。
⒊观察动物细胞融合过程中细胞的行为和变化。
【实验原理】细胞融合是指在自发或者诱导条件下，两个或两个以上细胞合并为双核或者多核细胞的过程。
目前人们已经发现有很多方法可以诱导细胞融合，包括病毒诱导融合、化学诱导融合和电激诱导融合。
⒈病毒诱导融合仙台病毒、牛痘病毒、新城鸡瘟病毒和疱疹病毒等可以介导细胞的融合。
这类病毒的被膜中含有融合蛋白，可介导病毒和宿主细胞融合，同时也可介导细胞与细胞的融合。
用紫外线灭活后，这些病毒即可诱导细胞发生融合。
⒉化学诱导融合很多化学试剂能够诱导细胞融合，如聚乙二醇(PEG)、二甲基亚砜、山梨醇、甘油、溶血性卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等。
这些物质能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分子层的相互亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
化学诱导方法，操作方便，诱导融合的概率比较高，效果稳定，适用于动、植物细胞，但对细胞具有一定的毒性。
PEG是被广泛使用的化学融合剂。
⒊电激诱导融合包括电诱导、激光诱导等。
其中，电诱导是先使细胞在电场中极化成为偶极子，沿电力线排布成串，再利用高强度、短时程的电脉冲击破细胞膜，细胞膜的脂质分子发生重排，由于表面张力的作用，两细胞发生融合。
电诱导方法具有融合过程易控制、融合概率高、无毒性、作用机制明确、可重复性高等优点。
【实验用品】⒈材料鸡血红细胞。
⒉试剂50%PEG、Hank’s溶液(pH7.4)、Alsever’s细胞保存液、0.85%氯化钠溶液。
⒊器材正置显微镜、离心机、离心管、载玻片、盖玻片、滴管、注射器等。
【实验步骤】⒈鸡血红细胞的制备和保存用无菌注射器先吸入Alsevers溶液1ml，再从鸡翼下静脉取血0.5~1ml，取出后放入刻度离心管中，再加入2~3mlAlsevers溶液，使总量为4~5ml，混匀并封口，置于4℃冰箱内。
细胞生物学实验实验报告
细胞生物学实验班级：生科142姓名：旷江学号：10143131组号： 2小组成员：旷江、韦立尧、莫霞指导老师：范立强、李鹏飞华东理工大学应用生物学系摘要本次细胞生物学实验通过细胞形态与结构的观察技术，细胞化学，细胞生理，细胞培养与分析，细胞周期分析，细胞成分分离与分析，细胞增殖与染色等技术对动植物细胞进行细胞形态结构的观察、细胞生理过程的研究、细胞培养与细胞分析、细胞冻存与复苏等，以此来研究动植物细胞的结构、功能和各种生命规律。
关键词：细胞增殖、细胞染色、冻存复苏、生理过程、形态结构AbstractThe cell biology experiment was carried out by cell morphology and structure observation technique, cytochemistry, cell physiology, cell culture and analysis, cell cycle analysis, cell fractionation and analysis, cell proliferation and staining. Observation of cell physiological processes, cell culture and cell analysis, cell cryopreservation and resuscitation, in order to study the structure of animals and plants, functions and a variety of laws of life.Key words: cell proliferation, cell staining, cryopreservation, physiological processes, morphological structur目录第一章综述 (1)1.1实验目的 (1)第二章实验原理 (2)2.1实验流程和应用实验方法 (2)2.2细胞器活体染色与显微观察 (2)2.3细胞骨架的观察 (3)2.4细胞冻存复苏 (3)2.5细胞冻存复苏活力检测 (3)2.6哺乳动物细胞的基因转染 (4)2.7细胞凋亡诱导和分析 (4)第三章实验仪器及试剂 (6)3.1实验仪器 (6)3.2实验试剂 (6)第四章实验步骤............ 错误！未定义书签。
细胞生物学实验显微镜的使用和细胞观察
细胞生物学实验显微镜的使用和细胞观察在细胞生物学研究中，显微镜是一种必不可少的工具。
通过显微镜的使用，科学家们可以观察和研究细胞的结构和功能，而且显微镜的技术也不断地发展和提升，使得细胞观察的分辨率和准确性更高。
本文将探讨细胞生物学实验中显微镜的使用以及细胞观察的相关内容。
一、显微镜的种类和使用方法显微镜有多种不同类型，常见的有光学显微镜和电子显微镜。
光学显微镜是最常用的显微镜，它使用可见光来观察样本。
光学显微镜可以分为单镜头显微镜和复合显微镜，其中复合显微镜是最常见的。
电子显微镜则使用电子束来观察样本，其分为透射电子显微镜和扫描电子显微镜。
在使用显微镜之前，我们需要做一些准备工作。
首先，我们需要调整显微镜的放大倍数和焦距，以便获得清晰的观察图像。
其次，我们需要将样本放在玻片上，通常是在一滴水中加入少量样本，并用盖玻片覆盖。
然后，将玻片放在显微镜的载物台上。
接下来，可以通过旋转镜片或调节焦距来使观察图像变得清晰，并通过调节光源的亮度来改变样品的照明。
二、细胞观察通过显微镜的使用，我们可以对细胞的外观、结构和功能进行观察和研究。
以下是一些可以通过显微镜观察到的细胞特征：1. 细胞形状：细胞的形状多样，可以是圆形、椭圆形、长条形等等。
不同类型的细胞形状有助于我们区分不同种类的细胞。
2. 细胞核：绝大多数细胞都含有细胞核，细胞核内含有细胞的遗传物质DNA，并且控制着细胞的生命活动。
3. 细胞器：显微镜可以观察到细胞的一些重要的内部结构，如线粒体、内质网、高尔基体等。
这些细胞器在细胞的功能中起着重要的作用。
4. 细胞膜：细胞膜是细胞的外层包裹物，它控制着细胞内外物质的交换和运输。
除了观察细胞的结构外，通过显微镜还可以进行一些更深入的实验，如观察细胞的生长过程、细胞的分裂过程等。
这些实验可以帮助我们更好地了解细胞的生命周期和功能。
综上所述，显微镜在细胞生物学实验中是一项不可或缺的工具。
通过显微镜，我们可以观察和研究细胞的结构和功能，从而深入理解细胞的生命活动。
电子显微镜实验报告
电子显微镜实验报告1.引言电子显微镜（Scanning Electron Microscope, SEM）是一种利用电子束来增大和观察微观结构和形貌的高精密仪器。
本实验旨在通过使用电子显微镜，观察并分析样本的微观结构，了解其成分和特征。
2.实验目的本实验的主要目的是：1) 了解电子显微镜的原理和工作原理；2) 学会正确操作电子显微镜的方法；3) 观察和分析不同样本的微观结构。
3.实验步骤3.1 准备样本首先，准备需要观察的样本。
样本可以是金属、无机材料、生物组织等。
3.2 装载样本将样品安置在电子显微镜的样品台上，并使用夹具固定好。
3.3 调整显微镜参数根据样品的性质和需要观察的目标，调整电子显微镜的加速电压、电子束流强度和根据需要选择所需的检测模式（如表面检测或穿透检测等）。
3.4 开始观察打开电子显微镜的电源，启动仪器。
根据操作手册中的指导，逐步调整电子显微镜的参数，以获得清晰的图像。
3.5 图像获取和分析使用电子显微镜的软件，将观察到的图像捕捉下来，并进行图像分析。
可以测量颗粒大小，计算粒子的分布密度，并观察材料的结构特征。
4.结果与讨论根据实验使用的样本，详细描述所观察到的微观结构及特征。
分析样品的成分组成、晶体结构、表面形貌以及其他相关特性，并与理论知识进行比较。
5.实验总结通过本次实验，我们深入了解了电子显微镜的工作原理和操作方法，并成功观察和分析了不同样品的微观结构。
电子显微镜在科学研究和工业应用中具有重要的作用，通过实验的学习，我们对其应用的理解更加深入。
6.参考文献（按照所使用的引用格式书写）以上为电子显微镜实验报告的基本格式和要点。
根据实际情况和要求，可以适当增加字数并拓展相关内容，以完整且准确地呈现实验的结果和讨论。
电子显微镜实验报告
电子显微镜实验报告电子显微镜实验报告引言：电子显微镜（Electron Microscope，简称EM）是一种利用电子束来观察物质微观结构的仪器。
与光学显微镜相比，电子显微镜具有更高的分辨率和放大倍数，能够观察到更小的细微结构。
本实验旨在通过使用电子显微镜，观察和分析不同样本的微观结构，以及了解电子显微镜的工作原理和操作技巧。
实验材料和仪器：本次实验使用的材料包括金属样品、植物细胞样品和昆虫组织样品。
实验所使用的仪器为电子显微镜，包括扫描电子显微镜（Scanning Electron Microscope，简称SEM）和透射电子显微镜（Transmission Electron Microscope，简称TEM）。
实验步骤：1. 样品制备：将金属样品切割成薄片，植物细胞样品进行固定和切片，昆虫组织样品进行化学处理和切片。
2. SEM观察：将样品放置在SEM的样品台上，通过控制电子束的扫描范围和电子束的强度，观察样品表面的微观结构。
3. TEM观察：将样品制备成透明薄片，放置在TEM的样品台上，通过控制电子束的透射范围和电子束的强度，观察样品内部的微观结构。
4. 结果分析：根据观察到的图像，分析样品的微观结构、形态和组成。
实验结果：1. 金属样品观察：通过SEM观察，我们可以清晰地看到金属表面的晶粒结构和纹理。
不同金属的晶粒大小和排列方式也可以通过SEM图像进行比较分析。
2. 植物细胞样品观察：通过TEM观察，我们可以观察到植物细胞的细胞壁、细胞质、细胞核和细胞器等微观结构。
通过比较不同类型的细胞样品，我们可以了解不同细胞的结构和功能差异。
3. 昆虫组织样品观察：通过SEM和TEM观察，我们可以观察到昆虫组织的外部形态和内部结构。
例如，昆虫的触角、翅膀和腿部等结构可以通过SEM观察到其表面形态，而昆虫的神经系统和内脏器官可以通过TEM观察到其内部结构。
讨论与总结：通过本次实验，我们深入了解了电子显微镜的工作原理和操作技巧，并成功观察到不同样品的微观结构。
电子显微镜实验报告
一、实验名称电子显微镜技术二、实验目的1. 了解扫描电子显微镜（SEM）和透射电子显微镜（TEM）的基本原理和结构。
2. 掌握电子显微镜的样品制备和操作方法。
3. 通过观察样品的微观结构，了解材料的形貌、内部组织结构和晶体缺陷。
三、实验仪器1. 扫描电子显微镜（SEM）：型号为Hitachi S-4800。
2. 透射电子显微镜（TEM）：型号为Hitachi H-7650。
3. 样品制备设备：离子溅射仪、真空镀膜机、切割机、研磨机等。
四、实验内容1. 扫描电子显微镜（SEM）实验（1）样品制备：将待观察的样品切割成薄片，用离子溅射仪去除表面污染层，然后用真空镀膜机镀上一层金属膜，以增强样品的导电性。
（2）操作步骤：① 开启扫描电子显微镜，调整真空度至10-6Pa。
② 将样品放置在样品台上，调整样品位置，使其位于物镜中心。
③ 设置合适的加速电压和束流，调整聚焦和偏转电压，使样品清晰成像。
④ 观察样品的表面形貌，记录图像。
（3）结果分析：通过观察样品的表面形貌，了解材料的微观结构，如晶粒大小、组织结构、缺陷等。
2. 透射电子显微镜（TEM）实验（1）样品制备：将待观察的样品切割成薄片，用离子溅射仪去除表面污染层，然后用真空镀膜机镀上一层金属膜，以增强样品的导电性。
（2）操作步骤：① 开启透射电子显微镜，调整真空度至10-7Pa。
② 将样品放置在样品台上，调整样品位置，使其位于物镜中心。
③ 设置合适的加速电压和束流，调整聚焦和偏转电压，使样品清晰成像。
④ 观察样品的内部结构，记录图像。
（3）结果分析：通过观察样品的内部结构，了解材料的微观结构，如晶粒大小、组织结构、缺陷等。
五、实验结果与讨论1. 扫描电子显微镜（SEM）实验结果：通过观察样品的表面形貌，发现样品表面存在大量晶粒，晶粒大小不一，且存在一定的组织结构。
在样品表面还观察到一些缺陷，如裂纹、孔洞等。
2. 透射电子显微镜（TEM）实验结果：通过观察样品的内部结构，发现样品内部晶粒较小，且存在一定的组织结构。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导实验目录:实验一：特殊显微镜的原理及其使用实验二：电子显微镜的原理及使用实验三：细胞膜的渗透性实验四：细胞的凝集反应实验五：诱导细胞融合—聚乙二醇法实验六：线粒体和液泡系的超活染色与观察实验七：叶绿体的荧光原位观察实验八：细胞骨架的观察实验九：细胞中DNA、RNA的显示实验一特殊显微镜的原理及其使用I.暗视野显微镜的原理和使用一、实验目的1.了解暗视野显微镜观察活细胞的基本原理；2.了解暗视野显微镜的特殊组件和位置；3.掌握调节暗视野显微镜的基本步骤。
二、原理和结构特点在日常生活中，室内飞扬的微粒灰尘是不易被看见的，但在暗的房间中若有一束光线从门缝斜射进来，灰尘便粒粒可见了，这是光学上的丁达尔现象。
暗视野显微镜就是利用此原理设计的。
它的结构特点主要是使用中央遮光板或暗视野聚光器，常用的是抛物面聚光器，使光源的中央光束被阻挡．不能由下而上地通过标本进入物镜。
从而使光线改变途径，倾斜地照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内，因而整个视野是黑暗的。
在暗视野中所观察到的是被检物体的衍射光图像．并非物体的本身，所以只能看到物体的存在和运动，不能辨清物体的细微结构。
但被检物体为非均质时，并大于1/2波长，则各级衍射光线同时进入物镜，在某种程度上可观察物体的构造。
一般暗视野显微镜虽看不清物体的细微结构，但却可分辨0.004μm以上的微粒的存在和运动，这是普通显微镜(最大的分辨力为0.2μm)所不具有的特性，可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动等。
三、仪器、材料与试剂（一）仪器具有暗视野聚光器的显微镜（二）材料牙垢微生物，洋葱内表皮细胞，载玻片，盖玻片，牙签，尖头镊子，滤纸条，指甲油，擦镜纸等。
（三）试剂生理盐水四、实验步骤1.样品制备：在一张无划痕、清洁的载玻片上滴一滴生理盐水，用牙签取牙垢或用镊子撕洋葱内表皮细胞与载玻片上的生理盐水混合均匀，盖上一片无划痕、清洁的盖玻片，用滤纸条吸取盖片四周多余的水分，用指甲油封片（或不封片）。
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扫描电子显微镜生物样品制备与观察-细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告扫描电子显微镜生物样品制备与观察
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【实验目的】
1、了解扫描电镜的基本结构与工作原理
2、了解扫描电镜的基本使用方法
3、了解临界点干燥仪的工作原理了解扫描电镜生物样品制备的基本过程
【实验原理】
扫描电镜主要用于观察样品表面几何形貌。
一般扫描电镜生物样品制备过程包括取材、固定、脱水、干燥以及导电处理等步骤。
取材时应尽量保护待观察的样品表面（如细胞表面、组织或器官的上皮表面等），并且避免样品表面在清洗过程中的人为损伤。
一般生物样品需经干燥后才能在扫描电镜下观察。
由于表面张力的作用，含水量大的生物样品在自然干燥过程中，其表面形貌将发生严重变形。
为了观察生物样品真实的表面形貌，通常采用临界点干燥法对样品进行干燥处理。
当气液两
相处于临界点时，气体、液体密度相等，表面张力为零。
因此，对生物样品进行临界点干燥，可以较好地保护其表面形貌。
水的临界温度和压力分别为374.1℃和218.3大气压，显然，此条件下生物样品将受到严重损坏。
由于CO2的临界温度和压力较低，为31.4℃和72.9大气压，故通常选择CO2作为生物样品临界点干燥的工作介质。
固定、脱水后的样品需经过乙酸异戊酯处理，然后利用临界点干燥仪对样品进行干燥。
由于生物样品导电性低，未经过导电处理的样品在扫描电镜下观察时会产生荷电现象，从而影响观察和照相记录。
为了减少荷电效应，对生物样品表面要进行导电处理，通常使用离子溅射仪在样品表面喷镀金属导电薄层。
喷镀的金属包括：金（Au），铂（Pt）及其合金等，喷镀导电薄层厚度在10nm左右为宜。
对于花粉粒等含水量较少的生物样品，可以经过自然干燥后在扫描电镜下观察。
入射电子术与固体样品原子之间的相互作用
1、入射电子术与固体样品原子之间的相互作用。
具有一定的能量的电子入射固体厚样品后收到样品原子的散射，产生二次电子、背散射电
子以及特征x射线等。
二次电子是从样品表面约10nm深度范围内被入射电子激发的低能电子，其能量约为0~50eV。
一部分入射电子在样品内部经多次散射后从样品表面射出，这些电子被称为背散射电子。
样品中不同元素的原子在受到入射电子电离激发时可以发射特征X射线。
扫描电镜主要是利用二次电子像观察厚样品表面形貌。
在观察样品微区表面形貌的同时，利用X射线显微分析技术可以对样品中的元素进行定性和定量分析。
2、扫描电镜的基本组成和成像过程
扫描电镜成像系统的基本组成由图1-1所示。
电子枪、聚光镜和物镜等组成扫描电镜的电子光学系统。
电子枪发射的电子经聚光镜和物镜的会聚作用形成极细的电子束入射样品。
在扫描偏转线圈的控制下，入射电子束在样品表面做光栅状扫描。
扫射过程中产生的二次电子由光电倍增管检测，该信号经视频放大器放大后输入观察显示器的栅极以调制其亮度。
由于入射电子束与观察显示器的扫描偏转线圈均由同一扫描信号发生器控制，所以两者扫描同步。
当入射电子束对样品某区域扫描时，在显示器上可以观察到该
区域的二次电子像。
像点的亮度与样品物点上所产生的二次电子信号强度相关。
当来自物点的二次电子信号强时，对应的像亮点；反之则暗。
3、扫描电子显微镜的技术指标
分辨率、加速电压和放大倍数是扫描电镜的基本技术参数。
扫描电镜的分辨率通常指二次电子像分辨率，该分辨率与入射电子束斑直径有关。
配备热发射电子枪的扫描电镜分辨率约为3nm，而高分辨率场发射扫描电镜的分辨率在1nm 左右。
扫描电镜加速电压范围约为1-20kV。
扫描电镜的放大倍数由观察显示器的尺寸与入射电子束在样品扫描区域尺寸之间的比值决定。
通过改变入射电子束扫描区域的大小，可以提高或降低放大倍数，其范围为数十倍至数十万倍。
4、二次电子像的衬度机制
二次电子的产率η定义为二次电子数与入射电子数之间的比值，并且η∝1／cosθ，θ为入射电子束与样品表面法线之间的夹角。
由于样品表面不是平整的，各点的θ值与η值不同，即样品表面各点的二次电子信号强度不同。
因此二次电子像的衬度反应样品表面几何形貌。
此外，由于入射电子束孔径角很小，二次电子像还具有
景深大，立体感强的特点。
【实验器材】
（1）实验仪器
扫描电镜、离子溅射仪
（2）实验材料
样品台、双面胶带、扫描电镜生物样品（百合花粉粒）
【方法与步骤】
（1）在样品上粘贴双面胶带，将自然干燥的百合花花粉粒分散、均匀的粘在胶带上，用离子溅射仪对样品表面喷镀导电薄层（厚度约10nm），准备在扫描电镜下观察。
（2）开启扫描电镜真空系统电源，等待真空度达到工作状态（正常情况下约需30min）。
（3）开启扫描电镜镜筒电源。
（4）将样品置入电镜。
（5）对于热发射钨灯丝扫描电镜，加高压至15~20kV。
（6）加灯丝电流至饱和点。
（7）在低放大倍数（数十倍）下，寻找样品感兴趣区。
根据样品特性和感兴趣区大小，选取适当的工作距离与放大倍数，调节亮度与对比度，聚焦，校正像散，然后进行照相记录即可。
（8）关机
【实验结果】
本次实验我们用扫描电镜对百合花粉粒进行观察并拍照记录，图一、图二是我们班级的一些实验照片。
图一百合花粉粒扫描电子显微镜像
图二百合花粉粒扫描电子显微镜像
【讨论】
思考题
1、二次电子像的衬度与样品的何种特征有关？
二次电子的产率η定义为二次电子数与入射电子数之间的比值，并且η∝1／cosθ，θ为入射电子束与样品表面法线之间的夹角。
由于样品表面不是平整的，各点的θ值与η值不同，即样品表面各点的二次电子信号强度不同。
因此二次电子像的衬度反应样品表面几何形貌。
此外，由于入射电子束孔径角很小，二次电子像还具有景深大，立体感强的特点。
2、为什么临界点干燥可以避免自然干燥对生物样品表面形貌的损伤？
临界点干燥的原理是：在一定的温度和压力下，物质的液态和气态界面将会消失，液态瞬间转化为气态，形成非液非固的状态，即达到临界点（C.P）状态。
在临界点时，表面张力消失，
分子间的内聚力等于零，而在显微尺度上，表面张力对生物材料形态的影响十分强大。
表面张力是存在于固-液、液-气界面上的主要物理力之一。
液-气界面上表面张力的作用是造成生物样品收缩的主要原因。
因此，利用临界点状态对材料进行干燥，材料理论上不会产生收缩和形变，对于质地较软的材料这种方法是最好的干燥方法。
3、生物样品在扫描电镜观察前为什么要进行金属喷漆处理？
由于生物样品导电性低，未经过导电处理的样品在扫描电镜下观察时会产生荷电现象，从而影响观察和照相记录。
为了减少荷电效应，对生物样品表面要进行导电处理，通常使用离子溅射仪在样品表面喷镀金属导电薄层。
喷镀的金属包括：金（Au），铂（Pt）及其合金等，喷镀导电薄层厚度在10nm左右为宜。
【参考文献】
[1] 桑建利, 谭信. 细胞生物学实验指导. 北京:科学出版社, 2010.。