通用蛋白质分子量规范标准参照物(精)
常见蛋白质分子量参考值
常见蛋白质分子量参考值（单位：dalton）蛋白质分子量肌球蛋白[myosin]甲状腺球蛋白[thyroglobulin]β-半乳糖苷酶[β-galactosidase]副肌球蛋白[paramyosin]磷酸化酶a[phosphorylase a]血清白蛋白[serum albumin]L-氨基酸氧化酶[L-amino acid oxidase]地氧化氢酶[catalase]丙酮酸激活酶[pyruvate kinase]谷氨酸脱氢酶[glutamate dehydrogenase]亮氨酸氨肽酶[glutamae dehydrogenase]γ-球蛋白，H链[γ-globulin, H chain]延胡索酸酶（反丁烯二酸酶）[fumarase]卵白蛋白[ovalbumin]醇脱氢酶（肝）[alcohol dehydrogenase (liver)]烯醇酶[enolase]醛缩酶[aldolase]肌酸激酶[creatine kinase]220,000 165,000 130,000 100,000 94,000 68,000 63,000 60,000 57,000 53,000 53,000 50,000 49,000 43,000 41,000 41,000 40,000 40,000胃蛋白酶原[pepsinogen]D-氨基酸氧化酶[D-amino acid oxidase]醇脱氢酶（酵母）[alcohol dehydrogenase (yeast)]甘油醛磷酸脱氢酶[dlyceraldehyde phosphate dehydrogenase]原肌球蛋白[tropomyosin]乳酸脱氢酶[lactate dehydrgenase]胃蛋白酶[pepsin]转磷酸核糖基酶[phosphoribosyl transferase]天冬氨酸氨甲酰转移酶，C链[aspertate transcarbamylase, C chain]羧肽酶A[carboxypeptidase A]碳酸酐酶[carbonic anhydrase]枯草杆菌蛋白酶[subtilisin]γ-球蛋白，L链γ-blobulin,L chain[]糜蛋白酶原（胰凝乳蛋白酶原）[chymotrypsinogen胰蛋白酶[trypsin]木瓜蛋白酶（羧甲基）[papain (carboxymethyl)]β-乳球蛋白[β-lactoglobulin]烟草花叶病毒外壳蛋白（TWV外壳蛋白）[TWV coat protein肌红蛋白[myoglobin]天门冬氨酸氨甲酰转移酶，R链[aspartate transcarbamylase, R chain]血红蛋白[h(a)emoglobin]40,000 37,000 37,000 36,000 36,000 36,000 35,000 35,000 34,000 34,000 29,000 27,600 23,500 25,700 23,300 23,00018,400 17,50017,200 17,000Qβ外壳蛋白[Qβ coat protein]溶菌酶[lysozyme]R17外壳蛋白[R17 coat protein]核糖核酸酶[ribonuclease或RNase]细胞色素C[cytochrome C]糜蛋白酶（胰凝乳蛋白酶）[chymotrypsin]15,500 15,000 14,300 13,750 13,700 11,700 11,000。
非预染蛋白分子量标准-大学本科毕业
摘要蛋白质分子量标准，即蛋白分子量Marker，是由一种或几种分子量大小已知且高度纯化的蛋白质混合而成，是广泛应用于电泳和免疫印记分析中的试验试剂。
蛋白质分子量标准的主要功能是确定未知蛋白质的分子量大小，指示电泳效果及转膜的成败。
相应的有三种类型的蛋白质分子量标准：非预染蛋白质分子量标准、预染蛋白质分子量标准和Western 专用的预染蛋白质分子量标准。
建立高效的、可靠的蛋白质分子量标准生产体系对蛋白质分子量标准的生产和商业化有重要价值。
本课题对非预染蛋白分子量标准的制作流程及方法进行探索，以求获得满足蛋白质组学研究所需的蛋白质分子量标准，并能够熟练掌握蛋白分子量Marker的制作流程。
本实验预混几种已纯化好的且分子量已知的蛋白质，采用SDS-PAGE电泳的方法制作比较清晰的蛋白Marker条带。
在实验中，我们主要对现有几种蛋白质进行筛选，以确定符合要求的蛋白质；探讨了点样量和点样体积对电泳条带清晰度的影响，并确定最终可用于制作Marker 的蛋白质，及其合适的点样量和点样体积。
结论：在实验室现有的几种蛋白质中，我们最终选用了牛血清白蛋白（BSA）和溶菌酶，蛋白分子量分别为66KD和14KD。
预混后，在上样量为8μL，即实际蛋白含量在6.4μg 时，凝胶电泳可呈现两条较为清晰的条带，其范围为14~66KD，适用于低分子量蛋白的检测，有一定的参考价值。
关键词：非预染蛋白分子量标准；制备；质量控制AbstractProtein molecular weight standard, also known as protein Marker,is a mixture of one or several pure proteins whose molecular weight is known. It is a test agent which is widely used in the analysis of electrophoresis and Western blotting. The main function of protein Marker is to determine the molecular weight of an unknown protein and indicate the success or failure of electrophoresis and transfer results. There are three kinds of corresponding protein molecular weight standards such as unstained protein molecular weight standard、pre-stained protein molecular weight marker and pre-stained protein molecular weight marker for western blot. Efficient production of protein molecular standard is crucial to commercialization of protein standard.In this communication we explore the processes and methods of non- pre-stained protein molecular weight standards, in order to obtain suitable protein marker to meet the requirement of proteomic studies and the ability to master protein marker making processes. In this experiment we premixed several proteins purified with known molecular weight, using SDS-PAGE to produce clearer protein marker bands. We screened several major protein of existing by SDS-PAGE experiment to determine suitable protein which meet the requirements of making protein marker; then we explored how different sample volume and the volume of spotting affect the clarity of electrophoretic bands and determined which protein can be used to make protein marker and appropriate sample volume and the volume of spotting.Conclusions: In the several proteins existing in the laboratory, we finally chose Bovine Serum Albumin (BSA) and Lysozyme, whose molecular weights are 66KD and 14KD. After premixing, when the sample volume was 6 ~ 8ul, i.e. the actual protein content is 4.8 ~ 6.4ug, the gel can be rendered more clearly two bands ranging from 14KD to 66KD. For the detection of low molecular weight proteins, there is some reference value.Keywords:Unstained protein molecular weight standard;Preparation; Quantity Control目录摘要 (I)Abstract (II)第一章文献综述 (1)1.1蛋白分子量测定方法 (1)1.1.1 超速离心法 (1)1.1.2 SDS-PAGE电泳法 (2)1.1.3 高效凝胶过滤率法 (3)1.1.4 电喷雾离子化质谱分析 (3)1.2蛋白Marker的分类 (4)1.2.1 非染色蛋白分子量标准 (4)1.2.2 预染蛋白分子量标准 (5)1.2.3 Western blotting专用的蛋白分子量标准 (6)1.3蛋白分子量标准的来源与研究现状 (6)1.3.1 普通蛋白质分子量标准的研究现状 (7)1.3.2 Western blotting 专用的蛋白质分子量标准研究现状 (7)1.4重要研究技术——SDS-PAGE电泳技术 (9)1.4.1 SDS-PAGE电泳概述 (9)1.4.2 SDS-PAGE电泳的原理 (10)1.4.3 SDS-PAGE电泳体系的分类 (11)1.4.4 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 (11)1.5主要实验内容概述 (12)第二章实验部分 (13)2.1实验材料、试剂及仪器设备 (13)2.1.1主要实验材料及药品 (13)2.1.2试剂配制 (13)2.1.3主要实验仪器及设备 (14)2.2实验方法 (14)2.2.1安装夹心式垂直板电泳槽 (14)2.2.2配胶及凝胶板的制备 (15)2.2.3样品的处理与加样 (17)2.2.4电泳 (18)2.2.5凝胶剥离、染色与脱色 (18)第三章结果与讨论 (19)3.1对现有几种蛋白样品电泳结果的分析 (19)3.2对符合要求的蛋白样品所进行的上样量梯度电泳的结果分析 (19)3.3对预混后蛋白样品所进行的上样量梯度电泳的结果分析 (20)第四章结论与建议 (22)4.1结论 (22)4.2建议 (22)参考文献 (23)致谢 (24)第一章文献综述分子量大小是蛋白质主要特征参数之一。
蛋白质检测标准
蛋白质检测标准
《蛋白质检测标准》
哎呀呀，说起蛋白质检测标准啊，我就想到了那次我在家做蛋糕的事儿。
那天我特别兴奋地想自己做个蛋糕，材料都准备得妥妥的。
我按照网上找的配方，把面粉、糖、鸡蛋啥的都放在一起搅拌。
我心里想着，等会儿就能吃到自己亲手做的美味蛋糕啦。
可是呢，当我把蛋糕放进烤箱烤了一段时间后，拿出来一看，哎呀，这蛋糕怎么感觉怪怪的，扁扁的，也不蓬松。
我就纳闷了呀，这是哪里出了问题呢。
后来我仔细研究了一下，发现问题可能出在蛋白质上。
原来做蛋糕的时候，鸡蛋里的蛋白质可是很关键的呀。
如果蛋白质的含量或者质量不合适，那蛋糕就没法发起来。
这时候我才意识到，蛋白质检测标准还真是挺重要的呢。
就像我做蛋糕，要是能知道鸡蛋里蛋白质的情况，说不定就能做出完美的蛋糕啦。
从那以后，我就知道了蛋白质检测标准的重要性。
不管是做美食还是其他的事情，了解这些标准真的能让事情变得更顺利呀。
以后我再做蛋糕，可得好好研究研究蛋白质检测标准啦，可不能再让失败的蛋糕出现咯！哈哈！。
标准蛋白
产品编号能
300-010
重组人血小板衍化生长因子（rhPDGF-BB）
产品纯度大于90%，活性每毫克大于10万单位
5μg/20μg 1mg/50mg
5μg/20μg 1mg/50mg
抗衰老、壮骨和维持骨质、运动饮料、减肥、增高;细胞无血清培养
300-050
重组人巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)
产品纯度大于95%（凝胶电泳）
5μg/20μg 1mg/50mg
300-060
干扰素INFα-2b
产品纯度大于95%（凝胶电泳）
5μg/20μg 1mg/50mg
产品纯度大于80%，活性每毫克大于9万单位。产品纯度大于90%，活性每毫克大于10万单位。
5μg/20μg 1mg/50mg
治疗风湿类风湿性关节炎抗炎、对抗过敏皮肤、祛痘产品、缓解痤疮。
300-040
重组人长效型胰岛素样生长因子-I（Long R3 IGF-I）
纯度：90%（凝胶电泳分析）；85%（HPLC）生物活性：NIH3T3细胞促增殖效果ED50< 20 ng/ml；
可提供克级规格产品
促进细胞生长增殖：具有良好的促进细胞增殖作用
300-020
表皮生长因子（rhEGF）
产品纯度大于80%，活性每毫克大于40万单位;产品纯度大于90%，活性每毫克大于50万单位
5μg/20μg 1mg/50mg
能促进上皮细胞、成纤维细胞的增值，增强表皮细胞的活力
300-030
细胞白介素-1拮抗剂（rhIL-1RA）
蛋白分子量标准试剂
蛋白分子量标准试剂
蛋白分子量标准试剂是用于分析和测定蛋白质分子量的一种标
准物质。
它由一系列具有已知分子量的蛋白质组成，可以用来校准电泳仪器的分析精度。
在蛋白质分离、纯化和定量分析中，蛋白分子量标准试剂是必不可少的工具。
常见的蛋白分子量标准试剂有低分子量标准和高分子量标准。
低分子量标准试剂通常由小分子量的多肽或蛋白质组成，适用于SDS-PAGE电泳；而高分子量标准试剂则主要由大分子量的蛋白质或蛋白质复合物组成，适用于凝胶过滤电泳等技术。
蛋白分子量标准试剂的选择应根据实验需要和样品特性而定。
- 1 -。
蛋白质的标准数据是多少
蛋白质的标准数据是多少
首先，蛋白质的标准数据包括其化学结构。
蛋白质是由氨基酸组成的，不同种类的蛋白质含有不同数量和种类的氨基酸。
一般来说，蛋白质的分子量在10,000到1,000,000之间，而其氨基酸残基的数量则在50到2,000之间。
此外，蛋白质的结构可以分为原生结构、二级结构、三级结构和四级结构，这些结构对蛋白质的功能起着决定性的作用。
其次，蛋白质的标准数据还包括其组成和含量。
人体内的蛋白质主要包括20种氨基酸，其中有9种是人体无法自行合成的必需氨基酸。
蛋白质的含量在不同的组织和器官中有所差异，肌肉、皮肤、头发等含有较高的蛋白质，而脂肪组织、骨骼等含量较低。
此外，不同种类的食物中也含有不同的蛋白质，例如动物性食物中的蛋白质含量较高，而植物性食物中的蛋白质含量较低。
再次，蛋白质的标准数据还涉及到其功能。
蛋白质在生物体内有多种功能，包括结构支持、酶催化、免疫防御、运输传导等。
不同的蛋白质具有不同的功能，这些功能对于维持生物体的正常生理活动至关重要。
例如，酶是一类重要的蛋白质，它可以催化生物体内的化学反应，是生命活动得以进行的关键。
综上所述，蛋白质的标准数据是一个综合性的概念，涉及到其化学结构、组成和含量、功能等多个方面。
对于科研工作者来说，准确了解蛋白质的标准数据对于开展相关研究具有重要意义；对于医学工作者来说，了解蛋白质的标准数据可以帮助他们更好地指导临床实践；对于普通大众来说，了解蛋白质的标准数据可以帮助他们更科学地进行膳食搭配，保持健康生活方式。
因此，深入了解蛋白质的标准数据，对于个人和社会都具有重要的意义。
蛋白质分子量标准(高)使用说明书
蛋白质分子量标准（高）Protein Molecular Weight Marker (High)使用说明书Takara Code : D531A浓度: 10 μg/μl制品内容（约200次量）Protein MW Marker（high）50 μl5×Loading Buffer 1000 μl1 M DTT（Dithiothreitol）100 μl制品说明Protein Molecular Weight Marker（High）是由五种纯化好的不同分子量的蛋白质组成的，它的分子量范围为：44.3 KDa～200KDa。
进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时，经考马斯亮蓝R－250染色后的各种蛋白质的条带强度均一。
每微升本制品的蛋白量为10 μg，稀释20倍后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，每次取5 μl（for SDS-PAGE mini gel）。
以每次使用5 μl（20倍稀释液）计算时本制品约可使用200次。
保存条件制品原液可在-20℃下长期保存，制品的20倍稀释液可在-20℃下保存2～3个月，制品的原液和制品的20倍稀释液都应避免多次反复冻融。
制品中的各种蛋白质种类使用注意推荐使用7.5～10％的聚丙烯酰胺凝胶。
浓度太高，高分子量的蛋白分离效果不好，有可能聚集于分离胶的上部。
使用方法1. 首先按以下方法配制“稀释液”。
1 M DTT2 μl 5×Loading Buffer 20 μl* 稀释液可于室温下放置一个月左右。
2.按以下方法稀释本制品。
稀释液22 μl灭菌蒸馏水73 μl* 20倍的制品稀释液可在-20℃下保存2～3个月，但应避免多次反复冻融。
如果一次稀释量较多时，可以小量分装后在-20℃下保存，以避免反复冻融。
3. 均匀混合后，100℃加热处理5分钟，然后取5 μl进行7.5～10％的聚丙烯酰胺凝胶电泳（for SDS-PAGE mini gel）。
4. 7.5%、10%的聚丙烯酰胺凝胶电泳后，经考马斯亮蓝R-250染色后的结果如下。
常用蛋白质分子量标准参照物(精)
十、常用蛋白质分子量标准参照物十一、层析法常用数据表及性质（一）离子交换纤维素*：英国Whatman厂的型号，原来有旧型号如DE-1，为长纤维性，长度1000微米。
还有DE-11，纤维性，50～250微米，对牛血清清蛋白的吸附容量仅为130毫克/克。
注：上述各种型号的凝胶都是亲水性的多孔颗粒，在水和缓冲溶液中很容易膨胀，生产厂为Bio-Rad Laboratories,Rich-mond, California, U. S. A.（三）琼脂糖凝胶的技术数据十二、常用缓冲溶液的配制方法1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L）甘氨酸分子量= 75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。
2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L）邻苯二甲酸氢钾分子量= 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升Na2HPO4分子量= 14.98，0.2 mol/L溶液为28.40克/升。
Na2HPO4-2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。
C4H2O7·H2O分子量= 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50% 氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。
柠檬酸C6H8O7·H2O：分子量210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量294.12，0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。
Na2Ac·3H2O分子量= 136.09，0.2 mol/L溶液为27.22克/升。
7．磷酸盐缓冲液Na2HPO4·2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液为85.61克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量= 358.22，0.2 mol/L溶液为71.64克/升。
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十、常用蛋白质分子量标准参照物
高分子量标准参照中分子量标准参物低分子量标准参照
十一、层析法常用数据表及性质
（一）离子交换纤维素
目前常用的离子交换纤维素列于下表
*：英国Whatman厂的型号，原来有旧型号如DE-1，为长纤维性，长度1000微米。
还有DE-11，纤维性，50～250微米，对牛血清清蛋白的吸附容量仅为130毫克/克。
（二）聚丙烯酰胺凝胶的技术数据
注：上述各种型号的凝胶都是亲水性的多孔颗粒，在水和缓冲溶液中很容易膨胀，生产厂为Bio-Rad Laboratories,Rich-mond, California, U. S. A.
（三）琼脂糖凝胶的技术数据
（琼脂糖是琼脂内非离子型的组分，它在0 ~ 4℃，pH 4~9范围内是稳定的。
）
（四）凝胶过滤层析介质的技术数据
（五）离子交换层析介质的技术数据
十二、常用缓冲溶液的配制方法
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L）
X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0.2 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升
甘氨酸分子量= 75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。
2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L）
X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾+ 0.2 mol/L HCl，再加水稀释到20毫升
邻苯二甲酸氢钾分子量= 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液
Na2HPO4分子量= 14.98，0.2 mol/L溶液为28.40克/升。
Na2HPO4-2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。
C4H2O7·H2O分子量= 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH 值有变化，再用少量50% 氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。
5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L ）
柠檬酸C 6H 8O 7·H 2O ：分子量210.14，0.1 mol/L 溶液为21.01克/升。
柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量294.12，0.1 mol/L
溶液为29.41克/毫升。
6．乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L ）
Na2Ac·3H2O分子量= 136.09，0.2 mol/L溶液为27.22克/升。
7．磷酸盐缓冲液
（1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（0.2）
Na2HPO4·2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液为85.61克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量= 358.22，0.2 mol/L溶液为71.64克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量= 156.03，0.2 mol/L溶液为31.21克/升。
（2）磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液（1/15 mol/L）
Na2HPO4·2H2O分子量= 178.05，1/15M溶液为11.876克/升。
KH2PO4分子量= 136.09，1/15M溶液为9.078克/升。
8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M）
X毫升0.2M K2PO4 + Y毫升0.2N NaOH加水稀释至29毫升
9．巴比妥钠-盐酸缓冲液（18℃）
巴比妥钠盐分子量=206.18;0.04M溶液为8.25克/升
10．Tris–盐酸缓冲液（0.05M，25℃）
50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至100毫升。
三羟甲基氨基甲烷（Tris）HOCH2 CH2OH
C
HOCH2 NH2
分子量=121.14;
0.1M 溶液为12.114克/升。
Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。
11．硼酸–硼砂缓冲液（0.2M 硼酸根）
硼砂Na 2B 4O 7·H 2O,分子量=381.43;0.05M 溶液（=0.2M 硼酸根）含19.07克/升。
硼酸H 2BO 3,分子量=61.84,0.2M 溶液为12.37克/升。
硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
11．硼酸-硼砂缓冲液（0.2M 硼酸根）
硼砂Na 2B 4O 7·10H 2O,分子量=381.43;0.05M 溶液（=0.2M 硼酸根）含19.07克/升。
硼酸
H 2BO 3，分子量=61.84, 0.2M 溶液为12.37克/升。
硼砂 易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M ）
X 毫升0.2M 甘氨酸+Y 毫升0.2NnaOH 加水稀释至200毫升
甘氨酸分子量=75.07;0.2M溶液含15.01克/升。
13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）
X毫升0.05M硼砂+Y毫升0.2NNaOH加水稀释至200毫升
硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=381.43;0.05M溶液为19.07克/升。
14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）
Ca2+、Mg2+存在时不得使用
Na2CO2·10H2O分子量=286.2;0.1M溶液为28.62克/升。
N2HCO3分子量=84.0;0.1M溶液为8.40克/升。
15．“PBS”缓冲液
十三、实验室中常用酸碱的比重和浓度
十四、硫酸铵饱和度的常用表
1．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（25℃）
①在25℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每升溶液所加固体硫酸铵的克数。
2．调整硫酸铵溶液饱和度计算表（0℃）
①在0℃下，硫酸铵溶液由初浓度调到终浓度时，每100毫升溶液所加固体硫酸铵的克数。
十五、常见蛋白质分子量参考值（单位：dalton）
十六、常见蛋白质等电点参考值（单位：pH）
十七、元素的原子量表（录自1997
年国际原子量表，并全部取四位有效数字）
r为离心机头的半径（角头），或离心管中轴底部内壁到离心机转轴中心的距离（甩平头），单位为厘米。
rpm为离心机每分钟的转速。
RCF为相对离心力，以地心引力即重力加速度的倍数来表示，一般用g(或数字×g)表示。
附图11是由下述公式计算而来的：
RCF = 1.119 ×10-5×r ×(rpm)2
将离心机转数换算为离心力时，首先，在r标尺上取已知的半径和rpm标尺上取已知的离心机转数，然后，将这两点间划一条直线，在图中间RCF标尺上的交叉点即为相应离心力数值。
注意，若已知转数值处于rpm标尺的右边，则应读取RCF标尺右边的数值。
同样，转数值处于rpm标尺左边，则读取RCF标尺左边的数值。