氨基酸的薄层层析实验报告
氨基酸的薄层分析实验报告
氨基酸的薄层分析实验报告一、实验目的本实验旨在通过薄层分析（TLC）技术对氨基酸进行分离和鉴定，熟悉TLC的操作流程，掌握氨基酸在不同溶剂系统中的迁移行为，以及利用显色剂进行定性检测的方法。
二、实验原理薄层分析是一种快速、简便的分离和分析技术。
其原理是基于混合物中各组分在固定相（通常是硅胶或氧化铝）和流动相（展开剂）之间的分配系数不同，从而实现分离。
氨基酸是两性化合物，在不同的pH条件下具有不同的离子形式。
在本次实验中，选择合适的展开剂和显色剂，使氨基酸在薄层板上得以分离，并通过显色反应显现出来。
三、实验材料与仪器（一）材料1、氨基酸标准品：丙氨酸（Ala）、缬氨酸（Val）、亮氨酸（Leu）、异亮氨酸（Ile）、脯氨酸（Pro）。
2、样品溶液：未知氨基酸混合液。
3、硅胶G板。
4、展开剂：正丁醇乙酸水（4:1:1，体积比）。
5、显色剂：茚三酮溶液。
（二）仪器1、层析缸。
2、毛细管。
3、电吹风。
4、喷雾器。
5、紫外灯。
四、实验步骤1、硅胶G板的制备称取适量硅胶G粉末，置于研钵中，加入一定量的蒸馏水，充分研磨成均匀的糊状。
将糊状硅胶均匀涂布在干净的玻璃板上，厚度约为 025 05mm。
室温下晾干，然后在 105℃烘箱中活化 30 分钟，取出后置于干燥器中备用。
2、点样用毛细管分别吸取氨基酸标准品溶液和样品溶液，在硅胶G板的一端约 1cm 处轻轻点样。
点样斑点直径应小于 2mm，且每个斑点之间应保持一定的距离。
3、展开将点样后的硅胶G板放入预先装有展开剂的层析缸中，使展开剂液面低于点样线。
盖上盖子，让展开剂通过毛细作用沿板上升，当展开剂前沿上升至距板顶端约 1cm 处时，取出硅胶G板，标记展开剂前沿位置，晾干。
4、显色将晾干的硅胶G板放入装有茚三酮溶液的喷雾器中，均匀喷雾显色。
用电吹风轻轻加热，使显色反应充分进行。
氨基酸斑点呈现出紫红色。
5、观察与记录在紫外灯下观察显色后的硅胶G板，记录氨基酸标准品和样品的斑点位置、颜色和形状。
刘亚旭-高媛-氨基酸的薄层层析-2012级医学影像学-第四实验室
南方医科大学生物化学实验报告姓名：刘亚旭学号：3120020015专业年级：2012级医学影像学组别：第四实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称氨基酸的薄层层析实验日期2013-10-14实验地点第四实验室合作者杨天红指导老师高媛总分教师签名批改日期一。
实验原理薄层层析是一种将固定相在固体上铺成薄层进行层析的方法。
薄层层析时一般将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固体相。
当液相在固体相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸样品的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。
即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组组分分离开。
氨基酸的显色反应:茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸发生羧基反应生成还原茚三酮，氨基醛，与此同时，还原茚三酮又与氨基茚三酮缩合生成蓝色化合物而使氨基酸斑点显色。
二．实验材料分析样品：氨基酸混合液吸附剂：硅胶粘合剂：0.5%的羧甲基纤维素钠氨基酸的异丙醇溶液：丙氨酸甘氨酸精氨酸展开-显色剂：（正丁醇乙酸茚三酮溶液）器材：层析板小烧杯量筒小尺子铅笔毛细玻璃管层析缸烘箱钥匙三．实验步骤1）制版称取硅胶3克，加0.5%的羧甲基纤维素钠8ml，调成均匀的糊状，然后在干燥玻璃板均匀涂布，将涂布好的玻璃板室温下水平放置0.5小时，晾干70度烘干60分钟2）点样用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点并做好标记。
每个样品相距1cm，用毛细血管分别吸取丙氨酸，精氨酸，甘氨酸及混合氨基酸荣，轻轻接触薄层表面点样。
加样原点扩散直径不超过2cm时，3）层析将薄层板点样端浸入展层-显色剂，展层-显色剂液面应低于点样线，盖好层析缸盖，上行展层，当展层剂前沿离薄板顶端2cm时，停止展层，取出薄板，用铅笔描出溶剂前沿界线4）显色四．实验记录各氨基酸色斑中心至原点中心距离记录测定次数丙氨酸甘氨酸精氨酸混合点1 混合点2 混合点31 4.20 3.30 1.90 2.00 3.50 4.102 4.20 3.30 1.90 2.00 3.40 4.203 4.20 3.30 1.90 1.90 3.50 4.20 平均a值 4.20 3.30 1.90 1.97 3.47 4.17 溶剂前缘至样品原点中心距离b值7.30 7.30 7.30 7.30 7.30 7.30以上是实验过程中测得的原始数据和所拍摄的显色图片。
氨基酸薄层层析实验报告doc
氨基酸薄层层析实验报告篇一：生物化学实验-氨基酸分析实验报告【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：XX】一、预习报告? 实验原理：根据固定相基质的形式，层析可分为纸层析、薄层层析和柱层析。
薄层层析是在玻璃或塑料等光滑表面铺一层很薄的基质进行层析。
薄层层析（thin layer chromatography，TLC）：是将吸附剂均匀地在玻璃板上铺成薄层（固定相），再把样品点在薄层板一端，再把板的这端浸入适当的溶剂（流动相）在薄层板上扩展。
并在此过程中通过吸附——解吸附——再吸附——再解吸附的反复进行，而将样品各组份分离出来。
本次实验：? 具体原理：当流动相在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。
? 吸附剂（固定相）：硅胶（C.P.）。
为使制成的薄层板不易松散，加入5%羟甲基纤维素钠（CMCNa）作黏合剂。
? 展开剂：正丁醇、冰醋酸和蒸馏水的混合液（80:10:10,V/V/V）。
? 展层-显色剂：按照10:1比例（V/V）混匀的展开剂和0.1%茚三酮溶液。
? 活化（activation）：在一定温度下，对吸附剂硅胶加热去除水分。
可使硅胶的活性提高，吸附能力加强。
? 氨基酸与茚三酮的显色反应：茚三酮水化后生成的水合茚三酮在加热时被还原，此产物与氨基酸加热分解产生的氨结合，以及另一分子水合茚三酮缩合生成紫红色化合物而使氨基酸斑点显色。
? Rf值：Rf?斑点中心到样品原点的距离对应溶剂前沿到样品原点的距离由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。
?实验材料：? 样品：1、0.01mol/L丙氨酸;2、 0.01mol/L精氨酸;3、0.01mol/L甘氨酸;4、混合氨基酸溶液。
氨基酸的薄层层析
氨基酸的薄层层析一、实验目的1．掌握薄层层析法的一般原理。
2．掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。
3．掌握如何根据移动速率（Rf值）来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液）。
二、实验原理1．薄层层析法是色谱分析技术的一种一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。
当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。
（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）硅胶吸附薄层层析吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶硅胶：表达式为SiO2·XH2O。
层析用硅胶是一种多孔性物质，它的硅氧环交链结构表面上密布极性硅醇基（－Si－OH），这种极性的硅醇基能和许多化合物形成氢键而产生吸附。
硅胶吸附薄层层析的特点：①硅胶的吸附能力比氧化铝稍弱，其吸附活性也与含水量呈负性相关。
②硅醇基显较弱的酸性，因而，硅胶只能用于中性、或酸性成分的分离，碱性成分不能用它分离。
③硅胶的活化温度通常为105℃－110℃，不能过高。
但是实际操作时为70℃，活化1h 2．氨基酸与茚三酮的显色反应茚三酮水化后生成水化茚三酮，它与氨基酸的羧基反应生成还原茚三酮、氨及醛，与此同时，还原茚三酮又与氨及茚三酮缩合生成紫红化合物而使氨基酸斑点显色。
3．记录结果，计算Rf值混合氨基酸被分离后，在薄层层析图谱上的位置用相对迁移率—Rf值（rate of flow）来表示。
层析中，物质沿溶剂运动方向迁移的距离与溶液前沿的距离之比为Rf值。
由于物质在一定溶剂中的分配系数是一定的，故移动速率（Rf值）也是恒定的，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。
三、材料与方法：材料：（一）分析样品：氨基酸混合液（二）试剂：吸附剂：硅胶粘合剂： 0.5%的羧甲基纤维素钠、氨基酸的异丙醇溶液、丙氨酸、精氨酸、甘氨酸。
试验10氨基酸的薄层层析一
2. 展层 在层析缸中加入展层剂约1.5cm深， 加盖平衡30min。将薄层板点样端浸入展 层剂中，加盖密闭展层。当展层剂前沿 到达薄层板的2/3高度时，取出薄层板， 在玻板背面划下展层剂前沿位置，用电 吹风（热风）将薄层板吹干（最好对玻 板背面吹）。 3. 显色 用喉头喷雾器向薄层板上均匀喷洒 0.5% 茚三酮丙酮溶液，热风吹干至各层 析斑点显现。
实验10 氨基酸的薄层层 析
一、目的与要求
1.熟悉用层析技术分离不同物质的原理
2.掌握薄层层析的基本操作方法
二、实验原理
薄层层析（thin layer chromatography, TLC） 是将吸附剂（或称固相支持物,如硅胶G、硅藻土、 氧化铝、氧化镁、纤维素粉等）均匀地铺在玻璃板 上使其成薄层。将待分析的样品点加到薄层板的一 端，然后把该端浸入适宜的展层剂（如苯酚-水、正 丁醇-冰醋酸-水等）在密闭的层析缸中展层。
四、结果与计算
展层剂前沿 ● ● ● 展 层 方 向 ● ● 亮氨酸 甘氨酸 赖氨酸 原点
氨基酸薄层层析示意图
Rf值=
原点到层析斑点中心的 距离(cm) 原点到展层剂前沿的距 离(cm)
五、注意事项
制备的薄层板应厚薄均匀，表面光滑无气 泡； 点样各原点分布均匀，各点直径不超过 2mm； 薄层板置层析缸中时各点样原点切勿浸入 展层剂中。
由于各种氨基酸结构和性质的不同， 其在吸附剂表面的吸附能力各异带至较 远的距离。这样，氨基酸在吸附剂和展层 剂之间反复多次的被吸附与解吸附，使不 同的氨基酸得以分离，并通过茚三酮反应 显色作鉴别。
三、操作部分
1. 点样 取内径约0.5mm管口平整的毛细玻管 3支，分别吸取甘氨酸、亮氨酸及混合氨 基酸液（含甘氨酸、赖氨酸、亮氨酸）， 在距薄层板底端2.5cm处、间距1cm宽的 位置上轻触点样，点样处干后在原点样处 重复点加1～2次。
氨基酸分析实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称氨基酸的薄层层析实验日期2014-10-22 实验地点第4实验室合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1.掌握薄层层析法的一般原理。
2.掌握氨基酸薄层层析法的基本操作技术。
3.掌握如何根据移动速率（R f值）来鉴定被分离的物质（即氨基酸混合液）。
二、实验原理(一)薄层层析1.层析技术是利用化合物中各组分的物理性质（如溶解度、吸附能力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等）的不同，使各组分不同程度地分布在两相中，随着流动相从固定相上流过，不同组分以不同速度而最终被分离。
1)特点：分离效率高，能分离各种性质相类似的物质。
不仅可用于少量物质的分离纯化，也可用于大量物质的分离纯化和制备。
2)固定相：固定相是层析的一个基质。
包括固体物质（如吸附剂，凝胶，离子交换剂等）和液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液），这些物质能与相关的化合物进行可逆性的吸附、溶解和交换作用。
3)流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的物质移动的液体、气体等，都称为流动相。
柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时称为展层剂。
4)分类（1）按两相所处状态，可分为液相层析和气相层析，前者以液体为流动相，后者以气体为流动相。
（2）按操作形式不同，可分为柱层析、薄层层析和纸层析。
（3）按层析的原理不同，可分为吸附层析、分配层析、凝胶层析、离子交换层析和亲和层析等。
今天要做的试验，根据原理属于吸附层析，根据操作形式又属于薄层层析，合到一起叫：吸附薄层层析。
2.薄层层析法是色谱分析技术的一种一般是将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。
当液相（展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的混合氨基酸样品随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。
（即通过吸附-解吸-再吸附-再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）3.硅胶吸附薄层层析1)吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶 :硅胶：表达式为SiO2·XH2O。
氨基酸的薄层层析_实验报告
氨基酸的薄层层析_实验报告实验目的：掌握薄层层析法的基本原理和实验操作技巧，了解氨基酸在薄层层析中的分离和检测方法。
实验原理：薄层层析法是以薄层硅胶或薄层纸片为固定相，利用液相作为移动相的一种物理分离技术。
氨基酸薄层层析法主要是将混合的氨基酸样品在薄层硅胶或薄层纸片上沿着其表面作为移动相的有机溶剂慢慢地溶解，不同的氨基酸成分会因吸附在薄层硅胶或薄层纸上的程度不同而在其中分离。
不同的氨基酸在薄层层析图谱上的Rf（相对移动率）值不同，是区分不同氨基酸的一种物理性质。
Rf值的计算公式为：Rf=色谱前行距离÷色谱柱高度。
实验操作：1、制备薄层层析板。
将硅胶胶涂在薄层层析板上，晾干后烘箱烘干。
2、制备样品。
将6种不同氨基酸分别以氨基酸质量浓度相等的方式混合制成样品，并分别标记。
3、将样品分别滴在薄层层析板上，注意每滴之间需使它们相距一定的距离，并在板子内侧写上标记。
4、放入有机溶剂。
将有机溶剂铺在盛有一点水的薄层层析槽中，使得铺上的有机溶剂厚度大约为硅胶层的三分之一。
5、将涂有样品的薄层层析板放在槽中，让它与槽中的有机溶剂接触，但不要使样品浸泡在有机溶剂中。
6、密闭容器，放置在不受光照的地方，等待样品进行分离。
7、取出薄层层析板，把它们晾干并用紫外灯照亮，用标尺测出不同色序分离的距离并计算它们的Rf值。
实验结果：对应不同氨基酸的Rf值，可以得出该试验的结果。
结果应与理论值相近，判断是否失真并计算误差。
氨基酸的薄层层析法是一种快速、简便的分离和检测氨基酸的方法，适用于从实验中得到定性和定量信息。
由于薄层层析板具有良好的重现性和灵敏度，它在生物化学和分析化学领域得到了广泛的应用。
氨基酸的纸层析实验报告
氨基酸的纸层析实验报告实验目的：掌握氨基酸纸层析技术，通过纸层析分离和定性鉴定氨基酸。
实验原理：氨基酸的纸层析是利用氨基酸对不同的升华剂的选择性吸附而实现分离的一种分析方法。
纸层析方法较简便、快速，并能够同时分离、定量、定性分子。
这使它在生物化学、蛋白质化学、微量分析等领域中得到了广泛应用。
实验过程：1.准备氨基酸标准溶液：取苯丙氨酸、天门冬酰胺酸、色氨酸、赖氨酸、小麦谷氨酸和组氨酸各10毫克，加入10毫升0.02mol/L HCl和1滴10%酚酞指示剂，用水定容至100毫升。
2.制备氨基酸样品：取10毫升氢氧化钠溶液和0.3克氨基酸溶液混合，使其溶解并加热至沸腾，将样品冷却到室温，并加入1毫升0.02mol/L盐酸。
3.准备纸层析板：将富马酸纸(6cm*0.8cm)沿宽度中心折叠，使其成为4cm*0.8cm的大小；将纸上端用20毫升1-丙醇-甲醛-草酸钾(6:0.4:4)振荡2次，再用烘箱烘干，使其完全干燥。
4.纸层析：将样品以细滴的形式滴在纸层析板下端处，将纸放入深度为2-3厘米的玻璃瓶中，瓶底加入1毫升0.2mol/L HCl溶液，并将其密封。
板上的液相在升华过程中被移动，当溶剂距离顶端紫色标记线1厘米时把纸层析取出，用乙醇-水(1:1)固定，并在水龙头下冲洗。
5.涂上氨基酸显色剂：将纸层析用10%磷酸液浸泡5-10分钟，使显色剂透彻纸层析板。
6.观察分析：根据分离的结果和标准溶液进行比较，以鉴定和定量分析被检测的氨基酸。
实验结果：在纸层析板上，分离了7种氨基酸。
在试验中，我们发现沿着纸层析板距离最短的氨基酸为小麦谷氨酸，距离最远的是组氨酸。
结果与标准溶液分析结果相符，可以证明该方法可以用于氨基酸的分离和定性鉴定。
实验结论：该实验使用氨基酸纸层析技术，成功地将氨基酸分离并鉴定。
该方法应用广泛，简便易行，能够分离、定性、定量不同的化合物。
种类繁多、方法不断丰富，成为分析化学领域中重要的分析手段。
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生物化学实验报告
姓名： XXX
学号： XXXXXX
专业年级：临床八年制 __
组别：第二实验室
图一层析板图二实验后的结果
2.3 实验原始数据
实验数据即为各氨基酸色斑中心至样品原点中心距离和溶液前缘至样品原点中心的距离记录，如下表：
表一原始数据记录表
各斑点样品原点中心距离前缘至原点中心距离
丙氨酸 3.60cm 6.50cm
精氨酸 2.10cm 6.40cm
甘氨酸 3.05cm 6.40cm
混合点1 2.01cm 6.40cm
混合点2 3.50cm 6.40cm
说明：由于溶剂前沿并不是一条直线，故我们选取了各斑点垂直的实验数据，以提高实验的准确率，减少实验误差。
6.50cm 3.60cm
6.40cm
3.50cm
3.05cm
2.10cm 2.01cm。