牧羊犬IFN-茁基因的克隆和序列分析(精)
摘要院为对犬干扰素-茁(IFN-茁)进行研究袁用 PCR 技术从犬血细胞基因组 DNA 中扩增了牧羊犬 IFN-茁 基因袁并克隆到 pGEM-T
载体袁转化大肠杆菌 JM109 感受态细胞袁阳性克隆经 PCR 和酶切鉴定后进行测序遥 结果表明院牧羊犬 IFN-茁 基因含 561bp袁编码
186 个氨基酸袁前 21 个为信号肽遥 成熟蛋白理论分子量为 20kD袁等电点为 5.737袁有 2 个潜在磷酸化位点尧5 个 N 糖基化位点和 4
Identification of recombinant plasmid by PCR; C. Identification of recombinant plasmid by Sac I digestion)
M. DNA Ladder; 1. Negative control; 2. PCR product; 3. Negative control
沈阳农业大学学报袁圆园11原08袁42穴4雪院449-453 允燥怎则灶葬造 燥枣 杂澡藻灶赠葬灶早 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁圆园11原08袁42穴4雪院449-453
牧羊犬 IFN-茁 基因的克隆和序列分析
夏润玺 1袁张曼夫 2*
渊1.沈阳农业大学 生物科学技术学院袁沈阳 110161曰2.中国农业大学 生物学院袁北京 100094冤
酶切鉴定结果显示袁 重组质粒被切成约 500bp 和约 3000bp 的 2 个片段渊图 1C冤袁与理论相符遥 2.3 基因测序和序列分析
将 2 个鉴定正确的重组克隆测序袁 结果表明 2 个克隆序列一致袁 测得的核苷酸序列及推导的氨基 酸序列如图 2遥 分析表明袁克隆的序列与 GenBank 中 犬 IFN-茁 基因序列一致袁含 561bp袁是一个完整的读 码框袁编码 186 个氨基酸袁前 21 个为信号肽遥 成熟蛋
Abstract院 The interferon-茁 (IFN-茁) gene of shepherd dog was amplified by PCR from genome DNA of blood cell, then cloned into pGEM -T easy vector and transformed into the competent cell of E.coli JM109. The positive clone was sequenced after identification of restriction endonuclease cleavage and PCR amplification. Shepherd dog IFN-茁 consisted of 561 bp and coded for 186 amino acids of which the first 21 amino acids constituted a putative signal peptide. The mature protein with the predicted molecular weight of 21 kD and the isoelectric point of 5.737 contained 2 potential casein kinase II phosphorylation sites, 5 Nglycosylation sites and 4 cysteines, and most of which were hydrophilic region. The protein mainly composed of 5 琢 -helix domains according to the secondary and tertiary structure prediction. The IFN-茁 gene of shepherd dog was identity to that of red fox and shared high homology of 85 %-98.4 % with raccoon dog, ferret and domestic cat. They grouped into the same branche in the phylogenetic tree base on IFN-茁 gene. Key words院 canine (dog); interferon-茁 (IFN-茁); gene cloning; sequence analysis
2 结果与分析
2.1 犬 IFN-茁 基因的 PCR 扩增
犬 IFN-茁 基因大小为 597 bp袁以牧羊犬血细胞基因组 DNA 为模板袁用 PCR 技术扩增出 1 条约 597 bp 的
片段渊图 1A冤袁与理论大小相符遥
2.2 重组克隆的鉴定
PCR 产物与 pGEM-T 载体连接后转化感受态
JM109袁涂布含 IPTG/X-Gal/氨苄青霉素的 LB 平板袁
挑取重组克隆渊白斑冤袁以载体自连克隆渊蓝斑冤为对
照进行 PCR 鉴定袁结果表明载体自连克隆无扩增条
带袁重组克隆扩增出约 597bp 条带渊图 1B冤袁大小与
理论相符遥 Sac I 在 pGEM-T 载体 94 位有 1 个切点袁
在插入片段的 140 位有 1 个切点袁 应将重组质粒切
成 501垣3098bp 两个片段袁 而自连载体只被线性化遥
渊blue clone冤; 4, 5. Recombinant clone渊whit clone冤
第4期
夏润玺等院牧羊犬 IFN-茁 基因的克隆和序列分析
窑451窑
白含 165 个氨基酸袁理论分子量 20 kD袁等电点 5.737遥 成熟蛋白有 2 个潜在磷酸化位点渊aa 13袁82冤尧5 个 N 糖基 化位点渊aa 25袁73袁80袁110袁115冤和 4 个半胱氨酸残基渊aa17袁31袁140袁150冤遥
干扰素渊interferon袁IFN冤是动物细胞在诱导物刺激后分泌的一类高活性多功能的糖蛋白袁具有广谱抗病 毒尧抗肿瘤及增强免疫调节能力的作用[1]遥 干扰素分为玉型和域型袁玉型干扰素渊IFN-琢尧茁 和 棕冤以抗病毒为 主袁域型干扰素渊IFN-酌冤以免疫调节为主[2]遥 1987 年犬 IFN-琢 基因首先被克隆[3]袁之后在昆虫细胞[4]和蚕体内获 得表达[5]遥 1992 年袁犬 IFN-酌 基因被克隆[6]袁之后在兔肾细胞尧犬肌细胞[7]中获得表达遥 1996 年犬 IFN-茁 基因被 克隆并在昆虫细胞中获得表达[8]袁但未注明犬的品种袁且没有进行全面生物信息学分析遥 之后袁在国际上鲜见 关于犬 IFN-茁 的研究报告遥 近几年袁犬的饲养量逐年增加袁而犬病渊特别是病毒病冤严重威胁着犬的健康和生 命遥传统的防治犬病毒病的方法越来越显示出其局限性遥由于干扰素的广谱抗病毒作用和多功能性袁犬干扰素 已用于犬病的治疗[9-10]袁且治疗效果很好遥 但临床使用的干扰素多来源于动物细胞表达系统袁成本高袁产量低袁 易携带病原遥 所以袁廉价尧安全的犬干扰素有待研究开发遥 现在临床使用的干扰素多为 琢 型和 酌 型袁其治疗效 果和范围有限袁干扰素单一使用效果不如 琢尧茁 和 酌 型联用袁所以犬 茁 型干扰素有待研发遥 目前袁有关 IFN-茁 基因和蛋白的结构尧性质尧遗传变异和进化等的研究尚少袁其基因工程生产和临床应用有待研究遥因此袁本研究 用 PCR 法克隆了犬 IFN-茁 基因袁进行了全面的生物信息学分析袁为下一步基因优化改造和原核系统高效表达 等工作奠定了基础遥
收稿日期院2011-01-15 基金项目院沈阳农业大学青年教师科研基金资助项目渊2006210冤 作者简介院夏润玺渊1972-冤袁男袁沈阳农业大学讲师袁博士袁从事动物分子病毒学研究遥 * 通讯作者 Corresponding author院张曼夫渊1939-冤袁男袁中国农
业大学教授袁从事动物分子病毒学研究遥
中图分类号院S829.2
文献标识码院 A
文章编号院 1000-1700渊2011冤04-0449-05
Cloning and Sequence Analysis of Shepher Run-xi1, ZHANG Man-fu2*
(1. College of Biological Science and Technology, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110161, China; 2. College of Biological Science, China Agricultural University, Beijing 100094, China)
窑450窑
沈阳农业大学学报
第 42 卷
1 材料与方法
1.1 材料 供试犬鲜血采自 1 岁牧羊犬袁加终浓度 1 mg窑mL-1 EDTA 抗凝曰供试 pGEM-T 载体试剂盒购自 Promega 公
司曰供试感受态大肠杆菌 JM109尧Taq DNA 聚合酶尧限制性内切酶 Sac I尧dNTP尧质粒快速提取试剂盒尧基因组 DNA 提取试剂盒尧DNA 凝胶回收试剂盒购自 TaKaRa 公司曰 供试 DNA Ladder Mix 购自 Fermentas 公司曰 供试 Tris-Cl渊pH 值 8.0冤饱和酚尧IPTG 等购自鼎国公司遥 1.2 方法 1.2.1 犬 IFN-茁 基因的 PCR 扩增 根据 GenBank 中犬 IFN-茁 基因序列渊E11229冤设计引物袁扩增完整的读码 框序列袁上游引物为 5爷-ACTCTTCCCATTTTCATC-3爷袁下游引物为 5爷-AGATCTCTCAGCCTCTGC-3爷遥 按基因组 DNA 提取试剂盒使用说明提取牧羊犬基因组 DNA袁 并做为模板 PCR 扩增牧羊犬 IFN-茁 基因袁50滋L 反应体系 含模板 2ng袁上尧下游引物渊10滋mol冤各 1滋L袁其他试剂按使用说明加入遥 先 94益预变性 5 min袁然后 94益 30s袁 51益30s袁72益 30 s袁30 个循环袁最后 72益保温 8min遥 PCR 产物经 10g窑L-1 琼脂糖凝胶电泳鉴定后袁用 DNA 凝胶 回收试剂盒按操作说明回收目的片段遥 1.2.2 犬 IFN-茁 基因克隆 按试剂盒操作说明袁 将回收的 PCR 产物与 pGEM-T 载体连接, 转化感受态大肠 杆菌 JM109袁 转化物涂于含 IPTG/X-Gal/氨苄青霉素的 LB 平板上袁37益培养至长出菌斑, 挑取白斑接种于含有 氨苄青霉素的 LB 培养基袁37益振荡培养 12耀16 h遥 用质粒快速提取试剂盒提取重组质粒袁 进行 PCR 鉴定和 Sac I 酶切鉴定遥 选取 2 个鉴定正确的重组克隆送生工生物工程渊上海冤有限公司测序遥 1.2.3 序列分析 用 DNAStar 进行序列分析和二级结构预测袁 用 SignalP尧MotifScan尧Swiss-Model 等工具在线 渊冤分析信号肽尧基序渊motif冤和预测三维结构遥 用 ClustalX 1.81 将测得序列与 GenBank渊http: //冤 中其他物种 IFN-茁 基因序列进行多重比对袁 用 MEGA 4.0 以邻位相连法 渊NeighborJoining methods袁NJ冤构建进化树遥
牧羊犬IFN-β基因的克隆和序列分析
（． ｏｌｇ ｆＢｏｏｉａ Ｓｉｎｅ ａｄ Ｔｃ ｎｌｇ， ｈ ｎａｇＡｇｉ ｌ ｒ ｎｖｒｉ ， ｈｎ ａｇ １０ ６ ，Ｃ ｉａ ２ ｏｌｇ ｆＢｏ ｇｃ ｃｅｃ， １ Ｃ ｌ ｅｏ ｉｌｇ ｌ ｃｅｃ ｎ ｅｈ ｏ ｙ Ｓ ｅｙ ｎ ｒ ｕｔ ａ Ｕ ｉｅｓｙ Ｓ ｅｙｎ １ １ ｈｎ； ．Ｃ ｌ ｅｏ ｉｌ ｉａ Ｓ ｉ ｅ ｅ ｃ ｏ ｃ ｕｌ ｔ １ ｅ ｏ ｌ ｎ Ｃ ｉａＡｇｉ ｌ ｒ ｎｖｒｉ，Ｂ ｉｎ ０ ０ ４ Ｃ ｉａ ｈｎ ｒ ｃ ｔ ａ Ｕ ｉ ｓｙ ｅ ｉｇ １０ ９ 。 ｈｎ） ｕ ｕｌ ｅ ｔ ｊ
沈 阳农 业大 学学报 ，０ １ ０ ，２ ）４ ９ ４ ３ ２ １— ８ ４ （ ：４ — ５ ４
Ｊ ｕ ｎ ｌｏ ｈ ｎ ａ ｇ ．ｒ ｕｔｒｌＵｎｖ ｒｉ ， ０ ｌ ０ ， ２４ ： ４ — ５ ｏ ｒ ａ ｆＳ ｅ ｙ ｎ ￣ ｉ ｌ ａ ｉｅｓｔ ２ １ 一 ８ ４ ｆ）４ ９ ４ ３ ｇｃ ｕ ｙ
１６个 氨 基 酸 ， ２ 个 为 信 号 肽 。 熟 蛋 白理 论 分 子 量 为 ２ ｋ 等 电点 为 ５７ ７ 有 ２个 潜 在磷 酸化 位 点 、 个 Ｎ糖 基 化 位 点 和 ４ ８ 前 １ 成 ０ Ｄ， ．３ 。 ５ 个 半 胱 氨 酸 残 基 ， 部 分 为亲 水 区 。二 、 级 结 构 预 测 显 示 ， 白 主 要 由 ５段 ０螺 旋 组 成 。犬 ＩＮ Ｂ基 因 与赤 狐 的 完 全 相 同 ， 大 三 蛋 ／ ． Ｆ— 与 貉 、 貂 和 猫 的 同源 性 很 高 （ ５ ９ － ）在 进 化 树 中处 于 同一 分 支 ， 与禽 类 和 鱼类 的 同 源性 仅 为 ２９ ８６ 雪 ８ ％一 ８４ ， ％ 而 ．％～ ．％。
山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备
山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备安贝;赵玄多;杨雯昱;侯伟杰;高洋;陈德坤【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2014(000)011【摘要】为获得山羊IFN-γ重组蛋白，提取山羊外周血淋巴细胞总 RNA，反转录得到cDNA，以此为模板经PCR扩增获得IFN-γ的ORF区，构建重组克隆载体。
经PCR扩增得到编码山羊IFN-γ成熟肽的基因序列，连入重组表达载体pET-32a，转入 BL21（Codon Plus）感受态细胞中，测序并分析。
重组表达载体经IPTG诱导后，对产物进行SDS-PAGE分析，并过镍柱纯化。
用获得的纯化蛋白免疫家兔制备抗体。
结果显示，编码山羊IFN-γ成熟肽部分的片段长432 bp；SDS-PAGE 分析显示，融合蛋白大小约为34．9 ku，在30℃条件下，以0．3 mmol／L的IPTG诱导6 h，可得到大量可溶性表达的目的蛋白；间接 ELISA测定制得的多克隆抗体效价为1∶106。
%To obtain the expression products of goat IFN-γ,to tal RNA was extracted from activated goat PBMCs,and cDNA was synthesized and used as template for PCR.The recombinant cloning vector was constructed.The sequence encoding mature peptide region was cloned by PCR and inserted into the ex-pression vector pET-32a,and the recombinant plasmid was transformed into the competent cell BL21 (Co-don Plus),followed by sequencing and analysis.After induced by IPTG,the expression products were and analysized by SDS-PAGE and purified by Ni-NTA.The purified protein was immunize rabbits to prepare polyclonal antibodies.Sequence analysis suggested that sequence encoding themature peptide was 432 bp. SDS-PAGE indicated that the fusion protein was about 34.9 ku,and a large amount of soluble protein could be expressed when induced with a total concentration of 0.3 mmol/L/L IPTG for 6 h at 30℃.The titter of polyclonal antibodies was 1∶106 detected by indirect ELISA.【总页数】6页(P29-33,34)【作者】安贝;赵玄多;杨雯昱;侯伟杰;高洋;陈德坤【作者单位】西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100;西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100;西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌712100;西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100;西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100;西北农林科技大学动物医学院，陕西杨凌 712100【正文语种】中文【中图分类】S852.4【相关文献】1.猪Ⅰ型干扰素受体Ⅱ胞外域基因的克隆表达及其多克隆抗体制备 [J], 杨青原;张军杰;秦运杰;王冬梅;夏平安;崔保安2.猪Jiv基因的克隆表达与多克隆抗体制备 [J], 刘伟;郭抗抗;林鸷;盛洁;赵娣;赵紫印;张彦明3.莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白基因gap45、gap50、myo A和m/c的克隆表达与多克隆抗体制备 [J], 王锦明;刘爱红;任巧云;马米玲;刘志杰;李安岩;李有全;赵帅阳;张浩浩4.基因C型鸭肝炎病毒VP1基因的克隆表达及其多克隆抗体的制备 [J], 赵立娜;崔言顺;任建亭;李建亮;黄兵;李玉峰;马秀丽5.埃及伊蚊丝氨酸蛋白酶抑制剂23的基因克隆表达与多克隆抗体制备 [J], 翟慧;王政艳;吕清巧;程金芝;李世琪;杨茜;商正玲;吴家红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
犬干扰素-γ-cDNA的克隆及其在鼠骨髓瘤细胞(SP20)中表达
,:NV )
&"3
犬 01,2 ! *+,- 序列与序列分析
"*+,-." %D-S 测序结果如图 H 所示。基因全长为 F@B 个核苷酸， 编码 BEE 个氨基酸， 信号肽为 )H 个氨基酸 （序列 下横线） ， 成熟蛋白为 BAH 个氨基酸， 含两糖基化位点 （序列 下横线） 。蛋 白 分 子 量 为 BP YD。将 该 序 列 与 基 因 库 中 同源性为 PPG 。 "*+,-."比较，
+ 材料与方法
+,+ 质粒、 酶、 试剂、 细胞和病毒 T,!%4、 RU8, 1/8-O. 载体购自 CK(92V- 公司。RS;DG,’$ 表达载体购自 A>N:WK(V2> 公司。EAFCK2R BR:> ,:>:RK2R 质粒提 取试剂盒购自 EAFU8+ 公司。限制性内切酶 3#$ @ &、 4(/ "、 50( S"和 10 H+F 连接酶购自 1-X-S- 公司。S1/CGS/JAUJ/ （ ’B’） 和 CYZB 试剂盒源于 1P[P\P 公司。滤泡性口炎病毒 由本室保存。牛肾细胞系 （ ,H\X） 小鼠骨髓瘤细胞 （ BC$D%） 购自中国兽药监察所。类新霉素 （U0!"） 购于 U:];( 公司。
收稿日期： 修回日期： $%%!/!%/!"， $%%$/%#/%0。 " 通信作者。 12)： "3/!%/3$"4##5$；6-7："3/!%/3$"4#!&0；8/9-:)：7:-;<=>? ;-= * 2@= * ;>
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拉布拉多犬和德国牧羊犬干扰素alpha基因克隆及测序_夏春
农业生物技术学报Journal of A gricultural Biotechnolog y1999,7(3) 拉布拉多犬和德国牧羊犬干扰素alpha基因克隆及测序夏 春 汪 明 夏兆飞(中国农业大学动物医学院,北京100094)摘 要:本研究采用PCR技术扩增和克隆了拉布拉多犬和德国牧羊犬的干扰素基因alpha IF N。
测序结果显示拉布拉多犬和德国牧羊犬的alpha IFN基因序列一致,全长均为513个核苷酸,共编码170个氨基酸。
两种犬alpha IFN蛋白分子量均为18 504kD。
结果也揭示了犬属动物的alpha IF N基因十分保守,仅存在0 3%的变异。
关键词:犬;干扰素基因;P CR法M olecular Cloning of Interferon-alpha Genes from T wo kinds of Dog(Labrader Retriever and German Shepherd Dog)Xia Chun Wang M ing Xia Zhaofei(College of Veterinary M edicine,China A gricultural U niversity,Beijing100094)Abstract:T wo alpha IF N genes were isolated from L abrader Retriever and German Shepherd dog by PCR us-ing primers based on hig hly conserved amino acid sequence blocks of do g's alpha IFN genes.T he cloned I FN g enesbetween L abrader Retriever and German Shepherd dog are similarities,and are513nucleotides long and deduced170amino acid.T his data w ould sug gest the alpha IF Ns o f dog be highly conser ved,and the amino acid sequenceshav e99 3%~100%homolog y with those of dog's alpha IF N g enes.Key words:dog;interferon gene;PCR method干扰素(Interferon,缩写为IFN)是一类能诱导动物细胞产生多种广谱抗病毒蛋白的细胞因子,具有阻止病毒繁殖、调节机体免疫反应的生物学功能,是当今应用前景广阔的重要生物制剂之一[1]。
荷斯坦奶牛IFN_基因的克隆_序列分析及表达研究
0引言干扰素（Interferon ，IFN ）是人和动物细胞受到适宜的刺激时产生的一种微量的、具有高度生物学活性的糖蛋白，因其具有干扰病毒复制的能力，故称干扰素。
根据分泌细胞、诱生剂和诱生条件的差异，干扰素可分为IFN-α、IFN-β和IFN-γ3种，其中IFN-α来基金项目：兵团博士资金（2008JC08）；家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放课题（KEYLAB200802）。
第一作者简介：李贞，女，1984年出生，河南郑州人，硕士研究生，主要从事病原分子生物学研究。
通信地址：832003新疆石河子石河子大学动物科技学院1307信箱，E-mail ：lizhen198458@ 。
通讯作者：乔军，E-mail ：ccf-xb@ ，qj710625@ 。
收稿日期：2009-10-20，修回日期：2009-11-04。
荷斯坦奶牛IFN-γ基因的克隆、序列分析及表达研究李贞1,2，陈创夫1,2，乔军1，任艳1，张辉1，杨明峰1，刘佳旭1，倪伟1(1新疆地方与民族高发病省部共建教育部重点实验室，新疆石河子832003；2石河子大学动物科技学院，新疆石河子832003）摘要：利用RT-PCR 技术从荷斯坦奶牛外周血淋巴细胞总RNA 中扩增IFN-γ（ccIFN-γ）基因，克隆至pMD18-T 载体进行测序。
测序结果表明，ccIFN-γ基因全长501bp ，编码166个氨基酸，其中前23个氨基酸残基构成信号肽序列，后面147氨基酸残基构成成熟肽，其中含有2个潜在的N-链糖基化位点。
二级和三级结构预测发现，ccIFN-γ蛋白分子中存在7个的α-螺旋，中间由无规卷曲连接，折叠成由α-螺旋包绕的中空状结构。
将ccIFN-γ成熟肽编码区序列进一步克隆至pET-28a ，转化大肠杆菌BL21(DE3)，用IPTG 诱导表达。
经SDS-PAGE 分析，表达出与预期大小（20.6KDa ）相符的重组蛋白，占菌体蛋白18.6%。
德国牧羊犬γ干扰素基因克隆表达与抗病毒活性测定
摘 要 ： 用 ＲＴ Ｐ Ｒ 扩 增 德 国牧 羊 犬 ７干 扰 素 （ ａＦ 一 ） 利 —Ｃ Ｃ Ｉ Ｎ ７ 的成 熟 肽 。序 列 分 析 表 明 ， ａＦ 一 Ｃ Ｉ Ｎ ７的 成 熟 肽 ｃ Ａ 由 ４ ２个 ＤＮ ３ 核 苷 酸 组 成 ， 编 码 １ ３个 氨 基 酸 。构 建 载 体 ｐ Ｅ Ｔ一ｐ１ Ｃ ｌ Ｎ ７表 达 重 组 Ｃ ＩＮ一 ， Ｇ ｕａｈｏ ｅＳ ｐ ａｏｅ４ 共 ４ Ｇ Ｘ ６ 一／ ａＦ 一 ａＦ ７ 经 ｌｔｔｉ ｅ ｈｒｓ Ｂ亲 和 层 ｎ
ｓ ｏ ｅ ｈ ｔ ｈ ｈ ｗ ｄ ｔ ａ ｔ ｅ ＣａＩ ＦＮ一 ｇｅ ｅ ｗ ａ ｏｍ ｐｏ ｅ ｆ ４ ２ ｕｃ ｅ ｔｄｅ ｎ ｏ ｉ ａ ｕｒ ｒ ｅ ｎ ｏ ４ ｍ ｉ 丫 ｎ ｓｃ ｓ ｄ ｏ ３ ｎ ｌｏ ｉ ｓ ｅ ｃ ｄ ｎｇ ａ ｍ ｔ ｅ ｐ ｏｔ ｉ ｆ １ ３ ａ ｎｏ ａ ｉ ｎ ｔ ｏ ｎ． Ｈ ｉ ｌ ｘ ｅ ｓ ｄ ａ ｄ ｐｕ ｉｉ ｄ ｒ ｃ ｃｄｓ ａ ｄ ａ ｓｏｐ ｃ ｄｏ ｇｈ ｙ ｅ ｐｒ ｓ ｅ ｎ ｒｆｅ ｅ ｏｍ ｂｉ ａ ｏｔ ｉ ｓ ｈ ｒ ｅ ｔ ｄ． Ａ ｎｔｖ ｒ ｌａ ｓ ｙ ｎ ｎｔｐｒ ｅ ｎ ｗａ ａ ｖ ｓ ｅ ｉ ｉａ ｓ ａ ｓ
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犬IFN-α基因的克隆、表达及其生物学活性的研究的开题报告
犬IFN-α基因的克隆、表达及其生物学活性的研究的开题报告一、题目：犬IFN-α基因的克隆、表达及其生物学活性的研究。
二、研究背景和意义：干扰素（IFN）是免疫系统重要的调节因子，可抑制病毒复制、增强细胞免疫功能、调节免疫细胞分化等。
IFN-α属于Type I IFN家族，具有广谱的生物学作用，对于疾病治疗具有广泛的潜在应用价值。
犬作为人类的伴侣动物，在医学和疾病控制方面也具有重要的意义。
因此，研究犬IFN-α基因的克隆、表达及其生物学活性，对犬的免疫系统和人免疫系统的研究都具有重要的意义。
三、研究内容和实施步骤：研究内容：本研究旨在从犬中克隆出IFN-α基因，并在表达系统中构建重组IFN-α蛋白，进一步探讨其可能的生物学活性，从而为IFN-α的研究提供一个新的研究材料。
实施步骤：1. 从犬体内收集组织，提取全基因组DNA。
2. Amplify适当长度的IFN-α基因片段，通过限制性内切酶切割克隆到表达载体上。
3. 将重组表达载体转化到大肠杆菌中，利用海绵状体做相应蛋白鉴别。
4. 将表达丰富的革兰氏阳性菌株进行转染，观察可能的细胞反应。
5. 通过SDS-PAGE和Western blotting等方法，对表达的蛋白进行鉴定和定量。
6. 进一步研究其可能的生物学活性，例如抗病毒活性，免疫调节活性。
四、研究预期成果：1. 成功从犬中克隆IFN-α基因。
2. 构建重组IFN-α蛋白表达系统，并成功表达出重组蛋白。
3. 鉴定表达的蛋白，研究其可能的生物学活性。
4. 为犬免疫系统和人免疫系统的研究提供一个新的研究材料。
五、研究的意义和价值：1. 探索了IFN-α在犬体内的表达和生物学活性，对于犬的免疫系统和疾病治疗研究具有意义。
2. 为IFN-α的研究提供了一个新的研究材料，对于其在人类疾病治疗方面的应用有所启示。
3. 为兽医学和人类医学的交叉研究提供了新的思路和方法，具有推动兽医医学发展的重要意义。
犬γ-干扰素基因的克隆、序列分析及蛋白质结构预测
犬γ-干扰素基因的克隆、序列分析及蛋白质结构预测谢昆;蒋成砚;唐秀华;周文树;王海荣;汪镜【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2016(032)001【摘要】根据GenBank上犬γ⁃干扰素基因（IFN⁃γ）序列（序列号WO318193），利用Primer 5．0软件设计特异性引物，应用RT⁃PCR技术从100μg／ml ConA刺激24 h后的犬外周血淋巴细胞总RNA中扩增出γ⁃干扰素基因，测序后应用DNAStar软件对克隆的犬γ⁃干扰素基因进行序列分析，并与GenBank上发表的犬、牛、大熊猫、鸡、牦牛、人、猪、野猪、斑马鱼、土拨鼠等的IFN⁃γ基因序列进行同源性比较。
结果显示，克隆的犬IFN⁃γ基因大小501 bp，编码166个氨基酸，与犬、牛、大熊猫、鸡、牦牛、人、猪、野猪、斑马鱼、土拨鼠 IFN⁃γ基因的核苷酸序列同源性分别为98�4％、81�6％、26�1％、26�1％、22�7％、22�7％、80�8％、81�0％、28�5％和25�0％；氨基酸序列同源性分别为95�8％、72�5％、5�4％、5�4％、6�6％、6�6％、68�9％、69�5％、5�4％和5�4％。
运用DNAstar软件对犬γ－干扰素进行蛋白结构预测的结果显示，犬γ⁃干扰素蛋白含有10个α⁃螺旋、9个β⁃折叠、11个β⁃转角和5个无规则卷曲。
【总页数】6页(P170-175)【作者】谢昆;蒋成砚;唐秀华;周文树;王海荣;汪镜【作者单位】红河学院生命科学与技术学院，云南蒙自 661199; 云南省高校农作物优质高效栽培与安全控制重点实验室，云南蒙自 661199;红河学院生命科学与技术学院，云南蒙自 661199; 云南省高校农作物优质高效栽培与安全控制重点实验室，云南蒙自 661199;红河学院生命科学与技术学院，云南蒙自 661199;红河学院生命科学与技术学院，云南蒙自 661199;红河学院生命科学与技术学院，云南蒙自 661199;红河学院生命科学与技术学院，云南蒙自 661199【正文语种】中文【中图分类】S858.292【相关文献】1.贵宾犬α-干扰素基因的扩增、克隆与序列分析 [J], 宋亚鹏;陈红英;崔保安;贾艳艳;郭显坡;张蕾2.中国黑白花奶牛干扰素-τ成熟蛋白基因的克隆与序列分析及牛干扰素-τ的分类[J], 张明;管晓斌;朱庆;刘学方;冯玉梅;赖松家3.猪细小病毒非结构蛋白NS1基因的克隆、序列分析及蛋白质结构预测 [J], 刘建;汤德元;罗险峰;曾智勇;李春燕;甘振磊;王凤;郝飞;王洪光4.藏獒犬α-干扰素全基因的克隆与序列分析 [J], 陈红英;董海聚;崔保安;贾艳艳;宋亚朋;王淑娟5.犬γ干扰素基因的克隆与序列分析 [J], 张桂红;丁乃峥;杨林;师守信;刘宝全因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
绵羊MUSTN1基因的克隆、序列分析及其组织表达
绵羊MUSTN1基因的克隆、序列分析及其组织表达高建锋;卢曾奎;马友记;李讨讨;赵兴绪【摘要】In order to study MUSTN1 gene characteristics of sheep ( Ovis aires) and its expression at different devel-opmental stages in longissimus dorsi and biceps femoris, fifteen sheep longissimus dorsi and biceps femoris tissues were collected at 0, 2, 6, 12 and 24 month old stages (three replicates for each).With application of molecular bi-ology and other methods , the bioinformatics and tissue expression of the coding region of MUSTN1 gene were cloned and analyzed .The results showed that the CDS region of the MUSTN1 gene was 248 bp, encoded with 82 amino acid, molecular weight of 8.89 ku, its theoretical isoelectric point is 9.93, the GC content is greater than AT con-tent, 5 phosphorylation sites, 5 N-glycosylation site, 1 O-glycosylation site, 0 transmembrane structure, hydrophobic protein and the secondary structure of MUSTN 1 protein is dominated by random coil; the highest homology was 99.2%and 100%in the nucleotide and the amino acid sequence of goat (Capra hircus), followed by Bos taurus (97.2%and 100%, respectively).MUSTN1 gene was expressed in the longissimus dorsi and biceps femoris at dif-ferent developmental stages (0, 2, 6, 12 and 24 month old).The expression of MUSTN1 in the longissimus dorsi was the highest at 24 month-old, which was significantly higher than those at other month old ( P<0.01 ) .The ex-pression of MUSTN1 was the lowest at 0 month and significantly lower than that in 2 and 12 month old ( P<0.01 ) , significantly lower than that in6 month old ( P<0.05 ) .The expression of MUSTN1 in 6 month old sheep biceps femoris was the highest and significantly higher than other month old ( P<0.01 ) .The expression level of 24 month old was significantly higher than that in 12 month old ( P<0.01 ) and 0 month old( P<0.05 ) .The conclusion was that the coding sequence of the MUSTN1 gene of sheep was conserved among species and expressed in the sheep of the dorsal long muscle and biceps femoris muscle at different development stages .The expression level of MUSTN1 gene may be related to the growth of skeletal muscle .%为了探讨绵羊(Ovis aires)MUSTN1基因特征及其在不同发育阶段的背最长肌与股二头肌组织中的表达规律,选取0、2、6、12和24月龄健康绵羊15只,每组3只,采取背最长肌和股二头肌组织,应用分子生物学等方法,对MUSTN1基因CDS区进行克隆,对其进行生物信息学和组织表达分析.结果表明,MUSTN1基因CDS区全序列为248 bp,编码82个氨基酸,其分子量为8.89 ku,等电点为9.93,GC含量大于AT含量,含有5个磷酸化位点、5个N-糖基化位点、1个O-糖基化位点、0个跨膜结构、疏水性蛋白,二级结构主要以无规卷曲为主;与山羊(Capra hircus)该基因核苷酸以及编码氨基酸序列的同源性最高,分别为99.2%、100%,其次为牛(Bos taurus),分别为97.2%、100%.MUSTN1基因在绵羊不同发育阶段(0、2、6、12和24月龄)的背最长肌与股二头肌中均有表达,在背最长肌中,24月龄MUSTN1表达量最高,极显著高于其他月龄(P<0.01),0月龄MUSTN1表达量最低,极显著低于2、12月龄(P<0.01),显著低于6月龄(P<0.05);而在6月龄绵羊股二头肌中MUSTN1表达量最高且极显著高于其他月龄(P<0.01),24月龄表达量次之且极显著高于12月龄(P<0.01),显著高于0月龄(P<0.05).结论为绵羊MUSTN1基因的编码区序列在物种间具有保守性,且在不同发育阶段的背最长肌和股二头肌组织中均表达,其表达量的高低可能与骨骼肌肉的生长快慢相关.【期刊名称】《浙江农业学报》【年(卷),期】2017(029)010【总页数】8页(P1661-1668)【关键词】MUSTN1;绵羊;克隆;组织表达;序列分析【作者】高建锋;卢曾奎;马友记;李讨讨;赵兴绪【作者单位】甘肃农业大学动物科学技术学院,甘肃兰州730070;甘肃肉羊繁育生物技术工程实验室,甘肃民勤733300;甘肃农业大学动物科学技术学院,甘肃兰州730070;甘肃肉羊繁育生物技术工程实验室,甘肃民勤733300;甘肃农业大学动物科学技术学院,甘肃兰州730070;甘肃肉羊繁育生物技术工程实验室,甘肃民勤733300;甘肃农业大学动物科学技术学院,甘肃兰州730070;甘肃肉羊繁育生物技术工程实验室,甘肃民勤733300;甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 730070【正文语种】中文【中图分类】S826肌肉骨骼胚胎核蛋白1(musculoskeletal temporally activated novel gene，MUSTN1)基因于2004年在小鼠上初次被发现并验证，共编码82个氨基酸[1-2]。
西农萨能奶山羊INSIG-1编码区的克隆、序列特征分析和组织表达
诉 ：患犬饮食 正常 ，以前右侧后腹部有一 红枣 大小 的包 ，一直 ６ 术后护理 没 有 增 大 ，没 有 引起 重视 ，２ ０ ｄ 前 配 种 ，就诊 时发 现包 块 越来 越 术 后 每 天 给 患 犬 静 注 糖 盐 水 ，加 头 孢 唑 啉钠 ，利 巴韦 林 ， 大 ，曾 到 当地 私人 动物 诊 所 就诊 ，没 给 出诊 治 方 案 ，遂 求 诊 笔 地塞 米 松 ，１ 次， ｄ ，连用 ５ ｄ ，术后 第 ７ ｄ ，采食 饮 水正 常 ，精 神好