高效液相色谱法及其在中药分析中的应用
高效液相色谱法在中药含量测定方面的应用
高效液相色谱法在中药含量测定方面的应用高效液相色谱技术(HPLC)是一种重要的分离与分析技术,其具有高压、高速、高效、高灵敏度、消耗样品少、色谱柱可反复使用、测定样品量少，容易回收等优势。
近年来，高效液相色谱检测中药的研究非常多,本文就HPLC在不同药物类型的中药活性成分中的应用进行综述，以供临床参考。
1.生物碱类成分含量测定生物碱结构复杂在植物界分布较广，大多具有生理活性，为许多中草药及药用植物的有效成分。
郑丽娜等人[1]表明高效液相色谱法测定山豆根中苦参碱和氧化苦参碱的含量,此方法线性关系良好,精密度、稳定性、重现性均较好,回收率较高.2.中药甙类成分的含量测定甙类在高等植物较为普遍，其种类繁多，结构不一，生理活性具有多样性，已成为目前研究天然药物很重要的一大类成分。
黄秋妹[2]采用高效液相色谱法,以甲醇:0.1%磷酸溶液(17∶83)为流动相,检测波长为233nm,流速为1mL?min-1. 结果，线性范围为0.08445～42.225mg,r值均为0.9999;回收率为99.46%,RSD分别为1.93%,1.74%。
3 .蒽醌类成分含量测定中药中以蒽醌及其衍生物为主的蒽醌类成分较为普遍，其中何首乌及制何首乌中以蒽醌类活性成分为主。
彭贵龙等[3]人表明高效液相色谱法对大黄酸、大黄素和大黄酚分别在0.0001~12.50μg/mL、0.0002~25.00μg/mL、0.00018~22.50μg/mL 范围内线性关系良好,相关系数(r)均大于0.9999,定性检测限(S/N=3)依次是：0.0703 ng/mL、0.0282 ng/mL、0.0871 ng/mL；样品回收率为88.39%~107.2%。
高效液相色谱法操作简单快速、定量准确、灵敏度高、成本低,为何首乌中蒽醌类化合物的检测分离及含量测定提供了一个有效的科学方法.4 .黄酮类成分含量测定酮类化合物数量之多位列天然酚性中化合物之首，植物体内其主要与糖结合成甙，小部分以甙元形式存在。
高效液相色谱—质谱联用技术在中药研究中的应用进展
高效液相色谱—质谱联用技术在中药研究中的应用进展高效液相色谱一质谱联用（LC-MS）将高效液相色谱的高分离效能与质谱的强大结构测定功能组合起来，不仅实现对复杂混合物更准确的定量和定性分析，而且简化了样品的前处理过程，样品分析更简便，为中药组分的分析及结构的鉴定提供了一个重要和全新的技术支撑。
该技术对中药化学成分的分析及鉴定，中药指纹图谱的研究，中药药代动力学的研究有应用价值。
论述了高效液相色谱-质谱联用（LC-MS）在中药领域的应用进展，阐述了各方法的特点、应用范围及研究现状，旨在为中药研究者提高参考依据。
促进中药研究向现代化的发展。
标签：高效液相色谱质谱联用；中药；指纹图谱；药代动力学作为一种新的现代技术分析手段，高效液相色谱-质谱（LC-MS）联用技术在分离效能、灵敏度和专属性等方面都有着巨大的优势，展现出强大的定性、定量分析能力，从而在药物分析特别是中药分析得到广泛的运用。
本文就近年来HPLC-MS联用技术在中药成分分析及结构的鉴定、中药指纹图谱研究、中药药代动力学研究3个方面的应用作一论述。
1高效液相色谱-质谱（LC-MS）联用技术有独到的优势和特点当用传统的高效液相色谱（HPLC）测定样品时，样品中的杂质对主成分有较大的干扰，主峰不易分离，峰型也不好，准确性有影响但却找不到好的办法时，高效液相色谱一质谱（LC-MS）可以排除其他杂质的干扰，即使主成分在色谱上没有完全分离开，但通过MS的特征离子质量色谱图也能给出它的色谱图来进行定性定量。
采用高效液相色谱-质谱（LC-MS）分析时其流动相主份相对于传统高效液相色谱（HPLC）法更少更简单，色谱柱更短更小（常用规格是2.1mm×50mm，1.8μm），出峰时间大大缩短，却可以得到很好的分离效果，短时间内可完成对一个样品的分析，操作简单、重复性好。
更适合于大批量样品的测定。
高效液相色谱一质谱（LC-MS）还可以用相对简单的色谱条件对中药中多种成分的定性、定量分析，比如分析西青果中的诃子酸、诃黎勒酸、鞣云实精、原诃子酸等化合物，方法简便，分析时间短。
高效液相色谱在中草药质量控制中的应用
高效液相色谱在中草药质量控制中的应用一、本文概述随着现代科技的进步，中草药的质量控制已成为中医药领域研究的热点和难点。
高效液相色谱（HPLC）作为一种高效、精确的分析技术，在中草药质量控制中发挥着越来越重要的作用。
本文旨在探讨高效液相色谱在中草药质量控制中的应用，包括其原理、方法、优势以及在实际操作中的案例分析，以期为提高中草药质量控制水平提供理论支持和实践指导。
本文将对高效液相色谱技术的基本原理和特点进行简要介绍，以便读者对该技术有一个初步的了解。
接着，将重点分析高效液相色谱在中草药质量控制中的应用，包括中草药的成分分析、质量标准制定、以及质量控制过程中的关键环节等。
同时，还将探讨高效液相色谱技术在中草药质量控制中的优势，如分离效果好、分析速度快、灵敏度高等。
本文还将通过具体案例分析，展示高效液相色谱在中草药质量控制中的实际应用效果。
通过对不同中草药样品的分析和比较，揭示高效液相色谱技术在中草药质量控制中的潜力和前景。
本文将总结高效液相色谱在中草药质量控制中的优势和挑战，并提出相应的建议和展望，以期为中草药质量控制领域的进一步发展提供参考和借鉴。
二、高效液相色谱技术原理及特点高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种重要的分离分析技术，广泛应用于中草药质量控制领域。
其技术原理基于不同物质在固定相和流动相之间的分配平衡，通过高压泵将流动相推动通过固定相，使样品中的各组分因分配系数的差异而实现分离。
高分离效能：HPLC具有高分辨率和高灵敏度，能够实现对中草药中复杂成分的有效分离和检测，为质量控制提供了准确的数据支持。
高选择性：通过选择合适的固定相和流动相，以及调整分离条件，HPLC能够实现对特定组分的选择性分离，有助于中草药中特定活性成分的定量分析。
快速分析：HPLC的分析速度快，通常能在较短时间内完成样品的分离和检测，提高了分析效率。
高效液相色谱法在中药质量检测中的应用
高效液相色谱法在中药质量检测中的应用中药具有悠久的历史，随着当代社会的不断发展，中药的研究行业也取得了不断的进步。
由于中药在对患者进行治疗时对人体的伤害较小，且具有较好的效果。
中医对中药进行质量检测中的传统方法是通过长久以往的经验进行的，主要是中医通过感官接触例如闻、看、嗅等，这种方法在我国已经有非常悠久的历史，被绝大部分中医所使用。
但是，社会在不断发展进步，传统的方法已经不能满足当代社会的要求，且传统方法的科学性较低，很容易发生失误。
因而，中药行业的专家学者也在不断研究探讨新型的检测方法。
高效液相色谱法符合现代社会的要求，在中药的质量检测中发挥了巨大的作用。
一、高效液相色谱法1.1高效液相色谱法的概念及特征HPLC是在经典液相色谱法的基础上的更进一步发展，适用单一或多种溶液混合而成的溶剂。
在具体操作中，首先要将溶剂调制完成，然后用泵将溶液注入到色谱柱中，因为溶液具有流动性，所以当溶液进入色谱柱内会产生分离现象，分离后的成分会进入到检测器中。
然后利用相关的检测设备和仪器进行检测，从而得出最终结果。
整个操作流程比较迅速，效率较高，并且具有很高的灵敏度和准确度，广泛的应用于中药的质量检测中。
1.2高效液相色谱法的分析原理HPLC与传统的经典液相色谱法相比并没有根本上的区别，是根据传统的方法再结合现代社会的科学技术的进一步的发展，所以高效液相色谱法更加具有科学性和现代性，在操作过程中应用了更多现代化的机械设备和测试仪器，使中药质量的检测结果更加具有说服性和科学性。
除此以外，随着社会经济、科技的不断发展，高效液相色谱法的操作技术和使用工具也在更新。
在具体操作中使用小口径柱，相比传统经典液相色谱法来说，具有更高的效率和分离速度，最快的速度可以达到经典液相色谱法的1000倍，在具体的质量检测中具有更好的便利性，因而HPLC在具体检测操作中的效率更高，更加受到中医的欢迎。
二、高效液相色谱法在中药质量检测中的应用2.1应用于测定和分析中药中的有效成分测定和分析中药中的有效成分，是衡量中药质量的重要指标，在整个中药的质量检测中是重要一环。
高效液相色谱法应用于中药成分分离分析
高效液相色谱法应用于中药成分分离分析中药是我国传统的药物治疗方式，由于其独特的药效和可靠性，受到了越来越多人的青睐。
随着科学技术的不断发展，为了更好地发掘中药的药效，研究中药中的物质成分已经成为了学术界和医学界的研究热点。
中药中复杂的化学成分对分离和定量分析的要求越来越高，而高效液相色谱法(HPLC)作为一种常见的分离分析技术，已被广泛应用于中药成分分离分析。
一、HPLC基本原理高效液相色谱法的基本原理是利用液相中流动的分离剂，将样品物质分离开来，通过对流动的分离相进行流量的调节、载波的单纯或混合、分离剂的选用等调节方法，来达到分离物质的目的。
而如何选择流动相，使分离效果更加突出，HPLC技术中最关键的问题则是如何调整流动相。
在HPLC分析中，流动相一般是有机溶液和水溶液混合配制而成的。
有机溶液主要是甲醇、乙腈、2-丙醇等有机化合物，而水溶液则是各种酸、碱、盐等。
在使用HPLC进行分离时，根据各种物质的分子结构、理化性质等不同特点，选择不同的流动相进行合理配比，进而实现目标物质的有效分离。
二、HPLC在中药分析中的应用HPLC在中药成分分析和定量分析中具有多方面的优势：可以对样品中的多种成分进行宽谱分析，分离得到纯度高的目标化合物，并能利用多种检测技术直接检测分离物质。
在中药成分分析中，HPLC对于研究中药的药效和药理机制十分关键，比如能够去分离和提纯中药中的有效成分，从而更好地研究药效、药理及中药活性成份等。
同时，HPLC对于中药的评价和质量保障也具有重要意义，例如监测中药的质量、提高中药质量控制标准、发现中药的新有效成分等。
在HPLC分析中，流量是一个非常关键的因素。
从理念上说，若样品流速较慢，则在适当时间内需要提高温度和压力，从而使液体通过狭窄而长的分离柱，并使分离效果更佳。
而当流量过高时，则可能影响到样品的质量，甚至影响HPLC技术的分离与检测效果。
因此，我们通常应试图找到一个合理的流量范围，以保证最佳的样品分离效果和分析结果。
高效液相色谱-质谱法在中药的应用研究
高效液相色谱-质谱法在中药的应用研究摘要：液质联用技术将液相色谱(HPLC)的高分离效能与质谱(MS)的强大结构鉴定功能结合起来，逐渐成为中药现代化研究的强有力手段。
本文对我国科学工作者应用液质联用技术在中药化学成分分析、中药质量控制、中药体内代谢、药代动力学、药效学、中药材指纹图谱及在复方中成药分析的方面进行的研究工作作一综述。
关键字：HPLC-MS 质量控制药代动力学药效学指纹图谱中成药分析HPLC是目前分离复杂体系最为有效的分析工具，由于其仪器自动化、普及化程度愈来愈高，已成为中药分析最常用的仪器之一。
但目前中药分析中运用的HPLC仪器绝大多数与UV或DAD检测器相联接，对于单个色谱峰仅能提供保留时间及紫外图谱等信号，而对未知成分所能提供的结构信息相当有限，对中药等复杂体系的定性结果可能给出错误的结论[1]。
MS是一种高灵敏度的检测器，且不同化合物的特征性强，可用于部分解析未知化合物的结构。
中草药是一个非常复杂的化学体系，其中含有大量的次生代谢产物，其结构复杂，性质相似，有的化合物还不稳定。
HPLC-MS将HPLC的高分离效能与MS的强大结构测定功能组合起来，为中药化学成分的快速分析提供了一个重要的新技术。
一、中药化学成分研究中药化学成分是其发挥药效作用的物质基础，它的深入研究是中药现代化的关键和核心。
以往中药成分研究主要采用传统提取分离方法，从复杂体系中分离提取单一化学物质，再通过光谱和质谱等分析技术进行鉴定。
而且对环境极不友好。
HPLC-MS在使化学成分达到有效分离的基础上，提供丰富的化合物结构信息，在中药化学成分分析中发挥了重要作用。
中药中某些常见的化学成分已经有对照品，通过与对照品的色谱和质谱特征进行对照可以快速、准确地对化学成分进行鉴定。
刘瑞等[2]采用HPLC-MS2鉴定大青叶水提液中的5种化学成分，通过与对照品的保留时间、色谱增益、紫外光谱图和特征离子碎片进行比较，鉴定出大青叶水提液图谱中的5个色谱峰分别为胞苷、尿苷、鸟苷、黄嘌呤和次黄嘌呤。
现代色谱分析—液相色谱在中药分析中的应用论文
现代色谱分析—液相色谱在中药分析中的应用论文近年来，随着现代科学技术的发展以及人们对中药的深度研究，液相色谱成为了中药分析中常用的一种技术手段。
液相色谱作为一种高效、准确、快速、灵敏的分析方法，已经在中药分析领域取得了广泛的应用和有重要的意义。
液相色谱是以液相为固定相，以其种类及其物理化学特性与柱填充物的物理化学特性相适应的固定相为动相，通过色谱柱的固定相与液相之间的气固界面相互作用，对物质进行分离的一种色谱分析技术。
在中药分析中，液相色谱的应用主要包括高效液相色谱（HPLC）和超高效液相色谱（UPLC）。
首先，液相色谱可以用于中药中活性成分的分离和定量分析。
中药复杂的成分成分组成，不同的成分对人体的药效也不同。
通过液相色谱技术，可以将中药中的不同成分进行分离，并通过检测器准确地测量出各个成分的含量。
这对于深入了解中药的药理学作用以及指导合理用药具有重要意义。
另外，液相色谱还可以用于中药中新药物的发现与研究。
中草药是中医药领域非常重要的一个组成部分，其中很多草药中存在着未知的化学成分，这些成分可能隐藏着新的药理学活性。
液相色谱配合质谱等分析技术可以对中草药进行全面的分析，快速地发现中草药中的潜在新药物，并对其进行深入研究。
综上所述，液相色谱在中药分析中具有非常重要的应用价值。
它可以对中药中的活性成分进行分离和定量分析，帮助我们深入了解中药的药理学作用。
同时，液相色谱还可以用于中药中有害成分的检测，保障中药的质量安全。
此外，液相色谱还可以用于中药中新药物的发现与研究，对推动中医药现代化起到积极作用。
因此，液相色谱在中药分析中的应用有着广阔的前景，并且仍然有待进一步的发展和完善。
超高效液相色谱法在中药分析领域中的应用现状及展望
超高效液相色谱法在中药分析领域中的应用现状及展望一、本文概述随着科技的不断进步和人们对中药认识的深入，中药分析领域正面临着前所未有的发展机遇。
超高效液相色谱法（UPLC）作为一种先进的色谱分析技术，以其高分辨率、高灵敏度、高分离效能和快速分析等特点，在中药分析领域中的应用日益广泛。
本文旨在综述超高效液相色谱法在中药分析领域的应用现状，探讨其发展前景，为中药的现代化和国际化提供技术支持。
本文将首先介绍超高效液相色谱法的基本原理和优势，阐述其在中药成分分析、质量控制、药物代谢等方面的应用案例。
然后，我们将重点分析超高效液相色谱法在中药分析领域中的优势和挑战，包括其对于复杂中药体系的处理能力、对于痕量成分的检测能力以及在实际应用中可能遇到的问题。
我们将展望超高效液相色谱法在中药分析领域的未来发展，包括技术创新、方法优化、多技术联用等方面，以期推动中药分析技术的不断进步和发展。
二、超高效液相色谱法在中药分析领域的应用现状超高效液相色谱法（UPLC）作为一种先进的色谱分析技术，近年来在中药分析领域得到了广泛应用。
其高效的分离能力和高灵敏度，使得UPLC成为中药复杂成分分析的有力工具。
在中药指纹图谱的构建中，UPLC发挥了关键作用。
通过优化色谱条件和选择适当的检测器，UPLC能够实现对中药中多种成分的快速、准确分离和检测。
这不仅有助于中药质量控制，还可以为中药的药效物质基础研究和质量控制提供科学依据。
UPLC在中药有效成分的分析中也表现出色。
通过精确测量中药中有效成分的保留时间和峰面积，可以实现对中药中有效成分的定量分析。
这为中药的质量评价、药效研究以及新药开发提供了有力支持。
同时，UPLC在中药代谢产物的分析中也有着重要应用。
通过分析中药在体内的代谢产物，可以深入了解中药的药效机制和药代动力学过程。
这对于中药的临床应用和新药研发具有重要意义。
然而，尽管UPLC在中药分析领域的应用取得了显著进展，但仍面临一些挑战。
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2019/5/29
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高效液相色谱仪器
1. 储存和输送液体设备 2. 进样系统 3. 柱系统 4. 检测器 5. 控制和数据处理系统
选择流动相的原则： •保持色谱柱的稳定性 •化学惰性 •适合所用的检测器 •对样品有一定的溶解能力 •清洗、更换方便、毒性小 •沸点、粘度等物理性质合适
反相色谱最常用的流动相： 水、甲醇、乙腈、四氢呋喃、异丙醇等。 水－甲醇体系：大约50％水的时候粘度最大 水－乙腈体系：35％水的时候粘度最大。
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电学和电化学检测器：
安培检测器 电导检测器 库仑检测器 介电常数检测器 极谱检测器
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工作站： 完成数据采集和对仪器的控制。
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超高效液相色谱仪（ UPLC）
超高效液相色谱是分离科学 中的一个全新类别，它给实 验室带来了新奇而强大的能 力。UPLC™借助于HPLC的 理论及原理，涵盖了小颗粒 填料、非常低系统体积及快 速检测手段等全新技术，增 加了分析的通量、灵敏度及 色谱峰容量。
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紫外吸收检测器有三种类型： 固定波长紫外吸收检测器：低压汞灯提供固定 254nm或280nm紫外光。
可变多波长检测器：氘灯做光源，光栅分光
光二极管阵列检测器photo－diode－array detector（PDAD，PDA, DAD）：钨灯和氘灯组合 光源，进入检测池的不是单色光，而是一段紫外 波长上的光。
存放流动相的容器一定要惰性的，并且 有机溶剂要避光。
输液泵要求流量平稳,可以调节的流量 范围宽，耐高压。
一般是柱塞往复泵。
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流动相的混合输入和洗脱方式
离线混合 配制 滤过 脱气
在线混合 低压在线混合 高压在线混合
洗脱 等度洗脱 梯度洗脱
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高效液相色谱仪器——泵系统
色谱分离
慢 中等
快
淋洗液
Temporal course
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液相色谱的分类
按溶质在分离过程中的原理：
• 吸附色谱 • 分配色谱 • 离子交换色谱 • 体积排阻色谱 • 亲和色谱
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液相色谱的分类
按色谱固定相的形式：
• 平板色谱（平面色谱） • 柱色谱
按分离的压力
• 高压液相色谱（高效液相色谱） • 中压液相色谱 • 常压液相色谱
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进样系统包括手动进样和自动进样
无论手动进样还是自动进样，都要通过 六通阀。六通阀进样是高压系统的需要， 既不影响系统的正常运行又能够让样品 进到系统中去。
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高效液相色谱仪器——进样器
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柱系统包括色谱柱和柱温箱
反相键合相色谱柱最常用的就是ODS柱， 也就是C18柱。 柱温箱的温度控制要求比较精确，因为 流体的粘度受温度的影响较大。
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H－dp关系图
液固色谱法
一般也把吸附色谱法称为液固色谱法。液固色 谱法的固定相一般为固体吸附剂，常用的是： 碳酸钙、硅胶、氧化铝、氧化镁、活性炭等。 其中硅胶最为常用。
吸附色谱对中等分子量的油溶性样品可获得最 佳的分离，而对强极性或离子型的样品，有时 会发生不可逆吸附，不能得到满意的结果。
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固定相的其他性能
载体的形状 球形 无定形 粒径 3~10μm, 1.7~2.5μm 孔径 <150Å 分析分子量
<2000的化合物;>300Å 分 析分子量>2000的化合物 表面积 键合基团的表面覆盖度 含碳量
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一般认为键合相色谱的机理分配色谱机理， 也有人认为它是吸附色谱机理，其实应该 是有两种成分在里面，现在又有疏溶剂理 论等机理的提出。
X m nM s 吸附 X s nM m
解吸
X表示溶质分子，下标m为流动相，s为固定相 M表示流动相分子，下标m为流动相，s为固定相 n为被溶质分子取代的流动相分子数目
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键合相液相色谱
键合相固定相：在硅胶的表明用键合反应 把官能基团键合到表面上，解决固定相流 失的问题。
正相色谱：流动相极性比固定相极性小
反相色谱：流动相极性比固定相极性大
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高效液相色谱——固定相 化学键合相硅胶
octadecyl
Si-[CH2]17-CH3 C18
octyl
Si-[CH2]7-CH3 C8
cyanopropyl Si-[CH2]3-CN
CN
aminopropyl Si-[CH2]3-NH2 NH2
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有效成分、指标成分的检测
人参皂苷的检测
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高效液相色谱法在药典中的应用
项目 含量测定
2000版 109
2005版 527
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HPLC与TLC比较(2005版)
含量测定
TLC-SC
药材和提取物 15
中成药
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HPLC 175 352
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HPLC在中药质量分析和检测中的应用
有效成分、指标成分的检测； 杂质或有关物质检查； 添加物或有害残留物质的检测； 中药指纹谱分析
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液相色谱检测器
测量原理不同分类： •光学性质检测器 •电学和电化学性质检测器 •热学性质检测器
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光学性质检测器：
紫外－可见光检测器 示差折光检测器 荧光检测器 蒸发光散射检测器 化学发光检测器
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高效液相色谱仪器——检测器
2019/5/29
PDA 可以辅助定性。
DAD检测器3D图
示差折光检测器（refractive index detector RID）： 溶液的折射率等于溶剂及其中所含各组分 溶质的折射率与其各自的摩尔分数的乘积 之和。
RID是通用型的检测器，但是灵敏度不高。
RID不能用于梯度洗脱。
蒸发光散射检测器
2019/5/29
2019/5/29
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基本原理：
吸附剂一般为多孔性的物质，在它们的表明 存在着分散的吸附中心，溶质分子和流动相 分子在吸附剂表面的活性中心上进行竞争， 同时不同溶质之间和同一溶质的不同官能团 之间液也存在竞争。竞争的综合结果就是形 成不同溶质在吸附剂表面吸附、解吸平衡。
2019/5/29
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用一个式子表示如下：