第二章 提取分离和纯化
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第二章 蛋白质分离纯化技术(2)
28
几种盐在不同温度下的溶解度（克/100毫升水）
温度
0℃ 20℃ 80℃ 100℃
（NH4)2SO4 70.6 75.4
95.3
103
Na2SO4 4.9 18.9
43.3
42.2
NaH2PO4 1.6
7.8 93.8
101
1）硫酸铵在0℃时的溶解度，远远高于其它盐类
29
2) 分离效果好：有的提取液加入适量硫 酸铵盐析，一步就可以除去75％的杂 蛋白，纯度提高了四倍。
3) 温度：为防止变性和降解，制备具有活性的蛋白 质和酶，提取时一般在0℃～5℃的低温操作。
4) 防止蛋白酶的降解作用：加入抑制剂或调节提 取液的pH、离子强度或极性等方法使相应的水解 酶失去活性，防止它们对欲提纯的蛋白质、酶的降 解作用。
15
5) 搅拌与氧化：搅拌能促使被提取物的溶解， 一般采用温和搅拌为宜，速度太快容易产生大 量泡沫，增大了与空气的接触面，会引起酶等 物质的变性失活。因为一般蛋白质都含有相当 数量的巯基，有些巯基常常是活性部位的必需 基团，若提取液中有氧化剂或与空气中的氧气 接触过多都会使巯基氧化为分子内或分子间的 二硫键，导致酶活性的丧失。在提取液中加入 少量巯基乙醇或二硫苏糖醇以防止巯基氧化。
1) 盐浓度（即离子强度）：
离子强度对生物大分子的溶解度有极大的影响，绝大多数蛋 白质和酶，在低离子强度的溶液中都有较大的溶解度，如在 纯水中加入少量中性盐，蛋白质的溶解度比在纯水时大大增 加，称为“盐溶”现象。盐溶现象的产生主要是少量离子的 活动，减少了偶极分子之间极性基团的静电吸引力，增加了 溶质和溶剂分子间相互作用力的结果。
带正电荷蛋白质
（疏水胶体）
阴离子
不稳定蛋白颗粒
几种盐在不同温度下的溶解度（克/100毫升水）
温度
0℃ 20℃ 80℃ 100℃
（NH4)2SO4 70.6 75.4
95.3
103
Na2SO4 4.9 18.9
43.3
42.2
NaH2PO4 1.6
7.8 93.8
101
1）硫酸铵在0℃时的溶解度，远远高于其它盐类
29
2) 分离效果好：有的提取液加入适量硫 酸铵盐析，一步就可以除去75％的杂 蛋白，纯度提高了四倍。
3) 温度：为防止变性和降解，制备具有活性的蛋白 质和酶，提取时一般在0℃～5℃的低温操作。
4) 防止蛋白酶的降解作用：加入抑制剂或调节提 取液的pH、离子强度或极性等方法使相应的水解 酶失去活性，防止它们对欲提纯的蛋白质、酶的降 解作用。
15
5) 搅拌与氧化：搅拌能促使被提取物的溶解， 一般采用温和搅拌为宜，速度太快容易产生大 量泡沫，增大了与空气的接触面，会引起酶等 物质的变性失活。因为一般蛋白质都含有相当 数量的巯基，有些巯基常常是活性部位的必需 基团，若提取液中有氧化剂或与空气中的氧气 接触过多都会使巯基氧化为分子内或分子间的 二硫键，导致酶活性的丧失。在提取液中加入 少量巯基乙醇或二硫苏糖醇以防止巯基氧化。
1) 盐浓度（即离子强度）：
离子强度对生物大分子的溶解度有极大的影响，绝大多数蛋 白质和酶，在低离子强度的溶液中都有较大的溶解度，如在 纯水中加入少量中性盐，蛋白质的溶解度比在纯水时大大增 加，称为“盐溶”现象。盐溶现象的产生主要是少量离子的 活动，减少了偶极分子之间极性基团的静电吸引力，增加了 溶质和溶剂分子间相互作用力的结果。
带正电荷蛋白质
（疏水胶体）
阴离子
不稳定蛋白颗粒
天然药物化学第二章天然药物成分提取分离及结构鉴定方法
天然药物化学第二章天然药物成分提取分离及结构鉴定方法天然药物成分提取、分离及结构鉴定方法是研究天然药物化学的重要环节。
本文介绍了几种常见的方法，包括传统的提取和分离方法以及现代的结构鉴定方法。
首先是天然药物成分的提取方法。
传统的提取方法主要包括研磨法、浸泡法、渗漏法、浸渍法、热水浸提法等。
这些方法在药材的初步处理阶段起着重要作用，能够将有效成分从药材中充分提取出来。
现代化学技术的发展使得提取方法更加多样化，比如超声波提取、微波提取、超临界流体提取等，这些方法能够提高提取效率和提取速度。
接下来是天然药物成分的分离方法。
传统的分离方法主要包括溶剂沉淀法、蒸馏法、萃取法等。
这些方法常用于将药材提取液中的目标成分与杂质分离开来。
现代的分离方法有色谱技术。
色谱技术包括高效液相色谱（HPLC）、气相色谱（GC）、薄层色谱（TLC）等，这些方法能够更加精确地分离和纯化目标成分。
此外，还有一些电泳方法如毛细管电泳、凝胶电泳等，能够对天然药物成分进行分离和鉴定。
最后是天然药物成分的结构鉴定方法。
结构鉴定方法主要包括光谱学和质谱学。
光谱学包括红外光谱（IR）、紫外光谱（UV）、核磁共振（NMR）等，这些方法能够提供分子结构和功能基团的信息。
质谱学通常用于研究分子的质量和质量分布，并且能够确定分子的分子式和分子量。
此外，还有一些其他的结构鉴定方法，如X射线衍射（XRD）、电子显微镜（SEM）等，这些方法能够提供分子的晶体结构和形貌信息。
综上所述，天然药物成分提取、分离及结构鉴定方法涉及到多个技术领域，传统的方法已经得到了很大的发展，同时现代化学技术的进步也为药物化学的研究提供了更多的选择。
可以预见，随着技术的进一步发展，天然药物的研究将会越来越深入，为人类健康做出更大的贡献。
植物化学成分的提取方法
价廉，易得，安全。 常用溶剂： 石油醚、乙酸乙酯、 乙醇、水、氯仿、乙醚等。
提取溶剂的选择原则
浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续回流提取法、 薄膜蒸发连续提取法
提取方法
常压过滤（折叠滤纸） 减压过滤——布氏漏斗接抽滤装置
提取液过滤
蒸发 蒸馏：⑴常压蒸馏 ⑵减压蒸馏
第三节 超临界流体萃取法
原理：
渗透率极强、提取效率高、 提取速度快、不破坏物质结构、 能实现选择性提取。
优点：
溶剂：CO2
第四节 超声技术提取法
原理 利用超声波产生的强烈振动和空化效应加速植物细胞内物质的释放、扩散并溶解进入溶剂中，并保持被提取物质的结构和生物活性不发生变化。 优点 缩短提取时间、消耗溶剂低、浸出率高。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
提取液的浓缩
第二节 水蒸气蒸馏法
意义 水蒸气蒸馏是用来提纯或分离有机物的一种方法。 基本原理 二组分混合的液体，在一定温度下时每种液体都有其各自的蒸气压，其蒸气压的大小与每种液体单独存在时蒸气压力一样。
水蒸气蒸馏法 适用于随水蒸气蒸馏而不被破坏的植物成分的提取，这些化合物与水不相混溶或仅相微溶，且约在100C时有一定的蒸气压。如大蒜素 、丹皮酚 、麻黄碱的提取。 分馏法：沸点不同进行分馏，然后精制纯化 减压蒸馏:降低沸点,减少分解和增加分馏效果,也称真空蒸馏。 注意事项（略）。
第二章 植物化学成分的提取方法
提取分离是研究天然产物的起点。 提取分离即去粗存精 ，根据化学指标、生物指标追踪分离有效成分（生理活性成分）。
第一节 溶剂提取法
对有效成分溶解度大，对其它成分溶解度小。
不与有效成分起化学反应。
第五节 微波辅助提取法
原理
植物样品在微波场中吸收大量的能量，使细胞内部的物质直接与相对冷的萃取剂接触，强化提取过程。
提取溶剂的选择原则
浸渍法、渗漉法、煎煮法、回流提取法、连续回流提取法、 薄膜蒸发连续提取法
提取方法
常压过滤（折叠滤纸） 减压过滤——布氏漏斗接抽滤装置
提取液过滤
蒸发 蒸馏：⑴常压蒸馏 ⑵减压蒸馏
第三节 超临界流体萃取法
原理：
渗透率极强、提取效率高、 提取速度快、不破坏物质结构、 能实现选择性提取。
优点：
溶剂：CO2
第四节 超声技术提取法
原理 利用超声波产生的强烈振动和空化效应加速植物细胞内物质的释放、扩散并溶解进入溶剂中，并保持被提取物质的结构和生物活性不发生变化。 优点 缩短提取时间、消耗溶剂低、浸出率高。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
提取液的浓缩
第二节 水蒸气蒸馏法
意义 水蒸气蒸馏是用来提纯或分离有机物的一种方法。 基本原理 二组分混合的液体，在一定温度下时每种液体都有其各自的蒸气压，其蒸气压的大小与每种液体单独存在时蒸气压力一样。
水蒸气蒸馏法 适用于随水蒸气蒸馏而不被破坏的植物成分的提取，这些化合物与水不相混溶或仅相微溶，且约在100C时有一定的蒸气压。如大蒜素 、丹皮酚 、麻黄碱的提取。 分馏法：沸点不同进行分馏，然后精制纯化 减压蒸馏:降低沸点,减少分解和增加分馏效果,也称真空蒸馏。 注意事项（略）。
第二章 植物化学成分的提取方法
提取分离是研究天然产物的起点。 提取分离即去粗存精 ，根据化学指标、生物指标追踪分离有效成分（生理活性成分）。
第一节 溶剂提取法
对有效成分溶解度大，对其它成分溶解度小。
不与有效成分起化学反应。
第五节 微波辅助提取法
原理
植物样品在微波场中吸收大量的能量，使细胞内部的物质直接与相对冷的萃取剂接触，强化提取过程。
第二章 天然产物
单糖、双糖等小分子化合物的分离。
分类：根据所用膜的孔径大小不同可将膜分离法分为超滤和纳滤。 优点：不使用大量有机溶剂。
5、升华法
植物中凡是具有升华性质的化合物均可用此法进行纯化。
实例：樟木中的樟脑、茶叶中的咖啡碱及植物中的苯甲酸等成分。 优缺点：简单易行，但产率低，还可能伴有分解现象。
伪石榴皮碱、异石榴皮碱和甲基异石榴皮碱时，均可利用常压或 减压分馏方法进行初步分离，然后再精制纯化。
3、沉淀法
原理：利用有机物的溶解性或与某些试剂产生沉淀的性质可实现
植物成分的初步分离。对分离成分来讲，这种沉淀是可逆的。 中性乙酸铅或碱式乙酸铅在水或稀醇溶液中能与许多物质生成难
溶性的铅盐或络盐沉淀，利用这种性质可使所需成分与杂质分离。
中皂苷析出，沉淀物溶于乙醇，加胆固醇的乙醇溶液沉淀，过滤，
沉淀干燥后置于索氏提取器中用苯回流，不溶物为皂苷，苯液浓 缩后可回收胆固醇。 对多糖、蛋白质等成分可加丙酮、乙醇或乙醚沉淀。
4、膜分离法
原理：小分子物质在溶液中可通过具有一定孔径的膜，而大分子
物质不能通过。 适用对象：常用于蛋白质、多肽、多糖等大分子化合物与无机盐、
在设计纯化方案时，通常是在初始阶段使用分离效能不高但具有
大量处理样品能力的纯化手段，如选择性提取、沉淀过滤机简单 的常压色谱柱分离等。合理地选择单一或混合溶剂进行提取是进 行样品有效分离纯化的第一步。以低极性溶剂提取可得到亲脂性 的组分，醇类溶剂则对极性与非极性溶剂都可溶出。若开始阶段 采用极性大的溶剂提取，接着用溶剂萃取方法可将提取物质按极 性分成不同的部位。一些较新的方法，如超临界流体萃取、固相 萃取等，则具有选择性高、快速、高效的优点。
6、结晶法
第二章 天然产物提取分离方法和技术
1、原辅材料规格的过渡实验。
2、设备选型与材料质量试验：
在小试阶段，大部分实验是在小型玻璃仪器中进行， 但在工业生产中，物料要接触到各种设备材料，如微 生物发酵罐、细胞培养罐、固定化生物反应器，多种 层析材料以及产品后处理的过滤浓缩、结晶、干燥设 备等。有时某种材质对某一反应有极大影响，甚至使 整个反应无法进行。故在中试时，要对设备材料的质
含强心苷的药材，用发酵法将低效的多糖苷转化为单 糖苷；需要从原料中提取某种苷的苷元时，用发酵法 或水解法把苷转化为相应的苷元后，再提取。
5、脱脂处理：
油质、蜡、树脂都不溶于水而易溶于乙醚、氯仿、丙 酮、苯及热乙醇中。
脱脂处理的方法：①先用乙醚或苯等亲脂性溶剂单独 或依次加热提取，并反复数次即可达到脱脂的目的。 ②对于树脂，可在乙醚提取液浓缩后，再经氯仿提取 即可以溶出树脂成分。
工厂化生产原料的质量控制方法
（1）形态与性状相结合的鉴别方法 （2）显微粉末鉴定：在显微镜下观察原料粉
末的组织或细微的形态，做出鉴定结论。 （3）化学鉴别法：用薄层层析法或传统的化
学方法进行化学成分的鉴定，并做出鉴定结论。 （4）紫外光谱法：用原料的甲醇或乙醇浸出
液在紫外光谱仪测定其紫外光谱，做出鉴定结 论。
主要是检查生产工艺流程的可行性和存在的问题，并 为中试和正式生产提供科学依据。如果放大实验的结 果较好，可以不再做中间生产实验，如果结果不理想， 可以为中间生产试验创造条件。
著名的化学工业学家L.H.裴克赖(L.H.Baekeland)的名 言:“小试验多摸索，大生产多收获” 。
在小型实验中要对所有工序的物料进行化学分析，并 在每个工序中计算被提取物质的收率和损失，并计算 各种物料的变化和废水、废液和废渣的数量。每次实 验都要总结经验、分析数据、找出问题、提出解决问 题的办法。
2、设备选型与材料质量试验：
在小试阶段，大部分实验是在小型玻璃仪器中进行， 但在工业生产中，物料要接触到各种设备材料，如微 生物发酵罐、细胞培养罐、固定化生物反应器，多种 层析材料以及产品后处理的过滤浓缩、结晶、干燥设 备等。有时某种材质对某一反应有极大影响，甚至使 整个反应无法进行。故在中试时，要对设备材料的质
含强心苷的药材，用发酵法将低效的多糖苷转化为单 糖苷；需要从原料中提取某种苷的苷元时，用发酵法 或水解法把苷转化为相应的苷元后，再提取。
5、脱脂处理：
油质、蜡、树脂都不溶于水而易溶于乙醚、氯仿、丙 酮、苯及热乙醇中。
脱脂处理的方法：①先用乙醚或苯等亲脂性溶剂单独 或依次加热提取，并反复数次即可达到脱脂的目的。 ②对于树脂，可在乙醚提取液浓缩后，再经氯仿提取 即可以溶出树脂成分。
工厂化生产原料的质量控制方法
（1）形态与性状相结合的鉴别方法 （2）显微粉末鉴定：在显微镜下观察原料粉
末的组织或细微的形态，做出鉴定结论。 （3）化学鉴别法：用薄层层析法或传统的化
学方法进行化学成分的鉴定，并做出鉴定结论。 （4）紫外光谱法：用原料的甲醇或乙醇浸出
液在紫外光谱仪测定其紫外光谱，做出鉴定结 论。
主要是检查生产工艺流程的可行性和存在的问题，并 为中试和正式生产提供科学依据。如果放大实验的结 果较好，可以不再做中间生产实验，如果结果不理想， 可以为中间生产试验创造条件。
著名的化学工业学家L.H.裴克赖(L.H.Baekeland)的名 言:“小试验多摸索，大生产多收获” 。
在小型实验中要对所有工序的物料进行化学分析，并 在每个工序中计算被提取物质的收率和损失，并计算 各种物料的变化和废水、废液和废渣的数量。每次实 验都要总结经验、分析数据、找出问题、提出解决问 题的办法。
天然药物化学 第二章 提取与分离 第一节
溶剂
特点
适用范围
醇溶液
提取效率高。 受热时间长。
对热稳定成分
提取效率比一
亲脂性有机 溶剂
般回流法高， 提取完全。 溶剂用量少。
对热稳定成分
受热时间长。
提取方法
超声波提 取法
溶剂 各类溶剂
特点
提取时间短， 效率高。 无需加热。
适用范围 各种成分
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◎适用物质： 1.具有一定的挥发性。 2.能随水蒸气蒸馏而不被破坏。 3.不与水发生反应。 4.不溶或几乎不溶于水。 ◎基本原理（了解）：
CH3-CH2-OH 乙醇
CH3C-HC｜H3-2C-HCO-OOHH OH
CH3-CH2-CH2-CH2-OH
正丁醇
常用溶剂的极性大小顺序排列如下： 水＞甲醇＞乙醇＞丙酮＞正丁醇＞乙酸乙酯＞
溶剂 极性
特点
适宜提取成分
优点：经济易得，安全。 糖类
氨基酸
蛋白质
水 强 缺点：①易霉变。②粘
鞣质
度大，难过滤。
材不适用）
浸渍法
水、酸水、 操作简单；时间 ①热不稳定成分。
碱水、稀 长，效率低。水 ②含果胶、淀粉。
醇
浸液易霉变。 粘液质、多糖等
成分多的物质
分。②含大量淀
浓度乙醇 间长，
粉、树胶、果胶
药材。
a.渗漉装置
提取方法 回流
提取法
连续回流 提取法
生物碱盐
③苷类成分易酶解。④
有机酸盐
提取液难浓缩。
大多数苷类
亲水性有 机溶剂
极 性
特点 （可与水以任意比例互溶）
适宜提取成分
乙醇 甲醇 丙酮
优点：①穿透力强，溶解
微生物蛋白的提取和分离纯化
菌体表达的胞外酶
上清（滤液）
菌体表达的胞外酶分解培养基形成的小肽 及一些氨基酸成分
预处理
未分解利用的部分培养基
沉淀（滤饼）
菌体
胞内匀浆：胞内表达的酶，小肽
膜系结构：周质蛋白，膜蛋白
细胞破碎和蛋白质溶解
• 机械法 匀浆、研磨、压榨、超声等 • 非机械法 渗透、酶溶、冻融、化学等 • 新方法 激光破碎、冷冻喷射、相向流撞击等
0.7 0.6 0.5
洗脱0Biblioteka 8Protein (mg/ml) Protein (mg/ml)
0.6 NaCl Na Cl 0.5 0.4
NaCl
0.8
Protein 1
按操作方式 • A.恒定洗脱 (isocratic elution) • B.分步洗脱 (stage elution) • C.梯度洗脱 (gradient elution
• 特点：
– 介质的颗粒尺寸分布较窄，柱效高（9000塔板 数/米）； – 在机械强度、理化特性、化学稳定性及热稳定 性等方面均优于传统凝胶介质
• 由于其机械强度高，适合在高流速下进行快速分离； • 可以用0.5 mol/L NaOH作为清洗剂 • 在pH 7时能承受121℃、30 min反复高温灭菌而不会 对层析效果产生明显影响 • 其分离效果不受去污剂、促溶盐类、变性剂等影响 • 能在多种有机溶剂存在下使用
• 根据所需的目的蛋白制定蛋白提取和纯化 的策略和步骤 • 一般的预处理：过滤（工业生产）和离心 （实验室研究）
过滤操作是借助于过滤介质，在一定的压力差ΔP作用下， 离心分离是利用转鼓高速转动所产生的离心力， 将悬浮液中的固体粒子截留，而与液体分离的技术。 来实现悬浮液、乳浊液分离或浓缩的目的。
分离提取纯化总结
中药有效成分的分离和纯化2007-03-07 16:52:27 来源：未知评论：0 点击：4（一）溶剂分离法：一般是将总提取物，选用三、四种不同极性的溶剂，由低极性到高极性分步进行提取分离。
水浸膏或乙醇浸膏常常为胶伏物，难以均匀分散在低极性溶剂中，故不能提取完全，可拌人适量惰性填充剂，如硅藻土或纤维粉等，然后低温或自然干燥，粉碎后，再以选用溶剂依次提取，使总提取物中各组成成分，依其在不同极性溶剂中溶解度的差异而得到分离。
例如粉防己乙醇浸膏，碱化后可利用乙醚溶出脂溶性生物碱，再以冷苯处理溶出粉防己碱，与其结构类似的防己诺林碱比前者少一甲基而有一酚羟基，不溶于冷苯而得以分离。
利用中草药化学成分，在不同极性溶剂中的溶解度进行分离纯化，是最常用的方法。
广而言之，自中草药提取溶液中加入另一种溶剂，析出其中某种或某些成分，或析出其杂质，也是一种溶剂分离的方法。
中草药的水提液中常含有树胶、粘液质、蛋白质、糊化淀粉等，可以加入一定量的乙醇，使这些不溶于乙醇的成分自溶液中沉淀析出，而达到与其它成分分离的目的。
例如自中草药提取液中除去这些杂质，或自白及水提取液中获得白及胶，可采用加乙醇沉淀法；自新鲜括楼根汁中制取天花粉素，可滴人丙酮使分次沉淀析出。
目前，提取多糖及多肽类化合物，多采用水溶解、浓缩、加乙醇或丙酮析出的办法。
此外，也可利用其某些成分能在酸或碱中溶解，又在加碱或加酸变更溶液的pH后，成不溶物而析出以达到分离。
例如内酯类化合物不溶于水，但遇碱开环生成羧酸盐溶于水，再加酸酸化，又重新形成内酯环从溶液中析出，从而与其它杂质分离；生物碱一般不溶于水，遇酸生成生物碱盐而溶于水，再加碱碱化，又重新生成游离生物碱。
这些化合物可以利用与水不相混溶的有机溶剂进行萃取分离。
一般中草药总提取物用酸水、碱水先后处理，可以分为三部分：溶于酸水的为碱性成分（如生物碱），溶于碱水的为酸性成分（如有机酸），酸、碱均不溶的为中性成分（如甾醇）。
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增溶助溶现象的原因
（1）中药中含有某些能表面活性物质，如皂苷、 树胶、蛋白质等。 （2）中药汤剂属于胶体溶液，由许多难溶物质 的分子组成的微粒混悬于介质中成为溶胶或粗分 散体系，也是使物质在溶液中含量增加的一个重 要因素。
(二)水蒸气蒸馏法
水蒸气蒸馏法适 用于能随水蒸气馏 出而不被破坏的天 然药物成分的提取。 中草药中的挥发油、 某些小分子生物碱、 小分子酚性物质等 都可采用本法提取。
（六）分馏法
分馏法是利用 各成分沸点的差异 进行提取分离的方 法，用于分离液体 混合物。在天然药 物有效成分研究中， 挥发油及一些液体 生物碱的分离常用 此法。
(七)超临界流体萃取技术
超临界流体萃取是一种利用超临界流体对天 然药物中有效成分进行萃取分离的新技术。 有些物质在临界温度和压力下，可形成一种既 非液体又非气体的特殊相态称为超临界流体。 该流体既具有与气体相似的粘度，又具有与液 体相似的密度，其扩散力和渗透力均大大强于 液体，因而对许多天然药物成分有很强的溶解 能力，且介电常（极性）数随压力增大而增加。 可根据成分的极性大小，改变压力进行选择性 提取及析出。
（４）回流提取法
本法适用于有机溶剂 的提取，提取效率与煎 煮法相同。 对热不稳成分的提取 不宜用此法
(5)连续回流提取法—索氏提取法
应用挥发性有机溶 剂提取天然药物中的 有效成分较多采用该 法。本法仅需少量溶 剂就能使有效成分提 取完全，提取效率高。 但提取液受热时间长， 一般需4～10小时。
乳化现象
液--液萃取中常遇到乳化现象。产生的原因有：溶 剂的组合、成分的种类等。操作中出现乳化现象，可 采用下列破乳方法： ①久臵； ②用一金属丝在乳化层中搅动使之破坏； ⑦将乳化层抽滤； ④将乳化层热敷或冷冻； ⑤分出乳化层，再用新溶剂萃取； ⑥加少量氯化钠，解决两相比重相差较小及两相 溶剂部分互溶的问题； ⑦滴加数滴醇类如乙醇或磺化蓖麻油等破乳类物 质。
中药成分及其适用的提取溶剂
中药成分极性 中药成分类型 适用的提取溶剂 强亲脂性（极性小） 挥发油、脂肪油、蜡、脂溶性色素、甾醇类、石油醚、己烷 某些苷元
亲脂性
小 中 等 极 性 亲水性 强亲水性 中
苷元、生物碱、树脂、醛、酮、醇、醌、有 乙醚、氯仿 机酸、某些苷类
某些苷类（如强心苷等） 某些苷类（如黄酮苷等） 氯仿：乙醇（2：1） 乙酸乙酯
分离和精制的方法
(一)系统溶剂分离法 (二)两相溶剂萃取法 (三)沉淀法 (四)吸附法 (五)盐析法 (六)透析法 (七)分馏法 (八)超临界流体萃取技术 （八）结晶 （九）色谱法
(一)系统溶剂分离法
此法一般是选用3-7种不同极性的溶剂，由低 极性至高极性分步对总提取物进行提取分离。使 总提取物中各组分，依其在不同极性溶剂中溶解 度的差异而得以分离。 本法操作较为复杂，对微量成分、结构性质相 似成分的分离精制有很大局限性，但仍是目前研 究成分不明的天然药物的最常用方法。
2．逆流连续萃取法
(三)沉淀法
沉淀法是在天然药物提取液中，加入某些试剂使 产生沉淀，通过过滤将成分分离的方法。依据加入 沉淀剂的不同，沉淀法可分为以下几种： 1．酸碱沉淀法 ２.铅盐
３.试剂沉淀法
1．酸碱沉淀法
在天然药物提取液中加入酸或碱试剂后产生沉 淀从而达到分离的方法称为酸碱沉淀法。 该方法是依据酸(碱)成分与碱(酸)试剂反应成 盐而溶于水，再加酸(碱)试剂反应重新生成游离 酸(碱)从溶液中析出。 一些具有内酯结构的化合物遇热碱开环生成羧 酸盐而溶于水，加酸后，又重新形成内酯环从溶 液中析出。 本分离法适用于酸或碱性成分，以及内酯类成 分的分离。
一、溶剂提取法
（一）基本原理 （二）溶剂的选择
（三）溶剂提取的方法
（一）溶剂提取法的原理
渗透 扩散
（二）溶剂的选择
溶剂提取法的关键是选择合适的溶剂，一种 好的溶剂应对所提取的成分有较大的溶解度， 而对共存杂质的溶解度很小。良好溶剂的选 择应遵循“相似相溶”原理。 一般说来，只要溶剂的极性与化学成分的 极性相似，化学成分就易被溶解。 溶剂的极性与介电常数ε有关，溶剂的ε 值越 大，极性越大。一些常用溶剂
（四）盐析法
在天然药物的水提液中，加入无机盐，使其达到 一定浓度或饱和，促使有效成分在水中溶解度降低而 沉淀析出,与其他水溶性较大的杂质分离。常作盐析 的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。 如三七的水提液中加硫酸镁至饱和状态，三七皂苷 乙即可沉淀析出。有些成分如原白头翁素、麻黄碱、 苦参碱等水溶性较大，在萃取分离时，也往往先在水 提取液中加入一定量的食盐，再用有机溶剂萃取。
（五）透析法
透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜， 而大分子物质不能通过半透膜的性质而达到分离的 方法。例如分离纯化皂苷、蛋白质、多肽、多糖等 大分子成分时，可用透析法除去无机盐、单糖、双 糖等小分子杂质。 透析成功与否和透析膜的规格关系很大。须根据 欲分离成分的分子量大小来选择。透析膜有动物膜、 火棉胶膜、羊皮纸膜(硫酸纸膜)、蛋白胶膜及玻璃纸 膜等。 透析法的分离速度较慢，为了加快透析速，可用 电透析法，电透析可使带电离子的透析速度增加10 倍以上。
第二章
中药化学成分的提取分离与鉴定
主要内容
第一节 中药化学成分的提取方法 第二节 中药化学成分的分离方法 第三节 中药化学成分结构研究简介
第一节 中药化学成分的提取方法
提取前的准备工作：基源、产地、药 用部位、采集时间与方法的考察及文献调 研； 提取前的预处理：粉碎、脱脂、酶的灭 活； 提取方法：溶剂提取法、水蒸汽蒸馏法 及升华
临界流体萃取的优点
用二氧化碳作为超临界流体物质具有无毒 无味，不易燃易爆，无残留，安全、价廉， 对大多数物质不反应，可循环使用的优点,故 最常用于天然药物的提取。
（八） 结晶和重结晶
结晶法是分离和精制固体成分的重要方法之 一，是利用混合物中各成分在溶剂中溶解度不同 达到分离的方法。对天然药物成分纯化精制的过 程常常就是反复结晶与重结晶的过程。 通常情况下，结晶的形成标志着化合物的纯度 达到了相当程度，故获得结晶并制备成单体纯品， 就成为鉴定天然药物成分、研究其分子结构的重 要一步。
增溶助溶现象举例
（1）已知含生物碱的中药与甘草配伍，生物碱与 甘草酸产生沉淀，生物碱可能提取不出来。 （2）黄连等中的小檗碱与黄芩苷产生沉淀，生物碱 与银花中的绿原酸发生沉淀，大黄鞣质与栀子、茵 陈之间也有沉淀产生。 （3）有的成分因其他成分的存在，溶解度有较大的 改变，如油脂类杂质的存在可以使不溶于石油醚的 香豆素溶解，含麻黄的方剂中如有葛根则麻黄碱的 含量增加等等。
2．铅盐沉淀法
在含天然药物成分的水或稀醇溶液中加人中性 醋酸铅或碱式醋酸铅试剂后，某些成分生成铅盐 沉淀，过滤使之分离的方法称为铅盐沉淀法。 中性醋酸铅可与酸性或酚性物质结合成不溶 性铅盐。如有机酸、蛋白质、氨基酸、黏液质、 鞣质、树脂、酸性皂苷、部分黄酮等； 碱性醋酸铅除与上述物质产生铅盐沉淀外，还 可沉淀中性皂苷、异黄酮、糖类及一些生物碱等 成分。 得到的铅盐沉淀悬浮于水或含水乙醇中，通 入H２Ｓ气体进行复分解反应，即可得到纯化的 有效成分。本法也可用来沉淀杂质。
3．试剂沉淀法
（1） 在天然药物的提取液中，加入某些试剂， 使之与有效成分结合生成水不溶物，滤集沉淀，经 复原处理后，即可得到有效成分。如加入雷氏铵盐 可沉淀分离水溶性季铵碱等。此外，还可以用明胶、 蛋白质溶液沉淀鞣质；用胆甾醇沉淀甾体皂苷。 （2）经浓缩的提取液加入另一种难溶性溶剂， 改变了原溶剂的极性，使其中某种或某些成分析出， 以达到纯化的日的。常用的方法有水-醇法、醇-水 法、醇-丙酮法、醇-乙醚法等。
一些常见溶剂的亲水性或亲脂性的强弱顺序
溶剂分类 ——按照极性大小和溶解性能
1、水
2、亲水性有机溶剂 3、亲脂性有机溶剂
1、水
强极性溶剂，对药材细胞穿透力大，中药中亲水性成分， 如无机盐、有机酸盐、生物碱盐、糖类、苷类、鞣质、氨 基酸、蛋白质等都能被水提出。 水作为提取溶剂有安全、经济、廉价易得等优点，缺点 是水 提取液（有其是含糖或蛋白质）易霉变，难以 保存，而且不易浓缩和过滤。
(6)超声提取法
利用超声波强烈振动 能传递巨大能量给浸提 药材和溶剂，从而破坏 植物药材的细胞，加强 胞内物质的释放、扩散 和溶解，加速有效成分 的浸出。该方法具有提 取时间短、提取效率高、 无须加热等优点，但此 法对容器壁的厚薄及放 臵要求较高。目前尚为 实验室小规模使用。
3、影响溶剂提取效率的因素
2. 提取方法
(１)浸渍法 (２)渗漉法 (３)煎煮法 (４)回流提取法 (５)连续回流提取法 (６)超声提取法
（１）浸渍法
又称冷浸法，适用于 遇热易破坏成分以及含大 量淀粉、树胶、果胶、黏 液质等多糖成分的药材， 多用水、乙醇作溶剂。 但本法提取时间长， 效率不高，特别是在用水 作溶剂浸渍时，提取液易 发霉变质，必要时可加适 量防腐剂。
(2)渗漉法
该法适用于以水、稀 醇为溶剂。用低沸点易挥 发的溶剂提取，不宜用此 法。因在室温下进行，故 特别适用于遇热易破坏成 分的提取。本法在渗滤过 程 中，不断加人新溶剂， 与渗滤液一直保持相当的 浓度差，故提取效率比浸 渍法高。但存在溶剂用量 大、费时较长的缺点。
(3)煎煮法