2触酶试验标准操作规程
肠球菌属标准操作规程
肠球菌属标准操作规程1.概述肠球菌属于1984年从链球菌属划出，单独成为一个菌属，包括粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌、坚韧肠球菌、铅黄肠球菌、蒙氏肠球菌、海氏肠球菌、鹑鸡肠球菌和病臭肠球菌等18个种和1个变异株。
临床上常见的菌株为粪肠球菌。
2.标本类型血液、尿液、痰、穿刺液、脓液等标本。
3.鉴定3.1 形态与染色革兰阳性球菌，单个、成双或短链状排列。
3.2 培养特性在血琼脂平板上形成较小、灰白色，有a 溶血或β溶血环的菌落。
在麦康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。
3.3 生化反应触酶试验阴性，分解甘露醇、山梨醇、胆汁七叶苷试验阳性、在含6.5%氯化钠的肉汤中生长，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌特征革兰阳性球菌，触酶试验阴性，在65g/L 氯化钠中生长，胆汁、七叶苷试验阳性，45℃中生长。
3.4.2与屎肠球菌的鉴别：粪肠球菌不分解阿拉伯糖，而屎肠球菌能分解阿拉伯糖3.4.3 与链球菌属和乳球菌属的鉴别：见表5-353.4.4 粪肠球菌与其他各主要菌种间的鉴别：见表5-36操作步骤3.5.1 触酶试验阳性参见触酶试验标准操作规程3.5.2 鉴定从血平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件.5.质量控制参见《质量控制程序》6.检验结果解释与分析在β-内酰胺酶阴性球菌肠球菌中，氨苄西林药敏试验结果可预测阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等敏感性。
青霉素药敏试验可预测氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林和哌拉西林-他唑巴坦等药敏结果。
粪肠球菌中氨苄西林药敏结果可以预测亚胺培南的药敏结果。
对于血培养和脑脊液中分离到的肠球菌，需做β-内酰胺酶检测，β-内酰胺酶阳性，则对青霉素、羧基青霉素和脲基青霉素均耐药。
ELISA操作规程
ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的实验方法，用于检测和定量分析特定抗原或者抗体的存在。
本操作规程旨在提供一套标准化的ELISA实验步骤，以确保实验的准确性和可重复性。
二、实验材料1. 96孔ELISA板2. 酶标仪3. 微量移液器和相应的可调移液器架4. 基质溶液（PBS等）5. 抗原或者抗体样品6. 酶标记的二抗7. 洗涤缓冲液8. 底物溶液9. 住手液三、实验步骤1. 准备工作a. 将96孔ELISA板放置在可调移液器架上。
b. 准备基质溶液，并将其加入ELISA板的每一个孔中，每孔100μL。
c. 将ELISA板放置在酶标仪中，孔底朝上，以避免溶液的蒸发。
2. 样品处理a. 将待测样品加入ELISA板的相应孔中，每孔100μL。
b. 将ELISA板盖好，轻轻摇动，使样品均匀分布。
c. 将ELISA板放置在酶标仪中，孔底朝上，孔盖向下。
3. 一抗孵育a. 将酶标记的一抗加入ELISA板的每一个孔中，每孔100μL。
b. 将ELISA板盖好，轻轻摇动，使一抗均匀覆盖样品。
c. 将ELISA板放置在酶标仪中，孔底朝上，孔盖向下。
4. 洗涤步骤a. 将洗涤缓冲液加入ELISA板的每一个孔中，每孔200μL。
b. 轻轻拍打ELISA板，使洗涤液充分覆盖孔底。
c. 倒掉洗涤液，重复以上步骤3次。
5. 二抗孵育a. 将酶标记的二抗加入ELISA板的每一个孔中，每孔100μL。
b. 将ELISA板盖好，轻轻摇动，使二抗均匀覆盖样品。
c. 将ELISA板放置在酶标仪中，孔底朝上，孔盖向下。
6. 洗涤步骤a. 重复步骤4中的洗涤步骤，以去除未结合的二抗。
7. 底物反应a. 将底物溶液加入ELISA板的每一个孔中，每孔100μL。
b. 将ELISA板盖好，轻轻摇动，使底物均匀覆盖样品。
c. 将ELISA板放置在酶标仪中，孔底朝上，孔盖向下。
8. 反应住手a. 在适当的反应时间后，将住手液加入ELISA板的每一个孔中，每孔100μL。
医院微生物室李斯特菌属检验操作规程
XXXX医院微生物室李斯特菌属检验操作规程1 目的2 标本类型3 鉴定检验3.1 形态染色3.2 培养特征3.3 生化反应3.4 鉴别要点3.5 操作步骤4 药敏试验5 质量控制6 检验结果解释与分析7 临床意义8 鉴定流程9 相关文件1 目的规范李斯特菌属检验操作规程，确保检验结果准确可靠。
李斯特菌属包括产单核细胞李斯特菌、伊氏李斯特菌、斯氏李斯特菌等菌种，其中只有产单核细胞李斯特菌对人和动物致病。
2 标本类型血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。
3 鉴定检验3.1 形态染色：革兰阳性小杆菌。
3.2 培养特征：在血琼脂平板上35℃培养18~24小时，形成较小、圆形、光滑而有狭窄β-溶血环的菌落。
3.3 生化反应：触酶试验阳性，分解葡萄糖，不分解蔗糖、木糖、甘露醇，甲基红、VP和CAMP试验阳性，吲哚、脲酶和硝酸盐还原试验阴性。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌属特征：革兰阳性短杆菌，菌落较小，有狭窄的β-溶血环，25℃时有动力，37℃时无动力，触酶、CAMP试验阳性，分解葡萄糖。
3.4.2 产单核细胞李斯特菌与粪肠球菌的鉴别：两者均具有耐盐、耐碱耐胆汁等特点，但可通过触酶试验加以鉴别。
3.4.3 产单核细胞李斯特菌与无乳链球菌的鉴别：两者CAMP试验均为阳性，但产单核细胞李斯特菌触酶试验阳性，无乳链球链触酶试验阴性。
3.5 操作步骤3.5.1 涂片染色：观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。
3.5.2 触酶试验：参见《触酶试验操作规程》。
3.5.3 鉴定：从血琼脂平板上挑取纯菌落，用细菌鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4 药敏试验参见《药敏试验标准操作规程》及CLSI M100-S19最新版本文件。
5 质量控制见《质量管理程序》。
6 检验结果解释与分析。
P2实验室操作规程
P2实验室操作规程1.目的加强P2实验室生物安全管理，规范实验人员仪器设备、实验操作行为，确保P2实验室工作安全运行。
2．适用范围适用于P2实验室的管理与操作。
3．职责3．1实验人员：严格执行P2实验室相关管理规定，规范操作行为。
3．2实验室负责人：监督执行P2实验室相关管理规定，及时纠正违规操作行为，发现不安全隐患及时上报。
3．3科室负责人：监督并定期抽查P2实验室管理规定执行情况，及时发现并解决P2实验室运行中出现的问题。
4．准入要求4．1只有经过授权的人员才允许进入P2实验室工作区。
4．2 16岁以下儿童禁止进入P2实验室工作区。
4．3 实验人员要接受相应预防性生物制品的免疫接种。
4．4禁止将无关动物带入实验区。
4．5外单位人员来访、参观、进修，必须经中心主管部门批准，未经批准不得进入P2实验室工作区。
4．6外来人员进入P2实验室，须由本室人员陪同，在严格遵守有关规定的条件下方可进入，同时填写《外来人员进出实验室特殊区域登记表》。
4．7限制免疫耐受者进入实验室。
4．8限制正在接受免疫抑制剂者进入实验室。
4．9严禁在实验室内吸烟、饮食、化妆等。
5．进入程序5．1进入P2实验室，伸手打开缓冲间内空调和生物安全柜按钮，使实验室和生物安全柜净化10分钟以上。
方可进入实验室进行实验。
5．2将实验所需材料和物品放入生物安全柜中。
5．3进入P2实验室缓冲区，关闭外门，在工作服外加穿P2实验室专用罩衣（紧口，后系带），戴一次性口罩、帽子和戴两层手套, 换穿P2实验室专用鞋。
需要时打开照明按钮。
5．4进入实验室工作区，首先打开照明按钮，打开前玻璃门，调节到要求的高度。
将实验所需物品一次性放入实验台内，摆放要有秩序且要相对区分清洁物与污染物，净化生物生物安全柜10分钟左右。
5．5观察实验区负压表指示数值是否在工作要求范围内，如不能满足要求则进行负压调节。
观察温湿度计，填写温湿度计使用记录。
5．6实验人员手臂放进生物安全柜内大约1分钟后，即可按无菌要求进行实验操作。
ELISA操作规程
ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫学实验技术，用于检测特定抗原或者抗体的存在和浓度。
本文将介绍ELISA的操作规程，包括试剂准备、样品处理、板上反应、洗涤、检测和数据分析等步骤。
二、试剂准备1. 缓冲液的配制：根据实验需求，选择适当的缓冲液配方。
常用的缓冲液有PBS、TBST等。
按照配方将所需试剂溶解于适当的体积的去离子水中，并进行调节和混合。
确保所有试剂的pH值和浓度符合实验要求。
2. 标准曲线的制备：准备一系列已知浓度的标准样品，按照实验设计的需求进行稀释。
标准样品的浓度应该覆盖实验样品的范围，并且至少包含一个空白对照。
3. 酶标板的涂覆：根据实验需要，选择合适的酶标板（如96孔板），将需要检测的抗原或者抗体溶解在适当的缓冲液中，按照要求的浓度将其加入到酶标板的孔中。
尽量避免气泡的产生，并确保涂覆均匀。
三、样品处理1. 样品采集：根据实验目的，选择合适的样品类型（如血清、尿液、细胞上清等），并进行采集。
确保样品的采集过程符合规范，避免污染和损坏。
2. 样品稀释：根据实验要求，将样品进行适当的稀释。
通常，样品的初始浓度较高，需要进行多次稀释以使其浓度在标准曲线范围内。
3. 预处理：根据实验需求，对样品进行预处理，如去除杂质、离心沉淀等。
确保样品的处理过程不会影响到所需的分析结果。
四、板上反应1. 标准样品的加入：将标准样品按照实验设计的要求加入到酶标板的孔中。
每一个标准样品应该有至少两个孔进行重复测量，以提高结果的可靠性。
2. 样品的加入：将稀释后的样品加入到酶标板的孔中。
同样，每一个样品应该有至少两个孔进行重复测量。
3. 阳性和阴性对照的加入：为验证实验的准确性，加入阳性和阴性对照。
阳性对照顾该包含所需的抗原或者抗体，而阴性对照则不含。
4. 孔板的封闭：将酶标板封闭，避免样品的蒸发和污染。
可以使用密封膜或者盖板进行封闭。
五、洗涤1. 洗涤缓冲液的配制：根据实验要求，配制适当的洗涤缓冲液。
酶类测定操作规程
酶类测定操作规程血清丙氨酸氨基移换酶（ALT）测定血清门冬氨酸氨基移换酶（AST）测定这两个酶的测定在方法上、操作程序上以及试剂等的要求上基本一致。
赖氏（Reitman）法（比色法）【试剂】市售现成试剂，每批试剂的空白管吸光度应≤0.015A，如超出此范围则应检查试剂及仪器等方面的问题。
【操作】按试剂盒的说明书手工操作，比色测定，波长505nm；并从预先绘制好的标准曲线中查得该酶的活性。
酶偶联速率法（连续监测法）【试剂】市售成套试剂，有“单试剂法”及“双试剂法”二种市售试剂盒均可使用，目前推荐双试剂法，它是ALT、AST测定的首选法，市售的ALT、AST底物溶液其起始吸光度必须大於1.2A，空白测定值必须小於5u/L，否则提示此试剂已不合格，不能使用。
【操作】按试剂及仪器使用说明书设定程序，输入参数，用自动生化分析仪测定，波长340nm。
【标本】血清，忌溶血，血清应即时分离，室温可保存二天，4℃可保存一周，-25℃可保存一月，但不推荐冰冻保存，更不宜反复冻溶，遇有严重脂血或黄疸的血清样品，测定时应作血清标本对照管（赖氏法）。
血清碱性磷酸酶（ALP）测定连续监测法【试剂】市售现成试剂，其中的磷酸对硝基苯酚底物液要求：1．酶水解转换率（4-NPP → 4NP）必须大於98%。
2．4-NPP的摩尔吸光度：波长311nm介质10mmo1/L NaOH，温度25℃ε=9867±76 L.mol–1·cm–1。
3．游离4-NP＜0.3mmo1/ mo1 4-NPP；4．无机磷酸＜10mmo1/ mo1 4-NPP。
试剂应贮于棕色瓶中4~8℃保存。
【操作】按试剂盒及仪器说明书要求，设定程序，输入参数用自动或半自动生化分析仪测定，波长450nm。
比色法【试剂】市售或按正式出版的书刊文献自配。
【操作】按试剂盒或相应文献规程比色测定，波长510nm；标准曲线绘制，样品测定，查标准曲线求得ALP活力单位。
ELISA操作规程
ELISA操作规程一、引言ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析抗原或抗体的存在和浓度。
本操作规程旨在提供一套标准化的ELISA实验操作步骤，确保实验结果的准确性和可重复性。
二、实验材料1. 微孔板：96孔或其他规格，耐酸碱性能好。
2. 酶标板洗涤缓冲液：含有洗涤液的缓冲液。
3. 标准品：已知浓度的抗原或抗体。
4. 待测样品：需要检测的抗原或抗体样品。
5. 酶标记的二抗：与待测样品中的抗体相应的二抗。
6. 酶标记底物：用于检测酶活性的底物。
7. 停止液：用于停止酶反应的液体。
三、实验步骤1. 准备工作a. 将微孔板标记编号，确保正确记录每个孔的样品信息。
b. 准备所需的试剂和材料，确保其完整性和质量。
c. 预热酶标仪至适当的温度。
2. 涂覆抗原或抗体a. 向微孔板的每个孔中加入适量的抗原或抗体溶液。
b. 将微孔板置于4℃的冰箱中，孵育一夜或适当时间。
3. 洗涤步骤a. 倒掉微孔板中的液体，用酶标板洗涤缓冲液洗涤孔板。
b. 重复上述步骤3次，确保洗涤干净。
4. 加入待测样品和标准品a. 向微孔板中的相应孔中加入待测样品和标准品，每个孔的体积相同。
b. 将微孔板覆盖，并在适当温度下孵育一段时间。
5. 洗涤步骤a. 倒掉微孔板中的液体，用酶标板洗涤缓冲液洗涤孔板。
b. 重复上述步骤3次，确保洗涤干净。
6. 加入酶标记的二抗a. 向微孔板中的每个孔中加入适量的酶标记的二抗溶液。
b. 将微孔板覆盖，并在适当温度下孵育一段时间。
7. 洗涤步骤a. 倒掉微孔板中的液体，用酶标板洗涤缓冲液洗涤孔板。
b. 重复上述步骤3次，确保洗涤干净。
8. 加入酶标记底物a. 向微孔板中的每个孔中加入适量的酶标记底物。
b. 将微孔板覆盖，并在适当温度下孵育一段时间。
9. 反应停止a. 向每个孔中加入适量的停止液，停止酶反应。
b. 使用酶标仪读取吸光度值。
四、数据分析1. 绘制标准曲线：根据已知浓度的标准品的吸光度值，绘制标准曲线。
ELISA操作规程
ELISA操作规程一、实验目的本实验旨在通过酶联免疫吸附试验（ELISA）的操作，检测目标物质的存在与浓度，以实现对生物样本中特定抗原或抗体的定量分析。
二、实验材料1. 96孔ELISA板2. 目标抗原或抗体样本3. 特异性一抗和二抗4. 辅助试剂：洗涤缓冲液、稀释缓冲液、底物和停止液5. 高精度微量移液器和相应的移液器头6. 高精度电子天平7. 显微镜和酶标仪三、实验步骤1. 预处理：将96孔ELISA板放置在实验台上，加入稀释缓冲液，轻轻震荡混合，然后倒掉液体。
重复此步骤3次。
2. 样本添加：将待测样本加入96孔ELISA板中，每孔加入相同体积的样本。
3. 孵育：将ELISA板盖上密封膜，置于恒温箱中孵育一定时间，使样本中的抗原或抗体与固相特异性一抗结合。
4. 洗涤：将洗涤缓冲液加入96孔ELISA板中，轻轻震荡混合，然后倒掉液体。
重复此步骤3次，以洗去未结合的物质。
5. 二抗结合：将特异性二抗加入96孔ELISA板中，轻轻震荡混合，然后盖上密封膜，继续孵育一定时间，使二抗与固相特异性一抗结合。
6. 洗涤：重复步骤4。
7. 底物添加：将底物加入96孔ELISA板中，轻轻震荡混合，然后暗处孵育一定时间，使底物与二抗结合的酶发生反应。
8. 反应停止：加入停止液，终止底物与酶的反应。
9. 测量：将96孔ELISA板放入酶标仪中，根据实验要求选择相应波长进行测量。
记录各孔的吸光度值。
10. 数据分析：根据实验目的，利用标准曲线或其他方法，计算出目标物质的浓度。
四、实验注意事项1. 实验前需准备好所有试剂和材料，确保实验环境清洁和无尘。
2. 操作过程中需佩戴手套，避免污染样本和试剂。
3. 洗涤步骤中，确保洗涤缓冲液充分覆盖每个孔，且每次洗涤液倒掉后，孔内无残留液体。
4. 孵育和暗处孵育步骤中，需控制好时间和温度，以确保反应的充分进行。
5. 底物和停止液需按照说明书的要求配制和使用，避免使用过期或变质的试剂。