AB-PAS染色试剂盒操作步骤及注意事项
糖原(PAS)染色
糖原(PAS)染色[原理]过碘酸能使细胞内乙二醇基氧化成二醛，醛基与雪夫氏溶液起反应，使无色品红结合成红色反应，沉着含糖原的细胞结构上，标本上所能显红色的糖类主要为多糖包括糖原、糖蛋白、粘多糖和糖脂等。
[试剂](1)由上海虹桥乐翔医用试剂技术有限公司提供。
(2)试剂组成:固定液4.5ml；过碘酸溶液20ml；雪夫氏溶液20mg。
(3)苏木素。
[操作](1)新鲜或陈旧血片、骨髓片于固定液内3-5分钟，水洗、晾干。
(2)滴加过碘酸于涂片上氧化10分钟，水洗、晾干。
(3)放入雪夫氏溶液中，置37度水浴箱5-10分钟。
(4)取出后流水冲洗10-20分钟，晾干、镜检。
(5)苏木素复染。
[结果观察]糖原在细胞浆内可染成红色，其判断标准随细胞不同而异。
有核红细胞判断：(-)：无红色阳性颗粒和浅红色物质。
(+)：胞浆中有少数分散红色阳性颗粒，或呈浅红色反应，比正常红细胞色深。
(++)：胞浆中有1或2个浓的红色颗粒环，或胞浆中有1一10个中等大的颗粒，或弥漫的红色物。
(+++)：胞浆中有11—20个红色中粗颗粒或染深红色。
(++++)：胞浆中红色颗粒明显增多且较粗，致密或呈紫红色物质。
淋巴细胞的判断:(-)：胞浆内无粉红色颗粒。
(+)：胞浆内有1一10个红色小颗粒或弥漫的浅红色物质。
(++)：10个以上红色颗粒。
编写：胡芙蓉制定日期：2009.01.01(+++)：胞浆中含有较多红色颗粒及小块紫红色物质。
(++++)：胞浆中含许多红色颗粒及小块紫红色物质。
[临床意义](1)用于营养性巨幼细胞贫血与红(白)血病的鉴别，前者的正常红细胞及有核红细胞常为阴性，而后者可呈强阳性反应。
(2)用于鉴别急性淋巴细胞性白血病与急性非淋巴细胞性白血病，前者的原淋巴细胞和幼稚淋巴细胞可见大块红色物质。
后者的原始阶段细胞常为阴性。
(3)高雪氏细胞呈强阳性，而尼曼匹克氏细胞呈微弱阳性。
[附注](1)雪夫氏液变红即不能再用，以免细胞出现假阳性。
血细胞PAS染色测定
血细胞PAS染色测定
一、原理：
血细胞内含有乙二醇的糖类物质（PAS）能被过碘酸氧化，形成双醛基类物质。
后者与无色品红结合，形成紫红色沉淀物，沉淀物的显色深浅与乙二醇的含量成正比。
二、试剂组成：
1、PSA固定液：1瓶×5
2、PASⅠ液：1瓶×5
3、PASⅡ液：1瓶×5
4、苏木素复染液：1瓶×5
三、操作步骤：
1、涂片滴加固定液5-8液，盖满血膜即可，5分钟，水洗待干。
2、滴加Ⅰ液10分钟，水洗待干。
3、置入Ⅱ液内室温（20-25℃左右为宜）暗处放置30分钟，然后流水冲洗数分
钟。
4、苏木素复染1-2分钟，水洗待干，镜检。
5、结果显示
阳性结果：细胞内出现红色沉淀物，定位于细胞质
阴性结果：细胞内无红色沉淀物。
四、注意事项
1、滴加Ⅰ液后水洗应充分，然后待涂片完全干燥后才能置于Ⅱ液内。
2、PASⅡ液保存不当或时间过久将会变红，并使阳性强度降低，且不能反复使
用。
3、PASⅡ液可同时放置5-8张涂片（即5-8份标本）。
五、临床意义
1、粒细胞系统自早幼粒阶段以下均可呈阳性，且随细胞分化而加强。
2、单核细胞系统可呈弥散状弱阳性伴细颗粒状。
3、淋巴细胞系统可呈块状或粗颗粒状阳性。
4、巨核细胞系统（血小板）可呈粗块状或团块状阳性。
5、红细胞系统正常情况下呈阴性，当某些疾病时可呈阳性，如：MDS、AML-Mb
时。
PAS染色法
PAS（PeriodicAcidSchiff）染色方法PAS染色步骤结果：糖原，粘液和基底膜-红色/粉红色.,背景-蓝色。
未经淀粉酶消化的切片，糖原被PAS染成洋红色，经淀粉酶消化的切片消失。
试剂配制1.0.5%过碘酸水溶液过碘酸 2.5g蒸馏水500ml2.Schiff试剂Schiff试剂碱性复红（CI42500）6g蒸馏水1200ml1N盐酸60ml偏重亚硫酸氢钠12g用600ml蒸馏水溶解6g碱性复红，煮沸几分钟，冷却到50℃加入1N盐酸60ml，冷却到25℃加入12g偏重亚硫酸氢钠（高纯度化学试剂）。
液体放于暗处24小时。
加5～6g活性炭，摇动大约1分钟。
通过粗过滤纸过滤，液体应该清亮，如果液体有颜色重复加入活性炭。
蒸馏水加到液体到总量600ml，放入棕色瓶中冰箱内保存。
3.Mayer改良苏木精夜苏木精2g硫酸铝钾100g蒸馏水600ml碘酸钠0.4g冰醋酸20ml硫酸铝钾加入蒸馏水中稍加热，同时将苏木精溶于无水乙醇中，再将两种液混合，加入碘酸钠，充分溶解。
此液是一种进行性苏木精液，染色时一般不需要分化，但染色过深可以进行适当分化。
注意事项：关键是碘酸钠的使用量1)根据气候季节温度的改变，适当调整碘酸钠的使用量，配方中给出的量适合夏季（温度大约25℃）随着温度下降每降1℃碘酸钠的使用量增加0.01g，最多不能超过配方使用量的50%，过量的碘酸钠可是苏木精氧化，不仅有效时间短，还会出现核浆共染。
2)称量一定要准确，碘酸钠尽量使用精确度高的天平称量。
3)碘酸钠有有限期，除了注意有效期，还应注意有无潮解，质量不保险的碘酸钠最好不用，为了保险使用有效的碘酸钠。
AB-PAS染色
AB-PAS染色某些细胞如胃肠的杯状细胞能分泌粘稠的分泌物，含有大量的糖称粘多糖。
中性粘液物质含有氨基己糖和游离的己糖基，酸性粘液物质也含有氨基己糖并含有各种酸根。
此方法先染阿利新蓝染酸性粘液物质为蓝色，并阻断酸性粘液物质的羧酸分子中的乙二醇被高碘酸氧化生产二醛而着红色。
只有中性粘液物质的乙二醇基被高碘酸生成二醛后与雪夫试剂中的无色品红作用生成红紫色复合物。
染色实验步骤：1、切片脱蜡至水。
2、阿利新蓝染液浸染或滴染5-10min。
稍水洗。
3、0.5%高碘酸水溶液氧化5-10min。
4、流水冲洗数分钟蒸馏水换洗两次。
5、雪夫试剂暗处浸染或滴染15~30min。
6、流水冲洗5-10min。
7、苏木素复染核1min左右，盐酸酒精分化，氨水返蓝。
8、95%酒精I 5min-95%酒精II 5min-无水乙醇I 5min-无水乙醇II 5min脱水，二甲苯透明中性树胶封固。
（一定要湿封，在组织上的二甲苯未挥发完组织变干之前封片，否则易出现黑色的结晶状物即空气结晶）。
染色结果：糖原、中性粘液物质呈红色，酸性粘液物质呈蓝色，混合性粘液物质呈蓝紫色或紫蓝色，胞核呈蓝色。
1、高碘酸溶液为透明溶液，长时间染色如果没有带入杂质的话此溶液一直是透明的，所以无法从常规的颜色辨别高碘酸的好坏，只有定期更换，根据标本的多少1~2月更换一次。
2、雪夫试剂要放入冰箱保存，临用前半小时取出恢复至室温，用后又倒回原瓶内放冰箱保存；雪夫试剂出现淡红色就不能继续使用了。
3、如果没有要求，可以不染核，要染核的话染色一定要浅。
因为酸性粘液物质着蓝色，如果核蓝色太深对比不明显。
4、一定要先染阿利新蓝后染PAS，否则蓝色着染少而浅结果不准确，原因是酸性粘液物质的羧酸分子中的乙二醇被高碘酸氧化生产二醛与雪夫试剂中的无色品红作用生成红紫色复合物后再难跟阿利新蓝结合。
糖原PAS染色试剂盒使用方法及注意事项
自备材料：
1、 10%福尔马林固定液
2、蒸馏水
3、乙醇
操作步骤（仅供参考）：
1、 常规固定，常采用 10%的福尔马林，常规脱水包埋。
7、 自来水冲洗 10min。
8、 样本置于苏木素染色液中，染细胞核 1～2min。
9、 酸性乙醇分化液分化 2～5s。
10、 自来水冲洗 10～15min 后，更换双蒸水清洗，使其返蓝。
11、 逐级常规乙醇脱水。 二甲苯透明，中性树胶封固。
染色结果： PAS 反应阳性物质 细胞核 细胞质
红色或紫红色 蓝色 深浅不一的红色
4×100ml 100ml 100ml 100ml 100ml
Storage 4℃ 避光 4℃ 避光 RT 避光
RT
产品说明：
糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus 在 1946 年最先使用高碘酸-雪夫技术显 示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该染色液不仅能够显示糖原，还能显示中性黏 液性物质和某些酸性物质，以及软骨、垂体、霉菌、真菌、色素、淀粉样物质、基底膜等。
5、 在过碘酸溶液和 Schiff Reagent 中作用时间非常重要，该依据切片厚薄、组织的 类别等决定。
6、 本染色液常用于常规组织切片染色，对于真菌、细胞、极其薄的切片，建议采购糖 原 PAS 染色试剂盒（细胞真菌专用）， 因为其过碘酸溶液和苏木素溶液浓度更低，不 宜过染。
7、 冷冻切片染色时间尽量要短。
备注：颜色深浅很大程度上取决于样品在过碘酸溶液和 Schiff Reagent 中作用时间的长 短。 阴性对照(可选)：
AB-PAS染色试剂盒操作步骤及注意事项
AB-PAS 染色试剂盒操作步骤及注意事项AB-PAS 染色试剂盒货号:G1285有效期：6个月有效。
产品简介:糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus 在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该染色液不仅能够显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质。
阿利新蓝和PAS 技术联合使用可鉴别同一组织切片中的中性黏蛋白和酸性黏蛋白。
这种技术也常用作广泛检测黏蛋白的手段。
该技术染色阴性，可明确断定该物质不是黏蛋白。
在大多数方法中，切片先经标准的阿利新蓝（pH 值为2.5）染色，在使用PAS 技术。
阿利新蓝可将唾液黏蛋白、硫黏蛋白和蛋白多糖染成蓝色。
PAS 技术可将中性黏蛋白染成深红/红紫色，同时将既含中性黏蛋白有含酸性黏蛋白的组织和细胞染成深浅不同的紫色，这是有于阿利新蓝与Schiff 试剂结合并反应。
上述染色常可出现在含有中性黏蛋白和唾液黏蛋白的小肠杯状细胞中。
阿利新蓝是类铜钛花青染料，这种阳离子染料与酸性基团结合，也即阿利新蓝与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物。
分子中带正电荷的盐键与酸性黏蛋白多糖物质中带负电荷的酸性基团结合形成不溶性的复合物而呈蓝色，再于PAS 进行复合染色，就编号名称6×50ml 6×100ml Storage 试剂（A ）阿利新蓝染色液50ml 100ml 4℃避光试剂（B ）过碘酸溶液50ml 100ml 4℃避光试剂（C ）Schiff Reagent 50ml 100ml 4℃避光试剂（D ）苏木素染色液50ml 100ml 4℃避光试剂（E ）酸性分化液50ml 100ml RT 试剂（F ）Scott 蓝化液50ml100mlRT能显示三种不同黏液物质成分。
自备材料：1、蒸馏水2、系列乙醇操作步骤（仅供参考）1、脱蜡至水，蒸馏水水洗2min。
2、阿利新蓝染色液染色10-20min。
糖原PAS染色液使用说明
糖原PAS染色液使用说明1.储存条件：-保持在室温下阴凉、干燥的地方；-避免阳光直射。
2.试剂配制：-糖原PAS染色液由两部分组成：糖原PAS染色液A和糖原PAS染色液B。
两者混合后即可使用。
-将糖原PAS染色液A和糖原PAS染色液B以1:1的比例混合。
3.样本制备：-取细胞样本，例如组织切片或细胞悬液；-依据实验需求，将样本制备成厚度为3-5μm的组织切片；-如果使用细胞悬液，则需要将细胞悬液离心，将沉淀后的细胞制备成细胞块。
4.染色步骤：-取一个玻片，将制备好的组织切片或细胞块平铺在玻片上；-用去离子水或磷酸缓冲液轻轻洗涤玻片上的样本，去除杂质；-用组织纸轻轻吸去多余的水分；-用移液管将糖原PAS染色液滴在样本上，确保样本完全覆盖；-在室温下将标本浸泡于糖原PAS染色液中15-30分钟。
时间过长可能导致染色过度；-将玻片用去离子水轻轻冲洗几次，以去除未结合的染色剂；-用组织纸轻轻吸去多余的水分。
5.染色结果观察：-将制备好的玻片在显微镜下观察；-糖原呈现红色至紫色的细小颗粒，分布在细胞质中；-根据颗粒的密度和分布情况，可以初步评估细胞内糖原的积累程度。
6.染色控制：-在染色过程中，正常细胞应该在细胞质中有较少的糖原颗粒；-通过对正常对照样本进行染色，可以确定阴性对照的糖原表达水平；-阴性对照样本应不显示糖原颗粒或仅有极少量的糖原颗粒。
7.离子蓝后染色：-如果需要对细胞核进行染色，可以在糖原染色后使用离子蓝（如伊红或核快蓝）进行核染色；-样本浸泡在离子蓝染色液中5-10分钟；-将玻片用去离子水轻轻冲洗几次，然后用组织纸吸去多余的水分；-在显微镜下观察并拍摄所需的染色结果。
PAS染色试剂盒操作步骤及注意事项
PAS染色试剂盒操作步骤及注意事项
货号：G1280
规格：2×50ml/2×100ml
保存：2-8℃保存，避免光照，复检期为6个月。
试剂盒组成：
高碘酸液50ml/100ml
Schiff染液50ml/100ml
产品说明：
PAS染液（Periodic Acid-Schiff stain）在组织学上，主要用来检测组织中的糖原或其他多糖物质。
高碘酸是一种氧化剂，能将多糖分子中相邻的二醇基氧化成二醛基，醛基能与希夫试剂（Schiff reagent）反应生成红色不溶性复合物。
操作说明：（仅供参考）
1、染色步骤
1)切片脱蜡至水；
2)高碘酸液处理5-10分钟；
3)流水冲洗5分钟，擦干切片上多余水分；
4)滴加Schiff染液，染色10-15分钟；
5)流水清洗5-10分钟；
6)Mayer苏木素复染；
7)分化、水洗；返蓝、水洗；
8)常规脱水，二甲苯透明；
9)中性树胶封片。
2、显微镜观察结果：糖原、中性粘液物质呈红色，细胞核呈蓝色。
注意事项：
1．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2．试剂均应低温保存，临用前半小时取出恢复室温。
3．高碘酸处理温度以不高于20℃为宜，室温高时，处理时间可适当缩短。
Schiff染液染色时间可随温度调整，室温高可减少染色时间，冬季室温低，可延长至20分钟左右。
4．第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。
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AB-PAS 染色试剂盒操作步骤及注意事项
AB-PAS 染色试剂盒货号:G1285
有效期：6个月有效。
产品简介:
糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，McManus 在1946年最先使用高碘酸-雪夫技术显示黏蛋白，该法常用来显示糖原和其他多糖，该染色液不仅能够显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质。
阿利新蓝和PAS 技术联合使用可鉴别同一组织切片中的中性黏蛋白和酸性黏蛋白。
这种技术也常用作广泛检测黏蛋白的手段。
该技术染色阴性，可明确断定该物质不是黏蛋白。
在大多数方法中，切片先经标准的阿利新蓝（pH 值为2.5）染色，在使用PAS 技术。
阿利新蓝可将唾液黏蛋白、硫黏蛋白和蛋白多糖染成蓝色。
PAS 技术可将中性黏蛋白染成深红/红紫色，同时将既含中性黏蛋白有含酸性黏蛋白的组织和细胞染成深浅不同的紫色，这是有于阿利新蓝与Schiff 试剂结合并反应。
上述染色常可出现在含有中性黏蛋白和唾液黏蛋白的小肠杯状细胞中。
阿利新蓝是类铜钛花青染料，这种阳离子染料与酸性基团结合，也即阿利新蓝与组织内含有的阴离子基团如羧基和硫酸根形成不溶性复合物。
分子中带正电荷的盐键与酸性黏蛋白多糖物质中带负电荷的酸性基团结合形成不溶性的复合物而呈蓝色，再于PAS 进行复合染色，就
编号
名称
6×50ml 6×100ml Storage 试剂（A ）阿利新蓝染色液50ml 100ml 4℃避光试剂（B ）过碘酸溶液50ml 100ml 4℃避光试剂（C ）Schiff Reagent 50ml 100ml 4℃避光试剂（D ）苏木素染色液50ml 100ml 4℃避光试剂（E ）酸性分化液50ml 100ml RT 试剂（F ）Scott 蓝化液50ml
100ml
RT
能显示三种不同黏液物质成分。
自备材料：
1、蒸馏水
2、系列乙醇
操作步骤（仅供参考）
1、脱蜡至水，蒸馏水水洗2min。
2、阿利新蓝染色液染色10-20min。
3、蒸馏水洗3次，每次1-2min。
4、放入过碘酸溶液中进行氧化5min。
5、Schiff Reagent浸染10-20min。
6、倾去Schiff Reagent，流水冲洗10min。
7、（可选）苏木素染色液染核1-2min。
8、用酸性分化液分化2-5s，水洗。
9、用Scott蓝化液返蓝，水洗3min。
10、逐级常规乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
染色结果：
糖原、中性黏蛋白、各种糖蛋白——紫红色
酸性黏蛋白（硫黏蛋白和唾液黏蛋白）——蓝色
蛋白多糖和透明质酸——蓝色
备注：含有中性黏蛋白和酸性黏蛋白的细胞或组织可染成不同程度的蓝紫色至紫色。
注意事项：
1、切片脱蜡应尽量干净，否则影响染色效果。
2、过碘酸氧化时间不宜过久，氧化时的温度以18-22℃最佳。
3、试剂（A）、试剂（B）、试剂（C）应置于4℃密闭保存，使用时避免接触过多的阳光和空气。
使用前，最好提前30min取出恢复到室温后，避光暗处使用。
4、酸性分化液应经常更换新液，其分化时间应该依据切片厚薄、组织的类别和酸性分化液的新旧而定，另外分化后自来水冲洗时间应该足够。
5、切片在过碘酸和Schiff Reagent中作用时间非常重要，该依据切片厚薄、组织的类别等决定。
6、如用苏木素染色液复染细胞核时一定要淡染，以免影响阳性物质观察，目的是防止胞浆或黏蛋白着色而掩盖阿利新蓝的颜色。
7、研究表明，阿利新蓝-PAS联合技术的染色顺序可影响最终结果。
PAS技术在阿利新蓝染色之前时，中性黏蛋白和糖原可染成紫色。
与此相反，阿尔辛蓝染色在PAS技术之前时，则可将这些物质染成预期的紫红色。
8、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。