热原检查法标准操作规程0
热原检查法
热原检查法第一篇：热原检查法【关键词】热原检查法细菌内毒素检查法热原热原是微生物的代谢产物，系能引起恒温动物和人体体温异常升高的至热性物质。
当注入人体含有热原的量达0.01微克/千克以上的输液时，即可产生热原反应。
《中华人民共和国药典》同时收载了热原检查法（家兔法）和细菌内毒素检查法(鲎试剂法）对输液进行热原检查。
我们对我院临床使用的哈尔滨三精艾富西药业有限公司生产的10个批次0.9%氯化钠注射液液，进行了两种方法联合应用的尝试，收到了良好效果。
1资料与方法1.1研究对象哈尔滨三精艾富西药业有限公司生产的规格为500 ml0.9%氯化钠注射液，批号为:50307A、50411C、50513A、50716A、50910A、50910C、51008A、51116A、51128C、51215C。
1.2试验材料细菌内毒素国家标准品：批号为20056（100EU/支）,厂家为中国药品生物制品鉴定所。
鲎试剂：批号为0507250（0.25EU/ml），厂家为湛江安度斯生物公司。
健康合格家兔（雌兔无孕），1 ml刻度吸管，5 ml试管，20 ml玻璃注射器，肛温计，250 ℃电热恒温烤箱，漩涡混合器、电热恒温水浴箱。
(见表1) 表10.9%氯化钠注射液检查结果（略）1.3方法与结果将上述10批次哈尔滨三精艾富西药业有限公司的0.9%氯化钠注射液，分别按照《中华人民共和国药典》（2000版）附录规定的热原检查法（家兔法）和细菌内毒素检查法（鲎试剂法）的标准进行检查，结果见表1。
2讨论从以上检查结果不难看出，两种方法对同批次的产品进行检查，结果出现了偏差，通过临床跟踪调查，上述批次产品用于临床均未发生热原反应。
内毒素检查法（鲎试剂法）检查热原可靠性强，且操作简便，成本低，省时，省力，是热原检查的发展方向。
相比之下相对古老的热原检查法（家兔法）就显得操作繁琐，成本高，即费时又费力，家兔容易受周围环境、温度、噪声等干扰而影响检查结果。
热原检查标准操作规程
XXXX药业有限公司标准操作规程(S O P)1.目的规范热原检查操作，保证热原检查结果的准确可靠。
2.范围热原检查3.责任质量保证科、化验室、实验动物室负责人及相关人员4. 制定依据：《中国药典》2010年版三部5.规程5.1 实验材料及用具5.1.1 天平精度 10g 家兔称量用5.1.2 电热干燥箱5.1.3 ZRY-2D型热原仪5.1.4 家兔固定盒5.1.5 实验用具注射器、广口试剂瓶（均需去热原）、直镊、时钟、脱脂棉5.1.6 试剂75%乙醇5.2.实验动物5.2.1 健康无伤、体重1.7kg以上、同一来源、同一品系家兔，雌兔应无孕，一兔一笼，标兔号。
5.2.2 新兔预选5.2.2.1 新兔经饲养7日后,进行预测体温,测温的条件与热原检查要求相同。
5.2.2.2 测量体温时,肛门体温计插入肛门的深度各兔应相同,约为6cm,测温时间不得少于1.5分钟。
5.2.2.3 每隔30分钟测温1次，共8次。
5.2.2.4 8次体温均在38.0-39.6℃（一般多选用38.4-39.4℃）的范围内，且最高最底体温数不超过0.4℃（以不超过0.35℃为佳）的家兔，可供3周内实验用。
5.2.2.5 录用新兔编号，登记入兔史记录卡，未被录选家兔，可饲养7日按2.2.1至2.2.3程序再预测体温一次，如仍不符合要求则淘汰。
5.2.3 家兔的重复使用5.2.3.1 供试品判定为符合规定的家兔；升温达0.6℃的家兔应休息2周以上，方可供下次试验用。
5.2.3.2 供试品判定为需重复实验的家兔，应暂作休息处理，如重复合格，升温≥0.6℃的家兔，应重新测温挑选。
5.2.3.3 供试品判定为不符合规定的家兔，不再使用。
5.2.3.4 复试用家兔挑选体重在2.0-2.4kg、正常体温在38.8-39.2℃、使用过2～3次的家兔进行实验。
5.3 实验前的准备5.3.1 温度探头每6个月校验一次，不符合要求者不能使用。
5.3.2 用具除热原清洗干净的玻璃器皿、注射器、针头、直镊等放入金属制容器内，密闭，置电热干燥箱中经250℃30分钟或180℃2小时加热除热原。
热原检查法
热原检查法中国鲎成为了国家二级保护动物, 鲎试剂成为了紧俏资源。
作为一个注射剂制药企业的QC, 不得不考虑以后怎么来应对, 除了采用减少鲎试剂的用量外, 可选择重组鲎试剂或采用重组C因子法, 但结果的等效性研究这个拦路虎很难打到。
百无聊赖就翻开了《中国药典检测分析指南》2017年版的热原检查法, 开卷有益, 该版指南对人员检查的基本原理等进行了全面的阐述, 现将学习内容进行总结。
1.热原相关的定义及来源1.1 相关定义热原是注射进入人体或动物体内后, 能导致其体温升高的一类物质的总称。
可以直接导致体温升高的物质称为外源性热原, 由外源性热原引起体内产生的致热物质称为内源性热原。
细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖（LPS）。
当细菌死亡或自溶后便会释放内毒素。
LPS是高分子量的脂多糖。
思考: 以上定义解释了注射剂为什么要进行热原检查或细菌内毒素检查。
1.2 热原的致热原理外源性物质进入人体, 作用到单核细胞系统, 刺激其分泌内源性致热原[主要有白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1（IL-1）干扰素（INF）及肿瘤坏死因子（TNF）等]；内源性致热原作用于下丘脑提问调节中枢, 使体温调定点上调, 造成产热增加、散热减少, 导致人体发热。
思考: 干扰素、抗肿瘤药物等是否会影响热原的检查？1.3 外源性热原的来源1.3.1 外源性热原中微生物来源的包括:a) 革兰氏阳性菌细菌成分（脂阿拉伯甘露聚糖、蛋白、热休克蛋白A.脂磷壁酸等）；b) 革兰氏阴性菌细菌成分（脂质A.外膜蛋白、膜孔蛋白、陪伴蛋白等）；c) 革兰氏阴性菌/革兰氏阳性菌细胞壁成分（细胞表面蛋白、菌毛、脂肽、脂蛋白、肽聚糖、胞壁酰二肽等）；d) 革兰氏阴性菌/革兰氏阳性菌细胞外成分（毒素、超抗原等）；e) 非细胞性微生物（活病毒、真菌、酵母、疟原虫等）。
微生物产生的致热物质中, 革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素致热性最强, 其次是革兰氏阳性杆菌, 革兰氏阳性球菌致热作用较弱, 真菌、病毒致热作用更弱, 因此, 细菌内毒素被认为是自然界最强致热原。
热原检查标准操作规程(2015版药典)
热原检查标准操作规程（2015版药典）1．目的：通过本规程的制定，使该检查操作进一步规范化，标准化，以减少误差的发生。
2．依据：《中国药典》2015年版四部通则1142 P153。
3．适用范围：本标准适用于本公司有热原检查的操作。
4．责任：热原QC检验人员对本规程的实施负责。
5．程序：5．1．概述本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。
5．2．实验材料及用具5．2．1．天平（精度50g，家兔称重用）。
5．2．2．电热干燥箱（0~300±）℃5．2．3．恒温水浴箱（37~100）℃5．2．4．家兔固定盒5．2．5．实验用具：注射器、针头、金属直镊、注射器盒、时钟、75％酒精棉球、手术镊。
5．3．将供试品放入恒温水浴箱中，温热至约38℃。
5．4．供试用家兔供试用的家兔应健康合格，体重1.7kg以上，雌兔应无孕。
预测体温前7日即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。
未曾使用于热原检查的家兔；或供试品判定为符合规定，但组内升温达0.6℃的家兔；或3周内未曾使用的家兔，均应在检查供试品前7日内预测体温，进行挑选。
挑选试验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30分钟测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.0~39.6℃的范围内，且最高与最低体温相差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。
用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可再供热原检查用，其中升温达0.6℃的家兔应休息2周以上。
对用于血液制品、抗毒素和其他同一抗原性供试品检测的家兔可在5天内重复使用1次。
如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用。
5．5．试验前的准备5．5．1．用具的除热原：所有与药液接触的器具，都必须清洗干净后，置电热干燥箱中经250℃、50分钟加热除热原。
注射器、针头、手术镊清洗干净后，放入注射器盒内，密闭，放入电热干燥箱中经250℃，50分钟加热除热原。
热原检查法
热原检查法热原检查法是一种用于检测微生物的方法，它基于微生物在特定温度下产生的热量来进行检测。
该方法被广泛应用于食品、水质、医药等领域，具有灵敏度高、快速、可靠等优点。
下面将从原理、操作步骤、优缺点和应用等方面进行详细介绍。
一、原理热原检查法是通过测量微生物在特定温度下产生的热量来进行检测的。
该方法主要基于微生物代谢活动所产生的热量，利用热电偶或红外线传感器对微生物所产生的热量进行实时监测。
当微生物数量较多时，其代谢活动所产生的热量也会相应增加，从而能够通过仪器显示出来。
二、操作步骤1. 样品制备：将待测样品按规定方法处理后，制备成适宜的试样。
2. 检测设备准备：根据使用说明书正确安装设备，并连接好电源和计算机。
3. 仪器调试：按说明书要求对仪器进行调试，并进行空白测试和标准曲线建立。
4. 样品检测：将制备好的样品加入检测仪器中，按要求设定温度和时间，进行检测。
5. 结果分析：根据仪器显示结果进行分析判断，确定样品中微生物的种类和数量。
三、优缺点优点：1. 灵敏度高：热原检查法对微生物的检测灵敏度高，可以检测到微生物数量较少的样品。
2. 快速：该方法操作简便，可以在短时间内获得检测结果，适用于快速筛查大批量样品。
3. 可靠性强：该方法结果准确可靠，并且不受环境影响。
4. 适用范围广：热原检查法适用于多种类型的样品，包括食品、水质、医药等领域。
缺点：1. 无法区分微生物种类：热原检查法只能确定样品中是否存在微生物以及其数量，并不能区分不同种类的微生物。
2. 对温度要求高：该方法对温度要求较高，在操作过程中需要掌握好温度控制以及时间控制等参数。
3. 不适用于活菌数的计数：由于热原检查法只能检测到微生物代谢产生的热量，因此不适用于活菌数的计数。
四、应用热原检查法广泛应用于食品、水质、医药等领域。
在食品领域中，该方法可以用于检测肉制品、水产品、奶制品等样品中的微生物。
在水质领域中，该方法可以用于检测自来水、污水等样品中的微生物。
执业药师考试药剂学辅导：热原检查法
执业药师考试药剂学辅导:热原检查法 (⼀)家兔发热试验法 热原检查⽬前各国药典法定的⽅法仍为家兔发热试验法，属限度试验。
它是将⼀定量的供试品，由静脉注⼊家兔体内，在规定时间内观察体温的变化情况，如家兔体温升⾼的度数超过规定限度即认为有热原反应。
具体试验⽅法和结果判断标准见《中国药典》(2000年版)⼆部附录。
本法结果准确，但费时较长、操作繁琐，不利于连续⽣产。
(⼆)鲎试验法 本法操作简单、结果迅速可得、灵敏度⾼。
但本法对⾰兰⽒阴性以外的内毒素不敏感，故还不能完全代替家兔发热试验法。
常⽤于某些不能⽤家兔进⾏热原检测的品种，如放射性药剂等;也适⽤于⽣产注射药品时，检测中间产品是否污染热原。
原理是利⽤动物鲎的变形细胞溶解物与引起热原反应的细菌内毒素之间可产⽣的凝胶反应，从⽽定性或定量地测定此内毒素。
测定⽅法：取4⽀⽆菌、⽆热原带塞玻璃试管放于37℃⽔浴中，向每⽀试管中加⼊0.2ml鲎试剂。
向第1⽀试管内加⼊0.9%nacl液0.2ml，作阴性对照管，此管应⽆凝胶⽣成(因⽆热原不应有凝胶⽣成);向第2⽀试管内加⼊0.9%nacl与0.05µg/ml标准内毒素混合液0.2ml，作阳性对照管，30分钟应出现稳定的凝胶(试管倒转180度，凝胶固定不变)，说明鲎试剂有效;向第3⽀试管内加样品溶液与0.05µg/ml标准内毒素混合液0.2ml作假阳性对照管，30分钟应出现稳固的凝胶，说明供试品内不致有⼲扰物质存在;向第4⽀试管内加⼊检品溶液0.2ml，30分钟后若⽆凝胶⽣成，证明检品中⽆热原存在。
操作时⼀般可将试管倾斜45度观察，如含有热原，多在20分钟就出现阳性反应，同时还须注意如温度、ph值及沉淀剂等对鲎试剂的⼲扰作⽤。
生物实验--热原检查法
生物实验--热原检查法本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。
供试用家兔供试用的家兔应健康合格，体重1.7～3.0kg，雌兔应无孕。
预测体温前7日即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。
未经使用于热原检查的家兔；或供试品判定为符合规定，但组内升温达0.6℃的家兔；或3周内未曾使用的家兔，均应在检查供试品前3～7日内预测体温，进行挑选。
挑选试验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30分钟测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.0～39.6℃的范围内，且与最低体温的相差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。
用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可供第2次检查用。
如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用。
每一家兔的使用次数，用于一般药品的检查，不应超过10次。
试验前的准备在作热原检查前1～2日，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室和饲养室的温度相差不得大于5℃，实验室的温度应在17～25℃，在试验全部过程中，应注意室温变化不得大于3℃，避免噪音干扰。
家兔在试验前至少1小时开始停止给食并置于适宜的装置中，直至试验完毕。
家兔体温应使用精密度为±0.1℃的测温装置。
测温探头或肛温计插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约6cm，时间不得少于1分半钟，每隔30分钟测量体温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.2℃，以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。
当日使用的家兔，正常体温应在38.0～39.6℃的范围内，且各兔间正常体温之差不得超过1℃。
试验用的注射器、针头及一切与供试品溶液接触的器皿，应置烘箱中用250℃加热30分钟，也可用其他适宜的方法除去热原。
检查法取适用的家兔3只，测定其正常体温后15分钟以内，自耳静脉缓缓注入规定剂量并温热至约38℃的供试品溶液，然后每隔30分钟按前法测量其体温1次，共测6次，以6次体温中的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度（℃）。
热原检查法标准操作规程
热原检查法标准操作规程目的：建立热原检查的基本操作，为热原检查人员提供正确的操作规程。
2.依据：《中华人民共和国药典》2000年版二部。
3.范围：本标准适用于采用家兔法进行的热原检查的操作。
4.职责：QC热原检查操作人员对本标准的实施负责。
5. 程序：5.1.实验材料及用具：5.1.1. 天平（精度50g，家兔称重用）。
5.1.2.电热干燥箱(50~300±1)℃5.1.3.保温箱(室温+3~60)℃5.1.4.智能热原检测仪。
5.1.5.家兔固定盒5.1.6.实验用具：注射器、针头、刻度吸管、锥形瓶、硫酸纸、砂轮、洗耳球、金属直镊、注射器盒、时钟、75%酒精棉球、手术镊。
5.1.7. 稀释剂：灭菌注射用水、氯化钠注射液。
5.2. 供试品溶液的配制：5.2.1.打开洁净台的风机及照明开关，并用75%酒精棉球擦拭台面消毒。
5.2.2. 用75%酒精棉球擦手消毒。
5.2.3. 取供试品适量，置锥形瓶中，并标明批号。
5.2.4. 加入规定的稀释剂，制成符合规定浓度的供试品溶液，锥形瓶瓶口用经过灭菌的硫酸纸封好，放入保温箱中，温热至约38℃。
5.2.5. 供试品配制完毕后，应在30分钟内注射于家兔体内。
5.3. 实验动物：应符合规定。
见家兔预选操作规程（SOP ZL5001）。
5.4. 实验前的准备：5.4.1. 智能热原检测仪探头应每月校验一次，见智能热原检测仪使用规程（SOPZL0058）。
5.4.2. 用具的除热原：所有与药液接触的器具，都必须清洗干净后，置电热干燥箱中经250℃、30分钟加热除热原。
注射器、针头、手术镊清洗干净后，放入注射器盒内，密闭，放入电热干燥箱中经250℃，30分钟加热除热原。
5.4.3. 实验室的温度：实验室的温度应在（17-28）℃范围内实验室与饲养室的温度相差不得大于5℃试验全过程中，室温变化不得大于3℃5.5. 检查法：5.5.1.选符合规定的家兔，停止给饲料和水，称重后置于家兔固定盒中至少1小时。
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热原检查法标准操作
规程
1目的：
建立热原检查的基本操作，为热原检查人员提供正确的操作规程。
2.依据：
《中华人民共和国药典》2010年版二部。
3.范围：
本标准适用于采用家兔法进行的热原检查的操作。
4.职责：
QC热原检查操作人员对本标准的实施负责。
5. 程序：
5.1.实验材料及用具：
5.1.1. 天平（精度50g，家兔称重用）。
5.1.2.电热干燥箱(50~300±1)℃
5.1.3.保温箱(室温+3~60)℃
5.1.4.智能热原检测仪。
5.1.5.家兔固定盒
5.1.
6.实验用具：注射器、针头、刻度吸管、锥形瓶、硫酸纸、砂轮、洗
耳球、金
属直镊、注射器盒、时钟、75%酒精棉球、手术镊。
5.1.7. 稀释剂：灭菌注射用水、氯化钠注射液。
5.2. 供试品溶液的配制：
5.2.1.打开洁净台的风机及照明开关，并用75%酒精棉球擦拭台面消毒。
5.2.2. 用75%酒精棉球擦手消毒。
5.2.3. 取供试品适量，置锥形瓶中，并标明批号。
5.2.4. 加入规定的稀释剂，制成符合规定浓度的供试品溶液，锥形瓶瓶口用经过灭菌的硫酸纸封好，放入保温箱中，温热至约38℃。
5.2.5. 供试品配制完毕后，应在30分钟内注射于家兔体内。
5.3. 实验动物：应符合规定。
见家兔预选操作规程（SOP ZL5001）。
5.4. 实验前的准备：
5.4.1. 智能热原检测仪探头应每月校验一次，见智能热原检测仪使用规程（SOP ZL0058）。
5.4.2. 用具的除热原：所有与药液接触的器具，都必须清洗干净后，置电热干燥箱
中经250℃、30分钟加热除热原。
注射器、针头、手术镊清洗干净后，放入注射器盒内，密闭，放入电热干燥箱中经250℃，30分钟加热除热原。
5.4.3. 实验室的温度：
实验室的温度应在（17-28）℃范围内
实验室与饲养室的温度相差不得大于5℃
试验全过程中，室温变化不得大于3℃
5.5. 检查法：
5.5.1.选符合规定的家兔，停止给饲料和水，称重后置于家兔固定盒中至
少1小时。
5.5.2.每隔30分钟测量家兔体温一次，一般测量两次。
两次体温之差不得
超过0.2
℃，以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。
5.5.3.测量体温时，测温探头插入肛门的深度和时间各兔应相同。
深度为
6cm，时
间约为1分半钟。
5.5.4. 当日使用的家兔，正常体温应在（38.0-39.6）℃范围内，且各兔间相差不得
超过1℃。
5.5.5. 每个供试品用家兔3只，在测定正常体温后15分钟内给药。
供试品的剂量，
应按各该药项下的规定注射。
注射前，先用75%酒精棉球轻擦家兔耳静脉的注射部位，从耳尖端静脉进针，如进针不利，则顺序向前进行。
5.5.7. 注射完毕，拔出针头时，用75%酒精棉球按压针孔数秒钟，止血，注射时间一般每只家兔不超过3分钟。
5.5.8.每隔30分钟，按前法测家兔体温一次，共测6次。
5.6. 温差计算：
5.6.1.注射药液后，以6次测得体温中最高的一次减去正常体温，为该兔
体温的升
高度数，如6次体温均低于正常体温，则升温度数以“0”计。
5.6.2.6次体温中最低的一次，减去正常体温，即为降温值。
5.7. 结果判断：
5.7.1.判断复试：
5.7.1.1 初试3只家兔中仅有1 只体温升高0.6℃或0.6℃以上，或3 只家兔升温均在0.6℃以下，但升温的总数达1.4℃或1.4℃以上，应另取5只家兔复试，检查方法同上。
5.7.1.2. 3只家兔中有一只降温值≥0.6℃，或3只家兔中有2只降温值在0.45~0.55℃,应另取3只家兔复试。
5.7.2. 判断符合规定：
初试3只家兔中，体温升高均在0.6℃以下，并且3只家兔升温的总数在1.4℃以下，可判断为符合规定。
复试5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔数仅有1 只，并且初复试合并，8只家兔的升温总数为3.5℃或3.5℃以下，可判断为符合规定。
5.7.3. 判断不符合规定：
5.7.3.1. 初试3只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔数，有2只或3只，可判断为不符合规定。
5.7.3.2. 复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔有2 只或2只以上，可判断为不符合规定。
5.7.3.3. 初复试合并8只家兔的升温总数超过3.5℃，可判断为不符合规定。
注意事项：
5.8.1. 热原实验室内外，均应保持安静，避免强烈直射的日光或灯光及其
它刺激。
5.8.2.在试验过程中，避免家兔骚动，保持体温稳定并注意相对湿度保持稳
定。
5.8.3.试验过程中，家兔因肛门出血过多，造成升温或降温超过规定时应复
试。