驴早期妊娠诊断中奶牛早孕试纸应用研究
奶牛早期妊娠诊断分子筛选研究
奶牛早期妊娠诊断分子筛选研究作者：李志明王彦平郭勇王春伟王相国倪和民来源：《安徽农业科学》2021年第17期摘要 [目的]探究整合素αv β3、TGF-β、HSP10、PAG、IL-10等妊娠因子在荷斯坦奶牛早期妊娠过程中的规律，筛选奶牛早期妊娠诊断标志因子。
[方法]选取49头荷斯坦奶牛，在输精后第7、14、21、28天取外周血，采用荧光定量PCR方法分析整合素αv β3的表达趋势和变化规律，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法分析TGF-β、HSP10、PAG、IL-10的表达趋势和变化规律。
60 d后通过直检对50头荷斯坦奶牛进行怀孕检测。
[结果]50头奶牛中有23頭受孕、26头未受孕。
通过分析受孕和未孕奶牛血液中整合素αv β3基因的表达量，发现整合素αv β3基因在受孕奶牛血液中的表达量高于未孕奶牛，特别是输精后第21、28天受孕奶牛的表达量显著增高（P<0.05）;TGF-β、HSP10、PAG、IL-10蛋白质表达量变化在28 d内不能有效区分怀孕奶牛与未孕奶牛。
[结论]整合素αv β3可作为奶牛早期妊娠诊断标志因子，理论上可将孕检的时间窗口提前到早期妊娠阶段的第21天。
关键词荷斯坦奶牛;整合素αv β3;血液;早期妊娠;诊断中图分类号 S823 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2021）17-0088-04doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.17.024Abstract [Objective] To study the regularit y of pregnancy factors such as integrin αv β3， TGF-β， HSP10， PAG， IL-10 in the early pregnancy of Holstein cows， and screen out the marker factors for the early pregnancy diagnosis of dairy cows.[Method] 49 Holstein cows were selected and peripheral blood was taken on the 7th， 14th ， 21st， and 28th days after insemination. Fluorescence quantitative PCR was used to analyze the expression trend and change laws of integrin αv β3， and the enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） method was used to analyze the expression trend and change laws of TGF-β， HSP10， PAG， and IL-10. After 60 days， 50 Holstein cows were tested for pregnancy by using rectum examination.[Result] Among 50 detected Holstein cows， 23 cows were pregnant and 26 cows were not. By analyzing the expression of integrin αv β3 gene in the blood of pregnant and non-pregnant dairy cows， it was found that the expression of integrin αv β3 gene in the blood of pregnant dairy cows was higher than that of non-pregnant dairy cows，especially the expression level of dairy cows on the 21st and 28th days after insemination increased significantly（P<0.05） . Through analyzing the expression level changes of TGF-β， HSP10， PAG， IL-10 within 28 days， pregnant cows could not effectively distinguished from non-pregnant c ows.[Conclusion] Integrin αv β3 could be used as a diagnostic marker for early pregnancy of dairy cows.In theory， the time window for pregnancy examination could be advanced to the 21st day of early pregnancy.Key words Holstein cows;Integrin αv β3;Blood;Early pregnancy;Diagnosis对于奶牛养殖行业而言，配种效率将直接影响企业效益[1]，主要表现为产奶量降低、护理成本增加2个方面。
奶牛早期妊娠诊断技术的研究进展
奶牛早期妊娠诊断技术的研究进展陈超，张欣欣，安志高，胡祥维，华丽萍，李可可，杨利国（华中农业大学动物科技学院，武汉 430070）中图分类号：S823.3 文献标识码：A 文章编号：1004-4264（2019）04-0026-04DOI: 10.19305/ki.11-3009/s.2019.04.006摘 要：高效准确的早期妊娠诊断，可以缩短母牛的产犊间隔，从而达到提高母牛繁殖效率的目的。
家畜早期妊娠诊断方法的研究具有悠久的历史，从原始的外部观察法到目前应用最广泛且最直接的直肠检查法，再到后期发展起来的超声波检查法以及近年来研究比较多的易于商业化的间接检测法。
本文对在生产中具有实际应用效果且具有一定发展前景的早期妊娠诊断技术应用现状进行了综述。
关键词：奶牛；早期妊娠诊断；繁殖随着经济的高速发展和生活水平的不断提高，人们对于乳制品的需求量越来越大，要求也越来越高，这也对奶牛养殖业的发展提出了更高的要求，所以为了满足社会发展的需要，需不断推进奶牛养殖的现代化和科学化。
经过半个多世纪的发展，中国奶牛产业已经从传统、落后、粗放的养殖模式转变成规模化、标准化、精细化、产业化养殖的模式，很多先进技术也得到了大力的推广[1]，其中早期妊娠诊断技术在近些年也得到了快速的发展。
早期妊娠诊断技术在畜牧养殖业中一直扮演着重要的角色，特别是在奶牛养殖业中。
母牛在配种后应尽早地确定是否妊娠，这对于保胎、减少空怀、提高母畜的繁殖力是非常重要的[2]。
经过早期妊娠诊断，对于确定怀孕的母牛，尽早提供妊娠母牛所需要的营养与环境，加强饲养管理，能够保证胎儿的正常发育，避免胚胎的早期死亡或流产；对于未妊娠的母牛，找出原因后及时采取措施进行二次配种，对于多次配种不孕的母牛及时淘汰，通过缩短产犊间隔而达到提高母牛繁殖效率的目的。
简便有效的妊娠诊断方法，尤其是早期妊娠的诊断方法，能够大大提高母畜的繁殖效率。
母畜繁殖效率一直是畜牧生产中极为重视的问题，繁殖效率的提高能大大提高畜牧生产的经济效益。
奶牛早期妊娠诊断ELISA方法的应用及PAG-1单克隆抗体的制备
奶牛早期妊娠诊断ELISA方法的应用及PAG-1单克隆抗体的制备奶牛早期妊娠诊断ELISA方法的应用及PAG-1单克隆抗体的制备导语：奶牛妊娠诊断是养殖业中的重要环节。
早期妊娠诊断有助于及时调整饲养管理措施，提高奶牛的生产性能。
本文将介绍一种常用的奶牛早期妊娠诊断方法——酶联免疫吸附法（ELISA），以及制备PAG-1单克隆抗体的工艺流程。
一、酶联免疫吸附法（ELISA）在奶牛早期妊娠诊断中的应用酶联免疫吸附法（ELISA）是一种常用的免疫学方法，可以用于检测体液中的特定蛋白质。
在奶牛早期妊娠诊断中，ELISA方法可以测定奶牛血液样本中的弗洛伊林相关蛋白（PAG），从而判断奶牛是否怀孕。
一般在妊娠的第24到28天，奶牛血液中的PAG水平会显著升高，通过ELISA方法可以快速、准确地检测出这种变化，判断奶牛是否成功受孕。
ELISA方法的步骤主要包括：1. 样品处理：收集奶牛的血液样本，离心分离，获取血清样品，保存在冰箱中备用。
2. 酶标板涂覆：将PAG抗原溶液均匀地涂覆在96孔酶标板中，密封孔板，在4℃下储存过夜。
3. 抗体结合：将待测样本稀释后加入涂覆好的酶标板孔中，与PAG抗原结合，孵育一定时间。
4. 酶标记抗体结合：加入标记有酶的二抗，培养片刻以促使其与已结合的PAG结合。
5. 反应底物：加入底物溶液，使酶催化反应产生发色物质，反应时间一般为10-30分钟。
6. 反应终止：加入反应终止液，停止酶催化反应，防止进一步产生发色物质。
7. 读取结果：使用酶标仪，在450nm波长下测定反应孔的吸光度值。
8. 结果判定：根据标准曲线和控制孔的吸光度值，判断样本中的PAG含量，从而判断奶牛的妊娠情况。
二、PAG-1单克隆抗体的制备PAG-1是奶牛血浆中的特异性蛋白质，其表达量与奶牛妊娠的状态密切相关。
为了制备PAG-1单克隆抗体，需要先提取并纯化PAG-1抗原，然后将其用于免疫小鼠，最后通过细胞融合技术得到抗原特异性的单克隆抗体。
奶牛的妊娠诊断实验报告
一、实验目的本实验旨在掌握奶牛妊娠诊断的基本原理和方法，提高奶牛养殖户对奶牛妊娠的早期诊断能力，为奶牛养殖生产提供科学依据。
二、实验原理奶牛妊娠诊断主要依据妊娠母牛体内激素水平的变化，如孕酮、雌激素等。
通过检测这些激素水平，可以判断奶牛是否妊娠。
三、实验材料1. 实验动物：健康黑白花奶牛5头，分别编号为1、2、3、4、5。
2. 试剂与仪器：3%硫酸铜溶液、饱和氯化钠、0.1%氧化镁溶液、医用碘酒、试管、酒精灯、火柴、温度计等。
3. 实验步骤：（1）乳汁诊断法① 分别取1毫升3%硫酸铜溶液加入0.5-1毫升乳汁中，观察乳汁是否凝结。
② 取1毫升乳汁放入试管中，加入1毫升饱和氯化钠，振荡后再加入15毫升0.1%氧化镁溶液，振荡20-25秒。
③ 将试管置于开水中加热1分钟，取出静置3-5分钟后观察，如形成絮状物沉在下半部表明已怀孕，不形成絮状物或集于上部是未孕。
（2）尿液诊断法① 取母牛清晨排出的尿液20毫升放入试管中。
② 加入1毫升醋，再滴入1毫升2%-3%医用碘酒。
③ 用火缓慢加热煮沸，此时试管中从上到下呈现红色表明怀孕，如呈浅黄色、褐绿色，冷却后颜色很快消退则未孕。
四、实验结果1. 乳汁诊断法① 奶牛1、2、3号乳汁凝结，表明已怀孕。
② 奶牛4、5号乳汁不凝结，表明未怀孕。
2. 尿液诊断法① 奶牛1、2、3号尿液在加热煮沸后呈红色，表明已怀孕。
② 奶牛4、5号尿液呈浅黄色、褐绿色，冷却后颜色很快消退，表明未怀孕。
五、实验分析通过本次实验，我们掌握了奶牛妊娠诊断的基本原理和方法。
乳汁诊断法和尿液诊断法均能准确判断奶牛是否妊娠。
在实际生产中，可根据具体情况选择合适的方法进行诊断。
六、实验总结1. 奶牛妊娠诊断是奶牛养殖生产中的重要环节，准确判断奶牛是否妊娠对于提高繁殖效率、降低养殖成本具有重要意义。
2. 本次实验中，乳汁诊断法和尿液诊断法均具有较高的准确性，为奶牛养殖户提供了便捷的妊娠诊断方法。
3. 在实际生产中，应根据奶牛的具体情况选择合适的妊娠诊断方法，以确保诊断结果的准确性。
奶牛早期妊娠诊断技术研究进展
此外， 该法操 作简便 ， 于推广 ， 点是会使 家畜 产生 应激 便 缺
反应 。
３ 超声 波诊 断法
超 声波法 主要原 理是 以检测宫血 音为 准 ， 正常未 怀孕
ｔ ，Ｓ Ｐ ） ｏ ＩＥ Ｆ 。小 鼠在配种 后 ６ ｒ ｈ就分 泌该 因子 。因此采用 酶免 疫分析方 法 （ ＬＳ 检 测配种后 ２ ｈ内分泌 的 ＩＥ Ｆ Ｅ ＩＡ） ４ Ｓ Ｐ
水平 就可检测 出奶牛 是 否妊 娠 ， 实 验 成本 很 大 ， 不 利 但 也 于生 产实践 中。 １６ 孕 酮诊 断法 ． 母 畜 怀孕 后 ， 酮分 泌 增 加 ， 般 用 孕 一
１ 实验 室诊 断法
实验 室诊断法 主要 有 采用 醋 酸纤 维 素 薄膜 血 清 电泳
１ ７ 血 小板计 数法 ．
母 牛 怀 孕后 ， 受精 卵 发育 到 桑葚 胚
是产生血 小板活 化 因子 （ Ａ ） 因此可 间接 通过 血小 板计 ＰＦ ，
法 、 酊法 、 碘 酒精法 、 硫酸 铜 法 、 疫学 诊 断 法 与孕 酮诊 断 免
滴入 ３ ％硫酸铜 １ —３滴 ， 摇动 ， 稍 出现云雾 状沉 淀的为 已 孕 ，未 出现 的则 为未 孕 。该 法妊 娠 与 空怀 的检 出率 分别 为 ７ ％ 、０ ， 法检 出率较低 ， ０ ６％ 该 不利 于推广应 用 。 以上这 四种方法可作 为辅 助检测 手段 。 １５ 免疫学诊 断方 法 一 般母 畜 怀 孕后 免 疫 力 降低 ， ． 研 究发 现出现这 种现象 的原 因是这 些 家 畜在 怀 孕后 分 泌免
法。
奶牛早期妊娠诊断研究进展
经 济方 向发展
１ 超 声 波 诊 断 法
超声 波 诊断 法是 把超 声 波 的物 理特 点 和 动物组 织
结 构 的声学 特点 密切 结合 的一种 物 理学 诊 断法 它是
以高频声 波对奶 牛的子 宫进行 探查 ． 后将其 回波 放大 然
肠 检 查 法 比较 ． 娠 符 合 率 为 ９ ． ％． 怀 符 合 率 为 妊 ８０ ４ 空 ７ ．３ ８１ ） 张寿 等 （９ ９ ［ 用 Ｓ Ｄ １ ２７ ％（／１ １９ ）Ｊ ３ 应 Ｃ —Ｉ型兽 用 超 声 多 普勒 仪检 查 宫血音 ． ５ 头 受 配乳 牛进 行 了早 期 对 １
牛及 时配 种 ， 短 产仔 间 隔 ， 高繁 殖 效率 。生产 实践 缩 提 中广 泛应用 的直肠 检查 等方 法 ， 管简 单 易行 ， 需特 尽 不 殊设 备 ． 检 出 时 间长 ， 断 结 果 不 够 准确 ， 响奶 牛 但 判 影
及 时配种 ． 因此奶 牛早期 妊娠诊 断方法 研究 引起 了普遍
（ ． ｅＳ ｎ ｉｇＨ ｒ ａｍ’ Ｖ ｔ ｎ ｒ Ｓａ ｏ ， ２ ｉ ｓ ｎ Ｘ ｎｉ ｇＰ ｏ ｕ ｔ ｎ ａ ｄ Ｃ ｎ ｔ ｃ ｏ ｏ ｓ Ｕ ｍ ｉ ８ ０ ３ ； １ ｈ ａ ｐｎ ｅｄＦ ｒ Ｓ ｅ ｒ ａｙ ｔｔ ｎ １ Ｄ ｖ ｉ ， ｉ ａ ｒｄ ｃｉ ｎ ｏ ｓ ｕ ｔ ｎ Ｃ ｒ ， ｒ ｑ ３ ０ ２ Ｔ ｅ ｉ ｉ ｉｏ ｊｎ ｏ ｒ ｉ ｐ ｕ
基于EPF检测的奶牛早期妊娠诊断方法的研究
基于EPF检测的奶牛早期妊娠诊断方法的研究基于EPF检测的奶牛早期妊娠诊断方法的研究摘要：近年来，奶牛生产业发展迅速，但奶牛早期妊娠诊断方法还面临着一些挑战。
本研究旨在探索一种基于早期妊娠特异蛋白（Early Pregnancy Factor, EPF）检测的奶牛早期妊娠诊断方法。
通过采用ELISA和蛋白印迹等技术，检测奶牛血清中的EPF水平，研究表明，在牛仔怀孕的早期就可以通过检测EPF 水平来诊断奶牛是否受孕。
该研究为奶牛生产提供了一种可行的早期妊娠诊断方法，具有推广应用的潜力。
关键词：EPF检测；奶牛；早期妊娠；诊断方法；ELISA 引言：奶牛生产业一直以来都是农业领域的重要组成部分，奶牛早期妊娠诊断是优化奶牛繁殖管理和提高繁殖效益的重要环节。
传统的早期妊娠诊断方法主要依赖于直肠检查或B超，但这些方法存在操作繁琐、时间周期长和准确性不高等问题。
因此，研发一种简便、准确的奶牛早期妊娠诊断方法具有重要的意义。
方法：本研究采用实验室检测方法，探索基于EPF检测的奶牛早期妊娠诊断方法。
首先，从奶牛大豆囊膜中提取EPF样品，通过纯化、浓缩、净化等步骤获得高纯度的EPF样品。
然后，利用ELISA技术测定样品中EPF的浓度。
同时，还运用蛋白印迹技术对EPF进行进一步的鉴定和定量。
结果与讨论：通过ELISA技术检测奶牛血清中的EPF水平，本研究发现，牛仔在受孕后的早期就会产生大量的EPF。
与此同时，对比对照组，奶牛血清中EPF水平在妊娠早期明显上升。
这一结果表明，EPF作为早期妊娠特异蛋白在奶牛受孕后迅速产生，可作为奶牛早期妊娠的可靠指标。
进一步的蛋白印迹结果也证实了ELISA的可靠性和准确性。
在实际应用中，这种基于EPF检测的奶牛早期妊娠诊断方法具有显著的优势。
首先，它不依赖于繁杂的直肠检查或B超技术，操作简单方便，减少了人力和时间成本。
其次，通过对奶牛血清进行采样检测，无需对奶牛进行干扰或损害，保证了奶牛的健康和生产性能。
奶牛早期妊娠诊断研究进展
一
触摸 或 使用 内窥 镜观 察 阴道 黏膜 、粘 液和 子 宫颈 的变 化 。该 法最 早可 在妊 娠 ５ 后 进 行 。 由于诊 断 时 间较 晚 ， ０ ｄ 其 应 用 受 到 了 限 制 。 １９ 年 ， 日本 ９３ 研 究 出一种 “ 殖检 测 器 ”（ ｅ ｒ－ 繁 Ｒ ｐｏ ｄ ｃｉｎ ｅｅｔｒ，用 于 测 定 阴道 粘 ｕｔ ｔｃｏ） ｏＤ
心后加入防腐剂，冷冻保存 ２ ， ４ ｈ后
二，阴道检查法
传 统 的 阴 道 检 查 法 主 要 是 用 手
便 可 以 进 行 测 定 。确 定 妊 娠 阳 性 的 血 浆 Ｐ 含 量标 准 随 畜 种 、采 样 、处 ４ 理 样 品 的 方 法 等 不 同 ，一 般 地 ，牛
≥ １ ｇ ｍｌ 羊 ≥ ０ ５ｎ ／ ， 猪 ／ ， ｎ ． ｇ ｍｌ
并做 好记 录 。 直 肠 触 诊 法 通 常 在 配 种 后 ４ ０ ｄ
并首次证 明了乳 中 Ｐ 浓 度所 反映 的 ４
发 情 周期 阶 段 与 直 接 卵 巢 的 评 估 结 果 相 一 致 。而 后 又 有 资 料 表 明 ，乳
≥ ３ｍｏ Ｌ １ｍｏ Ｌ 鸳 ０３ ｎ／ ． ｎ Ｕ （ ｎ ｌ ／ ． ｇ ￣） １
湿 润 光 滑 ，有 黄 色 分 泌 物 ，此 种 变 化 对 已 配种 ２ ０～ ４ 妊 娠 符 合 ０ｄ的
原子 能 机 构 （ Ｅ 正在 向发 展 中 Ｉ Ａ） Ａ
三 ．孕酮测定诊断法
主要 包 括放 射 免疫 测定 法 （ Ｉ ） Ｒ Ａ 和 酶免 疫 测定 法 （Ｉ ＥＡ） （ ） 放 射 免 疫 测 定 法 （Ｉ） 一 ＲＡ １５ 年 Ｙ ｌ 首 次 创 立 了 Ｒ Ａ， 由 ９９ ａｗ ｏ Ｉ 于 Ｒ Ａ 灵敏 度和精确度高 ， Ｉ 重复性好 ， 其 应 用 日益 广泛 。１７ 年 Ｌ ｇ等首 ９１ 痂 次将 ＲＡ用于牛乳 中孕酮 （４的测定 ， Ｉ Ｐ）
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
驴早期妊娠诊断中奶牛早孕试纸应用研究
王世泰;李吉鹏;韩芙蓉;李爱文;赵艳红;高凤琴
【期刊名称】《畜牧兽医杂志》
【年(卷),期】2023(42)1
【摘要】驴作为传统大家畜在国内饲养量逐年萎缩,繁殖效率低下是限制产业快速高效发展的主要因素之一。
精准有效做好早期妊娠诊断对合理安排母驴授配、分群管理和保证受胎率意义重大。
兽用B超设备在母畜繁殖疾病诊断和早孕检测方面较为成熟,奶牛早孕诊断试纸因使用简便、结果准确、价格低廉而在养牛领域得以普及。
本研究基于该试纸的设计原理,对奶牛早孕诊断试纸用于母驴早期妊娠诊断进行了试验研究,与B超诊断结果相比,两者间重合度高,测定结果准确。
【总页数】4页(P81-84)
【作者】王世泰;李吉鹏;韩芙蓉;李爱文;赵艳红;高凤琴
【作者单位】甘肃省畜牧技术推广总站;金川区畜牧兽医服务中心
【正文语种】中文
【中图分类】S813.2
【相关文献】
1.早孕诊断试纸检查异位妊娠患者腹腔血和尿液β-HCG的对比分析
2.B超与妊娠试纸诊断早早孕对照分析
3.奶牛早孕诊断试纸条的研制及临床试验
4.PAG-ELISA 在奶牛早期妊娠诊断上的应用研究
5.早早孕试纸对早期妊娠诊断的分析
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。