ABO及RhD血型鉴定流程图定稿版
S007红细胞ABO血型(正反定型)、RhD鉴定标准化操作规程
红细胞ABO血型（正反定型）、RhD鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型与RhD血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用微柱凝胶凝集试验检测红细胞ABO血型（正反定型）与RhD 血型。
三、原理将人红细胞血型抗原与相应的抗体发生的凝集反应在微柱检测系统中进行。
微柱检测系统的上端为反应室，将葡萄聚糖凝胶作为凝集反应的介质装入检测卡微柱凝集检测管中，卡片上从左向右顺序第一支至第三支微管凝胶中均分别充以抗A、抗B、抗D单克隆抗体IgM 试剂，检测人红细胞ABO、RhD抗原。
第四支至第六支微管中只有凝胶，第四支微管作阴性对照管，第五支和第六支微管作为ABO血型反定型管。
微柱凝集检测管中的凝胶的间隙起分子筛作用。
凝集反应阳性的红细胞凝决留在微柱凝集检测管的上面或中间，反应阴性未凝集的红细胞将通过凝胶的间隙，沉积在微柱凝集检测管的底部。
四、适用范围适用于输血前患者红细胞ABO血型（正反定型）确认与RhD血型复查。
五、仪器设备普通离心机；血型血清学多用离心机；37℃免疫微柱孵育器；六、试剂1、试剂名称：ABO、RhD血型试剂卡（单克隆抗体）；试剂生产厂家：长春博迅生物技术有限责任公司；批准文号：国药准字S2*******；包装规格：聚丙烯卡12检测人份/盒；贮藏条件；18-25℃避光保存；有效期：自检定合格之日起12个月；试剂单克隆抗体效价：抗A效价≥128；抗B效价≥128；抗D效价≥32；特异性试验合格。
2、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；批准文号：国药准字S2*******；包装规格：A1、B、O试剂各1支， 10ml /支；贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻；有效期：自检定合格之日起2个月；试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
微柱凝胶卡式ABO和RhD血型鉴定标准操作规程
微柱凝胶卡式ABO和RhD血型鉴定标准操作规程一、目的为规范ABO和RhD血型鉴定（微柱凝胶卡式法）的技术操作，保证鉴定结果准确即临床输血安全有效。
二、适用范围适用于微柱凝胶卡式法进行ABO和RhD血型鉴定。
三、原理红细胞血型抗原—抗体反应体系在微柱凝胶卡微孔上端反应室反应后，如红细胞血型抗原与相应特异性抗体发生凝集反应后，离心后被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或者颗粒间隙之中，不能通过凝胶筛网，而未发生抗原—特异性抗体凝集的红细胞则可以通过凝胶筛网沉降至微柱凝胶底部。
四、步骤和方法1，取微柱凝胶ABO血型鉴定检测卡放入专用离心机，3000r/min离心1min后撕开锡纸膜，正立放置待用。
2，用微量移液器在A、B、D、Ctrl微孔中分别加入50微升受检者1%红细胞悬液，在Ac、Bc微孔中各加入受检者血清（血浆）50微升，再分别加入1%A、B型试剂红细胞悬液50微升。
3，将准备就绪的检测卡静止3分钟使其充分反应后，用专用离心机以1800r/min·2min，2500r/min·1min离心后，取出判断结果。
结果判读：如Ctrl微孔为阴性：A、B、D各微孔阳性表明受检红细胞表达相应抗原，Ac、Bc微孔阳性表明受检者血清（血浆）存在抗-A或者抗-B；若各微孔阴性，则结果相反；结合反应格局判读血型结果。
若Ctrl微孔为阳性，结果不可信，重新试验。
5，Rh血型分型：5.1取Rh血型分型微柱凝胶卡放入专用离心机，3000r/min离心1min后撕开锡纸膜，正立放置待用。
5.2使用微量移液器在C、c、D、E、e、Ctrl微孔中分别加入50微升受检者1%红细胞悬液。
5.3将检测卡静止3分钟使其充分反应后放入专用离心机按上述条件离心后观察结果。
5.4判断规则见上表：结果判定：如Ctrl微孔为阴性，C、c、D、E、e微孔中阳性结果表示受检者红细胞表达相应的血型抗原，反之则不表达相应的血型抗原。
检验科ABO及RH血型标准操作规程
检验科ABO及RH血型标准操作规程1.【目的】确保红细胞ＡＢＯ及ＲＨ（Ｄ）血型鉴定试验的准确性，防止误定型，特制定本规程。
2.【职责】2.1实验室工作人员均应熟知并严格遵守本SOP，室负责人监督落实。
2.2本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：室负责人、科主任。
3.【样本类型及实验前准备】3.1样本类型：EDTA—K2抗凝管采集血液2ml（标本应新鲜，注意避免污染）3.2患者准备：患者处于安静状态精神、体力、情绪等因素的影响较小。
3.3容器添加剂类型：EDTA—K2抗凝管3.4实验试剂：1.ABO：1.1抗A、抗B和抗AB血型定型试剂。
1.2 5%A、B及O型试剂红细胞悬液。
1.3 受检者血清。
1.4 受检者5%红细胞盐水悬液。
2. RH：2.1IgG型抗D标准血清。
2.2 5%D阳性红细胞生理悬液。
2.3 5%D阴性红细胞生理悬液。
4.【测定原理】ＡＢＯ血型鉴定：生理盐水凝集法—试管法常用盐水凝集法检测红细胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗体，依据抗原抗体存在的情况判定血型。
常用的方法有：①正向定型：用已知抗体的标准血清检查红细胞上未知的抗原。
②反向定型：用已知血型的标准红细胞检查血清中的未知抗体。
结果判定：凡红细胞出现凝集者为阳性，呈散在游离状态为阴性。
ＲＨ鉴定：红细胞RH表型可用特殊的具有抗D、C、c、E 和e抗血清来鉴定。
虽然Rh血型系不能在盐水介不能在盐水介质中与红统中有许多种抗原，但常规只用抗D血清检查有无D抗原。
Rh （D）抗体属于IgG类，细胞发生凝集，因此必须采用低离子强度盐水试验或酶介质法。
5.【操作步骤】ＡＢＯ鉴定步骤：1.试管架每一竖排准备２只试管，分别为抗Ａ，抗Ｂ试管。
2.标本接收后进行标号，对应相应的试管标号。
3.分别加入Ａ，Ｂ型标准血清和受试者的红细胞悬液各两滴，混匀后离心２分钟。
4.取出试管后用手指轻弹试管底，若沉淀物成团漂起，表示发生凝聚现象；若试管内沉淀物恢复悬液状态，表示无凝集现象。
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程
ABO及RhD血型鉴定试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面ABO血型抗原、RhD抗原及血清(或血浆)中抗A、抗B抗体，确定受检者ABO及RhD血型。
(二)检验原理1.手工试管法、玻片法或纸板法利用标准IgM抗A／B血清鉴定红细胞表面ABO抗原即正定型，利用已知ABO 血型反定型红细胞鉴定同一标本血清(或血浆)中的抗A／B 抗体即反定型，综合正反定型结果确定受检标本ABO血型；利用标准IgM抗D直接鉴定RhD血型。
2.微柱凝胶法ABO／RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶颗粒中，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
3.玻璃珠微柱法ABO／RhD卡的微管中装填有玻璃微珠和抗A、抗B、抗D标准血清，如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发生凝集反应，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工、半自动、全自动ABO血型及RhD血型鉴定试验。
(四)设备性能参数各种血型检测系统性能指标参见相应血型检测系统说明书。
(五)器材与试剂1.器材WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO 血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro AutoVue Innova全自动血型配血系统、B600-A型低速离心机、KA-2200血清学专用离心机、阅片灯箱、塑料软试管、塑料硬质试管(100m m×12mm和75m m×l2mm)、血型鉴定专用纸板、玻片、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂Diana DG Gel ABO-CDE血型卡、DiaMed ABO／RhD血型卡、OTHROBiovueABO／RhD血型卡、2％氢氧化钠溶液、生理盐水、抗A／B标准血清、抗D标准血清、3％～5％反定型试剂红细胞、1％反定型试剂红细胞。
ABO.RhD血型定型试剂卡标准操作程序（SOP）
ABO.RhD血型定型试剂卡标准操作程序（SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
（二）检测标本的准备：1．红细胞悬液的制备：取被检者压积红细胞10微升，加入1.0－1.2毫升红细胞稀释液，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。
2．血清标本的制备：采集被检对象静脉血，放入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置 12小时，或37℃放置2小时后离心，2000r/min,10分钟，取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。
二、操作步骤1. 将准备好的ABO.RhD血型定型试剂卡做好标记。
2. 将待检者红细胞悬液分别加入第1至第4管中，每管50ul。
3. 将待检者血清分别加入第5和第6管中，每管50ul。
4. 将已知的A型和B型红细胞0.8%浓度悬液或0.8%浓度ABO血型反定型红细胞试剂，每管50ul分别加入第5和第6管。
5. 即刻使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟），取出肉眼判定结果。
结果判定：阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。
阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。
三、注意事项1. 检测标本必须为抗凝血。
2. 红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。
尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。
如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。
3. 血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。
4. 如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。
ABO、RhD血型鉴定
ABO、RhD血型鉴定操作规程一、目的指导规范本科工作人员进行血液ABO、RhD血型鉴定工作。
二、适用范围输血岗位工作人员。
三、职责负责对申请输血的标本进行ABO、RhD血型鉴定。
四、标本2mlEDTA-K2抗凝全血。
五、实验器材载玻片、0.5~10ul加样枪、20~200ul加样枪、100~1000ul加样枪、一次性吸头、台式离心机、小试管、微柱凝胶离心机、记号笔等。
六、实验试剂抗-A、抗-B血型定型试剂（单克隆抗体），RhD（IgM）血型定型试剂（单克隆抗体）；0.5%~1%A、B标准红细胞盐水悬液；ABO、RhD血型定型检测卡；0.9%生理盐水。
七、检测原理血型鉴定，是根据IgM类特异性血型抗体与红细胞膜上特异性抗原结合，能出现凝集反应的原理，用已知IgM类特异性抗-A、抗-B和RhD标准血清来检测红细胞上有无相应的特异性抗原；而反定型，是同时用标准A 红细胞和B红细胞来检测被检血浆（清）中有无相应的天然IgM类抗-A 或抗-B。
微胶凝柱卡是采用排阻层析原理，在微胶凝柱介质中，红细胞抗原与相应抗体结合，形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，该复合物不能通过凝胶间隙而浮于胶表面或悬于胶中；如无相应抗体结合，则不能形成红细胞免疫复合物，在一定离心力下，分散的红细胞可以通过凝胶间隙沉于微柱腔底部。
八、操作流程1、玻片法1.1查抗原：取洁净载玻片一张，用记号笔标注好A、B、Rh，分别向所标注位置加5ul待检全血，再向相应位置滴加抗-A、抗-B、RhD标准血清一滴，混匀。
1.2查抗体：台式离心机3000r/min离心待检标本2min，上清备用。
取洁净载玻片一张，记号笔标注Ac、Bc，相应加入A型、B型标准红细胞一滴，再分别加入待检血浆（清）20ul，混匀。
1.3将玻片不断轻轻转动，使血清与红细胞充分混匀，连续15min，肉眼观察有无凝集反应。
如肉眼观察无凝集，则用显微镜观察有无凝集或溶血。
2、微胶凝柱法2.1标本准备：待检全血3000r/min离心2min，上清液为待检血浆；取压积红细胞10ul加入1000ul生理盐水中制成待检红细胞悬液，在试管上做好标记。
Rh(D)血型鉴定标准操作程序
SOP_10-2 Rh(D)血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。
二、适用范围：血型鉴定。
三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1. 原理：1.1 Rh血型系统：Rh血型是一个极为复杂的血型系统，其重要性仅次于ABO血型系统。
ISBT现已确定Rh血型系统中共有46个血型抗原。
其中主要的抗原D、C、c、E、e分别表示为RH1、RH2、RH3、RH4、RH5或004001、04002、004003、004004、004005。
其抗原中包括了五个抗原之间的复合体以及弱表达等等，但在临床中主要的问题大都出自这五个抗原:抗E、抗e、抗C、抗c、抗D。
用这五种抗血清检查红细胞抗原可以有18种表现型，在临床输血中一般只做D抗原的鉴定。
1.2 D抗原：含有D（正常D抗原）；弱D（weak D）；不完全D（partial D）；不完全弱D；增强性D（elevated D）；正常D抗原。
由于红细胞上的D抗原较少，弱D抗原不能与盐水抗体（IgM）凝集，只能通过与不完全抗体的结合用抗球蛋白试验检出Del。
一些非常弱的D型抗原，只能被吸收放散试验（如三氯乙烯和三氯甲烷放散法）检测出来。
1.3 Rh 抗体：Rh血型的免疫原性强度可能仅次于ABO血型，其中以D抗原最强，其次为E、c、C、e。
绝大部分Rh抗体为免疫抗体，但少部分可能为自然发生的抗体。
2 试剂：（1）抗D试剂，包括完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体及改性IgG抗体等低蛋白试剂；（2）Rh对照试剂（通常可用自身血清或抗A、B管代替）；（3）Rh阳性和阴性5%红细胞悬液；（4）待检2~5%红细胞悬液。
3 方法：3.1 样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTA－K2干粉）中，混匀后备用。
3.2 操作：3.2.1 玻片法：使用完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体等低蛋白试剂。
不适合于输血前献血者和病人的血型鉴定，仅适合于临床体检时的RH血型鉴定。
输血科ABO血型鉴定操作规程
ABO血型鉴定标准操作规程【目的】正确鉴定血型，保障患者的输血安全。
【范围】所有送检需要鉴定ABO血型的标本。
【职责】配发血室负责临床患者的血型鉴定。
【原理】根据ABO血型分类原则，即红细胞上带有什么抗原就称什么血型、同一个体内抗原与抗体互补。
根据含某抗原的红细胞与含相应抗体的血清混合可使红细胞发生凝集，反之不发生凝集的原理，利用分型血清或分型红细胞鉴别血型，前者称为正定型（又称红细胞定型），后者称为反定型（又称血清定型）。
通过正反定型可准确鉴别ABO血型。
【标本采集和处理】1、标本采集：EDTA-K2或EDTA-K3抗凝静脉血2mL。
标本保存：室温放置不超过6小时，4℃保存不超过72小时，无溶血,无凝块及明显乳糜。
【设备与试剂】1、人ABO血型反定型用红细胞试剂盒①包装规格：每盒内装有Al,B,0试剂各1支，IOml/支②主要组成成分：Al型、B型、。
型红细胞。
③储存条件及有效期：2-8°C储存，不能冰冻；有效期2个月。
2、ABO>RhD血型检测卡（微柱凝胶）①包装规格：2人份/卡，12卡/盒。
②储存条件及有效期：18-25℃避光保存，自检定合格之日起12个月。
3、抗A抗B血型定型试剂（单克隆抗体）①包装规格：10ml。
②储存条件及有效期：2-8℃避光保存；储存条件下有效期为24个月。
4、红细胞悬液：取标本离心后压积红细胞与生理盐水配制（试管法为3%-5%；微柱凝胶法为0∙5%-0∙8%）.5、BaSo2005-2>BaSo2002-2型医用低速离心机：珠海贝索生物技术有限公司。
6、TD-3A型血型血清学用离心机：长春博研科学仪器有限责任公司。
【操作步骤】1、试管法①正定型：a）取洁净小试管（内径IOnIm义60mm）3支，分别标明抗-A,抗-B。
b）抗-A,抗-B管中分别按标记加入相应抗体血清1滴，并加入受检者3%~5%红细胞悬液1滴，混匀。
c）放入BaSo2002-2型离心机以3400r∕min离心15秒。