结核病实验室生物安全ppt课件
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结核病实验室生物安全及菌株运输2011.8.9
实验室安全操作-意外事故处理
1、实验过程中，如标本或含标本的前消化处理液被打翻， 污染操作台或地面，应以吸满75％乙醇溶液的卫生纸覆 盖污染区，15分钟后卫生纸方可移去； 2、实验过程中，如污染物溅落到身体表面，或有割伤、刺 伤、烧伤、烫伤等情况发生，应立即停止实验并进行紧 急处理；更换被污染的工作服，皮肤表面用消毒液清 洗，伤口以碘酒及酒精消毒，眼睛用无菌生理盐水冲洗； 3、被污染的器械等立即浸泡于含氯消毒剂或75％乙醇等溶 液中，实验完成后再进行高压消毒处理； 4、如果发生气溶胶污染或大面积污染，应立即停止实验并 关闭实验室，对实验区域和实验室进行紫外灯照射消毒2 小时以上；对污染区域进行空气熏蒸消毒。
结核杆菌分类—《人间传染的病原微生物名录 》
病原菌 名称 危害程 度分类 实验活动所需生物安全实验室级别 大量活 菌操作 结核分 枝杆菌 牛型分 枝杆菌 第二类 第二类 BSL-3 BSL-3 动物感 染实验 ABSL-3 ABSL-3 样本 检测 BSL-2 BSL-2 非感染性材 料的实验 BSL-1 BSL-1 运输包装 分类 A/B A A UN 编号 UN 2814 UN 2814
生物安全柜的使用
理想的工作台摆放原则（清洁---污染区）
在工作台面上的实验操作应该按照从清洁区到 污染区的方向进行
干净的物品
被污染的区域
废弃物托盘
垃圾袋
二、菌株运输
法律依据
1、病原微生物实验室生物安全管理条例（国务院令第424号 2004.11.12） 2、可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输 管理规定（卫生部令第45 号 2005.12.28） 3、人间传染的病原微生物名录（卫生部 2006.1.11） 4、中国民用航空危险品运输管理规定（CCAR276） 5、危险物品航空安全运输技术细则（国际民航组织）
结核病实验室生物安全
火警电话 匪警电话 急救电话 实验室负责人电话 119 110 120
祝大家工作愉快！
结核病实验室 生物安全
省结核参比室 龙波 2014年6月
内容
• 相关法律法规及要求
• 生物安全管理
实验活动的法律法规
• 《传染病防治法》中华人民共和物实验室生物安全管理条例》
中华人民共和国国务院令（第424号）2004.11.12
• 《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运 输管理规定》
我们该怎么做？ ——废物处理
感染性废物的高压消毒，不能装得太紧，并贴上高压指示 条，以便使其他工作人员能够区分已经高压过的废物和还未经 过高压处理的废物。
盛装液体的瓶子或容器在高压的时候不要盖紧
填写感染性废物高压处理记录
我们该怎么做？ ——生物安全柜的使用
1. 生物安全柜只能在正常运转时方可使用。 2. 使用生物安全柜时，观察窗不要抬得过高。 3. 柜内尽量少放仪器和物品。不要阻塞后面气口处的空气流通。物品 要先经过表面消毒才可放到柜内的工作区。 4. 禁止在柜内使用酒精灯。它产生的热量会改变气流方向，也可能破 坏滤板。 5. 在柜内的所有工作都要在工作台中央或后部进行，并且通过观察窗 能看见柜内的操作。 6. 尽量减少操作者后面的人员走动，操作者不要频繁移动及挥动手臂 以免破坏定向气流。 7. 前面的空气栅格不要被吸管或其它材料挡住，因为这样会干扰气流 的正常流动，引起潜在的污染和操作者的暴露。 8. 在操作结束后，应使用适宜的消毒剂擦拭生物安全柜的台面。 9. 生物安全柜的风扇在工作开始前及操作结束后至少要运行五分钟。
《中华人民共和国刑法修正案（六）》
2006年6月29日第十届全国人民代表大会 常务委员会第二十二次会议通过
祝大家工作愉快！
结核病实验室 生物安全
省结核参比室 龙波 2014年6月
内容
• 相关法律法规及要求
• 生物安全管理
实验活动的法律法规
• 《传染病防治法》中华人民共和物实验室生物安全管理条例》
中华人民共和国国务院令（第424号）2004.11.12
• 《可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运 输管理规定》
我们该怎么做？ ——废物处理
感染性废物的高压消毒，不能装得太紧，并贴上高压指示 条，以便使其他工作人员能够区分已经高压过的废物和还未经 过高压处理的废物。
盛装液体的瓶子或容器在高压的时候不要盖紧
填写感染性废物高压处理记录
我们该怎么做？ ——生物安全柜的使用
1. 生物安全柜只能在正常运转时方可使用。 2. 使用生物安全柜时，观察窗不要抬得过高。 3. 柜内尽量少放仪器和物品。不要阻塞后面气口处的空气流通。物品 要先经过表面消毒才可放到柜内的工作区。 4. 禁止在柜内使用酒精灯。它产生的热量会改变气流方向，也可能破 坏滤板。 5. 在柜内的所有工作都要在工作台中央或后部进行，并且通过观察窗 能看见柜内的操作。 6. 尽量减少操作者后面的人员走动，操作者不要频繁移动及挥动手臂 以免破坏定向气流。 7. 前面的空气栅格不要被吸管或其它材料挡住，因为这样会干扰气流 的正常流动，引起潜在的污染和操作者的暴露。 8. 在操作结束后，应使用适宜的消毒剂擦拭生物安全柜的台面。 9. 生物安全柜的风扇在工作开始前及操作结束后至少要运行五分钟。
《中华人民共和国刑法修正案（六）》
2006年6月29日第十届全国人民代表大会 常务委员会第二十二次会议通过
实验室检查-第二章 结核病实验室检查 PPT课件
旧版 痰检对象和要求：
疑似肺结核病人、结核病可疑症状者； 进行疗效考核的病人
痰直接涂片检查法：
涂片、染色、镜检与方法
新版 增加痰标本留痰场所的描述 增加镜检结果报告最低视野数量的要求
8
内容
实验室检查要求-培养和药敏
旧版
无
新版
增加培养和药敏的对象
培养对象
用于确定诊断
第二章 结核病实验室检查
实验室部分总体介绍
标 题
包含
单一------全面
内
范围
容
检查 方法
2
标题
旧指南
“痰涂片检查与质量 控制”
新指南
“结核病实验室检查”
3
包含范围
旧指南 涂片相关内容：
新指南
生物安全 实验室检查要求：
涂片 培养 药敏
4
旧指南
涂片
检查方法
新指南
涂片 培养 药敏试验
5
内容
实验室生物安全
旧版 无
新版 生物安全级别要求：
法律法规：
《病原微生物实验室生物安全管理条例》 《实验室生物安全通用要求》 《人间传染的病原微生物名录》 《医疗机构临床实验室管理办法》
结核菌操作的生物安全级别要求：
大量活菌操做：生物安全三级（BSL-3） 样本检测：生物安全二级（BSL-2）
12
内容
实验室登记报告
旧指南
本章节无明确表述
新指南
登记报告： 涂片 培养 药敏
13
内容——新指南
年
痰涂片检查登记本
第页
实验 序号
日期 姓名 性别 年龄
疑似肺结核病人、结核病可疑症状者； 进行疗效考核的病人
痰直接涂片检查法：
涂片、染色、镜检与方法
新版 增加痰标本留痰场所的描述 增加镜检结果报告最低视野数量的要求
8
内容
实验室检查要求-培养和药敏
旧版
无
新版
增加培养和药敏的对象
培养对象
用于确定诊断
第二章 结核病实验室检查
实验室部分总体介绍
标 题
包含
单一------全面
内
范围
容
检查 方法
2
标题
旧指南
“痰涂片检查与质量 控制”
新指南
“结核病实验室检查”
3
包含范围
旧指南 涂片相关内容：
新指南
生物安全 实验室检查要求：
涂片 培养 药敏
4
旧指南
涂片
检查方法
新指南
涂片 培养 药敏试验
5
内容
实验室生物安全
旧版 无
新版 生物安全级别要求：
法律法规：
《病原微生物实验室生物安全管理条例》 《实验室生物安全通用要求》 《人间传染的病原微生物名录》 《医疗机构临床实验室管理办法》
结核菌操作的生物安全级别要求：
大量活菌操做：生物安全三级（BSL-3） 样本检测：生物安全二级（BSL-2）
12
内容
实验室登记报告
旧指南
本章节无明确表述
新指南
登记报告： 涂片 培养 药敏
13
内容——新指南
年
痰涂片检查登记本
第页
实验 序号
日期 姓名 性别 年龄
结核病实验室诊断PPT课件
结核杆菌离心制片技术
2015年7月至2015年11月，对本院257例痰液和纤维支气管镜灌洗液 进行直接涂片法和离心制片法比对验证试验，结果如下：
直 接
离心制片法
涂
合计
片
阳性
阴性
法
阳 性
41
0
41 (15.9%)
阴 性
17
199
216 (84.1%)
合
58
199
计 （22.6%） (77.4%)
257
• Xpert MTB/RIF 在MDR或HIV问题不十分 严重的地区，可以考虑作为显微镜检查基础 之上的后续检测，特别是用于涂阴标本的进 一步检测。
体外r-干扰素释放试验
• 蛋白质水平
结核菌素试验（TST）
潜伏性结核 （LTBI）
T-SPOT.TB QuantiFERON-TB Gold in-tube (QFT-GI)
药物 RFP INH SM EMB CPM OFX ETH PAS LVF MOF RFB AMI KAN CLO
耐药 例数
80 146 94
58 50 61 41 49 53
62
60 11 13 87
耐药率 %
15.7
28.6
18.4
11.4
9.8
11.9
8.0
9.6
10.4
12.1
11.7
2.2
灵敏度
基本不受免疫力低下/受抑制影响，在肺外结核患者中有 很高的检出率
美国FDA数据：灵敏度95.6%(175/183) 国内临床数据：灵敏度95.3%(624/655)
体外r-干扰素释放试验
实 验 效 果 图
阴性结果
结核病实验室生物安全与菌株运输
9、结核杆菌对湿热敏感，在液体中加热62-63℃后15分钟 或煮沸即被杀死；
精选ppt
6
结核杆菌的生物学性状
10、结核杆菌对紫外线敏感，直接日光照射数小时可被杀 死，可用于结核患者衣服、书籍等的消毒；
11、结核杆菌的抵抗力与环境中有机物的存在有密切关系， 如痰液可增强结核杆菌的抵抗力，因大多数消毒剂可使 痰中的蛋白质凝固，包在细菌周围，使细菌不易被杀死；
3、一般用萋-尼（Ziehl Neelsen）抗酸性染色法，以5% 石炭酸复红加温染色后可以染上，但着色后不易被盐酸 酒精脱色；
精选ppt
4
结核杆菌的生物学性状
4、若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其它细菌及 背景中的物质为蓝色；
5、专性需氧，最适温度为37℃，低于30℃或高于42℃均 不
生长；营养要求较高，生长缓慢，初次分离需要营养丰 富的培养基。常用的有Lowenstein-Jensen培养基，内 含蛋黄、甘油、无机盐和孔雀绿等。
干净的物品 被污染的区域 废弃物托盘 垃圾袋
二、菌株运输
精选ppt
26
法律依据
1、病原微生物实验室生物安全管理条例（国务院令第424号 2004.11.12）
2、可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输 管理规定（卫生部令第45 号 2005.12.28）
3、人间传染的病原微生物名录（卫生部 2006.1.11）
14、结核杆菌对1：75000结晶紫或1：13000孔雀绿有抵 抗力，加在培养基中可抑制杂菌生长；
15、结核杆菌对链霉素、异烟肼、利福平、环丝氨酸、乙 胺丁醇、卡拉霉素、对氨水杨酸等敏感，但长期用药容 易出现耐药性，而吡嗪酰胺的耐药性<5%。
精选ppt
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6
结核杆菌的生物学性状
10、结核杆菌对紫外线敏感，直接日光照射数小时可被杀 死，可用于结核患者衣服、书籍等的消毒；
11、结核杆菌的抵抗力与环境中有机物的存在有密切关系， 如痰液可增强结核杆菌的抵抗力，因大多数消毒剂可使 痰中的蛋白质凝固，包在细菌周围，使细菌不易被杀死；
3、一般用萋-尼（Ziehl Neelsen）抗酸性染色法，以5% 石炭酸复红加温染色后可以染上，但着色后不易被盐酸 酒精脱色；
精选ppt
4
结核杆菌的生物学性状
4、若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其它细菌及 背景中的物质为蓝色；
5、专性需氧，最适温度为37℃，低于30℃或高于42℃均 不
生长；营养要求较高，生长缓慢，初次分离需要营养丰 富的培养基。常用的有Lowenstein-Jensen培养基，内 含蛋黄、甘油、无机盐和孔雀绿等。
干净的物品 被污染的区域 废弃物托盘 垃圾袋
二、菌株运输
精选ppt
26
法律依据
1、病原微生物实验室生物安全管理条例（国务院令第424号 2004.11.12）
2、可感染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样本运输 管理规定（卫生部令第45 号 2005.12.28）
3、人间传染的病原微生物名录（卫生部 2006.1.11）
14、结核杆菌对1：75000结晶紫或1：13000孔雀绿有抵 抗力，加在培养基中可抑制杂菌生长；
15、结核杆菌对链霉素、异烟肼、利福平、环丝氨酸、乙 胺丁醇、卡拉霉素、对氨水杨酸等敏感，但长期用药容 易出现耐药性，而吡嗪酰胺的耐药性<5%。
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结核病实验室ppt课件
标本及性状
754份痰标本
脓性痰 非脓性痰
即时痰 夜间痰
阳性检出率
液基法
直涂法
23.50%
16.80%
47.50% 13.50% 20.48% 25.6%
40.90% 4.66% 15.06% 17.01%
三、线性探针耐多药检测方法（HAIN）
适用范围： 1、TB的诊断 2、一线抗结核药物耐药诊断 3、二线抗结核药物耐药的诊断 4、目前，利福平（rpoB基因） 、异烟肼（Kat基
，
耐药检测基因芯片
基因芯片是基于特定基因位点突变与耐药性的相关性，通 过PCR扩增和核酸杂交技术，检测荧光信号的有无，判断 特定位点的突变情况和细菌耐药性的检测方法。
结核分枝杆菌耐药检测基因芯片基于rpoB/katG/inhA的基 因突变，快速检测分离株或者痰样本中结核杆菌耐药性 （利福平、异烟肼）。
基因芯片
将核酸片段有序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚 丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二 维分子排列。 采用光导原位合成或微量点样等方法。
然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交。 通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机
（CCD）对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测 分析，从而判断样品中靶分子的数量。
涂阳培阳
涂阴培阳
检测一份 标本
检测两份 标本
检测三份 标本
检测HIV
灵敏 特异 度度
97.6 0 %
99.8 0 %
90.2 0 %
72.5 99.2 00 %%
85.1 98.6 00 %%
90.2 98.1 00 %%
93.9 -
211例利福平耐药 506例利福平敏感
结核病实验室生物安全ppt课件
36
高压灭菌器使用
灭菌过程中： 随时查看所设定温度（121度）、压力是否 正确。（121度，30分钟）
灭菌后： 开门前务必确定內锅压力表已经归零。 灭菌器中各项物品及灭菌器本身均高温， 取出物品时应戴手套。 随时保持锅內清洁，以延长使用年限。
37
个人防护装备 (PPE)
在生物安全实验室中，这些器材和用品主要是 保护实验人员免于暴露于生物危害物质（气溶胶、 喷濺物以及意外接种等）危险的一种物理屏障。
结核病实验室生物安全
1
2
什么是生物安全
生物安全是指对由现代生物技术的开发和应 用过程中可能产生的负面影响，所采取的有
效预防和控制措施.
3
生物安全的目的
保护人（实验人员、同事、实验室辅助 人员）
物品(标本和器材等) 环境(空气、土壤、水)
4
实验室管理部门
国家发展与改革委员会 科技部 建设部 国家环保部 国家质检总局（中国合格评定国家认可中心） 国家卫生计生委 农业部 民航局 其它有关部门
28
生物安全柜的使用
操作：
干净和被污染的物品分开放置；被污染的物品 尽量不要进入干净区域，应放置在工作区域的 后部。
操作时物品和手臂不要频繁穿过前窗。 操作完毕后，将物品表面用适当的消毒液擦拭
后移出，用消毒液擦拭安全柜内面。
29
污染区
工作区
清洁区
30
不要覆盖前、后、侧边的隔栅
31
操作完毕后用消毒 液擦拭安全柜内面
44
生物安全意识至关重要！！ 谢谢 ！！
45
22
Ⅱ级生物安全柜
用于保护操作人员、处理样品安全与环境安 全的通风安全柜，柜内保持负压状态，适用 于生物危险度等级为1、2、3的媒质的操作。
高压灭菌器使用
灭菌过程中： 随时查看所设定温度（121度）、压力是否 正确。（121度，30分钟）
灭菌后： 开门前务必确定內锅压力表已经归零。 灭菌器中各项物品及灭菌器本身均高温， 取出物品时应戴手套。 随时保持锅內清洁，以延长使用年限。
37
个人防护装备 (PPE)
在生物安全实验室中，这些器材和用品主要是 保护实验人员免于暴露于生物危害物质（气溶胶、 喷濺物以及意外接种等）危险的一种物理屏障。
结核病实验室生物安全
1
2
什么是生物安全
生物安全是指对由现代生物技术的开发和应 用过程中可能产生的负面影响，所采取的有
效预防和控制措施.
3
生物安全的目的
保护人（实验人员、同事、实验室辅助 人员）
物品(标本和器材等) 环境(空气、土壤、水)
4
实验室管理部门
国家发展与改革委员会 科技部 建设部 国家环保部 国家质检总局（中国合格评定国家认可中心） 国家卫生计生委 农业部 民航局 其它有关部门
28
生物安全柜的使用
操作：
干净和被污染的物品分开放置；被污染的物品 尽量不要进入干净区域，应放置在工作区域的 后部。
操作时物品和手臂不要频繁穿过前窗。 操作完毕后，将物品表面用适当的消毒液擦拭
后移出，用消毒液擦拭安全柜内面。
29
污染区
工作区
清洁区
30
不要覆盖前、后、侧边的隔栅
31
操作完毕后用消毒 液擦拭安全柜内面
44
生物安全意识至关重要！！ 谢谢 ！！
45
22
Ⅱ级生物安全柜
用于保护操作人员、处理样品安全与环境安 全的通风安全柜，柜内保持负压状态，适用 于生物危险度等级为1、2、3的媒质的操作。
结核病实验室生物安全
实验室生物安全通用要求
中华人民共和国国家标准（GB19489-2019）2009.7.1
生物安全实验室建筑技术规范
中华人民共和国国家标准（GB50346-2019）
微生物和生物医学实验室生物安全通用准则
中华人民共和国卫生行业标准（WS233－2019）2019.8.1
《医疗废物管理条例》
中华人民共和国国务院令（第380号）2019.6.6
火警电话
119
匪警电话
110
急救电话
120
实验室负责人电话
祝大家工作愉快！
Thank You！
生物安全管理
根据我国<<病原微生物实验室生物安全管理条例 >>和<<实验室生物安全通用要求>>的规定，卫生部 关于印发《人间传染的病原微生物名录》的要求，对 于结核分枝杆菌大量活菌操作须在符合生物安全三级 （BSL-3）的环境中进行；而对于样本检测，包括样 本的病原菌分离纯化、药物敏感性实验、生化鉴定、 免疫学实验、PCR核酸提取、涂片、显微观察等初步 检测活动，可以在符合生物安全二级（BSL-2）的环 境中进行。
盛装液体的瓶子或容器在高压的时候不要盖紧
填写感染性废物高压处理记录
我们该怎么做？ ——生物安全柜的使用
1. 生物安全柜只能在正常运转时方可使用。 2. 使用生物安全柜时，观察窗不要抬得过高。 3. 柜内尽量少放仪器和物品。不要阻塞后面气口处的空气流通。物品 要先经过表面消毒才可放到柜内的工作区。 4. 禁止在柜内使用酒精灯。它产生的热量会改变气流方向，也可能破 坏滤板。 5. 在柜内的所有工作都要在工作台中央或后部进行，并且通过观察窗 能看见柜内的操作。 6. 尽量减少操作者后面的人员走动，操作者不要频繁移动及挥动手臂 以免破坏定向气流。 7. 前面的空气栅格不要被吸管或其它材料挡住，因为这样会干扰气流 的正常流动，引起潜在的污染和操作者的暴露。 8. 在操作结束后，应使用适宜的消毒剂擦拭生物安全柜的台面。 9. 生物安全柜的风扇在工作开始前及操作结束后至少要运行五分钟。
中华人民共和国国家标准（GB19489-2019）2009.7.1
生物安全实验室建筑技术规范
中华人民共和国国家标准（GB50346-2019）
微生物和生物医学实验室生物安全通用准则
中华人民共和国卫生行业标准（WS233－2019）2019.8.1
《医疗废物管理条例》
中华人民共和国国务院令（第380号）2019.6.6
火警电话
119
匪警电话
110
急救电话
120
实验室负责人电话
祝大家工作愉快！
Thank You！
生物安全管理
根据我国<<病原微生物实验室生物安全管理条例 >>和<<实验室生物安全通用要求>>的规定，卫生部 关于印发《人间传染的病原微生物名录》的要求，对 于结核分枝杆菌大量活菌操作须在符合生物安全三级 （BSL-3）的环境中进行；而对于样本检测，包括样 本的病原菌分离纯化、药物敏感性实验、生化鉴定、 免疫学实验、PCR核酸提取、涂片、显微观察等初步 检测活动，可以在符合生物安全二级（BSL-2）的环 境中进行。
盛装液体的瓶子或容器在高压的时候不要盖紧
填写感染性废物高压处理记录
我们该怎么做？ ——生物安全柜的使用
1. 生物安全柜只能在正常运转时方可使用。 2. 使用生物安全柜时，观察窗不要抬得过高。 3. 柜内尽量少放仪器和物品。不要阻塞后面气口处的空气流通。物品 要先经过表面消毒才可放到柜内的工作区。 4. 禁止在柜内使用酒精灯。它产生的热量会改变气流方向，也可能破 坏滤板。 5. 在柜内的所有工作都要在工作台中央或后部进行，并且通过观察窗 能看见柜内的操作。 6. 尽量减少操作者后面的人员走动，操作者不要频繁移动及挥动手臂 以免破坏定向气流。 7. 前面的空气栅格不要被吸管或其它材料挡住，因为这样会干扰气流 的正常流动，引起潜在的污染和操作者的暴露。 8. 在操作结束后，应使用适宜的消毒剂擦拭生物安全柜的台面。 9. 生物安全柜的风扇在工作开始前及操作结束后至少要运行五分钟。
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19
实验室危险
如果实验室进行了正确的试验操 作，那么与患者的一次不加防护的咳 嗽相比，在操作中产生的气溶胶是很 少的。
20
对结核病可疑症状者或结核病患者 应该采取：
• 给予口罩或面巾 • 教会如何较卫生的方式咳嗽 • 分开的区域侯诊 • 尽快接受相关检查(在排队前) • 转诊到专门的结核病诊断和治疗场所(机构)
32
生物安全柜内发生意外应急处理
•用蘸取消毒液的纱布或纸巾覆盖溅出物，静置使消毒 液和溅出物接触至少15分钟 •用适当的消毒液擦拭溅出物周围表面或其他容器表面 •换新手套，净化安全柜几分钟 •将污染物高压灭菌
33
生物安全柜外发生意外应急处理
发生重大溅洒事故时，所有人应立即离开 实验室，待气溶胶沉降完全后再处理。
22
Ⅱ级生物安全柜
用于保护操作人员、处理样品安全与环境安 全的通风安全柜，柜内保持负压状态，适用 于生物危险度等级为1、2、3的媒质的操作。
Ⅱ级生物安全柜为临床生物防护中应用最普 遍的一类生物安全柜。
23
24
安全柜的最佳放置位置
安全柜应该放在什么地方？ 尽量隔离安全柜 - 降低人流 - 尽量离开风管出口 - 尽量离开门和窗口
8
结核分枝杆菌危害等级
根据卫生部病原微生物危害等级分类，结 核分枝杆菌属于第二类，即指能够引起人 类或者动物严重疾病，比较容易直接或者 间接在人与人、动物与人、动物与动物间 传播的微生物。
9
实验室的设立与管理
国家根据实验室对病原微生物的生物安全防护水平， 并依照实验室生物安全国家标准的规定，将实验室 分为一级、二级、三级、四级。
21
结核分枝杆菌实验操作要求
根据我国发布的《人间传染的病原微生物 名录》的要求，对于结核分枝杆菌大量活菌操 作须在符合生物安全三级（BSL-3）的环境中 进行；
样本检测，包括样本的病原菌分离纯化、 药物敏感性实验、生化鉴定、免疫学实验、 PCR核酸提取、涂片、显微观察等初步检测活 动，可以在符合生物安全二级（BSL-2）的环 境中进行。
36
高压灭菌器使用
灭菌过程中： 随时查看所设定温度（121度）、压力是否 正确。（121度，30分钟）
让生物安全柜工作区排气几分钟之后再开始 工作
27
生物安全柜的使用
操作：
消毒桌面（75%酒精，使用紫外线作为表面消毒 的效果不一定能完全无菌）
安全柜内只放本次实验所需的物品。所有物品 离前窗至少15cm，即在隔栅之后，所有污染性 的操作尽量远离工作区域的后部。
大物体之间要保持一定距离。
10
BSL-1
11
BSL-2
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BSL-3
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原则：定向气流
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实验室个人防护装备
标准操作程序
15
结核菌是通过气溶胶传播
4
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可能产生气溶胶的操作
涂片 培养液的倾倒和转移； 高速混合含菌液体； 滴加、接种培养物； 取样器和振荡器的使用； 容器内外压力不同时打开容器
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实验室仪器设备操作及其危险性
在实验室中使用离心机、搅拌机、匀浆机、 振荡器、超声波粉碎仪和混合仪处理含有感 染性结核菌的材料时，以及打开培养容器； 冻干和过滤也可以产生感染性气溶胶
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保证实验室通风
保证实验室的窗户可以通风将含有气溶胶 的空气与室外空气进行交换，以排出或稀释 气溶胶浓度。
34
可以在 BSC内用火焰 ?
在生物安全柜内所形成的几乎没有微生物的 环境中，应避免使用明火。使用明火会对气 流产生影响。
在对接种环进行灭菌时，可以使用微型燃烧 器或电炉，而不应使用明火。
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高压灭菌器使用
负责高压灭菌的人员应接受过良好的培训并 持证上岗。
灭菌前： 检查灭菌容器的盖子，将盖子旋松后再放 入消毒物品。 容器內各种液体约装八分满，切勿装满。 具有挥发性的物质，不可高压灭菌。 灭菌前务必确定水位在正常要求水位以上。
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生物安全柜的使用
操作：
干净和被污染的物品分开放置；被污染的物品 尽量不要进入干净区域，应放置在工作区域的 后部。
操作时物品和手臂不要频繁穿过前窗。 操作完毕后，将物品表面用适当的消毒液擦拭
后移出，用消毒液擦拭安全柜内面。
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污染区
工作区
清洁区
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不要覆盖前、后、侧边的隔栅
31
操作完毕后用消毒 液擦拭安全柜内面
结核病实验室生物安全
1
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什么是生物安全
生物安全是指对由现代生物技术的开发和应 用过程中可能产生的负面影响，所采取的有
效预防和控制措施.
3
生物安全的目的
保护人（实验人员、同事、实验室辅助 人员）
物品(标本和器材等) 环境(空气、土壤、水)
4
实验室管理部门
国家发展与改革委员会 科技部 建设部 国家环保部 国家质检总局（中国合格评定国家认可中心） 国家卫生计生委 农业部 民航局 其它有关部门
5
基本规定
国家对病原微生物实行分类管理，对实验室实 行分级管理。 国家实行统一的实验室生物安全标准。实验室 应当符合国家标准和要求。
6
病原微生物的分类和管理
国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害 程度，将病原微生物分为四类：
第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重 疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。
25
注意
Installation
A ， B : 不可
D
D ，C : 建议
C
A
B
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准备：
生物安全柜的使用
在开始工作前应考虑实验中的操作步骤和所 需设备，充分做好准备工作。
准备好消毒剂和处理遗撒事件的物品。 尽量减少房间内的走动，保证正常气流。 前窗开至适当高度，打开安全柜的灯和风机。
第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病， 比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传 播的微生物。
第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。
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第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般 情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限， 实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措 施的微生物。 第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物 疾病的微生物。
实验室危险
如果实验室进行了正确的试验操 作，那么与患者的一次不加防护的咳 嗽相比，在操作中产生的气溶胶是很 少的。
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对结核病可疑症状者或结核病患者 应该采取：
• 给予口罩或面巾 • 教会如何较卫生的方式咳嗽 • 分开的区域侯诊 • 尽快接受相关检查(在排队前) • 转诊到专门的结核病诊断和治疗场所(机构)
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生物安全柜内发生意外应急处理
•用蘸取消毒液的纱布或纸巾覆盖溅出物，静置使消毒 液和溅出物接触至少15分钟 •用适当的消毒液擦拭溅出物周围表面或其他容器表面 •换新手套，净化安全柜几分钟 •将污染物高压灭菌
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生物安全柜外发生意外应急处理
发生重大溅洒事故时，所有人应立即离开 实验室，待气溶胶沉降完全后再处理。
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Ⅱ级生物安全柜
用于保护操作人员、处理样品安全与环境安 全的通风安全柜，柜内保持负压状态，适用 于生物危险度等级为1、2、3的媒质的操作。
Ⅱ级生物安全柜为临床生物防护中应用最普 遍的一类生物安全柜。
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安全柜的最佳放置位置
安全柜应该放在什么地方？ 尽量隔离安全柜 - 降低人流 - 尽量离开风管出口 - 尽量离开门和窗口
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结核分枝杆菌危害等级
根据卫生部病原微生物危害等级分类，结 核分枝杆菌属于第二类，即指能够引起人 类或者动物严重疾病，比较容易直接或者 间接在人与人、动物与人、动物与动物间 传播的微生物。
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实验室的设立与管理
国家根据实验室对病原微生物的生物安全防护水平， 并依照实验室生物安全国家标准的规定，将实验室 分为一级、二级、三级、四级。
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结核分枝杆菌实验操作要求
根据我国发布的《人间传染的病原微生物 名录》的要求，对于结核分枝杆菌大量活菌操 作须在符合生物安全三级（BSL-3）的环境中 进行；
样本检测，包括样本的病原菌分离纯化、 药物敏感性实验、生化鉴定、免疫学实验、 PCR核酸提取、涂片、显微观察等初步检测活 动，可以在符合生物安全二级（BSL-2）的环 境中进行。
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高压灭菌器使用
灭菌过程中： 随时查看所设定温度（121度）、压力是否 正确。（121度，30分钟）
让生物安全柜工作区排气几分钟之后再开始 工作
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生物安全柜的使用
操作：
消毒桌面（75%酒精，使用紫外线作为表面消毒 的效果不一定能完全无菌）
安全柜内只放本次实验所需的物品。所有物品 离前窗至少15cm，即在隔栅之后，所有污染性 的操作尽量远离工作区域的后部。
大物体之间要保持一定距离。
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BSL-1
11
BSL-2
12
BSL-3
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原则：定向气流
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实验室个人防护装备
标准操作程序
15
结核菌是通过气溶胶传播
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可能产生气溶胶的操作
涂片 培养液的倾倒和转移； 高速混合含菌液体； 滴加、接种培养物； 取样器和振荡器的使用； 容器内外压力不同时打开容器
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实验室仪器设备操作及其危险性
在实验室中使用离心机、搅拌机、匀浆机、 振荡器、超声波粉碎仪和混合仪处理含有感 染性结核菌的材料时，以及打开培养容器； 冻干和过滤也可以产生感染性气溶胶
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保证实验室通风
保证实验室的窗户可以通风将含有气溶胶 的空气与室外空气进行交换，以排出或稀释 气溶胶浓度。
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可以在 BSC内用火焰 ?
在生物安全柜内所形成的几乎没有微生物的 环境中，应避免使用明火。使用明火会对气 流产生影响。
在对接种环进行灭菌时，可以使用微型燃烧 器或电炉，而不应使用明火。
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高压灭菌器使用
负责高压灭菌的人员应接受过良好的培训并 持证上岗。
灭菌前： 检查灭菌容器的盖子，将盖子旋松后再放 入消毒物品。 容器內各种液体约装八分满，切勿装满。 具有挥发性的物质，不可高压灭菌。 灭菌前务必确定水位在正常要求水位以上。
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生物安全柜的使用
操作：
干净和被污染的物品分开放置；被污染的物品 尽量不要进入干净区域，应放置在工作区域的 后部。
操作时物品和手臂不要频繁穿过前窗。 操作完毕后，将物品表面用适当的消毒液擦拭
后移出，用消毒液擦拭安全柜内面。
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污染区
工作区
清洁区
30
不要覆盖前、后、侧边的隔栅
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操作完毕后用消毒 液擦拭安全柜内面
结核病实验室生物安全
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什么是生物安全
生物安全是指对由现代生物技术的开发和应 用过程中可能产生的负面影响，所采取的有
效预防和控制措施.
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生物安全的目的
保护人（实验人员、同事、实验室辅助 人员）
物品(标本和器材等) 环境(空气、土壤、水)
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实验室管理部门
国家发展与改革委员会 科技部 建设部 国家环保部 国家质检总局（中国合格评定国家认可中心） 国家卫生计生委 农业部 民航局 其它有关部门
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基本规定
国家对病原微生物实行分类管理，对实验室实 行分级管理。 国家实行统一的实验室生物安全标准。实验室 应当符合国家标准和要求。
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病原微生物的分类和管理
国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害 程度，将病原微生物分为四类：
第一类病原微生物，是指能够引起人类或者动物非常严重 疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。
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注意
Installation
A ， B : 不可
D
D ，C : 建议
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准备：
生物安全柜的使用
在开始工作前应考虑实验中的操作步骤和所 需设备，充分做好准备工作。
准备好消毒剂和处理遗撒事件的物品。 尽量减少房间内的走动，保证正常气流。 前窗开至适当高度，打开安全柜的灯和风机。
第二类病原微生物，是指能够引起人类或者动物严重疾病， 比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传 播的微生物。
第一类、第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物。
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第三类病原微生物，是指能够引起人类或者动物疾病，但一般 情况下对人、动物或者环境不构成严重危害，传播风险有限， 实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措 施的微生物。 第四类病原微生物，是指在通常情况下不会引起人类或者动物 疾病的微生物。