LCMS-IT-TOF 调谐液配置方法
LCMS操作说明
LC/MS的SOPStep 1：使用LC/MS前的准备工作1．查阅文献，获得目标分析物质或相近物质的液质条件。
2．检查线路是否连接完好。
检查流动相和洗针液是否充足，不足则根据要求添加。
3．有机流动相必须为HPLC级别，水相可使用纯水机出水或娃哈哈纯净水。
流动相中添加的酸或胺类物质必须为色谱纯，其中水相需每天更换以保持新鲜。
4．标样和样品在使用前必须用0.45μm的针头式滤器过滤。
5．在做LC/MS之前，需将样品放置在样品托盘上，并记录相应的位置。
且第一个或最后一个样品为空白采用不含盐或酸的流动相做样，用于清洗进样系统及管路。
Step 2：开机、关机方法Step 2.1：开机方法1．打开质谱电源，即打开质谱主电源开关（Main Power Switch）至On（/）位置；2．打开真空泵开关；真空泵开关开启约一小时后，打开电子开关（Electronics Switch）在Operational状态；3．打开计算机；4．双击桌面LCQ Tune图标，打开Tune Plus界面；5．查看Tune Plus界面右边质谱参数，确认Ion Gauge Pressure小于5×10-6 Torr；6．打开LC部分各模块电源。
Step 2.2：关机方法1．关闭电子开关（Electronics Switch）；2．5~6分钟后关闭质谱主电源开关(Main Power Switch)至Off (O) 位置；3．关闭LC部分各模块电源。
Step 3：LC /MS分析方法建立1．双击桌面Xcalibur图标，打开Xcalibur 工作站；2．在Xcalibur Roadmap 主页上, 点击Instrument Setup按钮, 建立LC/MS方法；3．设置LC部分参数；A.Accela pump的参数设置；1）点击Instrument Setup窗口中Accela pump图标；2）点击Gradient Program标签；3）设置流动相条件（时间、流动相比例、流速等）。
[emuch.net]岛津LCMS-IT-TOF技术介绍
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岛津 LCMS-IT-TOF 技术介绍岛津公司作为综合开发，生产，销售GC/MS、LC/MS、LC/MS/MS、TOF-MS/MS的质谱分析仪器专业厂家，拥有世界最先进的质谱技术。
自20世纪70年代开始，岛津公司就涉足质谱研发领域，与瑞典LKB公司共同开发出世界第一台GC/MS(扇形磁场)。
1982年推出日本第一台用于有机化合物分析的四极杆质谱GCMS-QP1000，1988年开发的LAMS-50K 是世界第一台MALDI-TOF飞行时间质谱，由此获得了2002年的诺贝尔化学奖。
1989年成功并购英国著名质谱厂家Kratos（克雷托斯）集团后，在大型质谱仪的技术上日臻完善，形成了独具特色的质谱全系列产品线。
LCMS-IT-TOF是岛津公司最新推出的高端质谱仪，并于2005年3月获得了全球著名分析仪器匹兹堡展会的银奖，这是该年度质谱仪整机产品得到的最高奖项。
而后，又获得了国际权威的分析仪器杂志R&D 的2006年新产品大奖，2007年底被中国仪器信息网评为最佳质谱产品奖，这些奖项充分表明分析仪器行业对该仪器的优越性能的充分认可。
LCMS-IT-TOF的设计理念是根据现有各厂家质谱仪不能同时实现多级质谱功能和精确质量测定，即二者不可兼得的行业现状下，独创一系列关键的专利技术，实现了离子阱质谱和飞行时间质谱的完美结合。
从而实现既可以做多级质谱，又能达到高质量精度的强大功能。
岛津LCMS-IT-TOF是全球唯一的连接离子阱和飞行时间质谱的串级质谱技术的仪器。
岛津LCMS-IT-TOF可以广泛应用在有机小分子的结构分析，中药成分鉴定，食品，香料，农残兽残，药物代谢物鉴定, 生物大分子的蛋白质组研究，包括多肽的一级从头测序，蛋白质鉴定，转录后修饰，复杂糖蛋白的分析等，其中未知化合物分子式预测是其最有特色的功能。
岛津LCMS-IT-TOF具有以下几点独特优势：1.每级的质谱都能保证高质量精确度LCMS-IT-TOF是世界上唯一的一台能保证每级MS高质量精确度的质谱仪器，这对传统的Q-TOF和离子阱质谱来说是完全不可能的。
LCMS及制备HPLC使用教程
如何优化：先走梯度，若A、B两峰在流动相比例为60% B左右分开，则直接选择 60% B走。若此时两峰分得更不开，就降低比例如55%、50%直到摸索出最优条 件，此条件可以作为分离条件。
Sampleபைடு நூலகம்~ 20mg/mL Mobile phase：A, H2O + 0.1% HCOOH; B, ACN. 70%B, 10ml/min Column: Waters XTerra® Prep MS C18 column, 10 μm, 19x 250 mm, CV: ~ 71 mL
活性剂洗涤！清洗用乙醇或甲醇超声清洗。 • 请估算好做样时间，做完样后及时调回Flush的方法以节约溶剂和氮气。若有
人排队等待做样就通知下一个人来做样。
制备HPLC使用教程
• 流动相（水和乙腈）最好抽滤除气泡，再超声 • 和LCMS不同，流动相中可添加非挥发性缓冲盐如磷酸盐、硼酸盐，但用 完后一定要用纯水、纯乙腈冲洗体系，防止盐析出造成管路堵塞！（冲洗 先用50-50的比例冲洗3 CV，再用5-95冲洗2 CV） • 样品最好用初始比例的流动相溶解，如不能溶可加入DMSO促溶，不要用
EIC
MS中常见的加合离子 Positive： M+H [1] M+Na [23] M+NH4 [18] M+K [39] Dimer 2M+H [1] 2M+Na [23] 2M+NH4 [18] 2M+K [39]
Negative: M-H [-1] M+Cl- [35.37] M+HCOO- [45] M+TFA- [113]
checktune: MSD Tune >>> OK >>> Tune >>> checktune
质谱的调谐与校正
调谐和校正目标: 熟悉DuoSpray离子源在正离子模式下TOF的调谐和校正，包括仪器优化、手动校正和自动校正用户也可以用合适的溶液校正TOF MS和MS/MS的负离子模式，以及Q1的正离子和负离子模式。
由于篇幅限制，我们以正离子为例。
1.Analyst® TF软件和仪器硬件设置A.双击桌面上的图标打开Analyst® TF软件1.在导航栏（Navigation bar）中的Configure模块上双击Hardware Configuration2.点击LC + MS profile，选择Edit Profile编辑，然后选择MassSpectrometer TripleTOF 5600，点击Setup Device，保证Use calibrantdelivery system (CDS)是选上的3.点击OK，激活LC + MS profile，关闭窗口B.针设置（probe setting）1.APCI和ESI探针的位置取决于流速。
这些参数不是自动设置的，用户需每次使用前确认该位置2.在校正和调谐的练习中，ESI针的垂直和水平位置可以设置到5微米，APCI源的针也是5，并保证电晕针的位置是朝向APCI探针（Probe）的C.保证CDS校正管路在APCI正离子校正溶液瓶中的，没入溶液中；保证CDS的Peek管是与APCI源相连的D. 保证液相流路是从ESI针进入2.使用LC + CDS手动校正A.选择API Instrument项目B.在工具栏中点击红色的T按钮使仪器进入tuning模式C.双击导航栏中的Manual TuningD.点击Source/Gas栏，填入适合500 µL/min流速的适当参数，这些参数不是自动生成的，因此用户需要根据流速设置离子源的参数，推荐值如下所示：Field ValueGS1 50GS2 50CUR 30TEM 600ISFV 5500E.点击Ramp按钮右侧的下拉菜单，选择LC method1.选择A和B相的溶剂，50:50，等度，流速为500 µL/min。
LCMS仪器方法优化流程及注意事项
+
++ + - -- + -+ +
+ + -- + +
+
+
溶剂离子簇
+ + +
+
分析离子
ESI实验条件优化
气相离子的产生
表面活性高（具低溶剂化能）的离子将优先转移至雾滴表面，最
终转变为气相离子，故有较高的实验灵敏度—竞争机制：
应采用表面活性低的缓冲剂；
采用低浓度的挥发性的酸、碱及缓冲盐；
分子离子 分子离子是样品分子失去或得到一个电子而形成的M+•。分子离子代表
完整的样品分子，是其所有碎片离子的终极前体(ultimate precursor)。
准分子离子 取决于化合物的性质和质谱离子化方法及条件，可生成质子化或去质 子的分子，即[M+H]+、[M-H]－及加合物离子，如[M+Na]+、[M+Cl]－等，这些均为 偶电子（even electron）离子。 同位素峰 这是由于有丰度的较低的同位素存在而产生的 。
That’s really all there is 有多少
是什么？
和/或
定量信息
质谱峰的强度，色谱峰的峰面积
20
高分辨质谱和元素组成
高分辨质谱——准确质量，元素组成
1000
176 386
100 formulas
882
10
1347 1672
Possible
1
5687
0.1
0.05
0.01
断裂程度
APCI源的探头处于高温，对热不稳定的化合物就足以使其分解. 灵敏度 ESI有利于分析生物大分子及其它分子量大的化合物，而APCI更适合于 分析极性较小的化合物。 APCI源不能生成一系列多电荷离子，ESI可生成一系列多电荷离子 与ESI不同, APCI也是正相液相色谱－质谱的接口
WatersLCMS液质联用培训讲义
校正的时候必须同时校正两个质量分析器的三种模式（静 态扫描、动态扫描、扫描速率补偿）的缘故。
Waters 四极杆质谱培训
©2005 Waters Corporation
仪器质量校正
Waters 四极杆质谱培训
仪器质量校正
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6. 混合扫描
• 样品：对羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟
基苯甲酸丁酯与氨基酸混合液。
• 要求：一次实验同时完成多种扫描组合方式 • 羟基苯甲酸甲酯/对羟基苯甲酸丙酯/对羟基苯甲酸
丁酯采用母离子扫描
• 氨基酸采用中性丢失扫描
Waters 四极杆质谱培训
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仪器质量校正
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5. 从下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯，从 下拉式选单选择适当的参考档案，如以碘化钠铯校正质 量范围两千以内可选择 Naics2 。确认后按开始键。
Waters 四极杆质谱培训
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实验要点:通过调谐仪器各项参数,不同化合物ESI/APCI的响应,毛细管电压,锥 孔电压,RF lens,离子能量,去溶剂化气温度,去溶剂化气流量,反吹气流量等参 数,找出目标化合物最佳响应参数,发挥最佳仪器检测灵敏度.
1．全扫描 full scan
Collision
MS1
Cell
MS2
Scanning (m/z M)
:609 (CV=45)
Waters 四极杆质谱培训
岛津离子阱飞行时间质谱仪LCMSITTOF操作指南
液相色谱质谱仪LCMS-IT-TOF操作指南空白页前言请在使用本产品前仔细阅读本指南。
感谢您购买本产品。
LCMS-IT-TOF控制软件LCMSsolution功能丰富。
本指南将对软件的基本功能进行说明。
首次使用LCMSsolution进行分析的用户，也可通过阅读本指南，掌握基本操作的分析流程。
有关具体功能请参考以下使用说明书：• 硬件《Shimadzu High-Performance Liquid Chromatograph/Mass Spectrometer LCMS-IT-TOF Operation Manual》(225-18046)• 软件《Shimadzu High Performance Liquid Chromatography / Mass Spectrometry Workstation [LabSolutions/LCMSsolution] Operation Manual》(225-18036)免责声明•本说明书内容如有改动恕不另行通知。
•本说明书内容力求准确，如有错误或遗漏敬请谅解。
•本说明书版权归株式会社岛津制作所所有。
未经本公司许可不得转载、复制部分或全部内容。
•Windows是美国Microsoft Corporation在美国及其他国家的注册商标。
在本说明书中记载的其他公司名及产品名是各公司的商标及注册商标。
此外，本说明书中不对TM、®标记做明确说明。
© 2011Shimadzu Corporation. All rights reserved.本说明书是日文版《液相色谱质谱仪LCMS-IT-TOF系列操作指南》(225-18407) (修订版B 2011年5月) 的译文。
i目录前言_____________________________________________________________ i1.仪器及LCMSsolution的启动 ___________________________________ 12.自动调谐____________________________________________________ 33.方法文件的创建______________________________________________ 54.开始分析___________________________________________________ 175.批处理分析_________________________________________________ 196.结束分析___________________________________________________ 237.后处理_____________________________________________________ 258.打印结果___________________________________________________ 379.附录_______________________________________________________ 39 9.1MS参数指南 __________________________________________________________ 39 9.2LC参数指南 __________________________________________________________ 42 9.3维护 _________________________________________________________________ 53 9.4后处理质量校准_______________________________________________________ 54 9.5质量校正 _____________________________________________________________ 68 9.6LCMS-IT-TOF系列基本构成图 __________________________________________ 77ii1. 仪器及LCMSsolution的启动1. 请确认氮气、氩气的供给。
液相色谱质谱操作指南
1液相色谱/质谱 LCMS-IT-TOF 操作指南岛 津 公 司此页空白2iLCMS-IT-TOF 的控制软件LCMSsolution 的功能非常强大，因此我们可能会产生诸如怎样才能完成某一特定分析，某一特定的操作过程是否能够为我们带来期望的结果之类的疑问。
此指南将不介绍LCMSsolution 的所有功能，而是针对分析过程中用到LCMSsolution 的分析流程加以介绍。
首次应用LCMSsolution 时，此指南不但能使您了解到此软件所能提供的功能，还将能使您了解到如何运用这些功能提高您的工作效率。
这些功能的具体描述请您参考以下的操作说明。
仪器硬件的介绍，请您参考“Shimadzu High-Performance Liquid Chromatograph/Mass Spectrometer LCMS-IT-TOF Operation Manual ”（225-18046）。
仪器软件的介绍，请您参考“Shimadzu High-Performance Liquid Chromatograph/Mass Spectrometry Workstation [LabSolutions /LCMSsolution] Operation Manual ”（225-18036）。
注意© 2008 岛津公司。
保留所有权利。
● 本手册的内容更改恕不另行通知，我们对说明书中所描述内容的后果不承担任何责任● 在撰写时，已经尽力保证本说明书内容的正确性。
一旦发现任何错误或疏漏，即使不是急需更改的小错误，我们做到了尽快更正。
● 本说明书的版权由岛津公司所有，严禁在没有岛津公司的许可下以任何形式复制此说明书或其中的部分内容。
● Microsoft 和Windows 是微软公司在美国和/或其它国家的商标。
本说明书中其它公司名或产品名是各自公司的商标或注册商标。
TM 和®在本说明书中省略介绍-----------------------------------------------------------------------------------------------------------ⅰ内容-----------------------------------------------------------------------------------------------------------ⅱ1. 启动系统及LCMSsolution ----------------------------------------------------------------------------12. 自动调谐--------------------------------------------------------------------------------------------------33. 创建方法文件--------------------------------------------------------------------------------------------54. 开始分析-------------------------------------------------------------------------------------------------155. 批处理----------------------------------------------------------------------------------------------------176. 结束分析-------------------------------------------------------------------------------------------------217. 再解析---------------------------- -----------------------------------------------------------------------228. 输出结果-------------------------------------------------------------------------------------------------349. 附录-------------------------------------------------------------------------------------------------------359.1 MS参数指南------------------------------------------------------------------------------------359.2 LC参数指南-------------------------------------------------------------------------------------389.3 维护------------------------ -----------------------------------------------------------------------499.4 后处理质量数校准------------------------------------------------------------------------------509.5 质量数补偿---------------------------------------------------------------------------------------639.6 LCMS –IT-TOF基本配置图-----------------------------------------------------------------72 ii1.启动系统及LCMSsolution1.确保氮气及氩气开启打开LC单元电源，对泵及自动进样器进行排液操作2.双击桌面上的（LCMSsolution）图标，启动软件（见图1-1）图1-13.双击[Analysis]中的将使用仪器的图标（通常是仪器1）。
(LCMSMS)简单操作流程
Labsolutions (LCMSMS)简单操作流程1. Labsolution 联机设置(CBM-20A/Alite PC IP 地址设定):1.1进入PC的网络“本地连接” “属性”。
1.2按如下设定局域网IP地址2. LabSolution 软件设置:绿色。
【注：如果该图标为黄色，说明系统正在启动，请稍等片刻。
如果该图标为红色，表示有错误产生，请重启电脑。
】2.1 Labsolutions 软件启动：Lab solutions 状态确认：电脑开机完毕后，确认电脑右下方的相关图标1:36 PM 2/25/2010双击电脑桌面上的图标 LabSolutions ,等待，直到出现下面的界面:2.2LCMSMS 系统配置设置：2.2.1点击"Adminitration"进入管理员界面:2.2.2 点击“Instrument administration"进入仪器管理界面: 223点击“add”添加仪器名称:2.2.4在如下界面中输入“仪器名称”选择“仪器类型”:3.联机设置:3.1 LC联机设置：3.1.1双击需要运行的“仪器名称”3.1.2点击快捷菜单栏的“main”主快捷菜单栏:3.1.3 点击“system configuration"进入系统配置窗口:& Realtime Analysis (LCMS8O5O-System Administrator) - [Data Acquisition - teit.lcm)I 怯 Kle Edit View Method Initrument Acquiiition Dau Tools Window Help L 3曰■ Bl『民囘反词副？I画* J3丄4双击右侧窗口的“Instrument (communication settings)进入系统连接设置界面: 3.1.5在LC项中选择相应的“CBM”类型，进入settings中刷新CBM的IP地址:3.1.6选择链接类型为“Ethernet”,点击“list”进入IP地址刷新:3.1.7确认如下界面中能够刷新出链接状态条:3.2MS链接设置：3.2.1选择相应的MS类型后点击“Setting”Instrument3.2.2选择链接类型为“USB",然后点击” List “：3.3.3确认如下界面中能够刷新出相应的仪器类型和系统设备号:3.2.4点击“OK”退出系统联机设置:3.2.5点击如下界面中的：“Auto Confiuration”进行系统自动配置:System ConfigurationModules Used for Analysis:3 LCMS:Au^o ConfigurationReset4.1真空系统启动: 4.1.1 Labsolution 主窗口中点击“instrument “双击需要进入的仪器系统:点击“OK”，启动实时分析程序。
LCMS 简易操作流程
LCMS 簡易操作流程(一) 為提升分析數據品質，請依下列方式進行樣品前處理1、純化。
鹽類會干擾質譜訊號，故樣品含有鹽類請先去除。
2、樣品應適用溶於水、Methanol及Acetonitrile等溶劑之高極性樣品，並控制濃度為0.5-10μM。
(1m g樣品以20-60μl相容溶劑溶解後以50%ACN +0.1%FA水溶液稀釋50×300倍) 。
3、無法全溶且有懸浮固體時應過濾或離心取澄清液以免阻塞管路。
(二) 測樣流程1、以syringe取100μl 80%ACN手動推針沖洗管路。
再以syringe取150μl配樣溶液並將syringe固定在樣品推送台上。
2、質譜儀參數設定。
(1) Capillary voltages: 2.5-3.5kV。
(2) Cone voltage:10-60V。
3、開氮氣，啟動氮氣供應系統(選按Gas)，穩定後按操作按鈕(operate)。
4、設定注射速度(50μl/min)啟動樣品注射(syringe pump)，推針50μl後將流速緩降至10μl後按(Acqu)。
5、設定存檔參數：file name、tex t、range) ，按(Start)開始測background。
6、樣品測定時可即時監看。
測樣完成按(Standby)並停止樣品注射。
7、取150μl濃度0.5-10μM之樣品。
質量監測得穩定peak或推針50μl後將流速緩降至10μl，按下(Acqu) 設定存檔參數後按(Start)。
8、測樣完成後取150μl配樣溶液沖洗管路至無樣品殘留。
9、降溫至100℃以下時按停氣體供應系統，關氮氣，簽使用記錄本。
10、印出質譜圖。
關螢幕。
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LCMS-IT-TOF 111
11
The LCMS-IT-TOF uses a solution of trifluoroacetic acid (TFA) and sodium hydrate as the standard sample to adjust sensitivity and resolution and to perform mass number calibration (ion trap and TOF analyzer) during autotuning.
Standard sample: P/N 225-06613-08 (200mL)
The autotuning procedure automatically optimizes the sensitivity and resolution, and adjusts the mass number using this standard sample.
11.1.1Preparation of the Standard Sample (Preparation by the Customer)
1
Solvents required (when approx. 3.5L of standard sample is prepared)Water (deionized water) 2250mL Acetonitrile ~2000mL 2
To 1000mL of water, add:Trifluoroacetic acid 1mL (0.1%)3
To 1250mL of water, add:Sodium hydrate 0.5g (10mM)4
Mix 750mL of each solution prepared in 2. and 3. (Total volume = 1500mL)The pH of this solution is approximately 2.8.5
Adjust the pH to 3.5 using the remaining sodium hydrate (10mM) solution. Record the final volume of the solution following adjustment of the pH.
6Add an equal volume of acetonitrile (to that recorded in 5.) to the solution prepared in 5.This is used as the standard sample.Final concentrations in the standard sample
Trifluoroacetic acid : 0.25mL/L
Sodium hydrate : approx.0.1g/L
112 LCMS-IT-TOF Calculated masses of sodium trifluoroacetate
Positive Ion [(CF 3COONa)n Na]+
Negative Ion [(CF 3COONa)n CF 3COO]
-After the calibrant is flowed for tuning process, cleaning operation from 6 port valve to probe is required. Clean the tube and probe as shown below.
With HPLC system
Clean the tube and probe by flowing solvent (e.g. acetonitrile) about 20 minutes, 0.2mL/min.
Without HPLC system (nanoLC system/infusion analysis)
Clean the tube and probe by flowing 4mL solvent (e.g. acetonitrile) with clean syringe (accesory).。