微生物自主实验-活性的测定
抗菌活性测试步骤
抗菌活性测试步骤抗菌活性测试步骤及实验器材第一天中午12点1、准备9个锥形瓶（1个备用，4个培养菌液，4个稀释菌液），洗净，烘干2、先在备用锥形瓶中配制500ML液体培养基，溶解后，倒入其余8个锥形瓶中，每瓶50ML。
盖上半透膜，用绳或皮筋系住，在用报纸盖上一层，用皮筋系住。
液态培养基：蛋白胨5g，酵母2.5g，氯化钠5g，水500ML，按比例增减。
（半透膜）第一天下午3点3、将9个锥形瓶，200μL枪头两盒，10μL 枪头，1ML枪头，用报纸包住，放入灭菌箱中，灭菌20min。
121摄氏度。
（灭菌锅）第一天下午4点4、配药液，按照0.0010g—1ML，0.0020g—2ML，这种浓度配药液配出的浓度为1000μg/mL,溶剂为DMSO：水=1:1.等着全部溶解。
第一天晚上6点5.稀释药液，将配制好的药液浓度为1000，500，250，125μg/mL，四个浓度梯度。
第一天晚上9点6、将超净台打开紫外灯灭菌20min，点燃酒精灯，从灭菌箱取出4个锥形瓶，把接种环放在酒精灯上烧红，冷却几秒，从固体斜面菌落中划出一点，放在培养基中，放入摇床（转速131，温度37摄氏度）中培养12个小时。
超净台，摇（从左到右依次为接种环，床）第三天早上11点10、加完MTT，放在37度恒温箱中，培养4个小时。
（恒温箱）第三天下午三点11、3小时后，取出，大概称量下96孔板的重量（使他们放在离心机中可以平衡，相对的板质量差不可以超过0.02克）放在离心机中离心3分钟，3050RPM 3 MIN,离心结束后，甩掉上层清液（），用排枪在96孔板中每孔加入150μLDMSO （二甲基亚砜），轻摇5-30min溶解，放在酶标仪中测量，得到数据。
（从左到右依次为排枪，离心机，酶标仪）仪器：锥形瓶, 半透膜, 200μL枪头两盒，10μL枪头，1ML枪头, 灭菌箱, , EP 管, 超净台, 接种环,酒精灯，摇床，96孔板，枪，恒温箱，离心机，酶标仪。
微生物学类实验指导书(下)蛋白酶产生菌活力测定及果酒酵母分离纯化
实验一产酶微生物的分离、纯化与选育酶是生物体内进行生物化学反应的催化剂，在生物体中已发现的酶有2500多种。
由于酶促反应的特异性强，反应条件温和，安全无毒,环境污染少，在洗涤剂、皮革、纺织、造纸、诊断、制药等领域具有广泛的应用价值。
目前,能由工业生产的50多种酶制剂包括蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶,葡萄糖异构酶等，这些酶大部分是由霉菌、细菌、链霉菌和酵母菌产生的.通过本实验项目，使学生学会从自然界中分离产酶微生物的方法，菌种的纯化技术及其高产菌的选育技术。
2。
蛋白酶产生菌的分离与纯化2。
1 实验目的学习从自然界中分离蛋白酶产生菌并纯化.2。
2 实验原理许多细菌和霉菌产生蛋白酶,细菌中的芽孢杆菌是常见的蛋白酶产生菌.本实验将土壤样品（或其他样品)悬液加热处理，杀死非芽孢细菌及其他微生物后进行划线分离得到芽孢杆菌，将其接种到酪蛋白平板进行培养，根据酪蛋白平板的水解圈作初筛.也可直接将细菌或霉菌接种到酪蛋白平板进行培养,分离筛选其他蛋白酶产生菌。
2.3 实验仪器与材料土壤样品或其他富含蛋白质的样品、牛肉膏蛋白胨培养基平板、酪蛋白平板、无菌水（带玻璃珠）、芽孢染色液;显微镜、恒温水浴锅、酒精灯、接种针、游标卡尺、无菌移液管、无菌试管、量筒等。
2。
4 实验方法与步骤2。
4.1 分离1)采集土壤样品，用无菌水制备1:10土壤悬液；2）取1:10土壤悬液5ml,注入已灭过菌的试管中，将此试管放入75—80 ℃水浴中热处理10 min，以杀死非芽孢细菌；3）取加热处理过的土壤悬液100-200 μL，涂布接种到牛肉膏蛋白胨培养基平板，将平板倒置,于30-32 ℃培养24-48 h；4)对长出的单菌落进行编号，选择表面干燥、粗糙、不透明的菌落，挑取少许菌苔涂片,做芽孢染色，判断是否为芽孢杆菌。
2。
4。
2 筛选1）从判定为芽孢杆菌的菌落处，分别挑取少许菌苔，先接种含酪蛋白的斜面培养基,再点接于含酪蛋白的平板，30-32 ℃培养24—48 h，测定平板上菌苔直径和水解圈直径.2）水解圈直径与菌落直径比值大的那个菌株对应的斜面培养物，可作为进行诱变选育或酶发酵、酶活力测定菌株。
微生物生物化学实验技术
微生物生物化学实验技术微生物生物化学实验技术是一门涉及微生物和生物化学的实验技术学科，其研究内容包括微生物的生长特性、代谢途径、原生态功能等方面。
在实验室中，通过一系列实验手段和技术手段，可以研究微生物的生物化学过程，揭示微生物在环境中的作用和影响。
一、菌种的保存和鉴定在微生物生物化学实验技术中，首先需要进行菌种的保存和鉴定工作。
菌种的保存是为了长期保存某种微生物，以备后续实验使用。
常见的保存方式包括在琼脂培养基上制备菌斑、制备冻干粉末或低温冷冻保存等。
而菌种鉴定则是为了确保所使用的微生物种属准确，常见的鉴定方法包括形态学观察、生理生化特性检测、分子生物学技术等。
二、微生物生长曲线的绘制和分析微生物生长曲线是研究微生物生长和繁殖规律的重要手段。
利用实验技术，可以通过不同培养条件下不同时间点的菌液浓度进行测定，从而得到微生物生长曲线。
通过绘制生长曲线并进行数据分析，可以了解微生物在不同生长阶段的生长速率、最大生长速率、最大生长速率等参数。
三、微生物代谢产物的检测和分析微生物代谢产物是微生物在代谢过程中产生的各种物质，包括有机酸、氨基酸、酶等。
通过实验技术，可以对微生物代谢产物进行检测和分析，了解微生物的代谢途径和代谢产物的种类及含量。
常见的检测方法包括高效液相色谱法、气相色谱-质谱联用法等。
四、微生物酶活性的测定和应用微生物酶是微生物体内产生的一种特殊蛋白质，具有催化作用。
通过实验技术，可以对微生物酶的活性进行测定，了解酶的催化特性和反应底物的种类。
此外，微生物酶在生物化学工程、食品工业、医药等领域有着广泛的应用，通过研究微生物酶的活性和性质，可以进一步开发和利用其潜在的应用价值。
五、微生物工程技术的发展趋势随着现代科学技术的不断发展，微生物工程技术也在不断更新和完善。
新兴的技术包括代谢工程、系统生物学、合成生物学等，将为微生物生物化学实验技术的发展带来新的契机和挑战。
同时，微生物生物化学实验技术在环境保护、资源利用、新药开发等方面具有广阔的应用前景，将为人类社会的可持续发展做出重要贡献。
生物化学实验指导：酶的活性测定实验
生物化学实验指导：酶的活性测定实验1. 引言在生物化学领域，测定酶的活性是一项重要的实验技术。
酶是生物体内参与许多生化反应的催化剂，能够加速反应速率。
通过测定酶的活性，我们可以了解其催化效率和特性。
本实验旨在教授如何测定某一种酶的活性，并提供相应步骤和分析方法。
我们选择一种常见的酶作为例子，详细介绍实验操作步骤和数据处理方法。
2. 实验材料•酶提取物•底物（适合所选酶催化反应的底物）•缓冲溶液（pH值适合所选酶催化反应的缓冲溶液）•辅助试剂（如辣根过氧化物酸）•试剂盒或相关仪器设备3. 实验步骤步骤1：制备必要溶液1.准备合适浓度并调整pH值适合实验目标的缓冲溶液。
2.准备底物溶液，确保其浓度符合实验要求。
步骤2：制备标准曲线1.准备一系列不同底物浓度的标准溶液。
2.按照指定的方法将不同底物浓度的标准溶液与酶提取物混合。
3.在一定时间间隔内，记录反应进程中释放的产物（如颜色变化）。
步骤3：样品预处理1.从所需生物样品中提取目标酶。
可以采用相关提取方法，如超声波法、机械破碎法等。
2.将提取得到的酶溶液进行适当稀释，以便后续操作过程中能够在合适浓度范围内工作。
步骤4：活性测定实验1.将提取得到的目标酶与底物溶液以及其他必要试剂加入适当容器中，形成反应体系。
2.控制温度和pH值，确保反应条件符合要求。
3.运行反应体系一段时间，并记录反应进程。
步骤5：数据处理和分析1.使用已经制备好的标准曲线，根据测试产生的光吸光度（或其他测量结果）计算出底物的浓度。
2.根据所得底物浓度和反应时间，计算出酶催化反应速率。
3.通过对不同条件组的实验数据进行比较和统计分析，可以进一步了解酶活性受到哪些因素影响。
4. 结论通过本实验指导，我们能够学会如何进行酶的活性测定实验，并熟悉基本的数据处理和分析方法。
这一实验可以为进一步探究酶催化机制、优化酶工艺等提供基础。
实践中，可以根据具体需求对该实验设计进行适当调整和补充。
微生物酶活性试验方法
微生物酶活性试验方法脱氢酶活性测定方法参考：【周春生, 尹军. 一脱氢酶活性检测方法的研究[J]. 环境科学学报, 1996, 4: 400-405.】以及【环境工程微生物检验手册[M]. 中国环境科学出版社, 1990.】（一）试验方法：（1）水样预处理：取污泥混合液10ml，放入离心管中离心5min后去除上清液，用纯水反复清洗三次，最后向样品中加入纯水至10ml搅拌均匀。
（2）加试剂：将处理后样品转移至25ml比色管中，依次加入7.5mlTris-HCl缓冲液（PH=8.4）、2.5ml硫酸钠溶液（0.36%）、2.5ml纯水以及2.5mlTTC溶液（0.4%）、混匀。
（3）样品培养：将比色管置于37℃条件下水浴恒温振荡器中培养，培养5min 后吸取5ml于离心管内，加0.5ml甲醛固定以作样品空白；（4）终止酶反应：继续培养30min，然后向管中加入2ml甲醛终止酶反应；（5）样品萃取：将样品培养液以5.5ml为1份分装在四个离心管中，连同样品空白对照管一道离心5min, 弃去上清液向各离心管内加6ml丙酮, 研磨搅拌混合,于37℃条件下萃取TF10min后；（6）比色分析：将萃取液进行离心5min,用1cm的比色皿取上清液显色液, 于波长485nm处进行比色, 记录吸光值,根据样品显色液与样品空白的吸光值之差, 查标准曲线, 进而计算出TF的生成速度, 即脱氢酶活性(mg/(L*h))（二）试剂：（1）0.4％三苯基四氮唑氯化物溶液（氯化三苯基四氮唑，TTC）:4g-2、3、5-氯化三苯基四氮唑，稀释至1L至容量瓶中，棕色瓶保存；（2）Tris-HCl缓冲液：称取6.057gTris（三羟甲基氨基甲烷, 分析纯, 北京化学试剂厂），加入20ml 1mol/L HCl溶液, 再定容至1L；（3）硫酸钠溶液（0.36%）：3.6g硫酸钠（Na2SO3）稀释至1L容量瓶中；（4）TTC标准溶液：称取0.05gTTC定容与50ml茶色容量瓶中此溶液即为1mg/L的标准溶液。
土壤微生物量及土壤酶活性测定方法
2 土壤微生物量测定土壤微生物量（MB）是指土壤中体积小于5x103叩3的生物总量，但活的植物体如植物根系等不包括在内］。
它通过调控土壤中能量和养分循环以及有机物转化，来反映土壤同化和矿化能力。
土壤微生物生物量包括土壤微生物生物量碳、土壤微生物生物量氮、土壤微生物生物量磷和土壤微生物生物量硫，但一般情况下土壤微生物生物量的大小以土壤微生物生物量碳来表示。
2.1熏蒸浸提法2.1.1原理利用不同的浸提剂，通过氧化滴定法来测定土壤浸提液中有机C、N和P提取的可溶性有机碳含量和微生物量C之间存在较稳定的比例关系。
2.1.2则定步骤1.根据土壤样品含水量，调节土壤含水量为田间持水量的50%，25 ℃下密封培养10 d，以保持土壤均匀和不同地方所得结果的可比性。
2.氯仿熏蒸24 h后，用真空泵反复抽气，直到土壤闻不到氯仿气味为止。
根据所测对象不同选择不同的提取剂浸提，振荡浸提30 min后，立即分析浸提液中所测对象的含量或放入-15 ℃下保存。
表1指出氯仿熏蒸浸提法测定不同土壤微生物量所选用的浸提剂及其条件。
表1姓熏薪髓喉土就生帽条件Table I F'E fcrdieneasuirm aitcondiocnsof soilm riobialbmass土情即鄢Detemiia血cfhdicaMr Eitatnt土觥生醯K(=D,3S 或D.45土觥物1小K国加士躺蜘M恻般注®拓牖腌雄魂航觥刎楠融脑机装痴螭定雕耐帕帆小麒眼3 土壤酶活性测定土壤酶活性均用风干土壤。
土壤转化酶活性和过氧化氢酶活性、脲酶活性、磷酸酶活性依次用硫代硫酸钠滴定法、高锰酸钾滴定法、靛酚蓝比色法和磷酸苯二钠比色法测定（关松荫,1986）3.1脲酶一一靛酚蓝比色法脲酶的活性可以用来表示土壤供氮能力（一）方法原理土壤中脲酶活性的测定是以尿素为基质，酶促水解生成的氨与酚类化合物起反应生成蓝色的靛酚，颜色深度与氨含量相关，因而用于脲酶活性的测定。
酶的活性测定实验报告
酶的活性测定实验报告实验目的：本实验旨在通过测定酶的活性，了解酶在不同条件下的反应速率，并熟悉酶的活性测定方法。
实验原理：酶是一种生物催化剂，可以加速生物体内许多生化反应。
酶的活性可以通过测定酶催化反应的速率来间接衡量。
本实验采用辣根过氧化物酶催化紫苏过氧化物酸钾（Guaiacol peroxidase催化H2O2）的反应，通过测定紫苏过氧化物酸钾在酶作用下与H2O2反应生成的天然染料产物对应颜色的吸光度变化，来确定酶的活性。
实验步骤：1. 实验前准备：将所需试剂和设备准备齐全，包括辣根过氧化物酶、紫苏过氧化物酸钾、H2O2、标准曲线所需的辣根酚浓溶液、缓冲液等。
2. 标准曲线的制备：依据辣根酚浓溶液的吸光度与其浓度的线性关系，制备一系列浓度不同的辣根酚标准溶液，浓度范围可根据实验需要自行设定。
3. 酶的活性测定：a. 取一定体积的缓冲液倒入试管中，并在室温下预热。
b. 向试管中加入一定体积的辣根过氧化物酶，尽量保持温度稳定。
c. 加入一定体积的紫苏过氧化物酸钾溶液，并立即开始计时。
d. 向混合液中加入适量的H2O2，混合均匀后立即开始计时。
e. 在一定时间间隔内，分别取出试管中适量的反应液，加入相应的辣根酚溶液，混合均匀后置于恒温水浴中反应一段时间。
f. 将反应液取出，用紫外分光光度计测定吸光度值。
4. 数据处理：a. 将浓度不同的辣根酚标准溶液的吸光度值与其浓度绘制曲线，得到标准曲线方程。
b. 将实验得到的吸光度值带入标准曲线方程，计算出相应的辣根酚浓度。
c. 根据反应体系中辣根酚的浓度变化，计算出酶催化反应的速率。
结果与讨论：根据实验数据，我们绘制了辣根酚浓度与吸光度的标准曲线，通过该曲线我们可以计算出实验得到的吸光度值对应的辣根酚浓度。
将实验中测得的吸光度值带入标准曲线方程，我们可以计算出不同时间点反应体系中辣根酚的浓度。
根据实验前的设定，我们可以计算出不同时间点酶催化反应的速率。
通过观察速率随时间变化的曲线，我们可以得出酶反应速率的变化规律。
(完整word版)乳酸菌活性测定具体操作步骤
乳酸菌活性测定具体操作步骤一、培养基的配制：改良TJA培养基(改良番茄汁琼脂培养基）番茄汁 50mL酵母抽提液 5g肉膏 10g乳糖 20g葡萄糖 2gK 2HPO42g吐温80 1g乙酸钠 5g琼脂 15g水加至。
1000mL pH6.8±0。
2（用10mol/l的氢氧化钠调节）番茄汁的制作：将新鲜番茄洗净,切碎（切勿捣碎），放入三角烧瓶，置4℃冰箱8～12h，取出后用纱布过滤即成。
如一次使用不完，可将其置入0℃冰箱，可保存四个月。
使用时让其在常温下自然溶解。
制法:将所有成分加入蒸馏水中，加热溶解，校正pH6。
8±0.2。
分装烧瓶，高压灭菌121℃ 15~15min。
临用时加热熔化琼脂，冷至50℃时使用。
二、器材lm1无菌移液管,无菌平皿,无菌试管，塞子，试管架,酒精棉、70～75％酒精、酒精灯、镊子、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱等，电子天平,洗耳球，三角瓶，烧杯等。
三、操作步骤（实验步骤按实验操作进行增减）l．编号：（每个样的操作按下表进行编号和操作）注：酸奶由一个组成员做即可,酸奶稀释倍数要做到10—8.平板上还需标明班级,组号，样品种类（分瓶中和管内)。
其中倒平板时酸奶做6、7、8三个梯度，酸奶粉做2、3、4三个梯度（根据具体情况定）。
酸奶粉做2个平行,原酸奶做3个平行。
2．配置酸奶奶粉溶液：以无菌操作（即在超净工作台上操作，电子天平、称量纸、药匙、事先放入超净工作台上紫外杀菌30min)称取1g 奶粉溶解于10—1试管无菌生理盐水中配成1:10的均匀稀释液。
将10-1试管置试管振荡器上振荡（此处由于实验条件有限，盖住硅胶塞，右手左右晃动震荡即可）,使菌液充分混匀.酸奶则吸取1ml溶解于另一支10—1标号无菌生理盐水中配成1：10的均匀稀释液。
3、稀释用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的1：10的奶粉溶液（待测样品) 沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的标号10—2试管内 (注意吸管尖端不要触及管内稀释液）。
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活性测定
一、测定方法
分离出的单菌落后，用打孔器在单菌落上打取菌落块儿分别将菌落块儿以菌落面向上的方式放置在已经涂布有大肠杆菌的平板上，培养48小时后测量抑菌圈的直径。
二、测定结果及分析
根据平板上色素的有无和抑菌圈的有无可将实验得到的放线菌分为三种：产黑色素和抗生素的放线菌、只产黑色素的放线菌和既不产黑色素又不产抗生素的放线菌。
1.产黑色素和抗生素的放线菌
由图可知，此种放线菌对大肠杆菌的抑菌圈直径在13mm左右，具有比较强的抑菌作用。
并且在产生抗生素的同时产生了黑色素。
2.只产黑色素的放线菌
由实验结果初步判定该菌株为只产黑色素的放线菌。
但是经分析也有可能是实验过程中，与测定第一种放线菌所用的大肠杆菌不同，
大肠杆菌可能产生了抗药性，才会导致没有抑菌圈的出现。
所以有“此菌株与第一种放线菌是相同”的猜想，需要后续鉴定过程鉴定。