饲草试样制备及常规成分检测技术规程：酸性洗涤木质素(ADL)测定
纤维素、半纤维素、木质素测定
纤维素含量的计算：纤维素=ADF（%）－经72%硫酸处理后的残渣（%）酸性洗涤木质素（ADL）含量的计算：ADL（%）=残渣（%）－灰分（硅酸盐,%）酸性洗涤木质素和酸不溶灰分（AIA）测定的优化：把酸性洗涤纤维置于50ml烧杯中，加入5ml 72%硫酸，20℃水解3h，然后加水45ml，室温过夜，次日用已称恒重的3号砂芯漏斗过滤，水洗残渣至pH6.5，于60℃烘干，称重。
把剩余残渣在马福炉中550℃经2.5h灰化，测得灰分重量。
洗涤优化：经过实际试验，发现中性洗涤纤维测定和酸性洗涤纤维测定中用丙酮冲洗这步效果不大，测量精度要求不高时，可省略。
方法一：化学滴定法（我们测定出来的结果较文献报道偏低）（一）纤维素含量的测定1.0.1N2.K（2）（3）（4）（5）（6）（7）定，用去（8）（9）1. 0.5%淀粉，2.（1）（2）5min （3）（4）（5）（6）（7）（8）（9）移液管吸取10mL滤液，加入10mL碱性铜试剂，盖好在沸水中煮15min（10）冷却，加入5mL草酸-硫酸混合液，加入0.5mL 0.5%淀粉，用0.01N硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色消失，用去b mL（11）取10mL碱性铜试剂，加5mL草酸-硫酸混合液，再加10mL滤液，加入0.5mL 0.5%的淀粉，0.01N硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色消失，用去a mL（12）生物质中半纤维素的含量计算公式x% = 0.9×100 [ 248－（a－b）]（a－b）/10000×10×n（三）木质素含量的测定1. 所需溶液1%醋酸，丙酮，73%硫酸，10%氯化钡溶液，0.5N重铬酸钾溶液，浓硫酸，0.1 N硫酸亚铁铵溶液，试亚铁灵指示剂。
2. 实验步骤（1）标定新配的0.1N硫酸亚铁铵溶液, 滴定度为K（2）称取自然风干的生物质粉末0.05-0.1g，数值为n（3）装入离心管，加入10mL 1％醋酸，摇动5min混匀（4）离心，用5mL 1％醋酸洗沉淀（5）加丙酮3-4mL，在摇荡的情况下浸泡3min，洗三次（6）用玻璃棒将沉淀沿管壁分散开，将离心管放热水中使沉淀充分干燥（7）在干燥沉淀中加入73％硫酸3mL，用玻璃棒搅匀，挤压成均匀的浆液（8）室温下放置一夜（9）加入10mL蒸馏水，搅匀，置沸水中5min（10）冷却，加入0.5mL 10%氯化钡溶液，搅匀，离心，倒出清液，分别用10mL蒸馏水冲洗沉淀两次，每次要混匀原理：生物质（浒苔、锯末和玉米秸秆）在加热的情况下用醋酸和硝酸的混合液处理，在这种情况下，细胞间的物质被溶解，纤维素也分解成单个的纤维，木质素、半纤维素和其它的物质也被除去。
饲料分析与检测实验：（VanSoest）中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定方法
实验六、（Van Soest）中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定方法【学习目标】了解饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）的测定意义，掌握饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）检测的原理、实验方法，并注意对测定结果的分析和讨论。
一、目的传统的粗纤维测定方法存在着明显的缺点，即所测得的结果包括部分半纤维素和纤维素，以及大部分木质素在内的一组复合物，又因为有部分半纤维素和少量纤维素、木质素溶解于酸碱溶液中，被计算到无氮浸出物中去了。
因此，传统方法测得的饲料中粗纤维和无氮浸出物的含量均不能反映出饲料本身被家畜利用的真实情况。
而范氏洗涤纤维分析法则能弥补这些不足，可以准确地获得植物性饲料中所含的半纤维素、纤维素、木质素以及酸不溶灰分的含量，这在纤维素的分析测定中是一项非常重要的改革。
二、原理植物性饲料如一般饲料、牧草的粗纤维经中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）分解，则大部分细胞内容物溶解于洗涤剂中，其中包括脂肪、糖、淀粉和蛋白质，统称为中性洗涤剂溶解物（NDS），而不溶解的残渣为中性洗涤纤维（NDF），这部分主要是细胞壁部分，如半纤维素、纤维素、木质素、硅酸盐和极少量的蛋白质。
酸性洗涤剂可将中性洗涤纤维（NDF）中各组分进一步分解。
植物性饲料可溶于酸性洗涤剂部分称为酸性洗涤剂溶解物（ADS），主要有中性洗涤剂溶解物（NDS）和半纤维素，剩余的残渣称为酸性洗涤纤维（ADF），其中含有纤维素、木质素和硅酸盐。
此外，由中性洗涤纤维（NDF）与酸性洗涤纤维（ADF）值之差即可得到饲料中半纤维素的含量。
酸性洗涤纤维经72.0%的硫酸消化，则纤维素被溶解，其残渣为木质素和硅酸盐，所以，从酸性洗涤纤维（ADF）值中减去72.0%硫酸消化后残渣部分即为饲料中纤维素的含量。
将经72.0%硫酸消化后的残渣灰化，灰分则为饲料中硅酸盐的含量。
而在灰化中逸出的部分即为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。
酸性洗涤纤维和木质素测定的国际标准
外 都小 于 １％ ０ 这些 数据可 与 Ｎ Ｆ法获得 的数 据 Ｄ
相 比。这可能 是小麦 Ａ Ｆ含量低 的原 因。表 １中 Ｄ
定 人员拿 到 的样 品 ， 号从 １ １ ． 盲重 复 的 ． 标 ～２是 不 用识 别样 品种类 ２ ２个 参 与研 究 的实 验 室 中 ．８个 用 Ｆ ｓ １ ｏｓ的
最 近 已 由 国际 分 析 师 协会 （ Ｏ Ｃ） 国际 标 准 化 Ａ Ａ 、
组 织 （ ｏ） 欧洲标 准化 委员会 （ Ｅ 联合 发布 。 ｉ 及 ｓ Ｃ Ｎ）
（ ） 次分 析 ６个 样 品 的萃取 和过 滤 系统 是 ２一
集成 的
（） ３ 用抗凝 结 的快速真 空过 滤系统 。 （ ） 系统 同时 加 热 和 加试 剂 与 水 时 ． 试 ４当 与 剂 的接 触最小 （ ） 剂加 入 系统 也可 简单 地 冲洗 粘 在仪 器 ５试
壁 的样 品
青贮料 青贮料
了。这个 标准也认 为 Ｆｂ ｒ ｃ系统是 一个 有效选 ｉｅ ｅ ｔ
择 。与 常规 的手 工操 作 （ 在烧 杯 中回流 ） 比较 ， 相 Ｆｂ ｒ ｃ 置 的优 点可 以总结 如下 ： ｉｅｔ 装 ｅ （ ） 转 移 样 品 可 改 进 准 确 和精 确度 ； 样 １不 称 品人 钳锅并 保 留到整个分 析过 程 。
Ｎ Ｆ测 定 国 际 标 准 化 方 法 （ Ｎ ＩＯ １ ９ ６２ ０ ） Ｄ Ｅ Ｓ ３ ０ ： ８ ０
１ 材 料 和 方 法
图 １ Ｖ ｎ Ｓ ｅ ｔ 洗 涤 纤维 体 系 ａ ｏｓ 的
１ 样 品 和 实验 室 ． １
选 择 用 作 研 究 的 样 品是 ： 末 、 麦 、 饲 锯 小 牛 料、 豆粕 粉 、 叶草 青贮 料和青 草青 贮料 。分析 三
纤维素、半纤维素、木质素测定
原理采用范氏（Van Soest）的洗涤纤维分析法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）原理: 植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
植物性饲料经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。
将72%硫酸处理后的残渣灰化，在灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。
试剂的配制中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）：准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H14O8Na2?2H2O，分析纯）和6.8g硼酸钠（Na2B4O7?10H2O，分析纯）放入烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S，分析纯）和 10ml乙二醇乙醚（C4H10O2，分析纯）；再称取4.56 g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，分析纯）置于另一烧杯中，加入少量蒸馏水微微加热溶解后，倒入前一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000ml，其中pH 值约为6.9~7.1（pH值一般勿需调整）； 1N 硫酸：量取约27.87 ml浓硫酸（分析纯，比重1.84，98%），徐徐加入已装有500ml蒸馏水的烧杯中，冷却后注入1000ml容量瓶定容，标定；酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）：称取20g十六烷三甲基溴化铵（CTAB，分析纯）溶于1000ml1N硫酸，必要时过滤；中性洗涤纤维测定准确称取1.0000g样品（通过40目筛）置于直筒烧杯中，加入100ml中性洗涤剂和数滴十氢化萘及0.5g无水亚硫酸钠。
将烧杯套上冷凝装置于电炉上，在5~10min内煮沸，并持续保持微沸60min。
煮沸完毕后，取下直筒烧杯，将烧杯中溶液倒入安装在抽滤瓶上的已知重量的玻璃坩埚中进行过滤，将烧杯中的残渣全部移入，并用沸水冲洗玻璃坩埚与残渣，直洗至滤液呈中性为止。
范氏中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维测定的实验方案1(修改)
饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）和木质素（ADL）的测定实验方案实验原理纤维分析法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）。
植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
中性洗涤纤维经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
2 所需试剂十二烷基硫酸钠溶液（中性洗涤剂）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA，化学纯）、四硼酸钠（Na2B4O7.10H2O）、磷酸氢二钠、乙二醇乙醚、十六烷基三甲基溴化铵、硫酸、丙酮，无水亚硫酸钠，十氢化萘，95%乙醇3 所需仪器分析天平：感量0.0001 g、容量瓶、锥形瓶、滴定管、移液管、洗瓶、洗耳球、滴管、量筒。
粗纤维测定仪（SLQ-6）、古氏坩埚、干燥器（以氯化钙或变色硅胶为干燥剂）、酸度计4 试剂的配制4.1 30g/L十二烷基硫酸钠（中性洗涤剂）溶液。
称取18.61g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，化学纯）和6.81g四硼酸钠（Na2B4O7.10H2O）和10mL已二醇乙醚同放入1000mL烧杯中，加入少量水加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠。
称取11.9644g磷酸氢二钠（含12水），置于另一烧杯中，加入少量水，微微加热溶解后倾入第一个烧杯，稀释至1000mL。
此溶液PH在6.9-7.1 .4.2 20g/L十六烷三甲基溴化铵（酸性洗涤剂）溶液。
称取20g十六烷三甲基溴化铵，溶于1000mL已经标定过的0.5mol/L硫酸溶液中，搅动溶解，必要时过滤。
4.3 0.5 mol/L硫酸溶液。
称取49g（27.87mL）浓硫酸，慢慢加入已有500mL水的烧杯中，冷却后注入1000mL容量瓶中，定容，标定。
（4.3.1标定硫酸的方法：称量1.6g在270-300℃灼烧至恒重的基准无水碳酸钠，称准至0.0001g。
溶解50mL水中，加入10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，用配制好的硫酸溶液滴定至溶液有绿色变为暗红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。
范氏纤维素测定方法
原理：采用范氏（Van Soest）的洗涤纤维分析法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）原理:植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。
植物性饲料经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。
酸性洗涤纤维经72%硫酸处理后的残渣为木质素和硅酸盐，从酸性洗涤纤维值中减去72%硫酸处理后的残渣为饲料的纤维素含量。
将72%硫酸处理后的残渣灰化，在灰化过程中逸出的部分为酸性洗涤木质素（ADL）的含量。
溶剂配制：中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠）：准确称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，C10H14O8Na2•2H2O，分析纯）和6.8g硼酸钠（Na2B4O7•10H2O，分析纯）放入烧杯中，加入少量蒸馏水，加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠（C12H25NaO4S，分析纯）和10ml乙二醇乙醚（C4H10O2，分析纯）；再称取4.56 g无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，分析纯）置于另一烧杯中，加入少量蒸馏水微微加热溶解后，倒入前一个烧杯中，在容量瓶中稀释至1000ml，其中pH 值约为6.9~7.1（pH值一般勿需调整）；1N硫酸：量取约27.87 ml浓硫酸（分析纯，比重1.84，98%），徐徐加入已装有500ml 蒸馏水的烧杯中，冷却后注入1000ml容量瓶定容，标定；酸性洗涤剂（2%十六烷三甲基溴化铵）：称取20g十六烷三甲基溴化铵（CTAB，分析纯）溶于1000ml1N硫酸，必要时过滤；操作步骤：准确称取1.0000g样品（通过40目筛）置于直筒烧杯中，加入100 ml 酸性洗涤剂和数滴十氢化萘及0.5g无水亚硫酸钠。
将烧杯套上冷凝装置于电炉上，在5~10min内煮沸，并持续保持微沸60min。
趁热用已知重量的玻璃坩埚抽滤，并用沸水反复冲洗玻璃坩埚及残渣至滤液呈中性为止。
牛羊类反刍动物饲料的营养成分评定
牛羊类反刍动物饲料的营养成分评定1 饲料营养成分评定方法1.1 常规成分分析法我国目前沿用的饲料成分常规分析法是德国人Hennebery和Stohmann于1862年在Weende实验站提出的概略养分分析方法。
该方法将饲料成分划分为水分、粗蛋白质、粗纤维、粗脂肪、粗灰分、无氮浸出物6大营养成分来评定饲料的营养价值。
由于每一类都可细分且结构复杂，所以称为“粗养分”。
Weende分析方法是饲料营养价值评定的基础，自诞生以来就在饲料的营养价值评定中起着十分重要的作用，但该方法对纤维成分的划分很不明确，不能很好地区分纤维素、半纤维素和木质素。
1.2 范式纤维分析法范氏（Van Soest）分析方法是在Weende分析方法的基础上建立起来的，对粗纤维和无氮浸出物这两个指标进行了修正和重新划分。
对于反刍动物来讲，仅用常规营养成分来评价粗饲料的营养价值是不够的，因为粗饲料的消化率与纤维物质关系密切，而粗纤维并不能完全代表所有的纤维物质，粗纤维除了包含所有的纤维素外，还包含部分半纤维素和木质素。
在评定饲草和纤维性饲料时，一旦测出饲料的NDS（中性洗涤可溶物）、ADF（酸性洗涤纤维）、NDF（中性洗涤纤维）、ADL（酸性洗涤木质素），就可以单独或配合使用这些测定值来评定饲料的营养价值。
邓卫东等研究表明，饲料干物质体外消化率与NDF呈极显著负相关(P<0.01)，与CP含量呈显著正相关，而且粗饲料干物质体外消化率（IVDMD）与CP、ADF和ADL含量之间存在显著的回归关系，回归方程分别为：Y=103.678-1.981×ADF+2034×ADL(R2=0.897)；Y=18.083+1.650×CP(R2=0.813)。
VanSoest分析方法对动物纤维性物质营养研究和高产奶牛饲料营养价值评定的发展和进步作出了历史性贡献。
但是由于反刍动物具有特殊的消化道结构及消化生理，因此仅根据化学分析很难说明反刍动物对饲料的消化和利用情况，因而不能较好地反映饲料的营养价值，在使用过程中存在一定的局限性。
饲料中木质素含量的测定
饲料中木质素含量的测定
时间：2014-03-05 11:47:59 来源：作者：
(一)原理
木质素(1ignin)构成覆盖在植物细胞壁纤维结晶上的包被或网状组织的高分子芳香族聚合物，又名木素。
它在细胞壁内与纤维素、半纤维素结合成强有力的化学键，是一组对植物起支撑作用的化学官能团，也是基本上不能被动物消化吸收的有机物。
(二)测定
常规饲料分析方法中木质素分别存在于粗纤维及无氮浸出物的含量中，是由碳氢氧组成，但与碳水化合物的结构完全不同，测定方法有浓硫酸(72％)法、发烟盐酸(40％～42％)法、酶-硫酸水解法及酸性洗涤剂法等。
因测定方法不同，凡在“木质素”前冠以状语者，系指在特定条件下测出的含量。
如“浓硫酸木质素”、“胃蛋白酶水解木质素”、“发烟盐酸木质素”、“酸
性洗涤木质素”等。
各自的内在质量均不同，无可比性。
是一组极少能被动物消化的抗营养因子或称为“非营养性物质” (nonnutritional matter，NNM)。
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饲草试样制备及常规成分检测技术规程：酸性洗涤木质素
（ADL）测定
1范围
本文件规定了饲草中酸性洗涤木质素（ADL）的测定。
本文件适用于草捆、草粉、草颗粒、草块、鲜草和青贮饲料等饲草产品。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中：注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T601化学试剂标准滴定溶液的制备
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T14699.1饲料采样
NY/T2129饲草产品抽样技术规程
DB37/T2969—2017饲草中酸性洗涤纤维（ADF）的测定
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
酸性洗涤木质素（ADL）aciddetergentlignin
经酸性洗涤剂和浓酸处理，剩余的残留物去除灰分，即为酸性洗涤木质素（ADL）。
4原理
饲草试样脱脂后在规定温度下分别经酸性洗涤剂和浓酸处理,分解脂肪、蛋白质、糖类、半纤维素、纤维素等大部分物质，并经灰化去除剩余残留物中的灰分，获得酸性洗涤木质素（ADDo
5试剂或材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水符合GB/T6682三级水的规定。
5. 1丙酮（CH3COCH3）o
5.2 硫酸溶液C（1/2H2SO4）：1mol∕L,按照GB/T601配制，并标定。
5.3 12.0mol∕L硫酸（H2SO4）洗涤溶液：取66
6.0mL浓硫酸缓缓倒入30OmL水中，冷却后用水定容至1OoomLo
5. 4酸性洗涤剂:称取20g十六烷基三甲基浪化钱（CJigNBnCTAB）溶解于1OOomL1mol/L硫酸溶液C（1/2H2SO4）中,适当加热搅拌溶解。
5.5 滤袋：孔径小于45μm,可封口，并能迅速渗透的特制无纺布滤袋。
5.6 干燥袋：内置干燥剂的拉口密封袋。
注：十六烷基三甲基溟化钺对黏膜有刺激，丙酮是高挥发可燃试剂，置入干燥箱干燥前，确保其已完全挥发。
6仪器设备
6. 1电子分析天平：感量0.0001go
6.5 干燥箱。
6.6 全自动纤维分析仪：能自动加入洗涤溶液，并排除废液，消煮温度控制在100C±
0.5℃,压强保持68.95KPa〜172.375KPa0
6.7 高温炉。
6.8 手压式封口机。
7样品
鲜草应按GB/T14699.1规定，其它饲草应按YY/T2129规定，并按照本标准第1部分进行试样制备。
8试验步骤
已按照DB37/T2969要求酸洗后的样品，从8.5开始操作。
未经酸洗的样品，则从8.1开始操作。
8.1 称样
平行做两份试验。
用标记笔给滤袋编号，称滤袋重（m1,精确至0.000lg）O称取试样0.45g〜0.55g（叱，精确至0.0001g）,小心倒入滤袋底部，避免样品粘在封样线以上。
同时称取空白滤袋重（血，精确至0.0001g）。
8.2 封口
用封口机在距滤袋口4mm处封口。
8.3 脱脂
将装有样品的滤袋放入250InL的烧杯中，加入足量的丙雨直至覆盖滤袋，浸泡并振荡10min,倒出，重免3次。
脱脂脱色过程在通风橱中进行。
8.4 酸性洗涤剂处理
按照DB37/T2969—2017中第8章规定。
8.5 浓酸处理
将经酸性洗涤剂处理后的干燥剩余物连同滤袋一起放入干燥的2L烧杯中，加入12.0mol/L硫酸洗涤溶液（5.3）至漫过滤袋，搅拌。
将25OmL干燥的锥形瓶放入2L烧杯内，多次提压，使硫酸溶
液充分浸润滤袋内样品，取出锥形瓶，消解3h。
取出滤袋，用热水淋洗至中性。
注：滤袋、烧杯及锥形瓶必须完全干燥。
8.6 烘干
将滤袋放入103°C干燥箱中烘干4h,取出滤袋,装入干燥袋,放置干燥器中冷却至室温，称量
（m3,精确至0.0001g）。
8.7 灰化
将滤袋放入已恒重并称重（m1,精确至0.00Olg）的蛆烟（30πιL）中，在550℃的高温炉中灼烧
3h,取出后在干燥器内冷却至室温，称量（叱，精确至0.0001g）。
9数据处理
试样中酸性洗涤木质素（ADL）的含量以质量分数3计，数值以%表示，按式（1）计算：
Γ（m,-m,×c.）-（m s-m4）］
3=^~!~__i<l×100%...........................................................................
m2
式中：
IDi-- 滤袋的质量，单位为克（g）；
叱-- 试样的质量，单位为克（g）；
叱一一硫酸洗涤后滤袋烘干质量，单位为克（g）；
Hii-- 蛆埸质量，单位为克（g）;
ms -- 灰化后生埸和灰分质量，单位为克（g）;
G^一一校正因子，空白滤袋因素（硫酸消煮后空白滤袋烘干质量/原空白滤袋质量加）。
结果以平行测定值的算术平均值表示，保留小数点后2位有效数字。
10精密度
在重复性条件下，两次平行测XX果的绝对差值不大于这两次测XX果算术平均值的10%。