滤袋法测定酸性洗涤纤维

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滤袋在纤维素分析中的应用

滤袋技术在饲料纤维素分析中的应用滤袋技术（Filter Bag Technology, FBT）是本世纪九十年初发展起来的一种简便易行，高效准确分析技术。

该项技术目前主要应用于饲料和食品中粗纤维（CF），中性洗涤纤维（NDF）、酸性洗涤纤维（ADF）的测定。

在该项技术的开发过程中，美国ANKOM 公司的创始人之父Dr. R. J. Komarek，著名的营养学家、油脂化学家、生化/营养/生理方面的大学教授，做出了卓越贡献。

众所周知的纤维素分析方案的创始人 Dr. Peter Van Soest ，也参入了此项技术的开发。

1993由美国康奈尔大学和加拿大共同合作，开发了ANKOM 纤维分析仪获得专利。

产品开发后的最初两年，该产品和技术应用仅限于国际上4~6 个国家。

自1996年以来，国际市场迅速扩展。

目前已在世界上75个多国家有用户，并被美国、法国、意大利、阿、根廷、爱尔兰、澳大利亚、肯尼亚和越来越多的国家政府、研究机构所采用。

滤袋的结构特点用于纤维素分析的滤袋是用特殊材料制成的统一规格，具有一定孔隙的三维结构袋。

用于纤维素测定和体外消化率测定的F57滤袋的孔径为30微米。

由于这种特殊结构，可使溶液自由通过，但同时不使袋内物质流出。

这种滤袋可耐受强烈化学试剂，甚至可耐受72%硫酸。

做工精制，燃烧后无灰，并且不含氮。

应用滤袋技术测定饲料中粗纤维的方法步骤仪器设备ANKOM 纤维分析仪， F57滤袋，封口机试剂0.255N 硫酸， 0.313N氢氧化钠，丙酮测定操作步骤采用滤袋分析饲料粗纤维主要包括以下几个主要步骤：1、首先将1克左右的样品装入已知重量的F57 滤袋中，然后用封口机封口。

平放在样品架上。

样品架每批可同时放24个滤袋，分8层，每层放3个滤袋，2、然后将放有滤袋的样品架置于纤维分析仪的消煮容器中，加入1900~2000毫升室温酸溶液（0.255N硫酸），密封。

按下加热和搅拌按钮，设定好时间（45分钟）。

不同粉碎粒度的饲料对滤袋法测定纤维物质含量的影响

料 ADF含量差异显著（P＜0.05）。粗粉碎组饲料的和 NDF 含 ADF 量普遍高于细粉碎组。 2）
粗粉碎组和细粉碎组的 NDIP含量除青贮类饲料差异显著（P＜0.05）外，其余几类饲料的 NDIP
含量差异均不显著（P＞0.05）；2 组间各类饲料的 ADIP含量差异均不显著（P＞0.05）。结果提
2.00 mm，细粉碎组为 0.45 过 mm（ 40 目分析筛），测定各样品的和 NDF、ADF、NDIP 含 ADIP
量。结果显示：1）粗粉碎组和细粉碎组的干草类饲料、饼粕类饲料 NDF含量差异极显著（P＜
0.01）；2 组间干草类饲料、青贮类饲料 ADF含量差异极显著（P＜0.01），糟渣类饲料、饼粕类饲
Silagefeedstuff
58.51 ±1.63
59.72 ±1.51
7
糟渣类饲料
Distiller' sdried grain solublefeedstuff 47.33 ±1.32
47.50 ±1.20
6
饼粕类饲料
Cakeand mealfeedstuff
31.47 ±3.59
34.31 ±4.04
试验所用溶液组成参照国标 GB/T20806— 20061，采用以下公式计算含量 NDF ：
NDF（ %） =[ m2 -（ m1 ×C1 ） ] ×100 /m。
式中：m1 为空袋质量（g）；m为样品质量（ g）； m2 为提取处理后样品残渣 +滤袋质量（g）；C1 为空白袋子校正系数（烘干后质量 /原来质量）。的测定 1.2.3 ADF
示，采用滤袋法测定不同粉碎粒度的饲料和 NDF ADF含量差异较大，建议采用 2.00 mm的粉

饲料中酸性洗涤木质素(ADL)的测定-最新国标

饲料中酸性洗涤木质素（ADL）的测定1范围本文件描述了饲料中酸性洗涤木质素（ADL）测定的坩埚法和滤袋法。

本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和植物性饲料原料中酸性洗涤木质素（ADL）的测定。

2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

3.1酸性洗涤木质素（ADL）acid detergent lignin经酸性洗涤剂和12.00mol/L硫酸溶液处理除去试样中的淀粉、蛋白质、脂肪、糖类和纤维素等成分后的干燥滤渣灰化所丢失的质量占试样质量的百分比。

4坩埚法4.1原理试样用酸性洗涤剂浸煮，水、丙酮洗涤，除去不耐酸的碳水化合物、没有发生梅拉德反应的蛋白质和脂肪，剩余物用12.00mol/L硫酸溶液消化，消化后残渣再干燥、灰化，扣除灰分后的残渣占试样质量的百分比为酸性洗涤木质素。

4.2试剂或材料警示：十六烷基三甲基溴化铵对粘膜有刺激，操作时需戴防护口罩；丙酮和石油醚是高挥发可燃试剂，在进入电热干燥箱干燥前，确保其完全挥发。

除非另有规定，仅使用分析纯试剂。

4.2.1水：GB/T6682，三级。

4.2.2丙酮。

4.2.3石油醚（沸程30℃~60℃）。

4.2.4硫酸溶液（0.50mol/L ±0.025mol/L H 2SO 4）：按照GB/T 601配制和标定。

4.2.5酸性洗涤剂：称取20g 十六烷基三甲基溴化铵（C 19H 42NBr ，CTAB ），加入1000mL 0.5mol/L 硫酸溶液（4.2.4），搅拌溶解，混匀。

4.2.6消泡剂：硅油。

4.2.7硫酸：质量分数72%（12.00mol/L ）。

按以下步骤校准硫酸（H 2SO 4）相对密度至1.634（20℃）或12.00mol/L 。

酸性洗涤纤维和木质素测定的国际标准

对误差（重复变异系数与重现变异系数）除样品２
外都小于１％０这些数据可与ＮＦ法获得的数据Ｄ
相比。这可能是小麦ＡＦ含量低的原因。表１中Ｄ
定人员拿到的样品，号从１１．盲重复的．标～２是不用识别样品种类２２个参与研究的实验室中．８个用Ｆｓ１ｏｓ的
最近已由国际分析师协会（ＯＣ）国际标准化ＡＡ、
组织（ｏ）欧洲标准化委员会（Ｅ联合发布。ｉ及ｓＣＮ）
（）次分析６个样品的萃取和过滤系统是２一
集成的
（）３用抗凝结的快速真空过滤系统。（）系统同时加热和加试剂与水时．试４当与剂的接触最小（）剂加入系统也可简单地冲洗粘在仪器５试
壁的样品
青贮料青贮料
了。这个标准也认为Ｆｂｒｃ系统是一个有效选ｉｅｅｔ
择。与常规的手工操作（在烧杯中回流）比较，相Ｆｂｒｃ置的优点可以总结如下：ｉｅｔ装ｅ（）转移样品可改进准确和精确度；样１不称品人钳锅并保留到整个分析过程。
ＮＦ测定国际标准化方法（ＮＩＯ１９６２０）ＤＥＳ３０：８０
１材料和方法
图１ＶｎＳｅｔ洗涤纤维体系ａｏｓ的
１样品和实验室．１
选择用作研究的样品是：末、麦、饲锯小牛料、豆粕粉、叶草青贮料和青草青贮料。分析三

范氏中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维测定的实验方案1(修改)

饲料中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）和木质素（ADL）的测定实验方案实验原理纤维分析法测定中性洗涤纤维（NDF）和酸性洗涤纤维（ADF）。

植物性饲料经中性洗涤剂煮沸处理，不溶解的残渣为中性洗涤纤维，主要为细胞壁成分，其中包括半纤维素、纤维素、木质素和硅酸盐。

中性洗涤纤维经酸性洗涤剂处理，剩余的残渣为酸性洗涤纤维，其中包括纤维素、木质素和硅酸盐。

2 所需试剂十二烷基硫酸钠溶液（中性洗涤剂）、乙二胺四乙酸二钠（EDTA，化学纯）、四硼酸钠（Na2B4O7.10H2O）、磷酸氢二钠、乙二醇乙醚、十六烷基三甲基溴化铵、硫酸、丙酮，无水亚硫酸钠，十氢化萘，95%乙醇3 所需仪器分析天平：感量0.0001 g、容量瓶、锥形瓶、滴定管、移液管、洗瓶、洗耳球、滴管、量筒。

粗纤维测定仪（SLQ-6）、古氏坩埚、干燥器（以氯化钙或变色硅胶为干燥剂）、酸度计4 试剂的配制4.1 30g/L十二烷基硫酸钠（中性洗涤剂）溶液。

称取18.61g乙二胺四乙酸二钠（EDTA，化学纯）和6.81g四硼酸钠（Na2B4O7.10H2O）和10mL已二醇乙醚同放入1000mL烧杯中，加入少量水加热溶解后，再加入30g十二烷基硫酸钠。

称取11.9644g磷酸氢二钠（含12水），置于另一烧杯中，加入少量水，微微加热溶解后倾入第一个烧杯，稀释至1000mL。

此溶液PH在6.9-7.1 .4.2 20g/L十六烷三甲基溴化铵（酸性洗涤剂）溶液。

称取20g十六烷三甲基溴化铵，溶于1000mL已经标定过的0.5mol/L硫酸溶液中，搅动溶解，必要时过滤。

4.3 0.5 mol/L硫酸溶液。

称取49g（27.87mL）浓硫酸，慢慢加入已有500mL水的烧杯中，冷却后注入1000mL容量瓶中，定容，标定。

（4.3.1标定硫酸的方法：称量1.6g在270-300℃灼烧至恒重的基准无水碳酸钠，称准至0.0001g。

溶解50mL水中，加入10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示剂，用配制好的硫酸溶液滴定至溶液有绿色变为暗红色，煮沸2min，冷却后继续滴定至溶液再呈暗红色。

酸洗、中洗洗涤纤维药品配置

酸性洗涤纤维药品配置及操作步骤（Ankom220型纤维分析仪）酸性洗涤剂:（2%）十六烷基三甲基溴化铵溶液：称区20gCTAB（十六烷基三甲基溴化铵溶液）溶解于1000ml 1mol/L硫酸溶液中，搅拌溶解。

1mol/L硫酸（1/2H2SO4）溶液：54.35ml H2SO4定容到1000ml测定操作步骤：1、将0.5g左右的样品装入已知质量的F57滤带中，然后用封口机封口样品架每批可同时放入24个滤袋，分八层，每层放三个滤袋。

2、将放有滤袋的样品架置于纤维分析仪的消煮容器中，加入1900-2000ml 的酸性洗涤剂3、按下加热按钮设定好时间（60min）,待容器中温度显示达100。

C，按下计时按钮，开始倒计时并打开搅拌按钮。

4、60min后关掉加热和搅拌按钮，停止加热和搅拌。

先打开废液阀，将废液排掉。

待废液排尽，关掉排液阀。

然后打开容器盖，加入1900-2000ml热的水（90-100。

C）按下搅拌开关，盖好盖，冲洗滤袋3-5min。

然后在重复2次。

5、将样品架从容器中取出，然后将滤纸置于干净烧杯中，加入丙酮，使滤袋浸没。

2-3min后拿出，轻轻挤出丙酮，并晾干。

然后在烘箱中105。

C烘2-3小时。

然后称重。

中性洗涤纤维药品配置及操作步骤（Ankom220型纤维分析仪）试剂：十二烷基硫酸钠、乙二胺四乙酸二钠（EDTA）、四硼酸钠、无水磷酸氢二钠、已二醇乙醚、正辛醇、丙酮中性洗涤剂（3%十二烷基硫酸钠溶液）：称取18.6g乙二胺四乙酸二钠（EDTA）和6.8g四硼酸钠（Na2B4O7.10H2O）,放入100ml烧杯中，加适量蒸馏水溶解，再加入30g十二烷基硫酸钠和10ml已二醇乙醚，称取4.56g无水磷酸氢二钠置于另一烧杯中，加蒸馏水加热溶解，冷却后将上述两溶液转入1000ml容量瓶并用水定容。

此溶液PH值6.9—7.1（PH 值一般不用调整）。

测定操作步骤：1、将0.5g左右的样品装入已知质量的F57滤带中，然后用封口机封口样品架每批可同时放入24个滤袋，分八层，每层放三个滤袋。

纤维袋法测定饼粕类饲料原料中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量的研究

（１．ＦｅｅｄＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｉｎｋｉａｎｇ，Ｋａｒａｍａｙ８３００００，ＳｉｎｋｉａｎｇＣｈｉｎａ；
ａｃｉｄｄｅｔｅｒｇｅｎｔｉｆｂｅｒ（ＡＤＦ）ｉｎｔｈｅｆｅｅｄ．Ｉｎｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅＡＮＫＯＭｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｒｅｓｕｌ，Ｓｉｎｋｉａｎｇｌｏｃａｌ
摘要：为探讨用纤维袋测定饼粕类饲料原料中中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量的方法，试验选取新疆本地
几种饼粕类饲料原料，以ＡＮＫＯＭ技术所测结果为参照，通过测定过程当中的消煮时间、理条件进行优选。结果表明，与半自动纤维分析仪ＡＮＫＯＭ测定值最接近的中性洗涤纤维处理条件为消煮时间１ｈ，添加无水亚硫酸钠１ｇ・１００ｍＬ－，无需添加ＡＮＫＯＭ酶，不需要脱脂处理
２．ＡｇｒｉｂｒａｎｄｓＰｕｒｉｎａｆＳｉｎｋｉａｎｇ）ＦｅｅｄＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｃｈａｎｇｊｉ８３００００，ＳｉｎｋｉａｎｇＣｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｅｘｐｌｏｒｅｉｆｂｅｒｂａｇｓｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｃｏｎｔｅｎｔｏｆｔｈｅｎｅｕｔｒａｌｄｅｔｅｒｇｅｎｔｆｉｂｅｒ（ＮＤＦ）ａｎｄｔｈｅ

《烟草及烟草制品中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、酸洗木质素的测定洗涤剂法》(报批稿)

0.00
100.00
0.01
0.01
样品一
24.09
8.39
31.58
89.29
17.24
8.36
25.08
93.82
1.65
8.32
1.72
0.80
样品二
18.47
8.78
27.38
101.44
12.54
8.46
20.69
96.28
1.56
8.29
1.55
-0.11
注1：酸洗木质素的标样无法获取；
6.6 四硼酸钠（Na2B4O7·10H2O）。
6.7 无水磷酸氢二钠（Na2HPO4）。
6.8 乙二醇乙醚（C4H10O2）。
6.9 正辛醇（C8H18O，消泡剂）。
6.10 丙酮（CH3COCH3）。
6.11 98％浓硫酸（质量分数）。
6.12 十六烷基三甲胺溴（C19H42BrN）。
6.13-高温淀粉酶（活性50kU/g）
7.2.4.2 加热结束后，立即进行抽滤，并用（90～100）℃水冲洗管壁和剩余物，直至滤出液无泡沫。
7.2.4.3将热浸提后的试样和坩埚放在纤维分析仪的冷浸提单元上，用丙酮(6.10)冲洗剩余物3次，确保剩余物与丙酮充分混和，至滤出液无色为止。
7.2.4.4抽干后将坩埚和剩余物放入（105±2）℃烘箱中烘干3～4h至恒量。在干燥器中冷却后称量。再烘干30min，冷却，称量，直至两次称量之差小于0.002g。记录坩埚和剩余物的总重为m5。
烟草及烟草制品中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、酸洗木质素的测定
洗涤剂法
11
12
本标准规定了烟草及烟草制品中中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、酸洗木质素含量的洗涤剂测定方法。

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滤袋法测定酸性洗涤纤维(ADF)
A. 试剂
(a) 酸性洗涤剂溶液：称取20 g十六烷三甲基溴化胺（CTAB），溶于1000 mL已标定过的 0.50 mol/L硫酸溶液中，加热搅拌使其溶解。

(b) 0.50 mol/L硫酸溶液：取49 g (约27 mL)浓硫酸，慢慢加入已装有500 mL水的烧杯中，冷却后注入1000 mL容量瓶中，加水至刻度，标定。

B. 安全注意
(a) 丙酮易燃，操作时应在通风橱中进行，避免吸入或与皮肤接触。

将滤袋放入烘箱之前，要确保滤袋完全干燥，丙酮完全挥发。

(b) CTAB对黏膜有刺激，因此操作时要带防尘口罩和手套。

C.设备
(a) 消化装置- ANKOM 220纤维分析仪。

(b) 滤袋- ANKOM F57滤袋。

2) 直接准确称取0.5g (± 0.05 g制备好的样品 (m ) 于滤袋中。

样品需要粉碎过1mm筛。

3)在距离滤袋上边缘大约5 mm用封口机封口。

然后将样品在滤袋中展平，均匀分布。

4)至少取一个空白滤袋(C1)，同时做空白测定。

5) 一次最多可以在滤袋架上放24个滤袋。

无论放置滤袋数量多少，9层滤袋架上托盘要全部使用，每层放三个滤袋。

层与层之间错开120度。

然后将装有滤袋的支架放入纤维分析仪消煮器中，然后在顶部将金属压锤放上，以确保消煮过程中不浮起。

6) 样品含有大豆产品或脂肪超过5% - 将装有样品的滤袋放入带盖玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，
盖好盖子。

摇动容器10次，浸泡10 min。

然后更换新的丙酮，重复上述操作一次。

最后将滤袋取出，放在网筛上凉干。

例外：烘烤大豆–由于烘烤大豆的特殊性，需要采用改进后的下面脱脂方法。

将装有样品的滤袋放入带盖玻璃容器中，加丙酮使滤袋完全浸没，盖好盖子。

摇动容器10次，然后更换新的丙酮，浸泡12 h。

取出滤袋，放在网筛上凉干。

(b) 当处理24个滤袋时，向容器中加入2000 mL酸性洗涤剂溶液。

如果处理样品少于20 个滤袋，按照每个滤袋加100 mL酸溶液，但不能少于1500 mL，确保9层托盘滤袋支架能完全浸没。

盖上盖子并完全密封好。

仪器将加热并维持溶液温度100°C。

处理时间60 min，包括加热升温时间。

(d) 消煮结束，关上加热和搅拌开关，打开排液阀（开始要慢一点），在打开盖子之前一定将热的溶液排完。

警示：消煮器中的溶液是有压力的。

在打开盖子之前一定将废液阀打开以释放压力。

确保废液排放管与废液容器安全连接。

(e) 溶液排完后，打开盖子，关闭排液阀，加2000 mL (85°C~90°C) 蒸馏水，放下盖子，但不旋紧。

打开搅拌开关（不打开加热开关）搅拌3~5 min。

排掉废液，重复2次，共淋洗3次或洗涤至中性。

(f) 最后一次淋洗后，加冷的自来水以操作和使冷却容器，为下轮测定做好准备。

排干水，从容器中取出带滤袋的支架。

将滤袋从滤袋支架上取下来，轻轻挤压去掉多余的水。

然后将滤袋放入250 mL 烧杯中，加丙酮至覆没滤袋，浸泡3~5 min ，然后取出并轻轻挤压去掉多余的丙酮。

(g) 在通风橱中展开滤袋，让其自然干燥。

完全干燥后放入105°C烘箱烘干3h. 警告：在丙酮完全挥发掉之前不能把滤袋放入烘箱中。

(q) 从烘箱中取出滤袋，直接放入干燥器中冷却至室温，然后称重（m 2）。

E. 计算
试样中中性洗涤纤维质量分数按以下公式计算。

NDF (%) = (m2- (m1 x C1)) x 100 / m
其中：m1 为空袋质量，g；m为样品质量，g；m2 为提取处理后样品残渣+滤袋质量，g；C1 为空白袋子校正系数(烘干后质量/原来质量)。

F．几点说明
如果样品同时测定NDF和ADF，可以先测定NDF，然后将测定完装有残渣的滤袋放在样品架子上，直接加酸性洗涤溶液，然后按照ADF测定程序测定。