OPTIMEM进行贴壁细胞培养的实验方法
Western实验步骤
转染（24-well）步骤1、贴壁细胞，0.5×105/500μl无抗生素培养基2、0.8μgDNA加入50μlOpti-MEM(或其它无血清培养基)3、2μl Lipofctoomine TM2000加入50μlOpti-MEM(或其它无血清培养基)，室温5min4、混合后室温20min共100μl5、每孔加100μl，混匀6、37℃培养18-48h，4-6h是更换培养基型号总体积DNA Lipo200096-well 100μl 0.2μg 0.5μl24-well 500μl 0.8μg 2μl6-well 2ml 4.0μg 10μl60-mm 5ml 8.0μg 20μl10-cm 15ml 24μg 60μlWestern Blot步骤一、蛋白样品制备（1）单层贴壁细胞总蛋白的提取（Monolayer adherent cells）:1、倒掉营养液，用冰预冷的PBS洗三次，弃净PBS后把培养皿置于冰上（期间标记EP管，用冰）2、1ml三去污裂解也加7μl PMSF（苯甲基磺酸氟）、1μl aprotinin(抑肽酶)、1μl leupetin（亮氨酸）、1μl pepstain(胃酶抑素)摇匀置于冰上。
也可以用冰冷PBS转移至EP管离心后再裂解，可操作性更强。
用量：6孔板每孔25μl，60mm2平皿70μl。
用过的scraper先用75%乙醇洗，再用超纯水洗3、在冰上用塑料细胞刮刮下贴壁细胞，用加样器吸至EP管中，4℃冰箱中震荡15分钟4、于4℃下12000rpm离心30min（提前开离心机预冷）5、将离心后的上清转移至0.5ml的离心管中放于-20℃保存（2）组织中总蛋白的提取1、将少量组织块置于1~2ml匀浆器中球状部位，用干净的剪刀将组织块尽量剪碎2、加400μl单去污剂裂解液裂（含PMSF）于匀浆器中，进行匀浆。
然后置于冰上。
裂解完一管先用75%乙醇洗，再用超纯水洗，最后用吸水纸吸干。
贴壁细胞传代培养步骤
贴壁细胞传代培养步骤贴壁细胞传代培养是一项细胞学技术，用于繁殖选定细胞，其目的是在同一种细胞中完成繁殖。
此技术对于基础研究、比较生物学和临床诊断都具有重要意义。
在贴壁细胞传代培养过程中，可以形成一系列细胞系供后续的研究使用，因此这一技术在细胞学研究中扮演着至关重要的角色。
贴壁细胞传代培养具体步骤如下：第一步：首先，将细胞从初始培养基中分离出来，用活细胞物镜观察，查看细胞形态是否正常，结果显示细胞有正常分裂。
第二步：将第一步中分离出的细胞悬浮液转移到饱和细胞悬浮液中，一般采用0.25%的胨酶，将细胞细胞壁分裂，使细胞形成悬浮状态，这一步称为“贴壁”。
第三步：将贴壁后的细胞悬浮液转移到新培养皿中，一般采用Trypsin EDTA抑制剂，使悬浮的细胞不能再分裂，形成不可见的“细胞溶液”，这一步称为“传代”。
第四步：缓慢地用微量移液器将细胞溶液倒入新培养皿中，当液体分散成一液一固时，加入培养基，使细胞随培养基逐渐沉淀，这一步称为“培养”。
第五步：此时，细胞受到培养环境的刺激，开始新一轮的分裂，细胞学习到细胞性质的分化，然后细胞会沉淀在培养皿底部，细胞分裂结束后，就形成了新一代的细胞，从而完成了一次贴壁细胞传代培养实验。
以上就是贴壁细胞传代培养的具体操作步骤，要想做好这项实验，必须按照上述步骤进行操作，只有这样，才能确保实验数据的准确性。
同时，必须注意实验中的环境条件，确保培养基的新鲜，避免菌类污染，进而确保实验的准确性和稳定性。
贴壁细胞传代培养技术正逐步得到应用，目前，它已经运用于很多细胞学领域，尤其是在细胞分化和细胞系的建立中发挥了重要作用。
贴壁细胞传代培养技术更加方便、成本更低，并且能够解决传统细胞培养技术中遗传变异现象导致的假阳性，新增细胞不能够稳定传代等问题，所以受到越来越多的关注。
最后，应该提醒大家，在实验中一定要遵守实验安全规范，做好实验前预防措施，以保障实验安全、获得准确有效的实验结果。
总之，贴壁细胞传代培养技术由于其便捷性、稳定性、节约开销等优点，在细胞学领域具有重要的应用价值，未来将会发挥更大的作用。
贴壁细胞的脂质体转染
一、实验材料1、宿主细胞CHO（贴壁细胞）2、脂质体LIPOFECTAMINE 2000（invitrogen公司）3、6孔细胞培养版4、无血清培养基OPTI-MEM（GIBICO）5、转染级质粒二、实验步骤invitrogen的LIPOFECTAMINE 2000说明书上列举了24孔、12孔、6孔……板的实验体系，因为需要转染的细胞量大，所以一直采用的是6孔版做的转染。
以下是以6孔板为例说明一下我的体系和方法吧！1、转染前一天，以合适的细胞密度接种到6孔培养板上。
（我的接种密度是3~4*105/ml.）转染时，细胞要达到90~95%的融合。
2、溶液1：240ul 无血清培养基 + 10 ul lipofectamine 2000 per well （总体积250 ul）（温育5min）3、溶液2：X ul 无血清培养基 + 4 ug 质粒 per well（总体积250 ul）4、将溶液1与溶液2混合，室温下置20min。
5、与此同时，将6孔板中的细胞用无血清培养基冲洗细胞两遍后，加入2ml 无血清培养基。
6、将溶液1与溶液2的混合液逐滴加入孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
在37℃，5％的CO2中保温5~6小时。
7、6小时后，更换含有血清的全培养基，在37℃，5％的CO2中48~72h检测转染水平。
8、如果做稳定转染，换全培养基培养后24h，即可以1：10或更高的稀释比例（根据细胞的生长情况）接种到新的培养基。
三、个人经验：我觉得贴壁细胞的脂质体转染还是很容易的，有了经验之后，现在做转染得心应手，转染前后细胞的形态几乎不发生变化，几乎没有细胞死亡。
转染率很高。
以下是个人经验，与大家分享。
1.细胞的状态。
这点非常重要，不要急于求成，一定要让细胞处于最佳的生长状态再做。
有文献说传代不要超过17代。
我总是在细胞复苏后的3代左右做，那时细胞状态最好，不要用传了很多代的细胞去做，细胞的形态都会发生变化了。
2.细胞的融合度。
贴壁细胞培养步骤及注意事项
贴壁细胞培养步骤一、复苏1.把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。
液体都融化后（大概1-1.5分钟），拿出来喷点酒精放到超净工作台里。
2.把上述细胞悬液吸到装有10ml培养基的15ml的离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来），1000转离心5分钟。
3.把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。
吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动，使培养皿中的细胞均匀分布。
4.标好细胞种类和日期、培养人名字等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。
5.3天换一次培养基（具体看细胞生长状态及培养液情况）。
二、传代1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。
2.把原有培养基吸掉。
3.加入2毫升PBs洗两遍，最后吸净培养皿中的PBS4.加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化（消化时长看情况而定）。
5.当看到细胞开始脱离培养皿时倒掉酶液，加入2毫升左右含血清的培养基终止消化。
6.用移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。
7.把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
8.倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。
9.根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。
一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个，继续培养。
10.若是只培养一皿，只需吹散后倒剩1/4左右，重新加入培养液继续培养。
三、冻存1.把原有培养基吸掉。
2.加入2毫升PBs洗两遍，最后吸净培养皿中的PBS3.加适当的胰蛋白酶（能覆盖细胞就行），消化（消化时长看情况而定）。
4.去掉酶液，加入2毫升左右含血清的培养基终止消化。
5.吹落后把细胞吸到15ml的离心管中，1000转离心5分钟。
6.加入1毫升冻存液悬浮细胞，装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。
7.4℃30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。
配制溶液一、培养基配制（1）（DEME培养基）89%基础培养基+10%血清（FBS）+1%双抗45毫升培养基+5毫升血清+0.5毫升双抗（2）（1640培养基）89%基础1640培养基+10%血清（FBS）+1%双抗45毫升培养基+5毫升血清+0.5毫升双抗二、冻存液90%血清+10%DMSO；DMSO要慢慢滴加，边滴边摇三、消毒液75%的酒精注意事项（1）进入细胞间必须严格按照下列步骤操作①确定所有的细胞操作用的溶液和耗材都已经消毒并检测没有问题，不确定的溶液和耗材请勿使用，除非特殊情况，不要借用别人的溶液。
细胞贴壁实验报告
一、实验目的1. 掌握细胞贴壁生长的基本原理和方法。
2. 了解细胞培养过程中细胞贴壁生长的重要性。
3. 观察细胞在不同条件下的贴壁生长情况，分析影响细胞贴壁生长的因素。
二、实验原理细胞贴壁生长是细胞在体外培养过程中的一种重要生长方式。
细胞在培养皿表面贴附，通过细胞与培养皿表面的相互作用，细胞逐渐伸展、增殖。
细胞贴壁生长对于细胞培养、细胞实验和药物筛选等具有重要意义。
三、实验材料1. 细胞：小鼠心肌细胞（HL-1细胞）2. 培养基：DMEM培养基、胎牛血清3. 培养工具：培养皿、移液枪、吸球、无菌操作台、显微镜、盖玻片、载玻片4. 实验试剂：0.5%多聚赖氨酸、PBS缓冲液、胰蛋白酶四、实验步骤1. 预处理：将细胞从培养瓶中取出，用胰蛋白酶消化后，用PBS缓冲液清洗细胞，收集细胞悬液。
2. 细胞贴壁：将细胞悬液加入培养皿中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
3. 贴壁条件优化：1）将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟，自然晾干后，将其放置于培养皿底部。
2）将细胞悬液加入盖玻片上，使其均匀铺展。
3）将培养皿置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
4. 观察与记录：1）每隔一定时间（如1小时、2小时、4小时等），在显微镜下观察细胞贴壁生长情况。
2）记录细胞贴壁生长速度、细胞形态、细胞数量等指标。
5. 数据分析：1）根据观察结果，绘制细胞贴壁生长曲线。
2）分析影响细胞贴壁生长的因素，如培养时间、细胞密度、培养条件等。
五、实验结果与分析1. 细胞贴壁生长曲线：细胞在培养皿中贴壁生长，随着时间的推移，细胞数量逐渐增加，细胞形态逐渐伸展。
2. 影响细胞贴壁生长的因素：1）培养时间：细胞贴壁生长速度随培养时间的延长而增加，但过长的培养时间会导致细胞密度过大，影响细胞生长。
2）细胞密度：细胞密度越高，细胞贴壁生长速度越快，但过高的细胞密度会导致细胞相互挤压，影响细胞生长。
3）培养条件：适当的温度、pH值、气体环境等有利于细胞贴壁生长。
细胞转染修订版
细胞转染准备：1．无抗生素培养基2．Opti－MEM ⅠReduced Serum Medium3．全培养基1、转染前细胞的处理（以35mm 培养皿为例）：贴壁细胞：在转染前一天，在35mm 培养皿中加入2 ml 无抗生素培养基培养一天，到转染时使细胞达到80％～90％的汇合率。
悬浮细胞:在制备混合物前，将4—8×105细胞用无抗生素培养基培养铺35mm 培养皿2、转染方法（以质粒DNA转染为例）2.1、制备质粒脂质体混合物，OPTI-MEM！1．将质粒溶于50 ul opti-mem 中，混匀室温静置5分钟；2．将脂质体溶于50 ul opti-mem 中，混匀室温静置5分钟；3．将两者混匀，室温静置5分钟（可能出现雾状沉淀，复合物在室温下六小时内稳定）。
2.2、加入培养皿中，温柔混匀；可在6小时后更换全培养基。
2.5、培养18－48个小时后，测量转染效率。
注：如有必要，转染前可用无抗生素无血清培养基。
细胞转染1、转染前细胞的处理（以35mm 培养皿为例）：贴壁细胞：在转染前一天，在35mm 培养皿中加入2 ml 无抗生素培养基培养一天，到转染时使细胞达到80％～90％的汇合率。
悬浮细胞:在制备混合物前，将4—8×105细胞用无抗生素培养基培养铺35mm 培养皿2、转染方法（以质粒DNA转染为例）A. 转染贴壁细胞（35 mm培养皿或6孔培养板）1. 对于每一个转染样本，按如下比例配制转染混合液：2.5 μg 质粒DNA7.5 μL GeneTranx μL 无血清DMEM（或其他无血清培养基, PBS,PBS）总体积100 μL2.用枪头吹打混匀，放置于室温20-40min。
3. 将混合液加入细胞培养皿中，晃动培养皿混匀培养液。
放入CO2培养箱。
注：血清浓度对于转染效果无影响，经测试高达20%的胎牛血清浓度也不会对转染效果产生影响。
4. 在转染后的18-48小时之间，对细胞进行换液。
OPTI-MEM进行贴壁细胞培养的实验方法
OPTI-MEM进行贴壁细胞培养的实验方法日期：2012-05-17来源：互联网作者：青岚点击： 194次•MEM细胞培养基无血清培养基可以提供细胞贴壁需要的一些基质，本文总结了利用无血清培养基OPTI-MEM进行贴壁细胞的脂质体转染试验材料，步骤、个人经验以及问题分析。
贴壁细胞的脂质体转染一、实验材料1、宿主细胞CHO(贴壁细胞)2、脂质体LIPOFECTAMINE 2000(invitrogen公司)3、6孔细胞培养版4、无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO)5、转染级质粒二、实验步骤invitrogen的LIPOFECTAMINE 2000说明书上列举了24孔、12孔、6孔......板的实验体系，因为需要转染的细胞量大，所以一直采用的是6孔版做的转染。
以下是以6孔板为例说明一下我的体系和方法吧!1、转染前一天，以合适的细胞密度接种到6孔培养板上。
(我的接种密度是3~4*105/ml.)转染时，细胞要达到90~95%的融合。
2、溶液1：240ul 无血清培养基 + 10 ul lipofectamine 2000 per well (总体积250 ul)(温育5min)3、溶液2：X ul 无血清培养基 + 4 ug 质粒 per well(总体积250 ul)4、将溶液1与溶液2混合，室温下置20min。
5、与此同时，将6孔板中的细胞用无血清培养基冲洗细胞两遍后，加入2ml 无血清培养基。
6、将溶液1与溶液2的混合液逐滴加入孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
在37℃，5%的CO2中保温5~6小时。
7、6小时后，更换含有血清的全培养基，在37℃，5%的CO2中48~72h检测转染水平。
8、如果做稳定转染，换全培养基培养后24h，即可以1：10或更高的稀释比例(根据细胞的生长情况)接种到新的培养板，加抗生素进行筛选。
三、个人经验：我觉得贴壁细胞的脂质体转染还是很容易的，有了经验之后，现在做转染得心应手，转染前后细胞的形态几乎不发生变化，几乎没有细胞死亡。
lipofectamine3000说明方案
0.2 μｇ 0.4 μＬ
5μＬ 5μＬ
室温孵育 5 分钟
加入 DNA- 脂质体复合物
96-well
至细胞中
DNA- 脂质体复合物
10 μＬ
50 μＬ 1μｇ 2μＬ
25μＬ 25 μＬ
24-well
50 μＬ
250 μＬ 5μｇ 10 μＬ
125μＬ 125 μＬ
6-well
250μ L
mine?300 0 转染 DNA 产 品参考 用量
37°C 孵育细胞 2–4 天。然后分析转染细胞。
转染 siRNA 至细胞中时，遵循如上所述的 DNA 实验方案，但在稀释 siRNA 时不要
加入 P3000?试剂 (第 3 步)。
细胞培养容器 贴壁细胞
Opti-MEM 培 养 基 稀 释 Lipofectamine ?3000 试 剂 （ 2 管）
Opti-MEM 培养基 Lipofectamine ?3000
10 μＬ
DNA ，制备 DNA 预混液， 然后添加 P3000?试剂，充 分混匀 Lipofectamine ?3000 试 剂 中加入稀释的 DNA(1:1 比例 )
DNA(0.5 – 5μ g/ μ L)
P3000?
试
剂
(2 μ L/ μ gDNA)
稀释的 DNA
稀
释
的
Lipofectamine?3000
96-well
24-well
6-well
表 1：使
1–4×104 5μ L×２
0.5–2×105 25μ L×２
0.25–1×106
用
125 μ L×２
0.15 和 0.3 μＬ 0.75 和 1.5 μＬ 3.75 和 7.5 μＬ lipofecta
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
O P T I-M E M进行贴壁细胞培养的实验方法
日期：2012-05-17来源：互联网作者：青岚点击：194次
•MEM细胞培养基
无血清培养基可以提供细胞贴壁需要的一些基质，本文总结了利用无血清培养基OPTI-MEM进行贴壁细胞的脂质体转染试验材料，步骤、个人经验以及问题分析。
贴壁细胞的脂质体转染
一、实验材料
1、宿主细胞CHO(贴壁细胞)
2、脂质体LIPOFECTAMINE2000(invitrogen公司)
3、6孔细胞培养版
4、无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO)
5、转染级质粒
二、实验步骤
invitrogen的LIPOFECTAMINE2000说明书上列举了24孔、12孔、6孔......板的实验体系，因为需要转染的细胞量大，所以一直采用的是6孔版做的转染。
以下是以6孔板为例说明一下我的体系和方法吧!
1、转染前一天，以合适的细胞密度接种到6孔培养板上。
(我的接种密度是3~4*105/ml.)转染时，细胞要达到90~95%的融合。
2、溶液1：240ul无血清培养基+10ullipofectamine2000perwell(总体积250ul)(温育5min)
3、溶液2：Xul无血清培养基+4ug质粒perwell(总体积250ul)
4、将溶液1与溶液2混合，室温下置20min。
5、与此同时，将6孔板中的细胞用无血清培养基冲洗细胞两遍后，加入2ml 无血清培养基。
6、将溶液1与溶液2的混合液逐滴加入孔中，摇动培养板，轻轻混匀。
在37℃，5%的CO2中保温5~6小时。
7、6小时后，更换含有血清的全培养基，在37℃，5%的CO2中48~72h检测转染水平。
8、如果做稳定转染，换全培养基培养后24h，即可以1：10或更高的稀释比例(根据细胞的生长情况)接种到新的培养板，加抗生素进行筛选。
三、个人经验：
我觉得贴壁细胞的脂质体转染还是很容易的，有了经验之后，现在做转染得心应手，转染前后细胞的形态几乎不发生变化，几乎没有细胞死亡。
转染率很高。
以下是个人经验，与大家分享。
1.细胞的状态。
这点非常重要，不要急于求成，一定要让细胞处于最佳的生长状态再做。
有文献说传代不要超过17代。
我总是在细胞复苏后的3代左右做，那时细胞状态最好，不要用传了很多代的细胞去做，细胞的形态都会发生变化了。
2.细胞的融合度。
细胞的融合度必须要达到90%才能做，细胞太少，容易死的。
3.无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO)很好用，有条件的话，就用它代替PBS 洗细胞两遍(我曾比较过OPTI-MEM与PBS或无血清的DMEM，前者的转染效率确实高)。
注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞，而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。
如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多。
4.加入无血清培养基后5~6小时更换全培养基。
无血清培养基培养时间过长，对细胞是有毒性的，这里有血的教训!
5.转染的质粒一定纯度好、浓度高、无内毒素。
浓度不要低于0.35ug/ul。
低浓度的质粒，我做的结果都不好。
6.48小时mRNA表达最高;72h蛋白表达最高。
加转染试剂(Opti-MEMI),细胞就浮起或死亡问题分析?
各位前辈：我想把microRNA转到成纤维细胞内，用的是
GIBCO(tm)Opti-MEMIReduced-SerumMedium(1X)和Lipofectamine?2000转的。
现在的问题是一加转染试剂细胞就大量死亡。
Opti-MEM和冲洗用的PBS都37度预热过的。
甚至我用无血清的DMEM对照也大量死亡。
有时细胞死亡稍微好点，是不是和细胞批次关系更密切，还是有其他原因。
我的实验操作：
110%血清DMEM接种细胞在24孔板，长至30~50%满底时进行转染。
2lipofectamine20000.5ul稀释于
25ulOpti-MEMIReduced-SerumMedium(1X)(GIBCO)静置5分钟
3microRNA10pM稀释于25ulOpti-MEM
4混匀2和3，加Opti-MEM至500ul。
室温静置30min。
5用PBS(室温)轻轻冲洗培养空，镜下观察部分细胞略变圆(或有变圆倾向)，但没什么细胞浮起。
吸去PBS，轻轻加入2和3的混合物。
镜下观察，即刻细胞大量浮起，或细胞挛缩，有细胞死亡倾向。
6h后证实细胞大量死亡。
但有细胞干死在培养皿底的印迹。
不同批次的细胞，死亡情况略有不同。
问题分析：
1.不是说明书上说什么你就做什么，你是有自主意识的。
2.你的细胞加opti-MEM就不好有两种可能：a。
你养的细胞有问题，或者有共生菌，改变培养条件就可能爆发;b。
你的细胞对opti-MEM敏感。
为什么一定要用opti?你没有自己的主见吗?
3.你的转染有问题。
从你的描述来看，你并不是接种后24hr左右立即做转染，而是让它长到50%左右，也就是如果不到50%，你也许会长更久，对吗?——这是转染实验的大忌，超过24hr细胞对转染会不敏感，转染效率下降。
4.你转染时选择的细胞丰度也没有太大的问题，但是这个也是具体问题具体对待。
像HeLa是绝对要30%左右的，就是这样48hr后，细胞已经铺得密密麻麻;就不要想95%了，那样的细胞只能扔掉，一天换几次新鲜的培养基也跟不上培养基变黄的速度。
需要参考的东西包括你细胞原本的生长速度，对lipo2K的敏感程度(被抑制和毒死的情况，我可以负责任的告诉你lipo2K非常毒，他们的
lipo2K是稀释到33%的产品，他们100%的lipo2KCD是另卖的，其中原因之一就跟毒性有关，没有多少细胞能耐受)，总之要确保你的细胞在24hr长到合适的浓度做转染，转染40-48hr后铺满孔，或多或少一点点也可。
5.由于lipo2K毒性很高，如果实在不合适，你应该考虑更换其他的转染试剂;此外，应该用你的平时养细胞的培养基做转染，不过记得去除抗生素，另外稀释lipo2K和质粒的培养基要去血清去抗生素的。
6.无血清细胞处于一种应激状态，本来就长不好，这时候你投毒，当然更差。
lipo2K不是不计较培养基是否有血清吗，所以在“双无”培养基稀释lipo2K和RNA，形成复合物后可以投到含血清的无抗生素的培养基中。
实际上我们转染用的培养基，double血清含量(普通5%，转染用10%)。
早期lipo的说明书要求“双无”，3hr后添加double血清培养基。
实际操作发现，也可以直接投入double 血清培养基中。
7.无抗生素的原因是，细胞膜被穿孔，抗生素进入直接杀细胞。
经验推荐：OPTI-MEM与PBS和无血清的DMEM培养基相比较，LifeTech的GIBICO无血清培养基OPTI-MEM的转染效率比较高，不妨试下。