大小型层析柱的装填实践介绍(中文)
（完整word版）层析柱使用方法
（完整word版）层析柱使用方法层析柱使用方法层析柱使用方法柱层析和TLC是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实验技术。
这两项技术掌握与否，对于提高实验的效率至关重要。
常见的例子是：在柱层析时，由于层析柱中的硅胶填料装得不均匀（没有填严实），使得柱子在淋洗过程中就因为出现太多气泡变花，导致分离效果不好。
更常见的例子是：层析柱虽然装得不错，但是由于淋洗剂选择不恰当，结果导致几十毫克产品，用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离。
分离同样的东西，熟手可能只需要半个小时，而一个层析技术不过关的人可能半天都不能得到纯品。
由此可见，这两项技术掌握与否，对于提高工作效率，减轻工作量，减少有机溶剂的使用，从而对身心健康和环境保护都有明显的作用。
柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。
而淋洗剂的选择则是通过TLC 确定。
这里要指出的一点是：TLC的作用除了跟踪反应进程，检测试剂和原料纯度外，一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。
首先谈柱层析：1：装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。
不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。
湿法装柱：是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂“走柱子”，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。
干法装柱：则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。
接着是用淋洗剂“走柱子”，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。
干法装柱较方便，但最大的缺陷在于“走柱子”时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲烷更为明显。
柱层析实验报告
柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用. 2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
层析柱装填要点和要求
层析柱装填要点和要求
1. 嘿，一定要注意啊，装填层析柱的时候，颗粒大小可不能马虎呀！就像建房子，砖的大小得合适吧。
比如说用硅胶装填，颗粒太大或太小，效果能好吗？
2. 别忘了均匀装填呀！你想想，要是填得乱七八糟的，那不就像走在坑坑洼洼的路上，能顺顺畅畅吗？比如说填的时候东一块西一块的，那怎么行！
3. 要把气泡赶跑啊！气泡在里面就像个捣蛋鬼，会坏事的呀！就好比你吃饭的时候有颗沙子，多难受啊。
比如装的时候不小心混进了气泡，得想办法弄出去呀。
4. 压实也很关键呀！松松垮垮的可不行，这就好像搭积木不压实会倒一样。
比如说随便弄弄，那后续分离还能靠谱吗？
5. 速度不能太快也不能太慢啊！快了容易出问题，慢了又耽误时间。
就像开车，太快危险，太慢也急人。
比如填充的时候没把握好速度，那不就糟糕了。
6. 注意柱子的垂直哦！歪歪扭扭的可不像话，就跟站没站相一样。
比如说没放垂直，那后续操作能顺利吗？
7. 清洗干净也超级重要！脏兮兮的怎么用啊，就像你穿脏衣服出门一样。
比如装填前不认真清洗，那不是给自己找麻烦嘛。
8. 还有啊，多检查几遍呀！不检查怎么能放心呢，就像考试不检查会丢分一样。
比如说填完了就不管了，万一有问题呢！总之啊，装填层析柱这些要点和要求一定得认真对待，这样才能得到好的结果呀！。
层析柱装柱流程范文
层析柱装柱流程范文层析柱(CLC)是一种分离和纯化化学物质的常用技术。
它在许多领域，包括制药、生物化学、环境科学和食品科学中广泛应用。
层析柱装柱流程是在层析柱中装填填料的过程，决定着柱的分离性能和吸附能力。
下面是一种常见的层析柱装柱流程:1.准备填料首先需要选择适当的填料。
填料的选择取决于分离目标和样品特性。
常见的填料包括硅胶、脱色树脂、离子交换树脂和凝胶颗粒等。
填料应具有一定的吸附能力，能够与目标物发生相互作用。
2.准备柱子将柱子清洗干净，并根据填料的尺寸调整柱子的高度。
柱子可以是玻璃柱、不锈钢柱或塑料柱，具体选择取决于实验要求。
3.浸泡填料将填料放入容器中，加入合适的溶剂。
浸泡填料有助于去除可能存在的杂质，提高填料表面的活性。
可以根据填料类型和实验要求调整浸泡时间，一般需要几小时到几天。
4.烘干填料将浸泡过的填料放入烘箱中或暴露在室温下进行干燥。
烘干填料有助于去除残留的溶剂，使填料能够更好地保持其结构和吸附性能。
5.装填填料将干燥的填料均匀地倒入柱子中。
填料的层高度应根据实验要求调整，一般为柱子高度的1/3到2/3、填料应当尽量均匀地分布在柱子中，以确保有效的分离效果。
6.压实填料使用压实设备或手动敲击柱子，将填料压缩和固定在柱子中。
压实的目的是增加填料的堆积密度，减少填料颗粒之间的间隙，提高分离效果。
压实的程度应根据填料类型和实验要求进行调整。
7.洗涤柱子将柱子与适当的溶剂进行冲洗，以去除可能存在的杂质和残留的溶剂。
洗涤的选择取决于填料和实验要求。
洗涤过程可以重复几次，直到柱子完全清洁。
8.储存柱子装填完成后，柱子可以进行包装或储存。
柱子应存放在阴凉干燥的地方，以保持填料的性能和活性。
柱层析实验报告
柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用. 2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
层析柱装填高度
层析柱装填高度摘要：一、层析柱简介1.层析柱的概念2.层析柱的分类3.层析柱的作用二、层析柱装填高度的重要性1.装填高度对层析效果的影响2.装填高度与样品移动速度的关系3.装填高度与分辨率的关系三、层析柱装填高度的确定1.理论计算法2.实验测定法3.经验公式法四、装填高度的调整与优化1.装填高度的调整2.装填高度的优化策略3.装填高度调整与优化的实际应用正文：层析柱是色谱分离技术中常用的分离介质，对于样品的分离起着关键作用。
本文主要探讨了层析柱装填高度的重要性及其确定方法。
首先，层析柱装填高度对层析效果具有重要影响。
适当的装填高度可以保证样品在柱中发生有效的分离，从而提高柱的分离效果。
装填高度不足可能导致分离效果不佳，而过度装填则可能使样品在柱中扩散不均，影响分离效果。
其次，装填高度与样品在柱中的移动速度密切相关。
在一定范围内，装填高度越高，样品在柱中的扩散阻力越大，从而降低样品的移动速度。
这会对分离效果产生一定影响，因此需要在实际操作中权衡。
此外，装填高度还会影响柱的分辨率。
适当的装填高度有利于提高柱的分辨率，从而实现样品的有效分离。
在实际操作中，确定层析柱装填高度的方法有理论计算法、实验测定法和经验公式法。
理论计算法是通过计算样品在柱中的扩散系数来确定装填高度；实验测定法是通过实际操作，根据样品在柱中的分离效果来调整装填高度；经验公式法是参照已有的实验数据，根据经验公式来确定装填高度。
最后，装填高度的调整与优化是提高柱分离效果的关键。
在实际操作中，可以通过调整装填高度、优化流动相和梯度条件等方法来提高柱的分离效果。
柱层析实验报告
柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。
2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。
二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。
从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。
利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。
分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。
柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。
常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。
吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。
由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。
继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。
用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。
本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。
由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。
三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用.2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。
层析柱装柱注意事项
层析柱装柱注意事项《层析柱装柱那些事儿》嘿，朋友们！今天咱来聊聊层析柱装柱这档子事儿。
这可真是个技术活，稍有不慎，那后果可是不堪设想啊！首先，选柱子就像找对象一样，得找个合适的。
尺寸得匹配你的实验需求，不然就像小脚穿大鞋或者大脚挤小鞋，都难受。
这柱子要是选错了，后面的事儿可就不好办喽。
然后，就是填料啦！这填料就像是柱子的灵魂，得好好对待。
千万别毛手毛脚地把它弄得到处都是，不然就像撒了一地的珍珠，心疼着呢。
装填料的时候，要慢慢地、轻轻地，就像给宝贝穿衣服一样，小心翼翼的。
还有啊，装柱的时候可得保持耐心。
这可不是着急就能搞定的事儿，得慢慢把填料压实，不能有气泡。
就好像盖房子打地基一样，得结实，不然房子可就要歪歪扭扭啦！有时候，我就觉得自己像是一个雕塑大师，在精心雕琢我的作品。
说起气泡，那可真是讨厌的家伙！一旦有气泡在里面，就像一个隐藏的炸弹，随时可能爆炸，让你的实验化为泡影。
所以啊，得时刻警惕着，一有气泡冒出来，就得赶紧把它赶跑。
记得有一次，我着急忙慌地装柱，结果填料没压实，实验做得一塌糊涂。
那心情啊，简直比丢了钱包还难受。
从那以后，我就吸取教训了，装柱的时候再也不马虎了。
另外，装柱的过程中也得注意保持环境卫生哦！别搞得乱七八糟的，不然被导师看到了，那可少不了一顿批评。
咱可得把实验台收拾得干干净净的，就像自己的小天地一样。
总之，层析柱装柱虽然看似简单，实则暗藏玄机。
咱们可得用心对待，就像对待自己最喜欢的玩具一样。
只有这样，才能保证实验的顺利进行，得到我们想要的结果。
好啦，今天就跟大家分享这些。
希望我的这些经验和感受能对你们有所帮助，让你们在装柱的道路上少走些弯路。
祝大家实验顺利，都能成为层析柱装柱的高手！哈哈！。
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2M Na2SO4 or (NH4)2SO4 in 50mM phosphate buffer
0.5M NaCl in 0.1M NaHCO3 or phosphate buffer 1M NaCl in 100mM phosphate or NaHCO3 buffer 2M NaCl in 20 nM phosphate buffer 0.5M NaCl or 0.2M glycine in 20mM phosphate or Tris buffer 2M KCI or NaCl in 20mM phosphate
TOYOPEARL的静臵时间
TOYOPEARL 粒径
Coarse Medium Fine Superfine C级规格: 100 µm M级规格: 65 µm F级规格: 45 µm S级规格: 35 µm 水中静臵时间 15-30 Min. 30-45 Min. 45-60 Min. 60-90 Min.
内容提要 装填前的准备工作
– 小颗粒的去除 – 缓冲液平衡 – 匀浆准备
装填步骤 / 层析柱类型 层析柱的操作
– 柱子的平衡与柱效评价 – 保存
Peak Biotech
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
TOYOPEARL树脂填料的装填
装填的一般原则
☆TOYOPEARL的装填压力最好在0.5 - 5 bar的范围内 ☆装填流速至少比实际操作流速高50% ☆不要使用会产生剪切力的装臵（如：磁力搅拌器、 齿轮泵）
装填
管路清洗
运行
卸料
优点：易于装填 弱点：填料用量较大, 卸料可能较难, 有剪切力发生, 卸料会导致大量的浆液体积
Resolute
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
恒压装填方法
Radial Flow - “Self Packer” - preset column volume (Proxcys-CRIO)
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
恒压装填方法
Horizontal Flow - “Self Packer” - preset column volume
(Pall/Euroflow-ResoluteTM, Millipore-IsoPakTM, GE Healthcare-Chromaflow, Eastern River)
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
TOYOPEARL树脂填料 大小型工业制备色谱柱的装填实践
Götec
GE Healthcare
Pall
Pall-Euroflow / Resolute A. Sprauer – 5/06
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
TOYOPEARL树脂填料的装填
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
恒流速装填方法
恒流速装填法中流速的增加量举例：
柱尺寸 (I.D. x L) 2.2 cm x 60 cm 9 cm x 30 cm 25 cm x 30 cm 填料类型
目标流速 (ml/min)
2
增加量 (ml/min) 0.5 50 500
保持时间 (min) 0.5 2 2
40 – 150
40 – 150 400 – 600 800 – 1000 800 – 1200 700 – 1000 800 – 1200 400 – 600 800 – 1000 800 – 1200 800 – 1000 800 – 1200 800 – 1000
15 – 30
15 – 30 45 – 65 80 – 130 80 – 600 80 – 240 80 – 500 45 – 65 80 – 130 80 – 500 80 – 130 80 – 500 30 – 130
1 M NaCl in 50 mM phosphate, Tris, or acetate buffer
HIC Ether-650, Phenyl-650, PPG-600m, Butyl-650, SuperButyl550C and Hexyl-650c AFC AF-Tresyl and AF-Epoxy-650M AF-Formyl-650M, AF-Amino-650M and AF-Carboxy-650M AF-Heparin HC-560M AF-Chelate-650M AF-Blue HC-650M, AF-Red-650M
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
匀浆准备
利用量筒测量静臵胶体体积或使用水泵抽滤浆液至湿滤饼后 计算装填所需要的填料体积 通过添加装填缓冲液调节浆液浓度:
流动式装填柱 ~ 40 - 70% (v/v) 自动装填柱 20 - 60% (v/v)
最终装填好的柱床体积是要小于装填前胶体静臵体积或抽干 的湿滤饼的体积
CRIO - Colonne Radiale InOxidable
o Low space requirements – only 0,5~1 m2; even 600 liter BV is mounted on wheels o Large inlet surface area – cotrolled & gentle product application (“Natural Distribution”). o Thin frit keeps the resin together – it is not used as flow distributor –> a barrier of only ~60um – negligible influence on pressure generation
HW-55S QAE-550C DEAE-650M
300
2000
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
恒流速装填方法- 扰动（由入口处筛板下气泡而引起的）
气泡会由于切换阀、管路连接处、 Götec/Superformance 20cm ID Column 活塞运动、未脱气缓冲液而引起........
F (45 um)
HW-75 IEC DEAE-650, SuperQ-650 CM-650, SP-650 2,2 x 60 2,2 x 20 F (45 um) S (35 um) M (65 um) C (100 um) SP-550, QAE-550 MegaCap II SP-550 HIC Ether-650, Phenyl-650, Butyl-650 2,2 x 20 2,2 x 20 2,2 x 20 C (100 um) EC (100-300 um) S (35 um) M (65 um) C (100 um) PPG-600, Butyl-600 SuperButy-550, Hexyl-550 AFC AF-Amino-650, AF-Carboxy-650 AF-Formyl-650, AF-Epoxy-650 AF-Tresyl-650, AF-Chelate-650, AF-Blue HC-650, AF-Heparin-HC-650 AF-Red-650 2,2 x 20 2,2 x 20 2,2 x 10 M (65 um) C (100 um) M (65 um)
Millipore Quik Scale
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
实验室规模最优化的装填及柱操作流速
模式 填料类型 柱尺寸 [cm ID x L] SEC HW-40 2,2 x 60 S (30 um) F (45 um) C (75 um) HW-50 2,2 x 60 S (30 um) F (45 um) HW-55 2,2 x 60 S (30 um) F (45 um) HW-65 2,2 x 60 S (30 um) 填料等级 装填流速 [cm/h] 30 – 40 60 – 80 120 – 160 25 – 35 50 – 70 25 – 35 50 – 70 20 – 75 操作流速 [cm/h] 10 – 25 25 – 50 50 – 100 10 – 20 25 – 35 10 – 20 25 – 35 10 – 15
Slurry preparation in the column Settling resin Slurry preparation in a separate tank
Amicon Moduline-120cm ID
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
对于给定的柱子，装柱所需的静臵胶体积
Toyopearl HW-40, HW-50, HW-55 HW-65 and HW-75F Ether-650, Phenyl-650 Butyl-650, DEAE-650 Super-Q-650, CM-650 SP-650 and all Affinity QAE-550C and SP-550C
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
恒流速装填方法
Flow Packed Columns (Millipore-QuikScale+Moduline, GE Healthcare-BPG, Götec-Superformance, BioRadGeltec, etc.)
方法简介:
将柱底筛板用装填缓冲液润湿（赶走气泡） 任何时候，均需确保浆液在注入层析柱前进行过匀浆操作 匀浆液倒入后，立刻将分配器臵于储槽内浆液表面 分配器与溶液浆液间不应有气泡存在 阶段性调整装填流速至目标流速，以产生一个实时的、没有太大振动 的栓塞流 – 在最初的压实操作基础上，为进一步压实柱床，至少泵入5-10倍柱体 积的装填缓冲液 – 调整分配器至胶体表面 – 重复后两个步骤，直至柱床被彻底压实。最后将分配器移至距离柱床 2-5 mm 处（最后一次）。不要担心使用分配器的同时进行柱床的压 实操作！ – – – – –