谷胱甘肽琼脂糖凝胶使用说明
GST琼脂糖凝胶FF
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北京卓冠科技有限公司 北京市西城区德外大街 2 号 512 室
邮政编码：100011
TEL：62364123
FAX：62360884
品目录
货号
产品名称
CS-A03-00 GST 琼脂糖凝胶 FF
CS-A03-01 CS-A03-02 CS-A03-03 CS-A03-04
GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF GST 琼脂糖凝胶 FF
联系人：韦新桂
E-mail: weixingui@
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北京卓冠科技有限公司 北京市西城区德外大街 2 号 512 室
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１、除去因离子交换作用吸附的蛋白，用 2-3 倍柱床体积 2M 的 NaCl 溶液淋洗柱子， 再反向淋洗。 ２、除去蛋白沉淀、疏水性蛋白，用 1M 的 NaOH 以 100cm/h 的速度淋洗柱子 1-2h， 再 反向淋洗。 ３、所有操作中，都要用至少 3 倍柱床体积的初始缓冲液洗柱子。 ４、除去强的疏水性蛋白和脂质等，用 4 倍柱床体积的 70%的乙醇或者 30%的异丙醇洗 柱子，再反向淋洗。 八、保存 在 20%乙醇，4℃下长期保存。
包装 1ml (预装 柱) 25ml
100ml
500ml
大包装
载量 mg/ml
≤10mg/ml
≤10mg/ml ≤10mg/ml ≤10mg/ml ≤10mg/ml
特性 及应用
平均粒 径(μm)
GST 及 GST 融 合蛋白
90
GST 及 GST 融 合蛋白
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GST 及 GST 融 合蛋白
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琼脂糖凝胶
谢谢观看
琼脂糖 Agarose，缩写为AG，是琼脂中不带电荷的中性组成成份，也译为琼胶素或琼胶糖。琼脂糖化学结构 由β-D-吡喃半乳糖(1-4)连接3,6-脱水α-L-吡喃半乳糖基单位构成.
制作方法
把琼脂糖，即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂，溶于热水，冷却制成的凝胶。
作用
制成的小颗粒用于凝胶过滤。适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤，若使用5%以下浓度的凝胶， 也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点，有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降 反应的支持物。
琼脂糖凝胶
以琼脂糖为支持介质制备的凝胶
01 商品名称
03 制作方法
目录
02 基本结构 04 作用
琼脂糖凝胶是以琼脂糖为支持介质制备的凝胶。琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼 脂糖，琼脂糖的熔点在62〜65°C之间，融化后在37°C下可维持液态数小时，30°C时凝固成胶。多用于对染色 体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。
商品名称
琼脂糖凝胶agarose gel 储藏温度:常温 商品名很多，常见的有，Sepharose（瑞典，pharmacia ），Bio-Gel-A（美国Bio-Rad）链如氢键来维持状结构，状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下， 它的结构是稳定的，可以在许多条件下使用（如水，pH4-9范围内的盐溶液）。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化， 也不能高压消毒，可用化学灭菌活处理。
琼脂糖凝胶电泳常考操作流程
琼脂糖凝胶电泳常考操作流程
准备工具：用蒸馏水将制胶工具洗干净，准备好制胶平板，用琼脂将模具边缘封闭，架好梳子。
配制琼脂糖凝胶：根据要分离的样品（DNA）大小配制合适浓度的琼脂糖凝胶。
将一定量的琼脂糖干粉加入到合适体积的锥形瓶中，加入一定量的电泳缓冲液（30ml左右TAE）。
融化琼脂糖：将琼脂糖放入到微波炉内加热融化，冷却片刻（不烫手即可）。
浇灌凝胶：融化后的琼脂溶液摇晃混匀，倒入电泳槽中，等其凝固。
凝固凝胶：室温下凝固30-40min左右，小心的拔出梳子，取出凝固好的凝胶放入电泳槽内，准备上样。
加入电泳缓冲液：在电泳槽中倒入电泳缓冲液（TAE）；没过胶面1mm左右，去除胶孔内的气泡。
上样：将DNA样品和对应体积的上样缓冲液（loading buffer）和染料混合，用抢混匀后加入到凝胶孔内。
电泳：上样结束，接通电源，红色正极，黑色负极，DNA样品有负极往正极运动，加样孔侧为负，，40-50v电压，电压30敏左右即可（<40min）。
观察结果：电压结束，关闭电源，凝胶成像仪上观察电压位置并比对marker 判断大小。
纯泰GST(GSH)亲和层析介质使用说明书
z 聚苯乙烯层析柱
1) 将层析柱固定在铁架台或层析架上，封闭层析 柱下端出口，向柱内充入纯水，排开层析柱内 空气，先将垫片完全浸没于水面下方，在保持 水平的状态下，小心推向底部，避免垫片下方 滞留气泡。
2) 打开层析柱下端出口，排出柱中纯水；在液面 低至距垫片1~1.5cm高度时封闭下端出口，用移 液枪按需要量吸取介质，或用玻璃棒紧靠柱子 内壁引流，将介质加入到层析柱中；静置30min， 让介质自然沉降。
每次层析前，为达到最佳纯化效果，需对介质 进行再生，步骤如下：
1) 2倍介质体积高pH缓冲液（0.1M Tris-HCl, 0.5M
NaCl, pH8.5）和低pH缓 冲液（0.1M sodium acetate, 0.5M NaCl, pH4.5）交替洗脱三次。 2) 10倍介质体积缓冲液A平衡介质。 7. SDS-PAGE检测：
三、 适用范围
分离谷胱甘肽S-转移酶（GST）融合蛋白、其 它谷胱甘肽转移酶以及与谷胱甘肽有亲和作用的 蛋白。
四、 操作说明
1. 缓冲液配制
z 缓冲液A（平衡缓冲液）：10mM Na2HPO4， 1.8mM KH2PO4，140mM NaCl，2.7mM KCl， 调节pH值至 8.0。
z 缓冲液 B（洗脱缓冲液）：10mM Glutathione
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1) 用10倍介质体积缓冲液A过柱，平衡介质； 2) 上样； 3) 用5~10倍介质体积缓冲液A过柱，洗去层析柱
中剩余上样液并重新平衡介质； 4) 用5~10倍介质体积缓冲液B洗脱，收集洗脱液； 5) 用5~10倍介质体积缓冲液A重新平衡介质。 注：纯化过程流速不宜过快，对于1ml介质，流速 保持在0.5ml/min为宜。 5. 介质清洗
琼脂糖凝胶电泳标准操作流程
琼脂糖凝胶电泳操作标准流程一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是常用的检测核酸的方法，具有操作方便、经济快速等优点。
本铜人阵学习DNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术，此关为能力考核，通关成功后，代表具备操作琼脂糖电泳的能力。
二、实验原理琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、RNA分子混合物的方法，这种电泳方法以琼脂凝胶作为支持物，利用DNA分子在泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合物的目的。
DNA分子在高于其等电点的溶液中带负电，在电场中向阳极移动。
在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即分子本身的大小和构型是主要的影响因素。
DNA分子的迁移速度与其相对分子量成反比。
不同构型的DNA分子的迁移速度不同。
如环形DNA分子样品，其中有三种构型的分子：共价闭合环状的超螺旋分子（cccDNA）、开环分子(ocDNA)、和线形DNA分子(IDNA)。
这三种不同构型分子进行电泳时的迁移速度大小顺序为:cccDNA＞IDNA＞ocDNA影响核酸分子泳动率的因素主要还是：1、DNA分子大小；2、琼脂糖浓度；3、DNA构想；4、所用的电压；5、琼脂糖种类；6、电泳缓冲液核酸电泳中常用的染色剂是溴化乙锭（ethidium bromide EB）。
溴化乙锭是一种扁平分子，可以嵌入核酸双链的配对碱基之间。
在紫外线照射BE-DNA 复合物时，出现不同的效应。
254nm的紫外线照射时，灵敏度最高，但对DNA损伤严重；360nm紫外线照射时，虽然灵敏度较低，但对DNA损伤小，所以适合对DNA样品的观察和回收等操作。
300nm紫外线照射的灵敏度较高，且对DNA损伤不是很大，所以也比较适用。
三、材料、试剂及器具1、材料不同大小的基因组片段；2、试剂Hind III digest DNA Marker（分子量标准）(TaKaRa)；D2000(TianGen)；BIOWESTAGAROSE（西班牙琼脂糖）；加样缓冲液（6x）：溴酚黄；电泳缓冲液（1×TAE）；溴化乙锭（EB）；3、仪器及器具（1）移液器、吸头、锥形瓶（2）电泳系统：电泳仪、水平电泳槽、托盘、胶托、梳子等。
凝胶的正确使用流程解
凝胶的正确使用流程解1. 凝胶的概述凝胶是一种在实验室中广泛使用的材料，常用于电泳和蛋白质分离等实验。
正确使用凝胶可以确保实验结果的准确性和可重复性。
本文将介绍凝胶的正确使用流程，包括准备凝胶、制备样品、装载样品和进行电泳分离等步骤。
2. 准备凝胶准备凝胶是使用凝胶的第一步，可根据实验需求选择不同种类的凝胶，如聚丙烯酰胺凝胶（Polyacrylamide gel）或琼脂糖凝胶（Agarose gel）。
以下是准备凝胶的步骤：•准备所需试剂和设备，包括凝胶模具、凝胶缓冲液和凝胶聚合物等。
•根据实验需要，按照要求配置凝胶缓冲液，并溶解凝胶聚合物。
•将凝胶模具放在水平的工作台上，并将模具中装有凝胶缓冲液的试管或烧杯放在模具内。
•缓慢地将凝胶聚合物溶液倒入模具内，确保液面平整，然后等待凝胶聚合。
3. 制备样品准备样品是使用凝胶进行分离的关键步骤，以下是制备样品的步骤：•收集所需的样品，并将样品转移到离心管或试管中。
•如有必要，对样品进行预处理，例如离心、加热或添加荧光染料等。
•根据实验需要，添加适量的样品缓冲液或加载缓冲液，以确保样品在电泳过程中保持稳定。
4. 装载样品装载样品是将样品置于凝胶上的步骤，以下是装载样品的步骤：•将凝胶从模具中取出，并放在凝胶室或电泳槽中。
•使用微量移液器或吸管将样品缓冲液和样品分别加载到凝胶孔中。
•根据实验需要，可以在凝胶孔中加载分子量标记物，以便确定目标DNA或蛋白质的大小。
5. 进行电泳分离进行电泳分离是使用凝胶的最后一步，以下是进行电泳分离的步骤：•将装有样品的凝胶室或电泳槽连接到电源以及电泳缓冲液槽。
•设置所需的电压和时间参数，并启动电泳操作。
•在电泳过程中，观察凝胶中样品的迁移情况，并确保凝胶在适当的时间范围内完成分离。
•分离完成后，关闭电源并移除凝胶室或电泳槽。
6. 结果分析完成电泳分离后，可以根据实验需求选择适当的方式对分离结果进行分析，如用紫外线照射凝胶来可视化DNA条带或用染色剂染色来可视化蛋白条带。
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤
琼脂糖凝胶电泳的操作步骤琼脂糖凝胶电泳是一种常用的蛋白质和核酸分析方法。
本文将介绍琼脂糖凝胶电泳的具体操作步骤，帮助读者更好地理解和掌握这一实验技术。
材料准备1.琼脂糖凝胶：根据需要选择合适的琼脂糖凝胶，通常有0.8%、1%和1.5%等不同浓度的琼脂糖凝胶可供选择。
2.海藻酸缓冲液：配制1×TAE缓冲液，将适量的氨基乙酸和琼脂糖溶解在去离子水中，并调整pH值至7.5。
样品制备1.样品处理：将待分析的蛋白质或核酸样品按照实验要求进行处理，例如进行裂解、消化等。
2.加载缓冲液：将样品与适量的样品加载缓冲液混合均匀，通常加载缓冲液中含有甘氨酸、溴酚蓝等成分，有利于负载样品。
凝胶制备1.琼脂糖溶液的制备：将适量的琼脂糖粉末加入到海藻酸缓冲液中，用力搅拌使其充分溶解。
2.加入染色剂：在溶解的琼脂糖溶液中加入适量的染色剂，如溴酚蓝，以便观察凝胶的迁移情况和样品带。
3.准备载玻片：在凝胶电泳槽的两侧放置两块玻璃板，用胶条固定，形成一个长方形的凝胶槽。
4.倒制凝胶：将制备好的琼脂糖溶液倒入凝胶槽中，并用打孔器在凝胶上打孔，用来加载样品。
电泳过程1.样品加载：将经过处理的样品加载到凝胶孔洞中，注意不要溢出或漏掉。
2.正常电泳：将凝胶槽放入电泳槽中，使凝胶完全浸泡在TAE缓冲液中，注意缓冲液的量要覆盖凝胶槽。
3.开启电源：将凝胶槽连接到电源上，并设定合适的电流和电压，开始电泳过程。
4.电泳时间：根据实验需要设定合适的电泳时间，通常为30分钟到数小时不等。
5.关闭电源：在电泳结束后，关闭电源，取出凝胶槽。
凝胶染色和成像1.染色凝胶：将电泳结束的凝胶浸泡在适量的染色液中，常用的染色剂有共染剂、Coomassie蓝等。
2.染色时间：根据染色剂的要求和实验需要，将凝胶浸泡在染色液中一定时间，以达到理想的染色效果。
3.洗涤凝胶：将染色液倒掉，用去离子水洗涤凝胶，去除多余的染色剂。
4.成像和分析：将凝胶放入凝胶成像系统中进行成像，根据需要可进行图像分析和数据提取。
谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B (GST标签纯化树脂)使用说明
谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B（GST标签纯化树脂）使用说明货号：P2020规格：5ml/10ml保存：4℃保存，有效期至少一年产品简介：pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。
GSTs是一类以谷胱甘肽（γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸）作为底物，通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。
由于GST对底物的亲和力是亚毫摩尔级的，因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对GST及其融合蛋白的纯化效率很高。
可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。
树脂用3mol/L NaCl的缓冲液再生。
谷胱甘肽琼脂糖对GST融合蛋白的结合能力很强（每毫升柱床体积的树脂能结合8毫克融合蛋白）。
特性:粒度：45-165um流速：75cm/h工作PH:4-10耐压:0.3Mpa载量:＞5mg谷胱甘肽S-转移酶使用说明：谷胱甘肽树脂的处理:1.轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆。
2.取部分匀浆放入15ml聚丙烯管（每100ml细菌培养物大约需要2ml匀浆）。
3.4℃500g离心5分钟，小心去掉上清。
4.在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS，颠倒数次混匀，4℃500g离心5分钟，小心去掉上清。
5.每毫升树脂加入1毫升冷的PBS，制成50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置待用。
制备细胞抽提物：6.每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mlPBS缓冲液中。
7.加入溶菌酶至终浓度为1mg/ml,冰上放置30分钟。
8.用针筒将10ml浓度为0.2%的TritonX-100强行注入黏稠的细胞裂解物中，剧烈振动数次混匀。
加入DNase和RNase至终浓度5ug/ml,4℃振动温育10分钟，4℃3000g 离心30分钟，去除不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入DTT至终浓度1mmol/L。
纯化融合蛋白：9.细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和，每100毫升细菌培养物加2ml树脂，于室温轻摇30min。
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谷胱甘肽琼脂糖凝胶使用说明 Pgex 载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽 S-转移酶溶合，因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层 析进行纯化。Pgex 是一类以谷胱甘肽（γ-谷胱甘肽半胱胺酰甘氨酸）作为底物，通过形成 硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于 GST 对底物的亲和力是亚豪摩尔级的，因此谷胱甘肽固 化琼脂糖形成的亲和层析树脂 GST 及其融合蛋白的纯化效率很高。可以用含游离谷胱甘肽的 缓冲液洗脱结合 GST 融合蛋白。树脂用 3mol/L NaCl 的缓冲液再生。 谷胱甘肽琼脂糖对 GST 融合蛋白的结合能力很强（每毫升柱床体积的树脂能结合 8 毫克融合 蛋白）。 1 谷胱甘肽树脂的处理 （1）轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器，将树脂混成匀浆； （2）取部分匀浆放入 15ml 聚丙烯管（每 100ml 细菌培养物需要 2ml 匀浆）； （3）4℃ 500 g 离心 5 分钟，小心去掉上清； （4）在树脂中加入 10 倍柱床体积的冷的 PBS，颠倒数次，混合均匀，4℃ 500 g 离心 5 分 钟，小心去掉上清； （5）每毫升树脂加入 1 毫升冷的 PBS，制成 50%匀浆，颠倒数次，混合均匀，悬液冰上放置 待用。 2 制备细胞抽提物 （1）每 100 毫升培养基的细胞沉淀悬于 4mlPBS； （2）加入溶菌酶至终浓度 1mg/ml,冰上放置 30 分钟； （3）用针筒将 10ml 0.2%TritonX-100 强行注入黏的细胞裂解物中，剧烈振动数次均匀。 加入 DNase 和 RNase 至终浓度 5ug/ml,4℃振动温育 10 分钟，4℃3000g 离心 30 分钟，去除 不溶性细胞碎片，上清转移到一只新管中，加入 DTT 至终浓度 1mmol/L。 3 纯化融合蛋白 （1）细胞裂解物与适量 50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混合，每 100 毫升细菌培养物加 2ml 树脂，于室温轻摇 30min；
（2）混合物于 4℃以 500g 离心 5 分钟，小心去掉上清并留样少许进行 SDS 聚丙烯酰胺凝胶 电泳； （3）沉淀中加入 10 倍柱床体积的冷的 PBS，颠倒离心管数次混匀，洗去未与树脂结合的蛋 白； （4）4℃以 500g 离心 5 分钟，小心去掉上清并留样少许进行 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳； （5）重复步骤 11 和 12 两次； （6）合的 GST 融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱缓冲液洗脱，也可用凝血酶、肠激酶或 Xa 因子切 割。 4 用谷胱甘肽洗脱融合蛋白 （1）沉淀中加入 1 倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液，室温轻轻搅动 10min,洗脱树脂上结 合的蛋白； （2）如步骤 12 离心，上清（含洗脱的融合蛋白）移至管中； （3）重复步骤 a 和 b，合并三次上清。 5 蛋白酶解 （1）在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或 Xa 因子（根据融合蛋白中的位点选 择），每 ml 树脂加入 50 单位溶于 1mlPBS 的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀，室温下振荡 2-16 小时。用小规模试验确定精确时间； （2）4℃以 500g 离心 5 分钟，上清小心移至新管中。（GST 仍结合在树脂上，而靶蛋白也在 上清中，仍需要奋力）； （3）10%SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。 6 试剂配制
谷胱甘肽洗脱缓冲液：10mmol/L 还原型谷胱甘肽 50mmol/L Tris-Cl(PH8.0)
特别注意： 上样之前，样品必须去除色素，否则色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。