盐酸克伦特罗的检测方法
酶联免疫吸附法测定猪肉中盐酸克伦特罗的方法
酶联免疫吸附法测定猪肉中盐酸克伦特罗的方法作者：张清超来源：《现代食品》 2017年第11期盐酸克伦特罗俗称瘦肉精，是人工合成类的β- 肾上腺素兴奋剂的一种，在治疗支气管扩张方面有显著效果，用量适当时，是防治哮喘、肺气肿等肺部疾病的有效物质；但当其用量为正常治疗量的5 ～ 10 倍时，在能量重分配的作用下，将导致脂肪沉积异常减少、肌肉合成异常增加，部分非法使用者往往将其添加到动物饲料中，用以改善动物胴体品质。
当动物食用盐酸克伦特罗后，其体内将残留不同程度的盐酸克伦特罗，用其制作的食品一旦被人们食用，将引发一系列中毒症状，严重危害人体生命安全。
调查显示，盐酸克伦特罗一次摄入量过大，人体将产生呕吐、心跳骤然加速等异常生理反应，严重者甚至直接死亡，因此被世界上大多数国家禁用。
近年来，在我国的严厉打击下，非法生产销售添加盐酸克伦特罗食品的现象显著减少，但畜产品抽检的实际工作显示，瘦肉精仍时有检出，加强对畜产品中盐酸克伦特罗的检测势在必行。
在多种检测方法中，胶体金免疫层析法、酶联免疫吸附法较为常见，广泛应用于畜牧业中，具有准确率高、操作简便、耗时短等优点。
下面本文将就酶联免疫吸附法测定猪肉中盐酸克伦特罗的方法进行进一步分析和总结。
1 原料与方法1.1 原料到附近市场随机抽取一批剔除杂质、脂肪的无皮精肉，使用高速捣碎机对无皮精肉进行处理，彻底捣碎后将所有精肉混合均匀并置于冰箱冷冻备用。
检测时，从冰箱冷冻室抽取5 g 捣碎样品，将25 mL 的50 mmol/L HCl与样品混合，持续摇动至均质。
在离心管中加入5 g 均质物，以10 000 r/min 的速度高速离心15 min，分离血清，提取上清液，在上清液中加入300μL 的1 mol/L NaOH，混匀并静置15 min。
15 min 后，在混合上清液中加入4 mL 的500 mmol/L KH2PO4，混匀静置，保存在温度为4 ℃左右的环境中。
90 min 后，取出混合液，以10 000 r/min的速度高速离心15 min，分离上清液，待检，待检标本共10 份[1]。
肉原料肉中激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)的测定—气质联用技术
2 液质联用法检测瘦肉精 2.2实验方法与主要步骤
2.2.4结果计算
计算结果小于本标准检出限0.5ug/kg时，视为未检出
2 液质联用法检测瘦肉精
备注 在检测实验室，确证和定量瘦肉精时，相对于气质联用，更
多使用液质联用。
2 液质联用法检测瘦肉精 2.2实验方法与主要步骤
2.2.3主要步骤 5.振荡均匀，放入37℃水浴 锅震荡16h 放置一夜 （备注：样品中有油脂，需要加入正己烷；若无油脂，无需加入正己烷） 6.离心 9000r/min 7min 7.上清液过滤（用漏斗、定量滤纸）到另一新管,用乙酸铵冲洗滤纸
详细过程参考实训指导书或国标GB-T22286-2008
2 液质联用法检测瘦肉精
2.2实验方法与主要步骤
2.2.2主要仪器: 高效液相色谱-串联质谱联用仪:配有电喷雾离子源（ESI）、 均质器、 漩涡混合器 离心机 氮吹仪、 真空过柱装置。
2 液质联用法检测瘦肉精 2.2实验方法与主要步骤
2.2.3主要步骤 （1）提取 1.称取5g样品（均匀取样）于50ml离心管中，
2.1原理
试样中的残留物经酶解，用高氯酸调节pH值，沉淀蛋白后离心， 上清液用异丙醇-乙酸乙酯提取，再用阳离子交换柱净化，液相色谱串联质谱法测定，内标法定量。
2 液质联用法检测瘦肉精
2.2实验方法与主要步骤
2.2.1主要试剂 甲醇（液相色谱纯） 乙酸钠 高氯酸 氨水甲醇溶液 标准储备溶液； 混合标准储备溶液； 同位素内标物:克仑特罗-D9， 沙丁胺醇-D3，纯度大于98%等
2 液质联用法检测瘦肉精 2.2实验方法吹干样液，吹到似干非干干为止； （6）用1ml 0.1 甲酸/水—甲醇定容； （7）超声后放沃悬器沃悬30s-1min； （8）用注射器吸需要样液，经0.22微米滤膜除杂，转入进样瓶 3.液相色谱串联质谱测定
盐酸克伦特罗胶体金检测
武汉欣泰扬生物科技有限公司盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测试剂使用说明书【产品简介】本产品用于快速检测猪肉中盐酸克罗特罗残留，灵敏度为3 μg/kg（ppb），整个检测过程只需要15～25分钟，适用于各类企业及检测机构。
【产品组成】盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测试剂板CLEN专用PBST缓冲液（1瓶/盒）说明书（1份/盒）【样品处理】猪肉样品应当避光冷藏保存。
1称取4 g左右剪碎的猪肉样本装于5 mL刻度冷冻管中，盖紧管盖，于90℃以上水浴锅中水浴10 分钟；2冷却至常温后，取3滴煮出的溶液（尽量吸取肉汁中上清）于1.5 ml离心管中，再加入3滴CLEN专用PBST缓冲液，充分混合，待检。
【使用步骤】测试前先完整阅读使用说明书，并将试剂板和待检样本溶液恢复至常温（20~30℃）。
♦从包装袋中取出试剂板后请尽快使用；♦用滴管吸取待检样品溶液，于加样孔中滴加4滴（约100 μL），加样后开始计时；♦结果应在3~5分钟读取，其他时间判读无效；♦读取结果时，试剂板水平置于观察者正面，如上图右侧所示。
【结果判断】阴性（－）：T 线（检测线，靠近加样孔一端）显色，表明样品中盐酸克伦特罗浓度低于3ng/mL，或不含盐酸克伦特罗。
阳性（＋）：T 线无显色，则表明样品中盐酸克伦特罗浓度高于3 ng/mL。
无效：未出现C 线（对照线），可能是操作不当或试剂条已失效。
应再次阅读说明书，并用新的试剂板重新测试。
【注意事项】♦请勿触摸试剂板中央的白色膜面；♦请勿使用过期的试剂板；♦切勿重复使用配备的滴管，以免交叉污染；♦切勿食用配备的试剂；♦若需直接检测标准品，请用本公司提供的PBST缓冲液进行配制。
【特异性】本产品与链霉素、四环素、氯霉素、磺胺类等药物无交叉反应。
【精密度】同时用本产品和盐酸克伦特罗ELISA检测试剂盒对260份样品包括140份阴性样本和120份阳性样本进行检测，结果表明本产品与盐酸克伦特罗ELISA检测试剂盒的结果符合率为93.6％。
盐酸克伦特罗残留物的定性定量检测方法
的生 物传 感器技术 。 它是 酶标 免疫技 术与光 电分析 技术相 毛细 管 区 带 电泳 法 （ ＣＥ）、气相 色 谱 一 立 叶红 外联 用 傅
结合 而产 生 的一种 电化学 免疫 分析技 术 。其原 理与 Ｅ ＩＡ 法 （ Ｃ— ＴＲ 及 薄层色 谱法（Ｌ ） ，其 中前３ 方法较 ＬＳ Ｇ Ｆ Ｉ） Ｔ Ｃ等 种 几 乎 相 同 ，只 是将 酶 与 底物 反 应 的化 学 变 化 用换 能 器 转 常用 阳。Ｌ ｙ ｓ ｎ 等人 用气 相色 谱一 谱联用 法对动 物毛 】 ｅ ｓｅｓ 质 化 为 电信 号 输 出 ，从 而 可得 待 测物 质 的 含 量 。刘 国艳 等 发和尿 液及组织 中的盐 酸克伦 特罗进 行定性定 量分析 ，回
岛
圈
检测 带不显 色 ，参 照带显 色 ，说 明样 品 中的盐酸克 伦特 罗 发展 ，特 别是 杂交瘤技 术 的发展 ，使 得各种化 合物都 可能 质量浓 度高于５ ｇｍＬ ｎ ／ ，结果 为阳性（ ｂ 。 阴性判定 为： 图２ ） １） 条带都 显色 ，但检 测带颜 色浅于 参照 带颜色（ ｃ ， ２ 图２ ） 说 明检 测样 品中盐酸 克伦特 罗质量 浓度超 过 １ ｇｍＬ ／ 。２） ｎ 产生相应 的抗体 。这 将会使免 疫测试 有着更 加广泛 的应 用 前 景 ，酶 免疫传 感技术 检测盐酸 克伦特 罗也将 得到广泛 的
（ ０ ４）４ ２０ ［ 】 酶免疫传 感技 术研 制成 功 的检 测盐 酸克伦 收率 为７ ．％，检 测限 为０５ｌｇ ｋ ［。对气相 色谱 一 基于 ５５ ． ａ ／ ｇｇ 】 质谱
特罗 的酶 免疫 传感器检测 限０３ｕｇｋ ． ／ｇ，可在 １ 分钟 内完成 联 用法 的预处理 进行 调整 ，缩 短 了分 析时 间 ，回收率达 到 ０ 检测全过程 ，且传感器体积小 ，便于携带和实现现场检测＿ ５ 】 。
盐酸克伦特罗的检测方法
盐酸克伦特罗的检测方法
盐酸克伦特罗（Clonidine hydrochloride）是一种中枢神经系统镇静剂，可以用于治疗高血压、焦虑症、戒烟等疾病。
在药品生产和医药研究中，需要对盐酸克伦特罗进行定量测定，以确保药品质量和研究成果的准确性。
下面就介绍几种盐酸克伦特罗的检测方法。
一、高效液相色谱法（HPLC）
高效液相色谱法是一种常用的药物定量分析方法。
对于盐酸克伦特罗的检测，可以使用反相高效液相色谱法。
反相柱中的固定相是疏水性的，可使化合物在流动相中移动速度较快，从而提高分离效率。
在蒸馏水-甲醇-磷酸盐缓冲液的混合溶液中，以流速1.0 mL/min进行分离，检测波长为266 nm，可获得很好的分离效果。
二、气相色谱法（GC）
气相色谱法用于盐酸克伦特罗的检测，需要经过提取纯化和甲氧基化处理。
首先，采用乙腈提取，得到原始样品。
然后，将样品中的酸性部分用硫酸进行提取，氯化物离子用银离子处理，与苯钠作用以除去酸性物质。
最后，采用甲氧基化处理，将克伦特罗转化为具有良好挥发性的甲氧基克伦特罗。
将处理后的样品注入气相色谱仪中进行检测，可获得良好的检测结果。
三、电化学法
电化学法是利用化学反应中的电荷转移过程对物质进行分析的方法。
对于盐酸克伦特罗的检测，可以使用溶液中的电荷转移反应来进行定量分析。
通过将盐酸克伦特罗的溶液与铁离子等离子体反应，并将反应后的电荷表现为电流，以此来测定盐酸克伦特罗的浓度。
以上为盐酸克伦特罗的三种常见的检测分析方法。
这些方法均已经得到广泛的验证和应用，可以为药品的生产和研究提供准确、可靠的数据基础。
盐酸克伦特罗检测方法的研究进展
盐酸克伦特罗检测方法的研究进展盐酸克伦特罗是一种临床常用的药物，常用于治疗心血管疾病和高血压。
克伦特罗也被用于研究细胞的信号传导途径。
为了定量检测盐酸克伦特罗的含量，需要建立可靠的分析方法。
本文将综述盐酸克伦特罗检测方法的研究进展。
盐酸克伦特罗的检测方法主要包括物理化学方法和生物化学方法两大类。
物理化学方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法等；生物化学方法主要包括酶联免疫吸附法、免疫荧光法、生物传感器等。
高效液相色谱法（HPLC）是目前最常用的分析方法之一。
该方法具有分离能力强、分析速度快、检测灵敏度高等优点。
HPLC检测盐酸克伦特罗的条件包括流动相的选择、柱温的控制、流速和检测波长等参数的优化。
近年来，研究者通过改进色谱柱材料和液相色谱柱填料，进一步提高了方法的分离能力和分析速度。
毛细管电泳法（CE）是一种电分离技术，其分离效率取决于使用的毛细管和电场强度。
CE检测盐酸克伦特罗的关键是控制pH值和缓冲液浓度，以增强样品的分离效果。
研究人员还通过改进偏析电泳、等温电泳等技术，提高了方法的分离效率和检测灵敏度。
酶联免疫吸附法（ELISA）是一种高度选择性和灵敏度的生物化学方法。
通过将特异性抗体固定在酶标板上，可以与盐酸克伦特罗结合并形成可检测的复合物。
ELISA检测盐酸克伦特罗的关键是选择适当的抗体和酶，以及优化反应条件。
近年来，研究人员采用改进的ELISA技术，如发光ELISA和荧光ELISA，提高了方法的检测灵敏度和准确性。
生物传感器是一种新兴的生物化学方法，可以直接测量盐酸克伦特罗与生物分子的相互作用过程。
生物传感器检测盐酸克伦特罗的关键是选择合适的生物分子，如酶、抗体或DNA探针，以及优化传感器的构建和检测条件。
研究者近年来发展了多种类型的生物传感器，如电化学传感器、光学传感器和电子传感器。
盐酸克伦特罗检测方法的研究进展包括物理化学方法和生物化学方法两大类。
未来的研究方向包括提高方法的分析速度、灵敏度和选择性，并探索新的检测技术和应用领域。
盐酸克伦特罗检测卡说明书(完整版)
盐酸克伦特罗胶体金法检测卡使用说明书克伦特罗属于β—兴奋剂，是一种人和兽医作为治疗哮喘的药物。
在牲畜中超剂量使用可以使脂肪组织转化为肌肉组织，由于能够显著改善脂肪率和生产效率，β兴奋剂往往被滥用于畜牧养殖生产中。
近来又有一些非法使用克伦特罗作为饲料添加，并存在滥用现象。
国家已经明令禁止克伦特罗在动物饲养中使用。
本品是一种不需要任何仪器设备的尿样及组织检测法，应用单克隆抗体技术从而特异性地定性检测尿样及组织中的克伦特罗。
本品阈值为3ng/ml。
【测定原理】本试剂运用抗原抗体的特异性反应以及侧向层析和胶体金技术进行样本中克伦特罗分子的快速定性检测。
用BSA偶联的克伦特罗分子与胶体金颗粒结合后，包被在醋酸纤维素膜上；在硝酸纤维素膜上将克伦特罗BSA偶联抗原和羊抗鼠二抗分别包被在检测区（T）和质控区(C)。
当尿样或组织样本加样后，样本中的克伦特罗分子与克伦特罗-BSA-胶体金偶联物一起层析泳动到检测区竞争与克伦特罗抗体结合，剩余的克伦特罗-BSA-胶体金继续泳动到质控区与抗体结合。
因此，当样本中的克伦特罗浓度超过一定量后，胶体金偶联物就不能与克伦特罗抗体结合，此时检测区不出现紫红色线条；当样本中克伦特罗浓度低于一定值或样本中没有克伦特罗时，胶体金偶联物就与克伦特罗抗体结合，从而在检测区显示出一条紫红色线条；而无论样本中是否含有克伦特罗分子，质控区都会出现紫红色线条，以示检测有效。
【包装组成】●克伦特罗胶体金检测卡（40份）●组织提取液（40支）●一次性塑料滴管（40支）●使用说明书（1份）【检测所需设备】●离心机●电炉、烧杯或者水浴锅或其它加热设备【一、尿样收集】尿液标本必须收集在洁净、干燥不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器内。
若不能及时送检，尿样标本在2ºC-8ºC冷藏可保存48小时。
长期保存需冷冻于-20ºC，忌反复冻融。
【二、组织样本收集】组织样本（包括精肉、肝脏、肺脏和肾脏）立即检测或收集在塑料袋中送检。
酶联免疫吸附法（ELISA）检测猪肉中盐酸克伦特罗
BB 0×100%百分吸光度值（%）=酶联免疫吸附法（ELISA ）检测猪肉中盐酸克伦特罗薛金英（山东省诸城市畜牧兽医管理局山东诸城262200）盐酸克伦特罗（俗称瘦肉精）为一种人工合成的β-肾上腺素兴奋剂，具有扩张支气管的作用，常用来防治哮喘、肺气肿等肺部疾病。
当其应用量达到治疗量的5～10倍时，其有能量重分配作用，可使肌肉合成增加，脂肪沉积减少，因此俗称为“瘦肉精”。
在畜牧业生产中一些非法使用者将其作为一种和生长促进剂添加到动物饲料中，用以改善胴体的品质，同时也造成食品中盐酸克伦特罗（瘦肉精）的残留。
当人们食用盐酸克伦特罗残留的产品后会出现一系列的中毒症状。
动物源性食品药物残留问题逐渐引起人们的重视。
本法用于定量、定性检测猪肉中盐酸克伦特罗的残留。
1试验原理采用间接竞争ELISA 法，在微孔板上包被抗盐酸克伦特罗检测抗原，样品中的盐酸克伦特罗将和酶标板上的盐酸克伦特罗检测抗原竞争结合盐酸克伦特罗抗体，盐酸克伦特罗检测抗原结合的盐酸克伦特罗抗体再与同时加入的酶标二抗结合，洗涤后，用TMB 底物系统显色，微孔板吸光值与样品中盐酸克伦特罗含量成负相关，与标准曲线比较再乘以浓度比值即可得出盐酸克伦特罗在样品的实际含量。
2试验方法（稀释倍数为4倍）称取1.0g （±0.05g ）均质样品于50mL 聚苯乙烯离心管中，加入1mL 0.1M 盐酸，再加入2mL 提取工作液，充分振荡混匀5min ，4000rpm （20～25℃）离心10min 。
取1mL 上清液加入约25μL 1M 氢氧化钠调节pH 至6.5～7.5之间，充分振荡混匀，取50μL 用于分析。
如果上层中存在白色脂肪层，取样时应避开。
试剂准备：将10×浓缩洗涤液和蒸馏水（或去离子水）按1∶9充分混匀，即为1×洗涤液。
编号：将盐酸克伦特罗标准溶液和待测样品对应微孔按序编号，建议每个标准溶液和待测样品均做重复孔。
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盐酸克伦特罗的检测方法科技信息职教与成教盐酸克伦特骂硇楦测方法河南科技大学林业职业学院刘荣森[摘要]肉食中的盐酸克伦特罗严重危害人体健康.检测盐酸克伦特罗残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法,高效液相色谱法,酶标记免疫吸附测定法,毛细管电泳'~--(CE)等,本文分析了各方法的优缺点,指出了今后的研究方向.[关键词]盐酸克伦特罗检测方法研究进展中央电视台2011年3.15晚会上,曝光了一些地方在动物饲养中滥用"瘦肉精"的问题."瘦肉精"是盐酸克伦特罗的俗称,通用名称:Clenbuterol(CLB),化学名称:d一[(叔丁氨基)甲基卜4一氨基一3,5一二氯苯甲醇盐酸盐,分子式:C.:H.C12N20?HC1,结构式:]}H31.l盐酸克伦特罗是一种B:一受体激动剂,具有蛋白同化作用,可以减少脂肪的形成,提高瘦肉和脂肪的比率,因而被滥用于饲养业,造成该药在动物体内蓄积,尤其是肝脏组织中的浓度较高.人类食用含有克伦特罗残留的肉品后会出现头晕,心悸,手指震颇等中毒症状.滥用瘦肉精已成为重大的食品安全问题.中国严禁盐酸克伦特罗等在动物生产中使用.但目前非法使用情况仍非常严重.近几年来,接连发生数起人食用有CLB残留的肉品中毒事件.造成CLB屡禁不止的原因一方面是利益驱使;另一方面是现在检测CLB的方法,手段还不完善,急需建立宰前监测体系和准确,迅速,方便,精确的检测方法.检测CLB残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法(GC—MS),高效液相色谱法(HPLC),酶标记免疫吸附测定法(ELISA),毛细管电泳法(CE)等.1.气相色谱一质谱联用法(GC—MS)气相色谱一质谱联用法是我国CLB测定中的确证性方法fNY/T468—2001].是最常用的CLB测定方法,能在多种残留物同时存在情况下对某种特定的残留物进行定性,定量分析.具有灵敏度高,假阳性率低等特点.测定时一般需要柱前衍生,最常用的衍生试剂是双三甲基硅基三氟乙酰氨(BSTFA).本办法具有前处理过程烦琐,检测时间长,需贵重仪器等缺点.吴银良等建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺残留量的固相萃取一气相色谱一质谱分析方法.样品在碱化条件下经乙酸乙酯和异丙醇混合溶剂提取,浓缩后用乙酸乙酯溶解,经SCX固相萃取(SPE)柱净化,经氮气吹干后用双三甲基硅基三氟乙酰氨(BSTFA)衍生,外标法定量.盐酸克伦特罗的检出限为O.301~g/kg.盐酸克伦特罗添加浓度在1.O～5.01zg/kg范围内,添加回收率为77.4%～88.3%;相对标准偏差(RSD)为3.1%～5.1%.胡明友等[21建立了克伦特罗的测定方法,用甲醇提取,正己烷脱脂净化,然后旋转蒸发冷冻离心浓缩后加0.1mmol/L的盐酸溶解,加样到净化柱上,用4%氨化乙酸乙酯洗脱后氮气吹干,甲苯溶解后加BSTFA衍生,用气相色谱一质谱法进行测定,内标定量.结果表明:添加56~10-9540x10(∞)浓度水平的克伦特罗,方法回收率在89.3%～107%,相对标准偏差为7.3%～16.5%,线性相关系数r为0.998,克伦特罗的最低检测限为2.0xl0f∞).PeterBa—tioens等[31用气相色谱一质谱联用法测定了牛,羊,猪粪便中的盐酸克伦特罗含量,最低检测限为2n.2.高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱法是检测CLB残留常见的分析检测手段之一,适合大批量样品的快速测定.我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证法.HPLC法中常用的检测器有电化学检测器,紫外检测器;其优点是检测精确度高,其最低检测限范围为1～15ng/g,而且假阳性率低,与GC—MS法相比样品不必衍生;缺点是检测过程繁琐,检测时间长,需贵重仪器,难于操作,价格昂贵.吴庆洁等用高效液相色谱法同时测定畜禽组织中盐酸克伦特罗和4种抗生素(土霉素,四环素,金霉素,氯霉素).用50%的三氯乙酸沉淀蛋白质,通过固相萃取(sPE)小柱进行活化,进行高效液相色谱分析.本法对盐酸克伦特罗的最低检出量为1.25ng.盐酸克伦特罗的回收率85.4%～93.8%.顾国平等用5%HClO超声提取肉样中的盐酸克伦特罗,80%水浴沉淀杂质,然后用固相萃取柱预分离和富集,用高效液相色谱法进行测定,以SunfireCl84.6mX150mm,3.9txm分离柱为固定相,用紫外二极管阵列检测器检测,外标法定量;在该色谱条件下盐酸克伦特罗在6.3rain左右可达到基线分离.方法的回收率在81.6%～103.7%.相对标准偏差在4.76%～7.94%.刘志梅等选用7cm的聚丙烯中空纤维,在样品溶液pH=l1,室温条件下萃取20min后,将有机溶剂在氮气流下吹干,用151xL甲醇溶解,进行液相色谱分析.结果表明:在优化的试验条件下,克伦特罗的富集倍数为78倍,线性范围在30～60001~g/kg 之间,线性相关系数O.9995,检出限2.4l~g/kg.将该方法用于猪肉组织中克伦特罗的测定,低,中,高3种浓度的加标回收率分别为84.9%,91.4%和95.0%,相对标准偏差(RSD)分别为6.3%,5.8%和4.6%.该方法操作简便,环境友好,具有较高的灵敏度,适于猪肉中盐酸克伦特罗残留的检测.高效液相色谱法也经常和质谱联用,实现分析过程的自动化.毛丽莎等171通过液相色谱一质谱以MRM方式检测,同时测定了猪肉组织中沙丁胺醇,莱克多巴胺和克伦特罗.样品用5%高氯酸溶液振荡提取,反相c18小柱净化浓缩,,以D3一沙丁胺醇为内标定量.测定克伦特罗的线性范围均为0.1～10.Oe~L,线性相关系数0.9992,定量检出限为0.5~g/kg,回收率为88-4%～96.2%.该方法简便,灵敏度好,选择性好.3.酶标记免疫吸附测定法(ELISA)ELBA法是检测盐酸克伦特罗较高效的免疫分析法,测定的基础是免疫学抗原抗体特异性结合反应和高效的酶促反应.ELISA法检测限可达0.05r-gs,实际应用中常使用EHSA试剂盒.该方法具有样品不需前处理或前处理简单,一次可检测样品数多,操作简便,快速等特点.但假阳性率较高.杨兴武等8】应用酶联免疫吸附法检测猪尿液中盐酸克仑特罗残留.结果表明,盐酸克仑特罗的线性范围为200～2000ng/kg,最小检出限为100n~L,样品不用前处理可直接检测,1个样品的2个平行样测定时间为45min.该方法回收率在81.9%～106.8%之间,相对标准偏差(RSD)d~ 于9%.李平等(采用直接竞争酶联免疫吸附试验对动物组织中的盐酸克伦特罗残留量进行了快速检测.将CBL与蛋白质载体偶联制备了CBL—BSA和HRP—CBL结合物,以CBL—BSA免疫实验兔获得特异性抗体,并建立了CBL残留直接竞争EHSA检测方法及检测试剂盒.结果表明,检测线性范围0.1～62.5ng/mL,检测低限为0.10ng/mL,尿,肝,肉和饲料的加标回收率为60.3%～l15.O%;相对标准偏差fRSD1为3.4%～7-2%.4.毛细管电泳法(CE)毛细管电泳法测定盐酸克伦特罗残留具有重复性好,操作相对简单,所需样品数量少等特点.高杨菲等峒毛细管电泳法同步分离检测肉制品中"瘦肉精"及其替代物法,整个分离在12min内完成.以90mmol/L的柠檬酸三钠(pH5.6)为电泳缓冲液,8kV分离电压,200nm检测波长,在25~C下可使克伦特罗,沙丁胺醇,特布他林和莱克多巴胺达到分离,分离度分别为1.90,2.73和2.17,回收率为92.4%～102.0%,相对标准偏差(RSD)Ib于3.2%,结果令人满意.王伟宇等…采用小型化毛细管电泳一电化学检测技术测定了猪尿和猪饲料中的克伦特罗及其替代品莱克多巴胺和沙丁胺醇,以直径300~m的碳圆盘电极为工作电极,检测电极电位为+0.95V, 在lOOmmol/L的硼酸盐运行缓冲液中,3种组分在7min内实现了分离. 被测物浓度与峰电流在3个数量级范围内呈良好的线性关系,检测限为1.20x10~-2.06x10-Tg/ml.该方法简单可靠,已成功应用于猪尿和猪饲料样品中3种B一兴奋剂的测定,是一种有效的食品安全分析检测方法5.其他方法樊晓博等采用时间分辨荧光免疫分析建立了简便,快速,灵敏的盐酸克伦特罗检测方法.以自制盐酸克伦特罗单克隆抗体包被96孔微孑L板作为固相抗体,Eu标记抗原与样品中的CBL竞争结合抗体,建立直接竞争荧光免疫分析体系.实验表明:方法灵敏度为0.021xg/L,样品回收率为91%～101%,与沙丁胺醇,莱克多巴胺等结构类似物的交叉反应率均小于1%.方法灵敏度高,特异性强,且操作简单,完全可以满足现有实际检测需求.曾文芳等【'3l建立了用离子色谱一电化学修饰方法l钡0定盐酸克仑特罗.采用离子色谱分离,碳纳米管修饰电极,直流安培检测,DionexAG9一HC保护柱(2mmx50mm),8mmol/L碳酸钠+1O%甲醇为淋洗液测定盐酸克仑特罗.盐酸克仑特罗的检测限是0.0003mg/L;样品测定的回收率分别为96%～103%.陈丽莉等【锻计了一种快速检测猪肉中盐酸克伦特罗的流动注射一化学发光免疫分析方法.采用过氧化脲作为luminol—CH~I20?Hz0z—HRP化学发光体系氧化剂,联苯硼酸作为.--——207...——科技信息.职教与成教增强剂,流动注射化学发光法检测竞争免疫反应后的上清酶标复合物.在最优条件下,测定克伦特罗的线性范围0.05～9~zg/L(r=-0.9959),检出限为0.021~L.该方法已经成功应用于猪肉中克伦特罗残留的检测.胡华军噪用巯基丁二酸作为表面修饰剂,水相法合成水溶性的CdTe/ZnSe核壳量子点,然后在N一羟基琥珀酰亚胺(NHS)的作用下,将CdTe/ZnSe核壳量子点与抗克伦特罗多克隆抗体(Anti—CLBpAb)连接.CdTe/ZnSe—Anti—CLBpAb偶联物能识别克伦特罗一BSA抗原(CLB—BSA).光谱分析表明,量子点与抗体连接后荧光增强,荧光峰位从628nm红移至635nm.将合成的CdTe/ZnSe—Anti—CLBpAb偶联物作为指示克伦特罗(CLB)分子的荧光标记物,制备出一种用于检测CLB的免疫层析试纸条,其最低检测量可达1Ixg/L.现常用的盐酸克伦特罗的检测方法各有优缺点,研究更快速,高效,检测限更低,操作简单,费用低廉的现场检测方法是今后的发展方向.参考文献[1]吴银良,李晓薇,刘素英等.气相色谱一质谱法测定肝脏组织中盐酸克伦特罗和盐酸菜克多巴胺[J]分析化学,2006,34(8):1083—1086 [2]胡明友,邵国建,郭和光.GC—MS测定肝脏中克伦特罗方法的探讨[J]冲国卫生检验杂志,2010(8):1867—1868[3]PeterBatioens',DirkCourtheyn,HuberF,eta1.GasChromato—graphicTandemMassSpectrometricanalvsisofclenbuterolresiduesinfaeces [j]JournalofChromatograF'hyA.1996,750(1—2):133—139[4]吴庆洁,石朝辉,蔡江帆.高效液相色谱法同时测定畜禽组织中4种抗生素及盐酸克伦特罗残留量[I].中国卫生检验杂志,2010(7): 1642—1644[5]顾国平,王森,周亚莲等-固相萃取高效液相色谱法测定猪肉中盐酸克伦特罗残留[1].浙江农业科学,2008(5):624—626[6]刘志梅,陈永艳,杨秀敏等.中空纤维液相微萃取——高效液相色谱法测定猪肉中盐酸克伦特罗残留[I]中国食品,2009,9(2): 171—175[7]毛丽莎,刘红河,陈慧玲.液相色谱一质谱联用法测定猪肉组织中3种B一激动剂[J].中国热带医学,2009,9(7):1356—1358[8]杨兴武,刘振国,周蓉等应用ELISA检测肉猪尿液中盐酸克仑特罗方法的研究lI1.黑龙江畜牧兽医,2003(5):9—10[9]李平,潘荣生,周洪斌等.动物组织中盐酸克伦特罗残留ELISA检测试剂盒的研制[J].免疫学杂志,2006,22(6):178—151[10]高杨菲,许学书毛细管电泳同步分离检测"瘦肉精"及其替代物[J].食品工业,2008(3):71—74[11]王伟宇,张玉莲,邢晓平等.小型化毛细管电泳!电化学检测法测定猪尿和猪饲料中的B一兴奋剂[J]色谱,2()O8,26(2):228—231 [12]樊晓博,杨金易,高秀杰等Eu标抗原盐酸克伦特罗的时间分辨荧光免疫检测[1].食品科学,2010,31(20):307—310[13]曾文芳,陈永欣,吴龙等l离子色谱电化学修饰法测定盐酸克仑特罗I1}冲国卫生检验杂志,2007,17(8):1350—1352[14]陈丽莉,章竹君,付爱华流动注射化学发光免疫分析检测猪肉中的盐酸克伦特罗残留[1].分析实验室,2011,30(2):6-8[15]胡华军,付涛,张明洲等.CdTe/ZnSe核壳量子点免疫层析试纸条检测克伦特罗的研究[T].分析化学,2010,38(12):1727—1731护理学基础实跬教学新搽i刁宝鸡职业技术学院医学分院高丽萍[摘要]护理学基础是一门实践性很强的学科,也是护理专业一门重要学科,要使护生学好掌握好,我们必须改革传统的教学模式,以多元化的教学方式授课,来提高护生的学习兴趣,能力,以适应医学护理事业的发展.[关键词]护理学基础实践教学教学改革护理学基础是护理专业课程的主干课程,是一门实践性应用性学科,可使护生具备从事护理工作所必须的基本知识,基本技能,基本情感的专业基础课.随着社会的发展,医学事业的不断创新,过去的护理医学模式已不再满足于临床工作,这就要求护理教师在临床教学工作中,必须改革传统的教学模式,提高护理教学质量,使大多数护生完成教学目标,强化护生的动手实践能力,做到理论和实践的有机结合.因此,笔者在教学方法上做一下尝试:1,道德素质的培养近代护理学创始人南丁格尔将护理的发展带进新纪元,并提出和实践了护理者必备的职业道德和伦理准则.1973年国际护士节学会修订的《护士伦理学国际法》中规定:护士的基本职责包括"增进健康,预防疾病,恢复健康和减轻痛苦"四个方面.与此相适应,护理道德的实质在于:珍视人的生命,尊重人的尊严和权利,为个人,为家庭,公众提供高质量的健康服务.l】现代医疗护理是一种医生,护士,患者之间帮助与被帮助的关系,护士承担着各种各样的角色,是护理工作的直接参与者,工作中应协调好各方面的关系,才能使医疗护理井然有序,提高质量.以促进人民的健康为宗旨,视患者为亲人.因此,我们要帮助学生树立正确的人生观, 价值观,职业责任感和道德感,树立牢固的专业思想,养成精益求精,一丝不苟的工作作风,有吃苦耐劳的奉献精神,热爱护理事业,以促进患者的健康,视患者为亲人为宗旨,为护理事业奉献一生.2,传统的教学模式在护理学基础的实践教学过程中,传统的教学模式是课前准备一教师示教一学生回复一学生练习一抽查考核.这些教学方法如果重复一二次,学生可能会认真耐心的学习,可长期用此教学方法会让学生厌烦,甚至会觉得是一种填鸭式教学,以至于对本门学科毫无兴趣.如今的护生不同以往的中专生,她们基础好,理解力强,这种单一的教学模式根本无法满足她们的求知欲望.3,改革措施3.1提高教师的综合素质"要想教给学生一滴水的知识,教师必须要有一桶水的知识",这是我院一位老校长的话.为了满足护理事业的发展,教师在授课前坚持集...——208...——体备课和学习,讨论护理理论及操作教学中可能出现的问题及教学改进方法,在教育观念上将应试型转变为创新型,素质型教育观;为保证课堂教学不与临床应用脱节,教师应轮流定期到临床实习,参与临床一作;为了更新,提高知识,应定期在高等学府进行深造学习,来满足专业的需求.3.2教学方法改革3.2.1应用多媒体教学法多媒体教学是一种较先进的辅助教学手段.在《护理学基础》实践教学中应用多媒体技术,有着无可比拟的优势,使实践教学更显生动,直观,精彩.开阔学生视野,诱发学生想象,提高学习效率,增强教学效果.比如无菌技术操作,在教师示教正确方法后应用多媒体教学再次演示,学生的印象更加深刻.3.2.2运用情景设计,角色扮演开展师生互动式教学.在实践操作中设置情景,让护生利用角色扮演进行操作练习.在病员运送法教学中,教师扮演护士,学生扮演患者,进行轮椅运送,一人,二人,三人及四人运送的搬运,示教结束后由学生互相角色扮演,效果相当好,学生兴趣很浓.3.2.3以案例形式进行授课通过训练使学生体会到为病人解决健康问题不只是简单的操作,还需要与病人沟通,评估和研究病人病情, 取得病人的配合,解决病人的问题.在口腔护理实践教学中,首先给出一个有口腔感染的患者,让学生按护理程序进行评估(观察到患者有哪些客观体征),计划(如何护理患者口腔,选择何种簌口液),实施(具体护理措施),评价(口腔护理后感染是否消失或好转),通过此形式的授课,学生会深入教学中,彻底吃透教学内容.3.2.4增加临床见习临床见习在《护理学基础》教学中必不可少,是弥补在校学习无法开展的实践,比如:洗胃法,在校实践教学只能模拟性的操作讲授,尤其是下胃管,缺乏真实感,有时觉得像演戏,学生听后似懂非懂.因此,临床见习提高学习效果.3.2.5比赛式教学法此教学法不仅激发了学生学习的积极性和趣味性,巩固了学生所学知识和技能,使学生以赛促学,达到增强记忆, 激发上进心,熟练掌握技能操作的目的,提高了心理素质及集体荣誉感.铺床法在教学中要求学生快速,正确完成操作,以体现节力的原则. 从教十几年,每届学生铺床法都采用比赛式,深受学生的欢迎.。