饲料中盐酸克伦特罗的测定-HPLC法
瘦肉精检测方法
目前，检测瘦肉精的方法主要有四种，即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC －MS）、毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）。
而我国结合自己的实际情况，2001年农业部首先组织制定了饲料中盐酸克伦特罗的测定标淮。
该标准选择确定了两种：即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC－MS）。
其中将HPLC法作为检测瘦肉精的半确证性方法，其最低检测限为0．05μg/kg，优点是检测精确度高，而且假阳性率低；缺点是检测过程烦琐、检测时间长，需贵重仪器、难于操作、价格昂贵。
而GC一MS法优点是能在多种残留物同时存在的情况下对某种特定的残留物进行定性、定量分析。
GC－MS 法与HPLC法相比，检测灵敏度更高，假阳性率更低，已将GC－MS法定为检测瘦肉精的确证性方法。
GC－MS法的缺点同HPLC相似。
(1)试剂和材料以下所有试剂，除特别注明外，均为分析纯试剂；水为符合GB／T6682规定的二级水。
①盐酸克伦特罗对照品：含盐酸克伦特罗不得少于98．5％②盐酸③无水甲醇④氢氧化钠⑤磷酸二氢钾⑥磷酸⑦盐酸溶液取盐酸4．2ml，加水至1000ml，即得。
⑧o．5mol／L磷酸二氢钾溶液取磷酸二氢钾68g，加水800ml溶解并用磷酸调pH值至3．O，用水稀释至1000ml，即得。
⑨0．05mol几磷酸二氢钾溶液取磷酸二氢钾6．88，加水800ml溶解并用磷酸调pH 值至3．0，用水稀释至1000mi，即得。
a．氢氧化钠溶液取氢氧化钠48，加水使溶解成100mi，即得。
b．盐酸克伦特罗对照品储备液(1mg／mi) 准确称取28．3mg盐酸克伦特罗对照晶至25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至25ml，一20~C以下保存，有效期1年。
⑩盐酸克伦特罗对照品工作液(10ttg／mi) 取lmg／mi储备液o．5ml到50mi量瓶中，加水至50mi，2～8~C保存，有效期1个月。
⑾盐酸克伦特罗对照溶液(100ng／m1) 取1(ug／m1工作液o．5ml到：50mi量瓶中水至50mi，2～8~C保存，有效期1个月。
盐酸克伦特罗的检测方法
盐酸克伦特罗的检测方法
盐酸克伦特罗（Clonidine hydrochloride）是一种中枢神经系统镇静剂，可以用于治疗高血压、焦虑症、戒烟等疾病。
在药品生产和医药研究中，需要对盐酸克伦特罗进行定量测定，以确保药品质量和研究成果的准确性。
下面就介绍几种盐酸克伦特罗的检测方法。
一、高效液相色谱法（HPLC）
高效液相色谱法是一种常用的药物定量分析方法。
对于盐酸克伦特罗的检测，可以使用反相高效液相色谱法。
反相柱中的固定相是疏水性的，可使化合物在流动相中移动速度较快，从而提高分离效率。
在蒸馏水-甲醇-磷酸盐缓冲液的混合溶液中，以流速1.0 mL/min进行分离，检测波长为266 nm，可获得很好的分离效果。
二、气相色谱法（GC）
气相色谱法用于盐酸克伦特罗的检测，需要经过提取纯化和甲氧基化处理。
首先，采用乙腈提取，得到原始样品。
然后，将样品中的酸性部分用硫酸进行提取，氯化物离子用银离子处理，与苯钠作用以除去酸性物质。
最后，采用甲氧基化处理，将克伦特罗转化为具有良好挥发性的甲氧基克伦特罗。
将处理后的样品注入气相色谱仪中进行检测，可获得良好的检测结果。
三、电化学法
电化学法是利用化学反应中的电荷转移过程对物质进行分析的方法。
对于盐酸克伦特罗的检测，可以使用溶液中的电荷转移反应来进行定量分析。
通过将盐酸克伦特罗的溶液与铁离子等离子体反应，并将反应后的电荷表现为电流，以此来测定盐酸克伦特罗的浓度。
以上为盐酸克伦特罗的三种常见的检测分析方法。
这些方法均已经得到广泛的验证和应用，可以为药品的生产和研究提供准确、可靠的数据基础。
盐酸克伦特罗检测方法的研究进展
盐酸克伦特罗检测方法的研究进展盐酸克伦特罗是一种临床常用的药物，常用于治疗心血管疾病和高血压。
克伦特罗也被用于研究细胞的信号传导途径。
为了定量检测盐酸克伦特罗的含量，需要建立可靠的分析方法。
本文将综述盐酸克伦特罗检测方法的研究进展。
盐酸克伦特罗的检测方法主要包括物理化学方法和生物化学方法两大类。
物理化学方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、毛细管电泳法等；生物化学方法主要包括酶联免疫吸附法、免疫荧光法、生物传感器等。
高效液相色谱法（HPLC）是目前最常用的分析方法之一。
该方法具有分离能力强、分析速度快、检测灵敏度高等优点。
HPLC检测盐酸克伦特罗的条件包括流动相的选择、柱温的控制、流速和检测波长等参数的优化。
近年来，研究者通过改进色谱柱材料和液相色谱柱填料，进一步提高了方法的分离能力和分析速度。
毛细管电泳法（CE）是一种电分离技术，其分离效率取决于使用的毛细管和电场强度。
CE检测盐酸克伦特罗的关键是控制pH值和缓冲液浓度，以增强样品的分离效果。
研究人员还通过改进偏析电泳、等温电泳等技术，提高了方法的分离效率和检测灵敏度。
酶联免疫吸附法（ELISA）是一种高度选择性和灵敏度的生物化学方法。
通过将特异性抗体固定在酶标板上，可以与盐酸克伦特罗结合并形成可检测的复合物。
ELISA检测盐酸克伦特罗的关键是选择适当的抗体和酶，以及优化反应条件。
近年来，研究人员采用改进的ELISA技术，如发光ELISA和荧光ELISA，提高了方法的检测灵敏度和准确性。
生物传感器是一种新兴的生物化学方法，可以直接测量盐酸克伦特罗与生物分子的相互作用过程。
生物传感器检测盐酸克伦特罗的关键是选择合适的生物分子，如酶、抗体或DNA探针，以及优化传感器的构建和检测条件。
研究者近年来发展了多种类型的生物传感器，如电化学传感器、光学传感器和电子传感器。
盐酸克伦特罗检测方法的研究进展包括物理化学方法和生物化学方法两大类。
未来的研究方向包括提高方法的分析速度、灵敏度和选择性，并探索新的检测技术和应用领域。
盐酸克伦特罗的检测方法
盐酸克伦特罗的检测方法科技信息职教与成教盐酸克伦特骂硇楦测方法河南科技大学林业职业学院刘荣森[摘要]肉食中的盐酸克伦特罗严重危害人体健康.检测盐酸克伦特罗残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法,高效液相色谱法,酶标记免疫吸附测定法,毛细管电泳'~--(CE)等,本文分析了各方法的优缺点,指出了今后的研究方向.[关键词]盐酸克伦特罗检测方法研究进展中央电视台2011年3.15晚会上,曝光了一些地方在动物饲养中滥用"瘦肉精"的问题."瘦肉精"是盐酸克伦特罗的俗称,通用名称:Clenbuterol(CLB),化学名称:d一[(叔丁氨基)甲基卜4一氨基一3,5一二氯苯甲醇盐酸盐,分子式:C.:H.C12N20?HC1,结构式:]}H31.l盐酸克伦特罗是一种B:一受体激动剂,具有蛋白同化作用,可以减少脂肪的形成,提高瘦肉和脂肪的比率,因而被滥用于饲养业,造成该药在动物体内蓄积,尤其是肝脏组织中的浓度较高.人类食用含有克伦特罗残留的肉品后会出现头晕,心悸,手指震颇等中毒症状.滥用瘦肉精已成为重大的食品安全问题.中国严禁盐酸克伦特罗等在动物生产中使用.但目前非法使用情况仍非常严重.近几年来,接连发生数起人食用有CLB残留的肉品中毒事件.造成CLB屡禁不止的原因一方面是利益驱使;另一方面是现在检测CLB的方法,手段还不完善,急需建立宰前监测体系和准确,迅速,方便,精确的检测方法.检测CLB残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法(GC—MS),高效液相色谱法(HPLC),酶标记免疫吸附测定法(ELISA),毛细管电泳法(CE)等.1.气相色谱一质谱联用法(GC—MS)气相色谱一质谱联用法是我国CLB测定中的确证性方法fNY/T468—2001].是最常用的CLB测定方法,能在多种残留物同时存在情况下对某种特定的残留物进行定性,定量分析.具有灵敏度高,假阳性率低等特点.测定时一般需要柱前衍生,最常用的衍生试剂是双三甲基硅基三氟乙酰氨(BSTFA).本办法具有前处理过程烦琐,检测时间长,需贵重仪器等缺点.吴银良等建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱克多巴胺残留量的固相萃取一气相色谱一质谱分析方法.样品在碱化条件下经乙酸乙酯和异丙醇混合溶剂提取,浓缩后用乙酸乙酯溶解,经SCX固相萃取(SPE)柱净化,经氮气吹干后用双三甲基硅基三氟乙酰氨(BSTFA)衍生,外标法定量.盐酸克伦特罗的检出限为O.301~g/kg.盐酸克伦特罗添加浓度在1.O～5.01zg/kg范围内,添加回收率为77.4%～88.3%;相对标准偏差(RSD)为3.1%～5.1%.胡明友等[21建立了克伦特罗的测定方法,用甲醇提取,正己烷脱脂净化,然后旋转蒸发冷冻离心浓缩后加0.1mmol/L的盐酸溶解,加样到净化柱上,用4%氨化乙酸乙酯洗脱后氮气吹干,甲苯溶解后加BSTFA衍生,用气相色谱一质谱法进行测定,内标定量.结果表明:添加56~10-9540x10(∞)浓度水平的克伦特罗,方法回收率在89.3%～107%,相对标准偏差为7.3%～16.5%,线性相关系数r为0.998,克伦特罗的最低检测限为2.0xl0f∞).PeterBa—tioens等[31用气相色谱一质谱联用法测定了牛,羊,猪粪便中的盐酸克伦特罗含量,最低检测限为2n.2.高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱法是检测CLB残留常见的分析检测手段之一,适合大批量样品的快速测定.我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确证法.HPLC法中常用的检测器有电化学检测器,紫外检测器;其优点是检测精确度高,其最低检测限范围为1～15ng/g,而且假阳性率低,与GC—MS法相比样品不必衍生;缺点是检测过程繁琐,检测时间长,需贵重仪器,难于操作,价格昂贵.吴庆洁等用高效液相色谱法同时测定畜禽组织中盐酸克伦特罗和4种抗生素(土霉素,四环素,金霉素,氯霉素).用50%的三氯乙酸沉淀蛋白质,通过固相萃取(sPE)小柱进行活化,进行高效液相色谱分析.本法对盐酸克伦特罗的最低检出量为1.25ng.盐酸克伦特罗的回收率85.4%～93.8%.顾国平等用5%HClO超声提取肉样中的盐酸克伦特罗,80%水浴沉淀杂质,然后用固相萃取柱预分离和富集,用高效液相色谱法进行测定,以SunfireCl84.6mX150mm,3.9txm分离柱为固定相,用紫外二极管阵列检测器检测,外标法定量;在该色谱条件下盐酸克伦特罗在6.3rain左右可达到基线分离.方法的回收率在81.6%～103.7%.相对标准偏差在4.76%～7.94%.刘志梅等选用7cm的聚丙烯中空纤维,在样品溶液pH=l1,室温条件下萃取20min后,将有机溶剂在氮气流下吹干,用151xL甲醇溶解,进行液相色谱分析.结果表明:在优化的试验条件下,克伦特罗的富集倍数为78倍,线性范围在30～60001~g/kg 之间,线性相关系数O.9995,检出限2.4l~g/kg.将该方法用于猪肉组织中克伦特罗的测定,低,中,高3种浓度的加标回收率分别为84.9%,91.4%和95.0%,相对标准偏差(RSD)分别为6.3%,5.8%和4.6%.该方法操作简便,环境友好,具有较高的灵敏度,适于猪肉中盐酸克伦特罗残留的检测.高效液相色谱法也经常和质谱联用,实现分析过程的自动化.毛丽莎等171通过液相色谱一质谱以MRM方式检测,同时测定了猪肉组织中沙丁胺醇,莱克多巴胺和克伦特罗.样品用5%高氯酸溶液振荡提取,反相c18小柱净化浓缩,,以D3一沙丁胺醇为内标定量.测定克伦特罗的线性范围均为0.1～10.Oe~L,线性相关系数0.9992,定量检出限为0.5~g/kg,回收率为88-4%～96.2%.该方法简便,灵敏度好,选择性好.3.酶标记免疫吸附测定法(ELISA)ELBA法是检测盐酸克伦特罗较高效的免疫分析法,测定的基础是免疫学抗原抗体特异性结合反应和高效的酶促反应.ELISA法检测限可达0.05r-gs,实际应用中常使用EHSA试剂盒.该方法具有样品不需前处理或前处理简单,一次可检测样品数多,操作简便,快速等特点.但假阳性率较高.杨兴武等8】应用酶联免疫吸附法检测猪尿液中盐酸克仑特罗残留.结果表明,盐酸克仑特罗的线性范围为200～2000ng/kg,最小检出限为100n~L,样品不用前处理可直接检测,1个样品的2个平行样测定时间为45min.该方法回收率在81.9%～106.8%之间,相对标准偏差(RSD)d~ 于9%.李平等(采用直接竞争酶联免疫吸附试验对动物组织中的盐酸克伦特罗残留量进行了快速检测.将CBL与蛋白质载体偶联制备了CBL—BSA和HRP—CBL结合物,以CBL—BSA免疫实验兔获得特异性抗体,并建立了CBL残留直接竞争EHSA检测方法及检测试剂盒.结果表明,检测线性范围0.1～62.5ng/mL,检测低限为0.10ng/mL,尿,肝,肉和饲料的加标回收率为60.3%～l15.O%;相对标准偏差fRSD1为3.4%～7-2%.4.毛细管电泳法(CE)毛细管电泳法测定盐酸克伦特罗残留具有重复性好,操作相对简单,所需样品数量少等特点.高杨菲等峒毛细管电泳法同步分离检测肉制品中"瘦肉精"及其替代物法,整个分离在12min内完成.以90mmol/L的柠檬酸三钠(pH5.6)为电泳缓冲液,8kV分离电压,200nm检测波长,在25~C下可使克伦特罗,沙丁胺醇,特布他林和莱克多巴胺达到分离,分离度分别为1.90,2.73和2.17,回收率为92.4%～102.0%,相对标准偏差(RSD)Ib于3.2%,结果令人满意.王伟宇等…采用小型化毛细管电泳一电化学检测技术测定了猪尿和猪饲料中的克伦特罗及其替代品莱克多巴胺和沙丁胺醇,以直径300~m的碳圆盘电极为工作电极,检测电极电位为+0.95V, 在lOOmmol/L的硼酸盐运行缓冲液中,3种组分在7min内实现了分离. 被测物浓度与峰电流在3个数量级范围内呈良好的线性关系,检测限为1.20x10~-2.06x10-Tg/ml.该方法简单可靠,已成功应用于猪尿和猪饲料样品中3种B一兴奋剂的测定,是一种有效的食品安全分析检测方法5.其他方法樊晓博等采用时间分辨荧光免疫分析建立了简便,快速,灵敏的盐酸克伦特罗检测方法.以自制盐酸克伦特罗单克隆抗体包被96孔微孑L板作为固相抗体,Eu标记抗原与样品中的CBL竞争结合抗体,建立直接竞争荧光免疫分析体系.实验表明:方法灵敏度为0.021xg/L,样品回收率为91%～101%,与沙丁胺醇,莱克多巴胺等结构类似物的交叉反应率均小于1%.方法灵敏度高,特异性强,且操作简单,完全可以满足现有实际检测需求.曾文芳等【'3l建立了用离子色谱一电化学修饰方法l钡0定盐酸克仑特罗.采用离子色谱分离,碳纳米管修饰电极,直流安培检测,DionexAG9一HC保护柱(2mmx50mm),8mmol/L碳酸钠+1O%甲醇为淋洗液测定盐酸克仑特罗.盐酸克仑特罗的检测限是0.0003mg/L;样品测定的回收率分别为96%～103%.陈丽莉等【锻计了一种快速检测猪肉中盐酸克伦特罗的流动注射一化学发光免疫分析方法.采用过氧化脲作为luminol—CH~I20?Hz0z—HRP化学发光体系氧化剂,联苯硼酸作为.--——207...——科技信息.职教与成教增强剂,流动注射化学发光法检测竞争免疫反应后的上清酶标复合物.在最优条件下,测定克伦特罗的线性范围0.05～9~zg/L(r=-0.9959),检出限为0.021~L.该方法已经成功应用于猪肉中克伦特罗残留的检测.胡华军噪用巯基丁二酸作为表面修饰剂,水相法合成水溶性的CdTe/ZnSe核壳量子点,然后在N一羟基琥珀酰亚胺(NHS)的作用下,将CdTe/ZnSe核壳量子点与抗克伦特罗多克隆抗体(Anti—CLBpAb)连接.CdTe/ZnSe—Anti—CLBpAb偶联物能识别克伦特罗一BSA抗原(CLB—BSA).光谱分析表明,量子点与抗体连接后荧光增强,荧光峰位从628nm红移至635nm.将合成的CdTe/ZnSe—Anti—CLBpAb偶联物作为指示克伦特罗(CLB)分子的荧光标记物,制备出一种用于检测CLB的免疫层析试纸条,其最低检测量可达1Ixg/L.现常用的盐酸克伦特罗的检测方法各有优缺点,研究更快速,高效,检测限更低,操作简单,费用低廉的现场检测方法是今后的发展方向.参考文献[1]吴银良,李晓薇,刘素英等.气相色谱一质谱法测定肝脏组织中盐酸克伦特罗和盐酸菜克多巴胺[J]分析化学,2006,34(8):1083—1086 [2]胡明友,邵国建,郭和光.GC—MS测定肝脏中克伦特罗方法的探讨[J]冲国卫生检验杂志,2010(8):1867—1868[3]PeterBatioens',DirkCourtheyn,HuberF,eta1.GasChromato—graphicTandemMassSpectrometricanalvsisofclenbuterolresiduesinfaeces [j]JournalofChromatograF'hyA.1996,750(1—2):133—139[4]吴庆洁,石朝辉,蔡江帆.高效液相色谱法同时测定畜禽组织中4种抗生素及盐酸克伦特罗残留量[I].中国卫生检验杂志,2010(7): 1642—1644[5]顾国平,王森,周亚莲等-固相萃取高效液相色谱法测定猪肉中盐酸克伦特罗残留[1].浙江农业科学,2008(5):624—626[6]刘志梅,陈永艳,杨秀敏等.中空纤维液相微萃取——高效液相色谱法测定猪肉中盐酸克伦特罗残留[I]中国食品,2009,9(2): 171—175[7]毛丽莎,刘红河,陈慧玲.液相色谱一质谱联用法测定猪肉组织中3种B一激动剂[J].中国热带医学,2009,9(7):1356—1358[8]杨兴武,刘振国,周蓉等应用ELISA检测肉猪尿液中盐酸克仑特罗方法的研究lI1.黑龙江畜牧兽医,2003(5):9—10[9]李平,潘荣生,周洪斌等.动物组织中盐酸克伦特罗残留ELISA检测试剂盒的研制[J].免疫学杂志,2006,22(6):178—151[10]高杨菲,许学书毛细管电泳同步分离检测"瘦肉精"及其替代物[J].食品工业,2008(3):71—74[11]王伟宇,张玉莲,邢晓平等.小型化毛细管电泳!电化学检测法测定猪尿和猪饲料中的B一兴奋剂[J]色谱,2()O8,26(2):228—231 [12]樊晓博,杨金易,高秀杰等Eu标抗原盐酸克伦特罗的时间分辨荧光免疫检测[1].食品科学,2010,31(20):307—310[13]曾文芳,陈永欣,吴龙等l离子色谱电化学修饰法测定盐酸克仑特罗I1}冲国卫生检验杂志,2007,17(8):1350—1352[14]陈丽莉,章竹君,付爱华流动注射化学发光免疫分析检测猪肉中的盐酸克伦特罗残留[1].分析实验室,2011,30(2):6-8[15]胡华军,付涛,张明洲等.CdTe/ZnSe核壳量子点免疫层析试纸条检测克伦特罗的研究[T].分析化学,2010,38(12):1727—1731护理学基础实跬教学新搽i刁宝鸡职业技术学院医学分院高丽萍[摘要]护理学基础是一门实践性很强的学科,也是护理专业一门重要学科,要使护生学好掌握好,我们必须改革传统的教学模式,以多元化的教学方式授课,来提高护生的学习兴趣,能力,以适应医学护理事业的发展.[关键词]护理学基础实践教学教学改革护理学基础是护理专业课程的主干课程,是一门实践性应用性学科,可使护生具备从事护理工作所必须的基本知识,基本技能,基本情感的专业基础课.随着社会的发展,医学事业的不断创新,过去的护理医学模式已不再满足于临床工作,这就要求护理教师在临床教学工作中,必须改革传统的教学模式,提高护理教学质量,使大多数护生完成教学目标,强化护生的动手实践能力,做到理论和实践的有机结合.因此,笔者在教学方法上做一下尝试:1,道德素质的培养近代护理学创始人南丁格尔将护理的发展带进新纪元,并提出和实践了护理者必备的职业道德和伦理准则.1973年国际护士节学会修订的《护士伦理学国际法》中规定:护士的基本职责包括"增进健康,预防疾病,恢复健康和减轻痛苦"四个方面.与此相适应,护理道德的实质在于:珍视人的生命,尊重人的尊严和权利,为个人,为家庭,公众提供高质量的健康服务.l】现代医疗护理是一种医生,护士,患者之间帮助与被帮助的关系,护士承担着各种各样的角色,是护理工作的直接参与者,工作中应协调好各方面的关系,才能使医疗护理井然有序,提高质量.以促进人民的健康为宗旨,视患者为亲人.因此,我们要帮助学生树立正确的人生观, 价值观,职业责任感和道德感,树立牢固的专业思想,养成精益求精,一丝不苟的工作作风,有吃苦耐劳的奉献精神,热爱护理事业,以促进患者的健康,视患者为亲人为宗旨,为护理事业奉献一生.2,传统的教学模式在护理学基础的实践教学过程中,传统的教学模式是课前准备一教师示教一学生回复一学生练习一抽查考核.这些教学方法如果重复一二次,学生可能会认真耐心的学习,可长期用此教学方法会让学生厌烦,甚至会觉得是一种填鸭式教学,以至于对本门学科毫无兴趣.如今的护生不同以往的中专生,她们基础好,理解力强,这种单一的教学模式根本无法满足她们的求知欲望.3,改革措施3.1提高教师的综合素质"要想教给学生一滴水的知识,教师必须要有一桶水的知识",这是我院一位老校长的话.为了满足护理事业的发展,教师在授课前坚持集...——208...——体备课和学习,讨论护理理论及操作教学中可能出现的问题及教学改进方法,在教育观念上将应试型转变为创新型,素质型教育观;为保证课堂教学不与临床应用脱节,教师应轮流定期到临床实习,参与临床一作;为了更新,提高知识,应定期在高等学府进行深造学习,来满足专业的需求.3.2教学方法改革3.2.1应用多媒体教学法多媒体教学是一种较先进的辅助教学手段.在《护理学基础》实践教学中应用多媒体技术,有着无可比拟的优势,使实践教学更显生动,直观,精彩.开阔学生视野,诱发学生想象,提高学习效率,增强教学效果.比如无菌技术操作,在教师示教正确方法后应用多媒体教学再次演示,学生的印象更加深刻.3.2.2运用情景设计,角色扮演开展师生互动式教学.在实践操作中设置情景,让护生利用角色扮演进行操作练习.在病员运送法教学中,教师扮演护士,学生扮演患者,进行轮椅运送,一人,二人,三人及四人运送的搬运,示教结束后由学生互相角色扮演,效果相当好,学生兴趣很浓.3.2.3以案例形式进行授课通过训练使学生体会到为病人解决健康问题不只是简单的操作,还需要与病人沟通,评估和研究病人病情, 取得病人的配合,解决病人的问题.在口腔护理实践教学中,首先给出一个有口腔感染的患者,让学生按护理程序进行评估(观察到患者有哪些客观体征),计划(如何护理患者口腔,选择何种簌口液),实施(具体护理措施),评价(口腔护理后感染是否消失或好转),通过此形式的授课,学生会深入教学中,彻底吃透教学内容.3.2.4增加临床见习临床见习在《护理学基础》教学中必不可少,是弥补在校学习无法开展的实践,比如:洗胃法,在校实践教学只能模拟性的操作讲授,尤其是下胃管,缺乏真实感,有时觉得像演戏,学生听后似懂非懂.因此,临床见习提高学习效果.3.2.5比赛式教学法此教学法不仅激发了学生学习的积极性和趣味性,巩固了学生所学知识和技能,使学生以赛促学,达到增强记忆, 激发上进心,熟练掌握技能操作的目的,提高了心理素质及集体荣誉感.铺床法在教学中要求学生快速,正确完成操作,以体现节力的原则. 从教十几年,每届学生铺床法都采用比赛式,深受学生的欢迎.。
盐酸克伦特罗检测检测方法(日本厚生省方法)
盐酸克伦特罗检测方法（日本厚生省方法）
1. 提取方法：称取样品5.00g，加入25ml乙酸乙酯及浓度为（4 mol ／L）碳酸钾溶液1ml后均质，3000r/min离心分离5min，上清液移入鸡心瓶中，在残渣中加入25ml乙酸乙酯，重复上述操作，合并乙酸乙酯于鸡心瓶中，40℃以下浓缩，氮气吹干后加入30ml乙腈移入分液漏斗，加入30ml乙腈饱合正已烷，激烈振荡5分钟，静止，将乙腈层转移另一分液漏斗中，向装入乙腈的分液漏斗中加入30ml乙腈饱合正已烷，激烈振荡、静止分层，将乙腈层移入鸡心瓶中，40℃以下除去乙腈，残留物用10ml甲醇及1.2%偏磷酸混液（2：3）溶解。
2.净化方法：使用MCX强酸性阳离子交换柱进行净化。
依次用3 mL 甲醇、3 mL水对柱子进行预处理，将1中得到的提取液加载在小柱上，用5 mL水淋洗弃去流出液。
用15mL（9：1）甲醇及磷酸氢二钾（0.1 mol／L）洗脱液进行洗脱，收集洗脱液于鸡心瓶中，40℃以下除去水及甲醇。
用1 mL甲醇溶解残渣，进行HPLC-MS/MS测定分析。
仪器测定：
色谱柱：C18柱（内径2.0~6.0mm；柱长：100~250mm；粒径：2~5μm）柱温：40℃
流动相：乙腈·甲酸·水（500：1：500）混液，调节流速，使盐酸克伦特罗10分钟出峰。
饲料中盐酸克伦特罗的测定
2016年第12期（下半月）Nong Min Zhi Fu Zhi You农民致富之友饲料中盐酸克伦特罗的测定宋红霞（兴安盟产品质量计量检测所，内蒙古兴安盟137400）[摘要]目的：建立饲料中盐酸克伦特罗的检测方法。
本文对农业行业标准《饲料中盐酸克伦特罗的测定-高效液相色谱法》中色谱条件和对照品处理进行改进，然后按标准方法进行样品处理。
结果证明，该法无论是峰形、信号、还是分离效果均达到满意程度。
[关键词]高效液相色谱法盐酸克伦特罗饲料[中图分类号]S816[文献标识码]A[文章编号]1003-1650(2016)12-0087-01科研◎农业科学盐酸克伦特罗是肾上腺类神经兴奋剂，被添加到动物饲料中用于增加动物的瘦肉率，故又称瘦肉精。
人类长期食用含有盐酸克伦特罗的肉类会出现中毒，危害极其严重。
因此，国家为从源头上扼制，便于2002年9月10日起出台了相关的法律法规，禁止在饲料和饮用水中使用盐酸克伦特罗，并在相关标准中规定为不得检出成分。
严格控制饲料中盐酸克伦特罗的含量，直接关系到人们的生命健康安全。
但是，目前的一些检测方法盐酸克伦特罗主成分峰信号小，甚至检测不到，并且峰形差，采取本文改进的方法测定，信号大，峰形尖锐，测定效果好。
1材料1.1仪器设备高效液相色谱仪：UltiMate 3000；紫外检测器。
电子天平：型号FA2004B，d=0.1mg。
超声波清洗器：HS3120型。
高速离心机：TG16-WS 型。
电热恒温水浴锅：DZKW-3-4型。
其它：实验室常用仪器设备。
样品：市售配合饲料1.2试剂盐酸克伦对照品：由国家标准物质中心提供。
编号：BW8001CWI020；纯度：99.0%±0.8%；规格：0.1g；批号：T150026，有效期至2018年11月。
甲醇、乙腈均为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
所用水为符合GB/T6682的一级水。
1.3固相萃取小柱（SPE）规格为3mL 的Supelclean LC-WCX SPE 固相萃取小柱2方法2.1色谱条件色谱柱：Acclaim C18柱，粒度5um ，规格4.6×150mm。
食用畜产品盐酸克伦特罗的感观识别与检测浅析
食用畜产品盐酸克伦特罗的感观识别与检测浅析【摘要】盐酸克伦特罗即民间所说“瘦肉精”，由于其具有促进动物生长，提高胴体瘦肉率的作用。
在畜牧生产业非法使用会对人体造成较大的伤害。
因此，为了维护消费者的权益，保障食品安全，对动物产品中盐酸克伦特罗残留检测具有十分重要的意义。
【关键词】盐酸克伦特罗;瘦肉精;感观识别;检测方法盐酸克伦特罗(clnebuetorl，CL)的化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，是一种具有扩张支气管作用的β-2兴奋剂。
由于其能明显增加畜牧业生产中的瘦肉率，因此，成为民间俗称瘦肉精的主要存在形式，并被不法分子应用于生猪生产中。
人一但食用含瘦肉精残留的肉制品就会产生不良反应，严重的还可能会因中毒而导致昏迷，甚至死亡。
因此，加强对含盐酸克伦特罗的畜肉的识别与检测，对于捍卫食品安全，保障人民健康具有十分重要的现实意义。
1.通过感官对盐酸克伦特罗进行识别的方法生猪屠宰前饲食盐酸克伦特罗的外观与体态具有以下特征：生猪肤色白里泛红且较为光洁，臀部结实上翘、腹部无下坠感，整体体态更为美观。
但可能同时也会出现呼吸急促腿脚无力，导致站立不稳或爬坡有困难，蹄部较易受伤并发生感染。
在运输过程中，前后肢还较易发生劈叉现象，剧烈运动还易导致死亡。
生猪在屠宰后，也可以通过肉的品质与颜色对是否含有盐酸克伦特罗进行判断。
如果饲喂盐酸克伦特罗较为严重的话，猪肉肉色就相对较深，皮下肥膘非常薄几不可见；后臀肌肉更加饱满且肉质鲜艳；膈肌较厚，大肠、小肠壁薄，冠油少板油薄。
当猪肉具有这些性状的话，通常可怀疑饲喂了盐酸克伦特罗。
通过感官对动物性食品中盐酸克伦特罗进行识别主观性较强，因此，只是粗略的判断方法。
可以做为消费者购买猪肉，或者肉制品生产质控人员避免使用含盐酸克伦特罗鲜肉进行参考。
2.盐酸克伦特罗的快速检测目前，要快速对盐酸克伦特罗进行检测，试纸条法是最合理的选择。
使用试纸条检测需根据产品的说明书进行。
具体方法如下：2.1准备检测样品将备检尿液放置室温内，待回升至20～24℃时，2000g离心10 min后，取上清尿液用于检测。
高效液相色谱内标法测定动物饲料中盐酸克伦特罗
高效液相色谱内标法测定动物饲料中盐酸克伦特罗邸万山【摘要】以茶碱为内标物,建立高效液相色谱内标法测定禽畜饲料中盐酸克伦特罗的检测方法.样品经三氯乙酸溶液提取,经过OasiaHLB固相萃取小柱(3mL/60 mg)处理,再用体积分数为5％的甲醇溶液冲洗后,采用Nova-Pak C18色谱柱(3.9 mm×150 mm×5 μm)分离,以乙腈-28 g/L磷酸二氢钠缓冲溶液(25∶75,V/V)为流动相进行洗脱,流速0.8 mL/min,检测波长210nm.结果表明,茶碱在该条件下能够与盐酸克伦特罗分离完全,可以作为测定盐酸克伦特罗的内标物.盐酸克伦特罗的加标回收率为97.8％～99.2％,精密度试验结果的相对标准偏差(RSD)为0.13％,表明该方法操作简单、准确度高、精密度良好,可用于饲料中盐酸克伦特罗含量分析.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)006【总页数】4页(P170-173)【关键词】高效液相色谱法;内标法;茶碱;盐酸克伦特罗;饲料【作者】邸万山【作者单位】辽宁石化职业技术学院应用化学系,辽宁锦州 121001【正文语种】中文【中图分类】TS207.3盐酸克伦特罗（clenbuterol hydrochloride）又称咳喘素、瘦肉精，是β-肾上腺素兴奋剂，其作用机理和肾上腺素相同。
当其用于家畜饲养超过治疗剂量几倍时，可以产生瘦肉含量更高的酮体，加快肉用家畜的生长速度。
1990年欧洲发生了食用残留β-兴奋剂的牛肝引起的食物中毒事件后，欧盟颁布了法规禁止β-兴奋剂作为生长促进剂使用［1］。
我国农业部已明令禁止在家畜饲料中使用盐酸克伦特罗。
关于饲料中β-兴奋剂的检验方法报道较多，其中液相色谱法主要以外标法测定盐酸克伦特罗［2-3］，而用高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）法内标法测定饲料中盐酸克伦特罗国内外报道较少。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
CLB 能激动 β2- 受体，对心脏有兴奋作用， 对支气管平滑肌有较强而持久的扩张作用，口服后 较易经胃肠道吸收。该药物可选择性地作用于肾上 腺素受体，是一种强效激动剂，可引起交感神经兴 奋，在药物剂量下，具有松弛气管平滑肌作用，用 于治疗支气管炎和肺气肿等引起的哮喘。
由于 CLB 是一种低毒、高效和用量少的促生 长剂，作为一种饲料添加剂被使用，具有促进代谢， 提高饲料利用率，增加被饲喂动物瘦肉率，增加经 济效益的效果。但是 CLB 既不是兽药也不是饲料 添加剂，其蓄积毒性不但能使动物发生中毒或死 亡，而且 CLB 还能残留在动物的内脏及肌肉组织中， 从而进一步引起对人的危害。由于 CLB 的蓄积毒 性，对人和被饲喂动物都会造成心动过速的现象 ； 原有交感神经功能亢进的患者，如有高血压和冠心 病患者上述症状更易发生，甚至会危及生命。因此， CLB 在我国已经禁止用作饲料添加剂使用。但有些 不法养殖企业（户）为了经济利益还是会违规使用， 所以对饲料中 CLB 进行监测可以减少其在动物性 食品的残留产生，间接保障了人类的身体健康与生 命安全。 1.3 检测原理
0.02 mol/L 盐酸溶液 ：准确移取盐酸优级纯 1.67 mL 定容至 1 000 mL 容量瓶中 ；2 mol/L 氢氧化钠溶液 ： 称取 20 g 氢氧化钠，溶于 250 mL 超纯水中 ；乙酸 乙酯 ：优级纯 ；HLB 固相萃取（SPE）小柱 ：HLB 填充量 200 mg，容量 6 mL。 1.4.1 SPE 淋洗液
饲料样品中的 CLB 经酸性甲醇溶液提取，离 心后溶液碱化，经乙酸乙酯萃取和固相萃取柱净化， 最后用反相色谱柱分离测定，紫外检测器 210 nm 波长处检测，同等条件下绘制工作曲线，CLB 含量 与吸光度值在一定质量浓度范围内成正比，试样与 工作曲线比较定量。 1.4 试剂和材料
甲 醇 ：色 谱 纯， 过 5 μm 有 机 相 滤 膜 ；乙 腈 ：色谱纯，过 0.45 μm 有机相滤膜 ；盐酸 ：优级 纯 ；提取液 ：0.5 % 偏磷酸溶液（14.29 g 偏磷酸溶 解于超纯水中，并稀释至 1 L）：甲醇＝ 80 ：20 ；
42 饲料研究 FEED RESEARCH NO.6,2011
饲料检测
化率、生长速率和酮体瘦肉率提高超过 10 ％，所 以也称它为瘦肉精。基于食用动物内脏而导致的中 毒事件不断发生，欧盟很快作出了反应 ：严禁在饲 料中添加 CLB 类药物。FDA 也将肉品中的 CLB 残 留作为必检项目。FDA 和世界卫生组织（WHO）还 制定了畜产品中 CLB 的最高残留限量 ：动物肌肉中 最高限量为 0.2 μg/kg，肝中最高限量为 0.6 μg/kg， 肾中最高限量为 0.6 μg/kg，动物脂肪中最高限量为 0.2 μg/kg，奶制品中最高限量为 0.05 μg/kg。至此， 瘦肉精在动物生产与饲料加工中全面被禁止使用。 近年来，动物性产品中 CLB 残留对人类健康造成 的危害和对生态食物链所造成的破坏已经引起高度 的重视。 1.2 对饲料中 CLB 进行监测的意义
饲料检测
饲料中盐酸克伦特罗的测定－ HPLC 法
贾涛 北京市饲料监察所
摘 要 盐酸克伦特罗（CLB）作为一种主要的 β- 兴奋剂应用于畜禽肉制品生产中，用以提高肌肉 和脂肪的比例并加快生长速度。在畜禽产品中过量残留会对消费者造成危害，因此被禁止在畜禽养殖中使用。 CLB 在家畜与人体内吸收好，而且与其他 β- 兴奋剂相比，它的利用率高，以至食用了含有盐酸克伦特罗 的猪肉出现中毒现象。由于 CLB 通过饲料对动物的饲喂会残留在动物的肌肉与内脏组织中，对饲料中 CLB 进行监测也就显得尤为重要。经试验，应用高效液相色谱（HPLC）法检测饲料中盐酸克伦特罗，标准曲线 r 值≥ 0.999 95 ；变异系数（CV 值）≤ 0.82 % ；检测回收率 88.06 %~100.33 % ；回收率标准偏差≤ 1.25 %。
关键词 高效液相色谱 饲料 盐酸克伦特罗 测定
中图分类号 ：S 816.17 文献标志码 ：B 文章编号 ：1002 - 2813（2011）06 - 0042 - 05
盐酸克伦特罗（CLB）残留在动物组织中，人 食用后会对肝和肾等内脏器官产生毒害，出现心悸、 头痛、目眩、恶心、呕吐、心率加快和肌肉振颤等 症状，严重者甚至死亡。临床表现为急性中毒有心 悸，面颈和四肢肌肉颤动，有手抖甚至不能站立， 头晕，乏力，原有心律失常的患者更容易发生反应， 心动过速，心室性早搏，心电图示 S-T 段压低与 T 波倒置 ；原有交感神经功能亢进的患者，如 ：有高 血压、冠心病和甲状腺功能亢进者上述症状更易发 生 ；与糖皮质激素合用可引起低血钾，从而导致心 律失常 ；反复使用会产生耐受性，对支气管扩张作 用减弱及持续时间缩短。虽然 CLB 残留的毒作用 为轻度，但美国食品与药品管理局（FDA）研究表 明 ：应用拟交感神经药者或对前药过敏者，对 CLB 的反应要比正常健康个体更为严重。
1 材料与方法
1.1 CLB 简介 CLB 是一种平喘药的商品名，又称氨哮素和克
喘素，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，或 2-[( 叔丁 氨基 ) 甲基 ]-4- 氨基 -3,5- 二氯苯甲醇盐酸盐。中 文名称有瘦肉精、克伦特罗、CLB、盐酸双氯醇胺、
收稿日期 ：2010 - 12 - 27
克喘素、氨哮素、氨必妥、氨双氯喘通和氨双氯醇胺。 理化特性为白色或类白色的结晶粉末，无臭，味苦， 熔点 174~175.5 ℃，易溶于水、甲醇和乙醇，微溶 于丙酮和氯仿，不溶于乙醚。
80 年代初，美国一家公司意外地发现，将一 定量的 CLB 药物添加在饲料中，可明显促进动物 生长，并增加瘦肉率。随后，这一新发现在一些国 家被应用于养殖业。CLB 进入体内后具有分布快和 消除慢的特点，能够改变营养的代谢途径，促进动 物肌肉，特别是骨骼肌蛋白质的合成，抑制脂肪的 合成和积累，从而使生长速度加快，瘦肉相对增加。 一般来说，饲料中添加适量 CLB 后，可使饲料转