细胞培养
细胞培养
细胞培养
一、复苏
1、开启水浴锅温度设置37℃，预热DMEM。
2、从液氮中取出细胞37℃水浴加热速融。
3、配制培养基：45mL DMEM（HG）+5mL FBS+500ul双抗。
4、将细胞缓慢加入到15mL离心管中，加入5-6mL培养基。
5、800 rpm离心5min。
此时在每个细胞培养皿中加入10mL培养基。
6、吸去上清液，从培养皿中取1mL培养基加入离心管中重悬细胞。
7、将重悬后的细胞加入到培养皿中，放入培养箱中培养。
二、传代
1、开启水浴锅温度设置37℃，预热培养基、PBS、胰酶。
2、取出培养皿，吸去培养基。
3、加入10mL PBS清洗，吸去PBS。
4、加入1mL胰酶消化3min。
5、加入5mL培养基终止消化，吸出到15mL离心管中。
可适当吹打使细胞全部
被收集。
6、800rpm离心5min。
此时在每个细胞培养皿中加入10mL培养基。
7、离心后吸去上清，加1mL培养基重悬细胞，一般情况下一盘分成三盘，将重
悬后的细胞分成三份分别加入到培养基中。
三、细胞计数。
细胞培养的四个步骤
细胞培养的四个步骤细胞是组成生物体的基本单位，生物体由各种类型的细胞组成。
在显微镜下不同的细胞有不同的形态。
利用免疫荧光、流式荧光标记、免疫组化都能进行细胞观察。
培养细胞的最终目的：拿到细胞进行后续的下游实验WB、ELISA等蛋白检测DNA、RNA等分子检测凋亡、增殖、周期等功能检测原代细胞培养、冻存等细胞实验细胞培养几乎是所有细胞生物学实验的基础，细胞养得好，实验没烦恼！原代细胞培养，细胞的传代，冻存、复苏，细胞污染的防与治，我们的经验都在这篇文章里！一、细胞培养相关设备和试剂1、细胞培养的相关设备生物安全柜的安全保护等级>超净工作台，当涉及到病毒，需要使用生物安全柜。
生物安全柜：对柜内外的安全保护超净工作台：对工作台内部的安全保护超净工作台/生物安全柜的工作流程：2、细胞培养用相关试剂①培养基作用：人工模拟细胞体内生长的营养环境，维持细胞生长的营养物质，提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。
不完全培养基：直接购买或者配置的培养基。
完全培养基：不完全培养基+血清（提供营养物质）+双抗（保证无菌环境）+其他。
由于细胞种类和培养条件不同，适宜的合成细胞培养基也不同，在动物细胞培养中最常用基础细胞培养基有6～7种，如BME、MEM、DMEM、HAMF12、RPMI1640、199等。
②血清血清的功能：生长、分化必须的物质：生长因子、激素、基础培养基中没有的微量物质、小分子营养物转运维生素、脂类、金属离子和微量元素等；促进细胞贴壁、铺展；毒素灭活，蛋白质与有毒金属和热源物质结合；提供蛋白酶抑制剂；起酸碱度缓冲液作用。
血清的分类最常用的是胎牛血清。
胎牛还未接触外界，免疫系统激活最少，血清中所含的抗体、补体等对外来物质排斥最小，对细胞有害的成分最少。
③胰酶常用0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA胰酶：胰脏中分离，选择性的水解蛋白质中有赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，最佳作用温度37℃，PH=8.0，常用浓度0.1%—0.25%，一般用不含Ca2+、Mg2+的平衡盐缓冲液配制（PBS或Hanks），可用含有血清培养基终止胰酶对细胞的作用（观察细胞的剥离状态确定终止时间）。
简述细胞培养一般步骤
简述细胞培养一般步骤
细胞培养一般包括以下步骤:
1. 准备工作:准备细胞培养所需的器材、设备、培养基等。
2. 细胞筛选:选择适合培养的细胞类型,如哺乳动物细胞、植物细胞等。
3. 细胞预处理:对细胞进行清洗、消毒、pH 值调整等预处理,使细胞处于适宜培养的状态。
4. 细胞接种:将预处理后的细胞导入培养皿或培养基中,并轻轻振动培养皿,使细胞均匀分布。
5. 维持细胞生长:通过控制温度、光照、营养供应等因素,维持培养环境的稳定性,促进细胞生长。
6. 培养和观察:将培养皿放入培养箱中,维持合适的培养条件,等待细胞生长和分裂。
通过观察细胞形态、增殖、分化等特性,可以确定细胞培养的效果。
7. 分离和纯化:通过离心、过滤等操作,将培养细胞分离出来,进行进一步处理和纯化,以便用于实验或生产。
细胞培养是一项复杂的过程,需要经过多次实验和调整,才能培养出符合要求的细胞。
细胞培养定义-概述说明以及解释
细胞培养定义-概述说明以及解释1.引言1.1 概述细胞培养是一种重要的科学技术，用于在控制的实验室条件下，培养细胞体外生长和增殖。
通过提供合适的生长环境，包括适当的培养基、细胞状态维持剂和温度、湿度等因素的控制，细胞可以持续生长和繁殖。
细胞培养可以在无菌环境下进行，以保证培养过程中没有污染物的引入。
细胞培养的主要目的是研究细胞的特性和功能。
通过细胞培养，科学家可以观察和研究细胞在不同条件下的行为，进一步了解细胞的基本生理过程、信号转导途径和分化过程。
此外，细胞培养还被广泛应用于药物筛选、生物技术研究、生物工程和医药领域等。
细胞培养的发展历史可以追溯到19世纪末。
当时，人们开始尝试培养动物细胞，最早成功地实现了培养培养出鸟胚细胞。
经过长期的努力和技术改进，细胞培养的技术逐渐成熟，并被广泛应用于各个领域。
综上所述，细胞培养是一种重要的科学技术，通过在受控的实验室条件下培养细胞，可以研究细胞的特性和功能。
随着细胞培养技术的不断发展和完善，它在生物学研究、生物技术和医药领域的应用将会更加广泛。
1.2文章结构1.2 文章结构本文旨在探讨细胞培养的定义、历史、重要性以及应用领域。
为了更好地展示这些内容，本文将按照以下结构进行组织和展示：第一部分是引言部分，引言部分将对细胞培养进行概述。
我们将介绍细胞培养的基本概念，其在生物科学中的重要性以及本文的目的。
第二部分是正文部分，正文部分将分为两个小节。
首先，我们将详细介绍细胞培养的定义。
我们将解释什么是细胞培养，如何进行细胞培养以及细胞培养的目的和意义。
其次，我们将回顾细胞培养的历史，探讨细胞培养技术的发展和重要里程碑，以及这些里程碑对现代细胞培养的影响。
第三部分是结论部分，结论部分将总结细胞培养的重要性和应用领域。
我们将强调细胞培养在生命科学研究中的关键作用，并讨论细胞培养在医学、药物研发、生物工程等领域的广泛应用。
通过以上的文章结构，我们将全面、系统地介绍细胞培养的定义、历史、重要性和应用领域。
细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
【1】细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项细胞培养是生物学实验中常见的一项重要技术，它广泛应用于细胞生物学、分子生物学、药理学等领域。
通过细胞培养，科研人员能够研究细胞的生长、分化、凋亡等生物学过程，同时也可以进行药物筛选、生物学效应观察等实验。
然而，细胞培养是一项复杂的工作，需要严格遵循一系列步骤和要求，并且需谨慎对待各项注意事项。
在本文中，我将以从浅入深的方式，全面探讨细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项，帮助你更深入地理解这一技术。
【2】细胞培养的具体步骤和要求让我们来了解细胞培养的具体步骤。
通常情况下，细胞培养的主要步骤包括：细胞分离、细胞计数、细胞传代、培养基准备、细胞接种、培养条件控制等。
具体来说，细胞培养的步骤包括收获细胞、细胞解聚、细胞计数、调整细胞密度、接种细胞、培养细胞、处理细胞等。
在进行这些步骤时，需要保持实验操作台面清洁整洁，常备所需培养工具、培养耗材和培养试剂，并且要准确记录实验过程中的重要参数和数据。
细胞培养的要求也是至关重要的。
要选择合适的细胞系，确保来源纯净、鉴定正确、培养活力好。
培养基的选用也十分重要，要根据不同细胞类型的需求来选择适当的培养基，并添加必要的生长因子、氨基酸、维生素等。
培养条件的控制也十分重要，包括温度、湿度、二氧化碳浓度、通风情况等。
细胞培养的灭菌和无菌操作更是必不可少，细胞培养过程中的任何污染都可能对实验结果产生影响。
【3】细胞培养的注意事项在进行细胞培养时，需要特别注意一些细节和注意事项。
要保持室内整洁，操作台面、培养箱、生物安全柜等工作台要保持干净，并且要经常消毒。
要做好个人防护工作，戴口罩、手套、工作服等，避免人体细胞对培养的影响。
要定期检查培养箱、生物安全柜等设备的运行情况，确保培养环境的稳定性和安全性。
对细胞的培养时间、传代次数、细胞密度等也需要严格控制，不可随意增加培养时间或传代次数，以免细胞出现突变或异常。
【4】对细胞培养的个人观点和理解从事细胞培养工作多年，我深知细胞培养的重要性和复杂性。
细胞培养的特点
细胞培养的特点细胞培养是指将活体细胞从体内或体外取出并放入适宜的培养基中，提供合适的营养物质和生长条件，使细胞在体外继续生长、分裂和繁殖的一种技术。
细胞培养是现代生物医学研究中不可或缺的重要手段，具有以下几个特点。
细胞培养具有无限的增殖能力。
在适宜的培养条件下，细胞可以持续增殖，形成细胞群落。
这种无限增殖的特性使得细胞培养成为大规模细胞产量的有效手段，可以满足人们对大量活细胞的需求。
细胞培养具有较高的细胞纯度。
通过选择性培养基和适当的培养条件，可以使特定类型的细胞优势生长，而抑制其他类型的细胞生长。
这样可以得到相对纯净的细胞种群，方便后续的实验研究和应用。
细胞培养具有较高的可控性。
在细胞培养过程中，可以根据需要调节培养基的成分、温度、气体浓度等因素，从而控制细胞的生长速度、分裂周期和细胞功能的表达。
这种可控性使得细胞培养成为研究细胞生物学和生物医学的重要工具。
细胞培养还具有较强的稳定性。
在适宜的培养条件下，细胞可以稳定地生长、分裂和繁殖，保持其遗传特性和生物学功能。
这种稳定性使得细胞培养可以长期保存，方便进行长期的实验观察和研究。
细胞培养的特点使得它在多个领域得到广泛应用。
首先，在生物医学研究中，细胞培养可以用于疾病机制的研究、新药筛选和基因治疗等方面。
通过培养病人的细胞或动物模型中的细胞，可以模拟疾病的发生和发展过程，研究疾病的分子机制，为疾病的诊断和治疗提供理论依据。
同时，细胞培养还可以用于筛选和评估新药的毒性和疗效，加快药物研发的速度。
此外，通过将修饰后的基因导入细胞中，还可以研究基因的功能和调控机制，为基因治疗的发展提供理论和实验基础。
在生物工程领域，细胞培养可以用于生物制药的生产。
通过培养工程菌或哺乳动物细胞，可以大规模生产重组蛋白、抗体等生物药物。
细胞培养技术的应用可以提高生物药物的产量和纯度，降低生产成本，满足人们对高质量生物药物的需求。
细胞培养还可以用于组织工程和再生医学研究。
通过细胞培养，可以获得大量的干细胞和多能干细胞，这些细胞具有分化为各种细胞类型的潜力。
细胞培养技术3篇
细胞培养技术第一篇：细胞培养技术的基本概念细胞培养技术是指在体外人工培养生物细胞的一种技术，该技术主要应用于生命科学、医学研究、生物制药等领域。
细胞培养技术的基本概念主要包括：细胞培养的类型、培养基、细胞的消耗物质、细胞培养的设备和细胞培养的步骤等，下面就逐一进行介绍。
一、细胞培养的类型细胞培养主要分为原代细胞培养和继代细胞培养两种类型。
1.原代细胞培养原代细胞培养是指直接从体组织中分离出来的生物细胞进行培养。
该类型的细胞培养在实验室中很少用到，因为从体组织中分离细胞的方法很繁琐，而且这种方法得到的细胞数量和品质不能保证。
2.继代细胞培养继代细胞培养是指从已经培养的细胞中分离出来的细胞进行培养。
这种类型的细胞培养方法非常常见，因为可以在实验室中轻松实现。
二、培养基培养基是指用来提供细胞分裂和生长所需营养物质的一种物质。
培养基通常由肝素、胰岛素和细胞因子等多种不同的化合物构成，以满足不同类型的细胞对营养物质的需求。
三、细胞的消耗物质细胞培养期间需要提供物种很多，其中主要包括以下几种：1.抗生素：用来防止在培养细胞中出现感染。
2.气体：氧气和二氧化碳是保证细胞正常生长的重要物质。
3.酸碱指示剂：用来检测培养基的酸碱度，以保证细胞处于适宜的pH值下。
四、细胞培养设备1.培养箱：用于控制培养环境中的温度、湿度和氧气等因素。
2.显微镜：用来观察细胞的形态和生长情况。
若无显微镜，还需要检测仪器，用来检测培养细胞的生长情况。
3.细胞培养板：用来培养细胞和收集细胞。
五、细胞培养的步骤细胞培养的步骤一般可以分为以下几个：1.细胞分离：从样品中分离出单个的细胞。
2.细胞传代：选取健康的细胞将其转移至新的培养基中，继续增殖，以获得更多的细胞。
3.细胞计数：测量细胞数量以确定下一步操作所需的细胞量。
4.细胞培养：将细胞加入新的培养基中，进行培养。
根据细胞培养的不同类型，上述步骤会稍有不同。
总之，细胞培养技术对于生命科学、医学研究、生物制药等领域都具有重要的应用价值，它通过人工培养细胞，为科学家们提供了一种研究生物学的新途径。
细胞培养的步骤以及注意事项
细胞培养的步骤以及注意事项
细胞培养是一种重要的实验技术，它有助于我们了解细胞生物学、生理学以及疾病的发生和发展机制。
以下是细胞培养的步骤以及注意事项：
步骤：
1. 细胞的收集：从组织样本中得到细胞，比如从动物、植物或
人类的器官中取得。
2. 细胞的处理：将细胞进行脱离、切割、分离等处理，从而得
到单个的细胞。
3. 细胞的培养基准备：选择适合细胞类型的培养基，加入营养
物质和生长因子以维持细胞的生长和分裂。
4. 细胞的接种：将处理好的单个细胞加入到培养基中，并放置
于培养箱中，控制其温度、湿度、氧气和二氧化碳浓度等环境因素。
5. 细胞的观察和维护：观察细胞的形态、生长速度、分裂情况等，同时需要定期更换培养基、检测细胞的纯度和健康状态。
注意事项：
1. 保持无菌环境：细胞培养需要在无菌环境下进行，防止培养
基和细胞被细菌、真菌等污染。
2. 确保细胞的纯度：细胞培养需要保证细胞的纯度，避免异质
性细胞或细胞株的混淆。
3. 控制培养环境：细胞培养需要控制培养环境，包括温度、湿度、氧气和二氧化碳等，以确保细胞的正常生长和分裂。
4. 定期更换培养基：培养基中的营养物质和生长因子会随着时间的推移而减少，因此需要定期更换培养基，以维持细胞的生长和分裂。
5. 避免过度培养：过度培养会影响细胞的健康和生长速度，因此需要在适当的时候停止培养，或将细胞进行冻存以备后续使用。
细胞培养技术
细胞培养技术一、细胞培养基本概念细胞培养是指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境, 在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下, 使期生长繁殖, 并维持其结构和功能的一种培养技术。
细胞培养的培养物为单个细胞或细胞群。
在医学遗传学研究中应用最广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤或纤维细胞和各种能在体外长期生长的细胞系。
外周血淋巴细胞培养具有时间短、技术简便、可反复取材等优点, 它在临床染色体分析中使用最广泛。
体外培养细胞株可在培养过程中发生自发的或在外界作用下的转化, 成为永久细胞系, 也可直接建成永久细胞系, 永久细胞系能在体外无取制的传代和生长。
永久细胞系通常具有非整倍体细胞和各个细胞的核型不完全相同特性。
但细胞克隆的细胞系其这一特性可以不明显。
二、细胞培养的环境细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同。
1.无污染环境培养环境无毒和无菌是保证细胞生存的首要条件。
当细胞放置于体外培养时, 与体内相比细胞丢失了对微生物和有毒物的防御能力, 一旦被污染或自身代谢物质积累等, 可导致细胞死亡。
因此在进行培养中, 保持细胞生存环境无污染、代谢物及时清除等, 是维持细胞生存的基本条件。
2.恒定的温度维持培养细胞旺盛生长, 必须有恒定适宜的温度。
人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃, 偏离这一温度范围, 细胞的正常代谢会受到影响, 甚至死亡。
培养细胞对低温的耐受力较对高温强, 温度上升不超过39℃时, 细胞代谢与温度成正比；人体细胞在39-40℃1小时, 即能受到一定损伤, 但仍有也许恢复；在40-41℃1小时, 细胞会普遍受到损伤, 仅小半数有也许恢复；41-42℃1小时, 细胞受到严重损伤, 大部分细胞死亡, 个别细胞仍有恢复也许；当温度在43℃以上1小时, 细胞所有死亡。
3.气体环境气体是人体细胞培养生存必需条件之一, 所需气体重要有氧气和二氧化碳。
氧气参与三羧酸循环, 产生供应细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。
细胞培养的方法与步骤
细胞培养的方法与步骤细胞培养是一种重要的实验技术，用于研究和生产生物学医学领域的许多问题。
下面是细胞培养的方法和步骤：1.细胞系的选择：选择适合研究目的的合适细胞系，如HeLa细胞，CHO细胞等。
细胞系应具有稳定的生长特性和易于操作。
2.细胞培养基的选择：根据细胞系的需求选择合适的培养基。
常用的培养基包括DMEM、RPMI-1640等。
3.预处理培养器具：将培养器具(如培养瓶、细胞培养皿）进行高温高压消毒，确保无细菌和病毒的污染。
4.细胞的解冻：将冻存的细胞样品取出，快速解冻，并转移到预先加热的培养瓶中。
解冻过程应尽量避免温度和时间的过度变化。
5.培养细胞：将细胞培养物转移到含有培养基的培养瓶中。
细胞培养瓶应放置于恒温培养箱中，并设定适当的温度和湿度。
培养基应每两到三天更换一次。
6.细胞的分离：当细胞达到较高的密度时，需要将细胞分离为新的培养瓶中。
这可以通过使用胰酶酶解进行细胞分离，或使用细胞刮刀进行机械分离。
7.细胞传代：当细胞达到生长的饱和状态时，需要进行传代以扩大培养规模。
传代可以进行有限次数，直到细胞进入老化期。
8.细胞生长的监测：定期检测细胞的存活率、增殖率和形态，以确保细胞在最佳状态下生长。
这可以通过显微镜观察和染色实验来完成。
9.细胞的冻存：当需要保留细胞的长期存储或备份时，细胞可以通过冻存的方式保存。
使用适当的冻存液和冷冻方法进行细胞冻存。
10.细胞实验的应用：根据实验需求，可以将培养细胞用于细胞学、分子生物学、药理学等多个领域的实验研究。
总之，细胞培养是一项复杂的技术，需要仔细选择合适的细胞系、培养基和培养条件，并进行严格的操作和监控，以确保细胞的良好生长和结果的可靠性。
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产品中文说明书OriCell TM Strain Balb/c小鼠骨髓间质干细胞货号： MUCMX-01001目录产品基本信息 (1)产品介绍 (1)产品特性 (1)产品应用领域 (2)处理原则 (2)OriCell TM Balb/c小鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养 (2)OriCell TM Balb/c小鼠骨髓间质干细胞的传代 (4)OriCell TM Balb/c小鼠骨髓间质干细胞的冻存 (6)参考文献 (6)产品基本信息产品名称Balb/c小鼠骨髓间质干细胞货号MUCMX-01001规格1×106个细胞/管冻存代次P6保存条件液氮警告：产品冻存液中含有DMSO，具有潜在的生物公害，操作者请谨慎处理。
产品介绍骨髓间充质干细胞是一种能分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞的多能干细胞。
因其具有强大的增殖能力和免疫调节功能，故被广泛应用于组织工程，细胞治疗和基因治疗。
OriCell TM Balb/c小鼠骨髓间质干细胞取自Balb/c小鼠的骨髓，拥有强大的自我更新能力并具有多向分化潜能。
质量控制：•本产品经过了细菌/真菌，支原体，内毒素检测。
•本产品还经过细胞复苏活力检测，细胞周期，分化潜能鉴定。
该产品仅提供给进一步科研使用，不可应用于临床治疗等其他方面。
产品特性•操作规范的条件下，本产品有良好的传代能力，至少能传5代。
•本产品有良好的分化潜能，能分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞等。
•流式检测鉴定CD29、CD44、CD31、Sca-1阳性（>70%），CD117阴性（<5%）。
产品应用领域目前，Balb/c小鼠骨髓间质干细胞作为一个研究热点被广泛应用于再生医学和组织工程（特别是在骨、心血管和神经系统等疾病的领域）。
OriCell TM Balb/c小鼠骨髓间质干细胞可作为细胞模型被应用于增殖，移植和分化研究，以及体内外的免疫反应的鉴定。
处理原则1.要在无菌的条件下处理该产品。
2.Balb/c小鼠骨髓间质干细胞一旦培养起来，请冻存一部分细胞作为备份。
注意：Balb/c小鼠骨髓间质干细胞能被冻存或复苏至少一次。
3.我们强烈建议用于科研的细胞代次不超过10代。
4.我们建议一般细胞接种密度是2.5-4.0×104个活细胞/cm2，具体数量请根据细胞状态加以调整。
注意：我们强烈建议使用OriCell TM培养基和其他相关试剂以达到最理想的培养效果。
OriCell TM Balb/c小鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养所需试剂•OriCell TM Balb/c小鼠骨髓间质干细胞完全培养基（货号：MUCMX-90011）Balb/c小鼠骨髓间质干细胞的复苏和培养1.准备好37℃水浴。
2.准备好Balb/c小鼠骨髓间质干细胞完全培养基，温育到37℃。
3.在15 mL离心管中加入9 mL完全培养基。
4.从液氮中取出冻存的骨髓间质干细胞，立即放入-80℃冰箱（目的是让进入冻存管的液氮稍加挥发）。
5.在-80℃放置2-3 min后，取出冻存细胞，将冻存管迅速放入37℃温水中，快速晃动使管中内含物尽快融化。
仔细观察，待冻存管内含物完全融化后取出。
注意：①尽可能避免水没过管帽，以减少污染的风险。
②要快速完成细胞复苏过程，融化过程时间过长，会造成复苏后的细胞活性较差。
6.用70%-75%的酒精消毒冻存管口的外壁。
7.在超净台中打开冻存管，用吸管将细胞冻存悬液移入装有9 mL完全培养基的15mL离心管中。
注意尽量避免产生。
8.为了减少细胞损失，往冻存管中加入1 mL完全培养基，稍微吹打，用吸管将这1mL的细胞悬液吸入离心管中，再用吸管将离心管中的细胞轻轻吹打混匀。
9.将细胞悬液经250 g（对应于Eppendorf 5810R离心机是1134 rpm）离心5 min。
10.尽量去除上清液，向细胞沉淀物加入1-2 mL的完全培养基（已预热到37℃），轻轻吹打均匀。
11.将细胞按2.5-4.0×104个活细胞/cm2的密度接种到培养器皿中，加入足量的完全培养基。
轻轻摇晃细胞培养器皿使细胞均匀分布。
12.放入37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养。
13.复苏后的第二天，给复苏的细胞换用新鲜的完全培养基（已预热到37℃）。
14.之后，每两天给细胞换新鲜的完全培养基直到细胞达80%-90%的汇合度。
15.当细胞达80%-90%的汇合度，进行消化传代。
注意：为避免反复温热培养基，如果在一次操作中无法用完整瓶培养基，建议分装到适当的无菌容器中。
换液时只取当天所需培养基量进行预热。
图1已贴壁的Balb/c小鼠骨髓间质干细胞OriCell TM Balb/c小鼠骨髓间质干细胞的传代所需材料•0.25%Trypsin-0.04%EDTA（货号： TEDTA-10001）•Phosphate-BufferedSaline (1×PBS) （货号： PBS-10001）•OriCell TM Balb/c小鼠骨髓间质干细胞（货号：MUCMX-01001）•OriCell TM Balb/c小鼠骨髓间质干细胞完全培养基（货号：MUCMX-90011）传代1.将Balb/c小鼠骨髓间质干细胞完全培养基、1×PBS、0.25%Trysin-0.04%EDTA预热至37℃。
2.吸去培养液。
3.用1×PBS（T25培养瓶加入约3 mL，T75培养瓶加入约6 mL）洗涤细胞2-3次，注意不要损害贴壁的细胞。
4.吸去1×PBS。
5.加入0.25%Trypsin-0.04%EDTA (T25培养瓶加入约1 mL，T75培养瓶加入约2-3mL)。
轻轻旋转，使Trysin-EDTA覆盖细胞表面，消化，显微镜下观察到约70%-80%左右的细胞变圆后，用手轻拍培养器皿的壁使细胞脱壁。
注意：由于不同实验室所使用的Trysin效价不同，消化时间可能会略有不同，具体时间应以显微镜下观察到的情况为准。
6.当看到明显的细胞脱落下来，立即加入预热的完全培养基（T25培养瓶加入约3mL，T75培养瓶加入约6 mL）终止消化。
7.用吸管吸取液体，反复吹打培养器皿底壁，使细胞彻底脱离器皿底壁。
吹打时动作不宜太猛，尽量避免产生气泡。
8.将细胞悬液转移到15 mL的离心管中。
9.250 g，离心5 min。
10.小心弃去上清液。
11.加入2 mL完全培养基重悬细胞。
吹打时动作不宜太猛，尽量避免产生气泡。
12.对细胞进行台盼蓝染色计数活细胞数量。
13.按照2.5-4.0×104个活细胞/cm2的密度来接种细胞。
14.加入适量的完全培养基，轻轻摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布。
15.把细胞放入37℃，5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养。
提示1.换液时机传代后发现有很多死细胞，应该予以换液。
当完全培养基pH值变低（培养液的颜色变黄），而此时细胞仍未能做传代处理时，应该予以换液。
一般来说，Balb/c小鼠骨髓间质干细胞的换液间隔为2-3天。
2.传代时机当Balb/c小鼠骨髓间质干细胞达到80%-90%汇合时，就应该进行传代。
不可让Balb/c小鼠骨髓间质干细胞完全融合或过度融合，否则会发生生长接触抑制。
这将严重影响细胞的生长状态。
P7-40× P7-100×图2 Balb/c小鼠骨髓间质干细胞（P7）3.细胞汇合度提示（以C57 MSCs为例）图3 细胞约70%-75%汇合图4 细胞约85%-90%汇合OriCell TM Balb/c小鼠骨髓间质干细胞的冻存所需材料•OriCell TM 间质干细胞无蛋白非程序冻存液（货号：GUXMX-07021）冻存注意：冻存前24小时需要给细胞换上新鲜的完全培养基。
1.待细胞生长至可传代的密度，即可消化准备冻存。
2.细胞的消化请参考OriCell TM Balb/c小鼠骨髓间质干细胞的传代操作中1-8步骤。
3.对细胞进行计数。
4.细胞悬液经250 g离心5 min。
5.小心弃掉上清。
6.用OriCell TM间质干细胞无蛋白非程序冻存液重悬细胞，并使细胞的密度为1×106个活细胞/mL（或希望达到的细胞密度）。
注意：OriCell TM间质干细胞无蛋白非程序冻存液在使用前需保持4℃。
7.把细胞分装到冻存管（需提前做好标记或贴上标签）中，旋紧冻存管盖。
8.将冻存管直接放进-80℃冰箱。
24小时后将细胞转移到液氮进行长期保存。
注意：如使用程序冻存液，需将冻存管放入程序降温盒后方可放入-80℃冰箱。
参考文献AlexandraPeister, Jason A. Mellad, and Benjamin L, Larson. (2004)Adult stem cells from bone marrow (MSCs) isolated from different strains of inbredmice vary in surface epitopes, rates of proliferation, and differentiation potential. BLOOD 1: 1662-1668.Masoud Soleimani, and Samad Nadn. (2009) A protocol for isolation and culture of mesenchymal stem cells from mouse bone marrow. NETURE 4: 102-106.Philippe Tropel, Daniele Noel, and Nadine Platet.(2004) Isolation and characterisation of mesenchymal stem cells from adult mouse bone marrow.Experimental Cell Research295: 395-406.Lindolfo da Silva Meirelles, Pedro Cesar Chagastelles, and Nance Beyer Nardi.(2006)Mesenchymal stem cells reside in virtually all post-natal organs and tissues. Jourmal of CellScience119: 2204-2213.Cyagen Biosciences保留OriCell TM细胞培养产品技术文件的所有权利。
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