浙江选考2018届高考生物 22微生物的利用复习课件
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2018高中生物浙科版浙江参考课件：29 微生物的利用、
-12考点一 考点二 考点三 考点四 自主梳理 核心突破 典例精析
划线分 倒置培养皿,放在 37 ℃恒温培养箱培养 12~24 h 后,可看 离 到划线末端出现不连续的单菌落 培养观 察
在无菌条件下将单菌落用接种环取出,再用划线法接种在 斜面上,37 ℃培养 24 h 后,置于 4 ℃冰箱保存
菌种保 存
-11考点一 考点二 考点三 考点四 自主梳理 核心突破 典例精析
4.大肠杆菌的培养与分离 (1)扩大培养用LB液体培养基,划线分离和涂布分离用固体培养 基。 (2)实验步骤
培养基 对 LB 液体培养基和 LB 固体培养基及培养皿用高压蒸 灭菌 汽灭菌 在酒精灯火焰旁将三角瓶中培养基分别倒入 4 个灭菌培 倒平板 养皿中,水平放置 ,制成平面培养基 将大肠杆菌用灼烧冷却后接种环在无菌条件下接种至三 角瓶中 LB 培养基中,37 ℃摇床振荡培养 12 h 接种 用接种环在有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次,在固体平 面培养基上连续划线
仅杀死物 体表面或 内部一部 分微生物 (不包括芽 孢和孢子) 杀死物体 内外所有 的微生物, 包括芽孢 和孢子
强烈的 灭 理化 菌 因素
-10考点一 考点二 考点三 考点四 自主梳理 核心突破 典例精析
(4)无菌操作要求 ①各种器皿必须是无菌的。 ②各种培养基必须是无菌的。 ③菌转移操作的过程必须是无菌的。
-7考点一 考点二 考点三 考点四 自主梳理 核心突破 典例精析
1.大肠杆菌 革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌,属原核生物,能以二分裂方 式快速繁殖,是基因工程中被广泛采用的工具。 2.培养基 (1)成分:碳源、氮源、水、无机盐和生长因子。还需满足不同微 生物生长对pH、特殊营养物质及氧气的要求。 (2)类型 ①按照物理性质分:固体培养基、半固体培养基和液体培养基。 区别在于是否加琼脂和加入琼脂的多少。 ②按照目的用途分:选择培养基、鉴别培养基。 (3)制作牛肉膏蛋白胨固体培养基。 制作牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤:计算→称量→溶化、 调pH→灭菌→倒平板。
2020届浙江高考生物(选考)复习课件：22微生物的利用
专题22
微生物的利用
考考点点11
考点2
-7-
特色梳理
选考提升
知识强化教科书灭菌方式的归纳
灭菌 菌后处理
高压 蒸汽 灭菌
121 ℃,1 kg/cm2
培养基、 压力(若培养基中
玻璃器 含有葡萄糖,防止
皿等
其碳化,90 ℃以
上,500 g/cm2 压力)
15 min(若 含有葡萄
专题22
微生物的利用
考考点点11
考点2
-5-
特色梳理
选考提升
2.大肠杆菌的培养和分离的实验操作
50 mL LB 液体培养基和 50 mL LB 固体培养基及
培养基灭 培养皿高压蒸汽灭菌
菌
将固体培养基分别倒入 4 个灭菌后的培养皿中,水
↓
平放置,使之形成平面
倒平板 在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌,培养
(2)“目的菌”生长所需的氮源为培养基中的
。用琼脂糖
代替琼脂配制固体培养基的原因为
。为检测能
降解尿素细菌的存在与否应在培养基中加入酚红指示剂,若存在,
则菌落周围将形成
色环带。
(3)上图中为将细菌转接到固体培养基上,应采用
法进行
接种,获得单菌落后继续筛选。
(4)对尿素溶液进行灭菌的最适方法是
。
A.高压蒸汽灭菌
特色梳理
专题22
选考提升
微生物的利用
考点1
考考点点22
-17-
分离以尿素为氮源的微生物 1.菌种特点:含有脲酶,通过降解尿素作为其生长的氮源。 2.培养基:以尿素为唯一氮源的培养基,以LB全营养基为对照。 3.实验原理 (1)筛选以尿素为氮源的微生物,可使用以尿素为唯一氮源的选择 培养基(功能)进行培养选择。 (2)尿素在脲酶的降解下产生NH3,使培养基的pH由原来的中性变 为碱性,于是培养基中的酚红由红黄色变成红色。
2018高中生物浙江专用浙科版选修一 课件 第一部分 微生物的利用1-1
答案 (1)无菌水 10 (2)a.酒精灯火焰 b．平行 连续
c.
第一次灼烧
每次划线之前灼烧 划线结束时灼烧
目的
杀死接种环上原 有的微生物
杀死上次划线后接种环 上残留的菌种，使下次 划线的菌种直接来源于 上次划线的末端，使每 次划线后菌种数目减少
杀死接种环上残 存的菌种，避免 细菌污染环境和
感染操作者
将菌液进行一系列的梯度稀释， 然后将不同稀释度的菌液分别涂 布到琼脂固体培养基的表面，进 行培养。在稀释度足够高的菌液 里，聚集在一起的微生物将被分 散成单个细胞，从而能在培养皿 表面形成单个菌落
(2)大肠杆菌的培养和分离应注意的几个问题 ①在倒平板过程中，不能将培养基溅在皿壁与皿盖上，防止杂 菌污染。 ②本实验需设置空白培养基在相同条件下一起培养，以确定是 否有杂菌污染。 ③培养皿倒置的目的是防止皿盖上的水珠落入培养基中难以形 成单菌落。
第1课时 大肠杆菌的培养和分离
【学考报告】
知识内容 考试属性
考情解读
大肠杆菌 的培养和 分离
加试
1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进 行细菌培养的操作。 2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基 进行细菌的划线培养。 3.说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
一、微生物培养的微生物对营养物质的不同需求，配制出供 其生长繁殖的营养基质。 (2)种类
根据微生物的代谢特点， 鉴别不同种类的
鉴别 培养基 在培养基中加入某种指示 微生物
剂或化学药品
(3)成分：一般都含有水、 碳源 、氮源和无机盐等最基本的
物质，有时还需要加入特殊的营养物质。
2．无菌技术 (1)含义：无菌技术不仅能防止实验室的培养物被其他外来微 生物污染，保持微生物的纯培养，而且在分离、转接时亦能 防止其他微生物污染。 (2)无菌操作 ①对实验空间、操作台可用 紫外线 或酒精消毒，操作者的 手用 酒精 消毒。 ②实验用的培养器皿和培养基一般用高压蒸汽灭菌 法灭菌， 接种环用灼烧方法灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 酒精灯火焰 附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品 相接触。
【新步步高】2018版浙江高考生物《选考总复习》课件第9单元第33讲微生物的利用
菌(或纯化菌种) 的通用方法，也是筛选特定菌株的最简便方法之一。
解析 通过划线分离后，一个菌体就会繁殖出一个菌落。
解析答案
1
2
3
(4)植物组织培养时，先配制MS培养基，再加入一定比例的植物激素，当生 生根 。 长素相对较多时，可促进_____
解析
植物组织培养中生长素相对较多时，有利于生根，而细胞分裂素相
尿素 为唯一氮源且加入了 (1) 欲从土壤中分离出能利用尿素的细菌：以 _____ 酚红 指示剂的培养基，用涂布分离 (或涂布)法分离细菌。若培养基平板上 _____ _______________
有菌落存活且颜色变___ 红 ，则说明分离成功。
解析
分离能利用尿素的细菌，只需以尿素为唯一氮源，加酚红指示剂，
答案
倒平板
↓ 接种 ↓ 划线分离 ↓ 培养观察
(3)大肠杆菌分离的用途：单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是 用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。
答案
5.微生物接种的两种常用方法比较 比较 划线分离法 涂布分离法
工具
接种环
玻璃刮刀
通过接种环在琼脂固体培养基表面 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后
答案
3.判断下列叙述的正误
(1)土样应从有哺乳动物排泄物的地方取( √ )
提示 有哺乳动物排泄物的地方含脲酶的细菌较多。
(2)取10－4、10－5的土壤稀释液各0.1 mL，分别涂布于全营养LB固体培养
基、尿素固体培养基上( √ )
(3)将实验组和对照组平板倒臵，37 °C恒温培养24～48 h( √ )
答案
4.如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请 思考：
(1)获得图A效果和B效果的接种方法分别是什么？
解析 通过划线分离后，一个菌体就会繁殖出一个菌落。
解析答案
1
2
3
(4)植物组织培养时，先配制MS培养基，再加入一定比例的植物激素，当生 生根 。 长素相对较多时，可促进_____
解析
植物组织培养中生长素相对较多时，有利于生根，而细胞分裂素相
尿素 为唯一氮源且加入了 (1) 欲从土壤中分离出能利用尿素的细菌：以 _____ 酚红 指示剂的培养基，用涂布分离 (或涂布)法分离细菌。若培养基平板上 _____ _______________
有菌落存活且颜色变___ 红 ，则说明分离成功。
解析
分离能利用尿素的细菌，只需以尿素为唯一氮源，加酚红指示剂，
答案
倒平板
↓ 接种 ↓ 划线分离 ↓ 培养观察
(3)大肠杆菌分离的用途：单菌落的分离是消除污染杂菌的通用方法，也是 用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。
答案
5.微生物接种的两种常用方法比较 比较 划线分离法 涂布分离法
工具
接种环
玻璃刮刀
通过接种环在琼脂固体培养基表面 将菌液进行一系列的梯度稀释，然后
答案
3.判断下列叙述的正误
(1)土样应从有哺乳动物排泄物的地方取( √ )
提示 有哺乳动物排泄物的地方含脲酶的细菌较多。
(2)取10－4、10－5的土壤稀释液各0.1 mL，分别涂布于全营养LB固体培养
基、尿素固体培养基上( √ )
(3)将实验组和对照组平板倒臵，37 °C恒温培养24～48 h( √ )
答案
4.如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图，请 思考：
(1)获得图A效果和B效果的接种方法分别是什么？
2018届高考生物一轮(课标通用)课件：专题二十二微生物的应用(共66张PPT)
解成CO2和NH3,供植物吸收和利用。回答下列问题。 (1)有些细菌能分解尿素,有些细菌则不能,原因是前者能产
生
。能分解尿素的细菌不能以尿素的分解产物CO2作为碳
源,原因是 。但可用葡萄糖作为碳源,进入细菌体内的葡萄糖
的主要作用是
(答出两点即可)。
(2)为了筛选可分解尿素的细菌,在配制培养基时,应选择
学霸有招 高手洞考 高手锻造
第九单元 生物技术实践(选修部分)
学霸有招 高手洞考 高手锻造
专题二十二 微生物的应用
学霸有招 高手洞考 高手锻造
本专题主要介绍了人类对微好地掌握它们
需要
关注以下几点:首先,对所有的实验应该抓住实验
目的,
一切设计都是为实验目的服务,在答题时要抓住
(填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”)作为氮源,不选择其他两组
的原因是
。
(3)用来筛选分解尿素细菌的培养基含有KH2PO4和Na2HPO4,其作 用有 (答出两点即可)。
考点51
学霸有招
高手洞考
高手锻造
试做真题 透析真题 高手必备 萃取高招 对点精练
【答案】 (1)脲酶 分解尿素的细菌是异养生物,不能利用CO2来合 成有机物 为细胞生命活动提供能量,为其他有机物的合成提供原
考点51
学霸有招
高手洞考
高手锻造
试做真题 透析真题 高手必备 萃取高招 对点精练
(2)醋酸杆菌是一种好氧细菌,只有当氧气充足时才能进行旺盛的生 命活动,因此将第一阶段产生的乙醇转变为醋酸的过程,需要在有 氧条件下才能完成。 (3)酵母菌发酵温度一般控制在18~25 ℃,而制作葡萄醋时要将温度 控制在30~35 ℃。 (4)醋酸杆菌属于原核生物,其细胞中只有核糖体一种细胞器,不含 有线粒体等其他细胞器。
高考总复习《生物》微生物的利用ppt课件
(1)①过程中的 BPW 培养基为__________(填“固体”“液
体”或“半固体”)培养基。
(2)②选择培养时，mLST-Vm 培养基中添加的万古霉素是一
种抗生素，分析可得，克罗诺杆菌属对该抗生素__________(填
“敏感”或“不敏感”)。
(3)由于②的培养产物细菌浓度未知，为避免对其进行稀释的
(4)由于紫外线对人体有伤害作用，因此，打开超净台上的 紫外灯后，人必须离开。整个操作过程中，过滤风不关闭。
(5)对微生物进行扩大培养采用液体培养基，主要目的是 利于增加菌种与营养物质的接触，并且可以提供氧气环境。
(6)检测培养基灭菌是否彻底，最简便的方法是空白接种， 即将未接种的培养基放在适宜温度下培养一段时间后观察是 否有菌落生长，若培养基中出现菌落，说明培养基灭菌不彻 底或被污染，反之说明培养基灭菌彻底。
(5)食品安全关系每个人的生命，对一种细菌的鉴定程序也相
当严格。在上述检验程序中，步骤__________(填序号)对克罗
诺杆菌属具有一定的选择或鉴定作用。
解析：(1)由于 BPW 属于增菌培养基，因此①过程中的 BPW 培 养基为液体培养基。(2)②选择培养时，mLST-Vm 培养基中添加 的万古霉素是一种抗生素，分析可得，克罗诺杆菌属对该抗生素 不敏感。(3)由于②的培养产物细菌浓度未知，为避免对其进行稀 释的工作，从②转移至③培养时，需采用的接种方法为划线(接种) 法。③过程所需的显色培养基在制备时的次序是 B 称量药品→C 溶解→A 调节 pH→E 灭菌→D 倒平板。(4)克罗诺杆菌属能产生黄 色素，积累到一定量的时候，可使整个菌落呈现黄色，形成菌落 需配置固体培养基，据此，除注释中的成分外，TSA 培养基中还 应包含琼脂(或琼脂糖)。(5)食品安全关系每个人的生命，对一种 细菌的鉴定程序也相当严格。在上述检验程序中，步骤②③④⑤ 对克罗诺杆菌属具有一定的选择或鉴定作用。 答案：(1)液体 (2)不敏感 (3)划线法 BCAED (4)琼脂(或琼脂糖) (5)②③④⑤
2018高中生物第一部分微生物的利用浙科版1!
第一部分微生物的利用一、课标内容进行微生物的分离和培养。
二、教学要求本部分“实验3 观察土壤中能水解纤维素的微生物”不作要求，只要求学生做2个实验，即“实验1 大肠杆菌的培养和分离”与“实验2 分离以尿素为氮源的微生物”。
实验1 大肠杆菌的培养和分离实验2 分离以尿素为氮源的微生物三、教学建议1．课时建议（共计12课时）选修Ⅰ内容主要由各种实验组成，强调对学生动手能力的培养与实验操作过程的体验，与必修内容的知识性学习有明显的不同。
学生刚接触时，教师应通过生物技术概述内容的讲解，先让学生对生物技术有一初步的了解，在思想上有充分的准备，使学生形成勤动手、勤实验的意识与习惯，促进学生对本模块的学习与体验。
（1）在“大肠杆菌的培养和分离”的实验中，要特别强调无菌操作，这是进行微生物实验中必备的操作要求，也是本模块多数实验的基本要求，应该让学生形成无菌操作的行为习惯。
无菌操作，既包括各种器皿必须是无菌的，也包括各种培养基也必须是无菌的，同时还要求在接种时不能带有其它杂菌，所以在实验过程中，应时刻让学生保持这种无菌的意识。
在教学菌落和菌种种类的辩认时，要教会学生能大致区分细菌、放线菌与酵母菌菌落，有些用肉眼不能判断的菌落也可以借助显微镜进行观察推判断。
（2）在“分离以尿素为氮源的微生物”的实验中，教学重点是细菌得以分离的原理；教学难点是稀释涂布分离法的操作过程和原理。
关键是无菌操作，具体要求见实验1。
本实验以LB全营养培养基与尿素固体培养基为对照，通过观察两者的细菌菌落数说明能利用尿素的细菌在土壤菌群中较少。
这两种培养基在配制时均要用琼脂糖代替琼脂使之固化。
另外，由于尿素在高温下会分解，所以对尿素溶液的灭菌要采用G6玻璃漏斗过滤的方法。
在尿素固体培养基中还要加入酚红，这是一种酸碱指示剂，有脲酶的细菌菌落周围会出现着色的环带。
2018届高三生物(浙江选考)一轮复习文档 选考加试部分 第12章 第30讲 微生物的利用
选考加试部分第十二章生物技术实践第30讲微生物的利用1．微生物的实验室培养(1)培养基①概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
②成分：一般都含有碳源、氮源、水和无机盐，还需要满足不同微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
(2)无菌技术方法⎩⎪⎨⎪⎧消毒⎩⎨⎧煮沸消毒法化学药剂消毒法紫外线消毒法灭菌⎩⎨⎧灼烧灭菌干热灭菌高压蒸汽灭菌(3)实验操作牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备： 计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。
2．细菌的分离方法：划线分离法和涂布分离法 (1)划线分离法①方法：用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，使聚集的菌种分散到培养基的表面。
每个菌落就是一个细菌产生的后代。
②应用：用于基因工程的大肠杆菌的工程菌，可以用划线分离法获得产物表达能力高的菌株。
由于工程菌的质粒中通常有抗性基因(如抗氨苄青霉素基因)，如在培养基中加入一定量的氨苄青霉素，由于非工程菌和其他杂菌都没有抗性基因，所以在划线后只有存在抗性基因的工程菌能生存下来。
(2)涂布分离法：先将培养的菌液稀释，通常稀释到10－7～10－5倍，然后取0.1 mL 稀释度不同的菌液加在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。
3．大肠杆菌的培养和分离(1)大肠杆菌特点：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。
(2)细菌的繁殖：以二分裂的方式繁殖，分裂速度很快。
(3)细菌的扩大培养：用LB 液体培养基，划线分离用LB 固体平面培养基。
(4)大肠杆菌的分离操作技术最常用方法是划线分离法，其操作步骤是：①培养基灭菌：将刚配制好的50 mL LB 液体培养基和50 mL LB 固体培养基分别装入两个250 mL 的三角瓶中，加上封口膜，用高压锅进行灭菌。
②倒平板：在酒精灯火焰旁将固体培养基分别倒在4个培养皿中，使培养基铺满平皿底部，待凝，使之形成平面。
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(2)使用高压锅灭菌 ,计时时间不是高压锅通电后 ,而是有压力后 开始计时灭菌 15 min;灭菌结束 ,不是灭菌锅压强降为 0停止,而是与 大气压相同时打开锅盖。
(3)对于培养基 pH的调节,需在灭菌之前。 (4)检测培养基灭菌是否彻底 ,最简便的方法是空白接种 ,即将未 接种的培养基放在适宜温度下培养一段时间后观察是否有菌落生 长,若培养基中出现菌落 ,说明培养基灭菌不彻底或被污染 ,反之说 明培养基灭菌彻底。
选考提升
-12-
题型三 大肠杆菌的培养与分离操作
典例精析 3(2017浙江温州期末 )生活饮用水的微生物安全性日常检
测是很重要的。请回答下列问题。
(1)检验大肠杆菌的含量时 ,通常将水样用
(液体)进行
一系列的梯度稀释。将稀释后的水样分别用
-7-
特色梳理
选考提升
知识强化 教科书灭菌方式的归纳
灭菌 适用材 方法 料或用具
灭菌条件
灭菌时间 灭菌后处理
高压 蒸汽 灭菌
培养基、 玻璃器 皿等
121 ℃,1 kg/cm2 压力(若培养基中 含有葡萄糖,防止 其碳化,90 ℃以 上,500 g/cm2 压力)
15 min(若 含有葡萄 糖,灭菌时 间 30 min)
酸碱性
要求在中性偏碱 的环境中生长
要求在中性偏酸 的环境中生长
特色梳理
选考提升
-4-
(2)常见无菌操作 a.对于培养皿、试管、三角瓶、镊子等常采用 高压蒸汽灭菌 法 灭菌。 b.对于不能加热灭菌的化合物 ,如尿素等 ,只能用G6玻璃砂漏斗 过 滤。 c.实验操作过程中 ,一般采用 灼烧对接种环和玻璃刮刀进行灭菌。 d.为避免周围环境中微生物的污染 ,实验操作应在 酒精灯火焰旁 进行。
保存。
-6-
特色梳理
选考提升
题型一 无菌操作
典例精析 1下列有关高压蒸汽灭菌的叙述 ,错误的是 ( A )
A.用于分离微生物的土壤样品必须高压蒸汽灭菌
B.灭菌前要将培养皿用牛皮纸或报纸包扎 C.为达到良好的灭菌效果 ,一般在压力为 1 kg/cm 2,温度为121 ℃的 条件下,维持15 min
D.当灭菌锅压力与大气压相同时 ,可以打开锅盖将灭菌物品拿出来 解析 用于分离微生物的土壤样品不能使用高压蒸汽灭菌 ,否则 会导致样品中微生物全部死亡 ,而分离不到微生物 ,A项错误;灭菌 前要将培养皿用牛皮纸或报纸包扎 ,B项正确;为达到良好的灭菌效 果,一般在压力为 1 kg/cm2,温度为121 ℃的条件下 ,维持15 min,C项 正确;当灭菌锅压力与大气压相同时 ,即灭菌锅内没有压力了 ,可以 打开锅盖将被灭菌物品拿出来 ,D项正确。
↓
次,在固体培养基的平板上连 续划线,盖好培养皿
划线分离 培养皿倒置(盖在下面),放在 37 ℃恒温培养箱中
↓
培养 12~24 h 后,可看到划线的末端出现不连续的
培养观察 单个菌落
↓
无菌条件下,将单菌落用接种环取出 ,再用划线法
菌种保存 接种在斜面上,37 ℃培养 24 h 后,置于 4 ℃冰箱中
养基的表面进行培养。在稀释 度足够高的菌液里 ,聚集在一起
分离到由一个细胞繁殖 的微生物将被分散成单个细胞 ,
而来的肉眼可见的细胞 从而能在培养基表面形成单个
群体,即菌落。
的菌落
特点 方法简单,但不适宜计数 单菌落更易分开,但操作复杂
目的 使培养基上形成单个细胞繁殖而来的子细胞群体 ——菌落
特色梳理
灭菌时间
G6 玻璃砂漏斗过 尿素滤液滤来自过滤完毕灭菌后处理
玻璃砂漏斗 用 1 mol/L 的 HCl 浸泡,抽 滤去酸后蒸 馏水洗至中 性,干燥后保 存
特色梳理
选考提升
-9-
易错警示 (1)若配制的培养基中有葡萄糖 ,为防止葡萄糖分解碳化 , 一般要用 500 g/cm2压力(90 ℃以上)灭菌30 min;不能加热灭菌的化 合物,如尿素等 ,只能用G6玻璃砂漏斗过滤。
专题22 微生物的利用
考纲要求
考试内容 1.大肠杆菌的培养和分离 2.分离以尿素为氮源的微生物
考试要求 选考
实验与探究能力
特色梳理
选考提升
-3-
大肠杆菌的培养和分离
1.培养基及无菌技术 (1)微生物对培养基的需求
微生物类型 细菌 霉菌
培养基配制特点 用蛋白胨和酵母提取物来配 制,还要加入一定量的 氯化钠 以维持一定的渗透压 用无机物配制或添加 蔗糖的 豆芽汁即可
实验用具在 60~80 ℃烘 箱中烘干 ;培 养基冷却待 用
接种环、
灼 烧 灭 菌
接种针 或其他 金属用 具;玻璃
在酒精灯火焰的 充分燃烧层灼烧
烧红;玻璃 刮刀上的 酒精燃尽
防止过热杀 死目的菌种 , 冷却后使用
刮刀
特色梳理
选考提升
-8-
灭菌 适用材 方法 料或用具
过 滤 尿素培 灭 养基 菌
灭菌条件
-11-
特色梳理
选考提升
知识强化 划线分离和涂布分离操作比较
项目 划线分离法
涂布分离法
工具 接种环
玻璃刮刀
通过接种环在琼脂固体 将菌液进行一系列的梯度稀释 ,
培养基表面连续划线的 然后用玻璃刮刀将不同稀释度
操作,将聚集的菌种逐步 的菌液分别涂布到琼脂固体培
原理
稀释分散到培养基表面。 在数次划线后培养 ,可以
-5-
特色梳理
选考提升
2.大肠杆菌的培养和分离的实验操作
50 mL LB 液体培养基和 50 mL LB 固体培养基及
培养基灭 培养皿高压蒸汽灭菌
菌
将固体培养基分别倒入 4 个灭菌后的培养皿中 ,水
↓
平放置,使之形成平面
倒平板 在装有液体培养基的 三角瓶中接种大肠杆菌,培养
↓
12 h
接种
用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一
-10-
特色梳理
选考提升
题型二
划线分离与涂布分离操作比较
典例精析 2划线分离和涂布分离是纯化微生物的两种常用方法 , 下列描述正确的是 ( D )
A.都要将菌液进行一系列的梯度稀释 B.划线分离是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表 面连续划线的操作 C.涂布分离是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养 D.都会在培养基表面形成单个的菌落 解析 划线分离不需要进行梯度稀释 ,A项错误;划线分离不需要 进行梯度稀释 ,划线分离是将菌液通过接种环在固体培养基表面连 续划线的操作 ,B项错误;涂布分离是将不同稀释度的菌液涂布到固 体培养基的表面 ,C项错误;划线分离和涂布分离都能在培养基表面 形成单个菌落 ,D项正确。
(3)对于培养基 pH的调节,需在灭菌之前。 (4)检测培养基灭菌是否彻底 ,最简便的方法是空白接种 ,即将未 接种的培养基放在适宜温度下培养一段时间后观察是否有菌落生 长,若培养基中出现菌落 ,说明培养基灭菌不彻底或被污染 ,反之说 明培养基灭菌彻底。
选考提升
-12-
题型三 大肠杆菌的培养与分离操作
典例精析 3(2017浙江温州期末 )生活饮用水的微生物安全性日常检
测是很重要的。请回答下列问题。
(1)检验大肠杆菌的含量时 ,通常将水样用
(液体)进行
一系列的梯度稀释。将稀释后的水样分别用
-7-
特色梳理
选考提升
知识强化 教科书灭菌方式的归纳
灭菌 适用材 方法 料或用具
灭菌条件
灭菌时间 灭菌后处理
高压 蒸汽 灭菌
培养基、 玻璃器 皿等
121 ℃,1 kg/cm2 压力(若培养基中 含有葡萄糖,防止 其碳化,90 ℃以 上,500 g/cm2 压力)
15 min(若 含有葡萄 糖,灭菌时 间 30 min)
酸碱性
要求在中性偏碱 的环境中生长
要求在中性偏酸 的环境中生长
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(2)常见无菌操作 a.对于培养皿、试管、三角瓶、镊子等常采用 高压蒸汽灭菌 法 灭菌。 b.对于不能加热灭菌的化合物 ,如尿素等 ,只能用G6玻璃砂漏斗 过 滤。 c.实验操作过程中 ,一般采用 灼烧对接种环和玻璃刮刀进行灭菌。 d.为避免周围环境中微生物的污染 ,实验操作应在 酒精灯火焰旁 进行。
保存。
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题型一 无菌操作
典例精析 1下列有关高压蒸汽灭菌的叙述 ,错误的是 ( A )
A.用于分离微生物的土壤样品必须高压蒸汽灭菌
B.灭菌前要将培养皿用牛皮纸或报纸包扎 C.为达到良好的灭菌效果 ,一般在压力为 1 kg/cm 2,温度为121 ℃的 条件下,维持15 min
D.当灭菌锅压力与大气压相同时 ,可以打开锅盖将灭菌物品拿出来 解析 用于分离微生物的土壤样品不能使用高压蒸汽灭菌 ,否则 会导致样品中微生物全部死亡 ,而分离不到微生物 ,A项错误;灭菌 前要将培养皿用牛皮纸或报纸包扎 ,B项正确;为达到良好的灭菌效 果,一般在压力为 1 kg/cm2,温度为121 ℃的条件下 ,维持15 min,C项 正确;当灭菌锅压力与大气压相同时 ,即灭菌锅内没有压力了 ,可以 打开锅盖将被灭菌物品拿出来 ,D项正确。
↓
次,在固体培养基的平板上连 续划线,盖好培养皿
划线分离 培养皿倒置(盖在下面),放在 37 ℃恒温培养箱中
↓
培养 12~24 h 后,可看到划线的末端出现不连续的
培养观察 单个菌落
↓
无菌条件下,将单菌落用接种环取出 ,再用划线法
菌种保存 接种在斜面上,37 ℃培养 24 h 后,置于 4 ℃冰箱中
养基的表面进行培养。在稀释 度足够高的菌液里 ,聚集在一起
分离到由一个细胞繁殖 的微生物将被分散成单个细胞 ,
而来的肉眼可见的细胞 从而能在培养基表面形成单个
群体,即菌落。
的菌落
特点 方法简单,但不适宜计数 单菌落更易分开,但操作复杂
目的 使培养基上形成单个细胞繁殖而来的子细胞群体 ——菌落
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灭菌时间
G6 玻璃砂漏斗过 尿素滤液滤来自过滤完毕灭菌后处理
玻璃砂漏斗 用 1 mol/L 的 HCl 浸泡,抽 滤去酸后蒸 馏水洗至中 性,干燥后保 存
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易错警示 (1)若配制的培养基中有葡萄糖 ,为防止葡萄糖分解碳化 , 一般要用 500 g/cm2压力(90 ℃以上)灭菌30 min;不能加热灭菌的化 合物,如尿素等 ,只能用G6玻璃砂漏斗过滤。
专题22 微生物的利用
考纲要求
考试内容 1.大肠杆菌的培养和分离 2.分离以尿素为氮源的微生物
考试要求 选考
实验与探究能力
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大肠杆菌的培养和分离
1.培养基及无菌技术 (1)微生物对培养基的需求
微生物类型 细菌 霉菌
培养基配制特点 用蛋白胨和酵母提取物来配 制,还要加入一定量的 氯化钠 以维持一定的渗透压 用无机物配制或添加 蔗糖的 豆芽汁即可
实验用具在 60~80 ℃烘 箱中烘干 ;培 养基冷却待 用
接种环、
灼 烧 灭 菌
接种针 或其他 金属用 具;玻璃
在酒精灯火焰的 充分燃烧层灼烧
烧红;玻璃 刮刀上的 酒精燃尽
防止过热杀 死目的菌种 , 冷却后使用
刮刀
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灭菌 适用材 方法 料或用具
过 滤 尿素培 灭 养基 菌
灭菌条件
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知识强化 划线分离和涂布分离操作比较
项目 划线分离法
涂布分离法
工具 接种环
玻璃刮刀
通过接种环在琼脂固体 将菌液进行一系列的梯度稀释 ,
培养基表面连续划线的 然后用玻璃刮刀将不同稀释度
操作,将聚集的菌种逐步 的菌液分别涂布到琼脂固体培
原理
稀释分散到培养基表面。 在数次划线后培养 ,可以
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2.大肠杆菌的培养和分离的实验操作
50 mL LB 液体培养基和 50 mL LB 固体培养基及
培养基灭 培养皿高压蒸汽灭菌
菌
将固体培养基分别倒入 4 个灭菌后的培养皿中 ,水
↓
平放置,使之形成平面
倒平板 在装有液体培养基的 三角瓶中接种大肠杆菌,培养
↓
12 h
接种
用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一
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题型二
划线分离与涂布分离操作比较
典例精析 2划线分离和涂布分离是纯化微生物的两种常用方法 , 下列描述正确的是 ( D )
A.都要将菌液进行一系列的梯度稀释 B.划线分离是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表 面连续划线的操作 C.涂布分离是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养 D.都会在培养基表面形成单个的菌落 解析 划线分离不需要进行梯度稀释 ,A项错误;划线分离不需要 进行梯度稀释 ,划线分离是将菌液通过接种环在固体培养基表面连 续划线的操作 ,B项错误;涂布分离是将不同稀释度的菌液涂布到固 体培养基的表面 ,C项错误;划线分离和涂布分离都能在培养基表面 形成单个菌落 ,D项正确。