液相基本术语及操作
液相色谱的结构原理和基本知识 液相色谱操作规程
液相色谱的结构原理和基本知识液相色谱操作规程液相色谱(HPLC)法是以高压下的液体为流动相，并采用颗粒极细的固定相的柱色谱分离技术。
液相色谱对样品的适用性广，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，因而弥补了气相色谱法的不足。
在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约占20%，而80%则需用液相色谱来分析。
液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别。
液相色谱分析原理(1)、液相色谱分析的流程：由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。
被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。
废液流入废液瓶。
遇到复杂的混合物分离(极性范围比较宽)还可用梯度控制器作梯度洗脱。
这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在佳条件下得以分离。
(2)、液相色谱的分离过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。
它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。
分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。
分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。
组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。
若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。
不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。
其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。
高效液相色谱仪常识
被分离组分在柱中的洗脱原理
Ⅱ 基本概念和理论
一、基本概念和术语
1.色谱图和峰参数
⊕色谱图（chromatogram）--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号－时间曲线，又称色谱流出曲线（elution profile）.
⊕基线（base line）--流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。
⊕拖尾因子（tailing factor,T）--T=B/A,用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子（symmetry factor）或不对称因子（asymmetry factor）《中国药典》规定T应为0.95～1.05。T<0.95为前延峰，T>1.05为拖尾峰。
⊕峰底――基线上峰的起点至终点的距离。
4.相平衡参数（distribution coefficient,K）--在一定温度下，化合物在两相间达到分配平衡时，在固定相与流动相中的浓度之比。K=[xs]/[xm]
Cs-溶质在固定相中的浓度
Cm－溶剂在流动相中的浓度
分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关，也与温度、压力有关。在不同的色谱分离机制中，K有不同的概念：吸附色谱法为吸附系数，离子交换色谱法为选择性系数（或称交换系数），凝胶色谱法为滲透参数。但一般情况可用分配系数来表示。
⊕保留时间（retention time,tR）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
⊕保留体积（retention volume,VR）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VR＝F*tR .
⊕调整保留时间（adjusted retention time,tR’）--扣除死时间后的保留时间。也称折合保留时间（reduced retention time）。在实验条件（温度、固定相等）一定时，tR’只决定于组分的性质，因此，tR’(或tR)可用于定性。TR’=tR-t0
液相色谱定量基础知识3
第三部分定量基础知识1定性方法色谱峰的定性鉴别通过保留值(通常是保留时间)进行定性需要指定保留时间误差范围（时间窗、时间带）在相同的分析条件下保留时间相同并不肯定是同样的组份保留时间不同肯定不是同样的组份2定性确证仅仅通过保留时间并不能完全确证该物质通过加入标准物确认通过改变色谱条件确认光谱和质谱信息也可以作为进一步确证手段其他仪器方法确证3定量分析的基本要求需要有纯物质作标准被定量组分峰要与其它峰达到基线分离符合定性参数要求选择合适的定量方法45定量分析基本公式C i = f i A i C i = f i H i在某些条件限定下，被测组分的浓度与检测器的响应值成正比的关系。
（蒸发光散射检测器浓度与峰面积不成线性，分别取对数后成线性）C i ：组分浓度,f i : 响应因子，与组分的物理化学性质和检测器的性质有关A i ：组分响应面积H i ：组分响应高度实际修饰公式：Y=aX+b常用定量方法面积归一化外标法内标法标准加入法67面积归一化法公式：%100%×=∑AiAiCi 特点：1.无需做校正，简便，快速2.进样量不严格要求3.要求所有组分都流出并且被检测到4.要求所有组分的响应因子相当不能作为准确定量的方法，仅在特定情况下使用8外标法浓度C 1C 4C 3C 2浓度面积A 1A 2A 3A 4C 1C 2C 3C 4A 1A 2A 3A 4峰面积标准曲线9外标法特点：1.不需所有峰都流出或被检测到，只对目标组分作校正2.需要标准样品3.进样量必须准确4.仪器必须有良好的稳定性是实验室最常用的定量方法，定量结果准确f i ——i 组分工作曲线的斜率ii i A f C =1010单点校正法当被测试样中各组分浓度变化范围不大时，可不必绘制多点的标准曲线，而用单点校正法（比较法）。
配制一个和被测组分含量接近的标准溶液，定量进样，根据被测组分和外标组分峰面积比或峰高比计算被测组分的含量。
最新整理HPLC的常用术语解释
H P L C的常用术语解释高效液相色谱法(H i g h P e r f o r m a n c e L i q u i d C h r o m a t o g r a p h y\H P L C)又称高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱、近代柱色谱等。
它是在生化和分析化学中常用的柱层析仪。
接下来小编为大家整理了H P L C的常用术语解释，希望对你有帮助哦!第一部分色谱曲线1、色谱图(c h r o m a t o g r a m)：色谱柱流出物通过检测器系统时所产生的响应信号对时间或流动相流出体积的曲线图，或者通过适当的方法观察到的纸色谱或薄层色谱斑点、谱带的分布图。
2、(色谱)峰(c h r o m a t o g r a p h i c p e a k)：色谱柱流出3、峰底(p e a k b a s e)：峰的起点与终点之间的连接的直线4、峰高(h，p e a k h e i g h t)：色谱峰最大值点到峰底的距离(图1中的B E)。
5、峰宽(W，p e a k w i d t h)：在峰两侧拐点(图1中的F，G)处所作切线与峰底相交两点的距离6、半高峰宽(W h/2，p e a k w i t h d a t h a l f h e i g h t)：通过峰高的中点作平行于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离(图1中的H J)。
7、峰面积(A，p e a k a r e a)：峰与峰底之间的面积8、拖尾峰(t a i l i n g p e a k)：后沿较前沿平缓的不对称的峰。
9、前伸峰(l e a d i n g p e a k)：前沿较后沿平缓的不对称的峰。
(又叫伸舌峰、前延峰)10、假峰(g h o s t p e a k)：除组分正常产生的色谱峰外，由于仪器条件的变化等原因而在谱图上出现的色谱峰，即并非由试样所产生的峰。
这种色谱峰并不代表具体某一组分，容易给定性、定量带来误差。
液相 操作规程
液相操作规程
《液相操作规程》
一、操作前准备
1. 工作场所应保持干净整洁，避免灰尘、杂物等附着在设备上。
2. 确保操作人员具备相关操作技能和知识，并穿戴好相应的防护装备。
3. 检查设备和仪器的完好性，确保操作的安全性。
二、操作步骤
1. 将需要使用的试剂和溶剂准备好，根据实验要求量取所需的物质。
2. 根据实验要求将试剂和溶剂混合，并将混合液注入反应器中。
3. 调节反应器的温度、压力等参数，并根据实验要求进行反应操作。
4. 定时监测反应的进行情况，及时调整参数以确保实验进程的顺利进行。
5. 操作结束后，将反应器中的产物进行分离、提取等操作。
三、注意事项
1. 操作过程中需严格遵守安全操作规程，避免化学品的接触、吸入等情况。
2. 在操作过程中应避免产生冷凝现象，可根据实验需要使用相应的保温装置。
3. 操作结束后应及时清理工作场所，处理废弃物等，确保环境的整洁和安全。
四、事故处理
1. 在操作过程中如发生事故，应立即停止操作并进行紧急处理，确保人员和设备的安全。
2. 如有人员受伤，应及时进行急救处理并报警求助。
3. 事故发生后应对设备和场所进行检查、维修和整治，避免再次发生同类事故。
总之，《液相操作规程》对实验操作中的相关要点和注意事项进行了系统的规定，操作人员应严格遵守，确保实验的安全性和顺利进行。
高效液相色谱基础知识总结
（LC-MS），有效的弥补了色谱法定性分析特征性差的弱 点，成为最重要的分离分析方法之一， LC-MS在选择性、 灵敏度、分子量测定和提供结构信息方面具有明显的优 势，能够同时获得可靠的定性定量结果，因而被广泛应 用于药物的质量控制（杂质、副产物、降解产物等的鉴 定和测定）、药物在生物体内的吸收、分布和代谢研究 （包括代谢物的结构确定及定量）和临床医学研究（如 蛋白异常的研究）。 LC-MS已成为新药研究必不可少的 手段。20世纪70年代，高效液相色谱法崛起克服了
高效液相色谱基础知识总结
二、基本概念和术语
一、色谱图和峰参数 1、色谱图(chromatogram)--样品流经色谱柱和检测器， 所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)。 2、基线(base line)--经流动相冲洗，柱与流动相达到 平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行 于时间轴。基线反映仪器及操作条件的恒定程度，主要 由流动相中的杂质等因素决定。
键合相色谱法是将类似于气相色谱中的固定液的液 体，通过化学反应键合到硅胶表面，从而形成固定相。
高效液相色谱基础知识总结
采用化学键合固定相的色谱法称为键合相色谱。若采用 极性键合相、非极性流动相，则称为正相色谱；采用非 极性键合相、极性流动相，则称为反相色谱。这种分离 的保留值大小，主要决定于组分分子与键合固定液分子 间作用力的大小。
高效液相色谱基础知识总结
气相色谱法不能直接用于分析难挥发、热不稳定及高分 子化合物等的弱点，大大扩大了色谱法的应用范围，把 色谱法推进到一个新水平。
高效液相色谱（high performance liquid chromatography, HPLC）是一种高效、快速的分离分析 技术，具有灵敏度高、选择性好的特点。HPLC具有的同 时分离和分析的功能对于体内药物分析和体内内源性物 质的分析及成分复杂的中药分析尤其重要。 HPLC的分离 功能还广泛用于药物的纯化和制备，如用制备色谱分离
高压液相色谱(HPLC)基本概念与理论
高压液相色谱(HPLC)基本概念和理论一、基本概念和术语1.色谱图和峰参数色谱图(chromatogram)--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)。
基线(base line)--经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。
一般应平行于时间轴。
噪音(noise)--基线信号的波动。
通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
漂移(drift)--基线随时间的缓缓变化。
主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
色谱峰(peak)--组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。
流出曲线上的突起部分。
正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。
不对称色谱峰有两种：前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak)。
前者少见。
拖尾因子(tailing factor，T)，用以衡量色谱峰的对称性。
也称为对称因子(symmetry factor)或不对称因子(asymmetry factor)。
《中国药典》规定T应为0.95~1.05。
T＜0.95为前延峰，T＞1.05为拖尾峰。
峰底-基线上峰的起点至终点的距离。
峰高(peak height，h)-峰的最高点至峰底的距离。
峰宽（peak width，W)-峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。
W＝4σ半峰宽（peak width at half-height，Wh/2)-峰高一半处的峰宽。
Wh/2＝2.355σ标准偏差（standard deviation，σ)-正态分布曲线x ＝±1时（拐点）的峰宽之半。
正常峰的拐点在峰高的0.607倍处。
标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。
σ小，分散程度小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。
液质联用基础知识和名词术语
ESI谱图示例
1amu=1Da
仪器的使用范围
仪器的测试条件决定了其使用范围 色谱条件（液相色谱条件） 质谱条件（离子源的选择）
HPLC条件的选择
根据化合物的类型选择选择流动相的组成；（甲醇-水、乙腈-水或甲醇-乙腈-水 DMF DMSO THF）
某些化合物质有某种流动相体系才可以出峰 一般正离子方式用甲醇，负离子方式用乙腈 梯度的设定：梯度变化太快时对离子化效率影响很大，相应源参数也应该改变，
液质联用基础知识和名词术语 （LC/MS/MS）
2019-08-01
什么是液质联用？
LC-MS/MS：是一种将液相色谱的高效分离能力与质谱的特异、灵敏、多 组分检测能力相结合，实现复杂混合物更准确的定量和定性分析技术。 在药物分析、食品分析和环境分析等许多领域得到了广泛的应用。
样品引入 液相色谱
离子化
质量分析器 质谱图
检测器 数据分析
什么是质谱分析法
质谱分析法是先将中性分子离子化，变为气态离子混合物，并按质荷比 （ m/z）分离、丰度记录的一种分析方法;
质谱仪是实现上述分离分析技术，从而测定物质的质量与含量及其结构 的仪器。由样品导入系统、离子源、检测器、数据处理系统组成。
质谱分析法是一种快速,有效的分析方法，利用质谱仪可进行同位素分析, 化合物分析，气体成分分析以及金属和非金属固体样品的超纯痕量分析。
同位素：具有相同原子序数而又具有不同的质量数的原子叫做同位素
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液相色谱检测1仪器的基本常识及术语仪器结构：液相色谱仪主要包括泵、进样器、色谱柱、检测器；仪器分类：液相色谱仪属于精密仪器中的色谱仪器；按照分为离机制，吸附、分配、离子交换、亲和色谱，体积排阻色谱；按照流动相与固定相的极性，分为正相色谱法和反相色谱法；1.2.2高效液相色谱法的应用范围：高效液相色谱法适用于高沸点不易挥发、受热不稳定易分解、分子量大的，不同极性的有机化合物，生物活性物质和多种天然产物，合成的和天然的高分子化合物等。
仪器检定：液相色谱仪检定周期为1年，在两次检定间期内进行一次期间核查，也可以根据情况增加核查次数；维护保养：对于液相维护方式主要是周维护和日维护，其中周维护包括联机系统及中工作站软件维护、数据库整理备份、检测器自检、维护单向阀、溶剂砂芯滤头、进样器、电机泵检查维护、溶剂瓶清洗等；日维护包括环境温度、环境湿度、色谱柱温度、压力流速、进样口是否洁净、进液处的砂芯过滤头是否洁净、流动相交换时是否有沉淀；色谱法的常用基本术语基线：在色谱操作条件下,没有被测组分通过鉴定器时,记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线.死时间,保留时间及校正保留时间:从进样到惰性气体峰出现极大值的时间称为死时间,以td表示.从进样到出现色谱峰最高值所需的时间称保留时间,以tr表示.保留时间与死时间之差称校正保留时间.以Vd表示. 死体积,保留体积与校正保留体积:死时间与载气平均流速的乘积称为死体积,以Vd表示,载气平均流速以Fc表示,Vd=tdxFc.保留时间与载气平均流速的乘积称保留体积,以Vr表示,Vr=trxFc峰面积：流出曲线(色谱峰)与基线构成之面积称峰面积,用A表示.拖尾因子：是反映峰对称性的指标，计算公式：拖尾因子T＝2d1（其中为5%峰高处的峰宽，d1为峰顶点至峰前沿之间的距离）。
峰高与半峰宽:由色谱峰的浓度极大点向时间座标引垂线与基线相交点间的高度称为峰高,一般以h表示.色谱峰高一半处的宽为半峰宽,一般以x1/2表示；色谱检测的特性（1）灵敏度高；（2）线性范围宽；（3）分离度与柱效、选择因子、容量因子、分析时间的关系：（4）分离度与柱效的平方根成正比，选择因子一定时，增加柱效；（5）分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质有关的常数，随分离柱温度、柱压的改变而变化：一般通过改变固定相和流动相的性质和组成或降低柱温，可增大选择因子；（6）增大选择因子的最有效方法是选择合适的固定液。
对于液相色谱，改变流动相的组成，可以有效控制k；2仪器的操作规程日立液相设备L-2000/2400操作规程2.1.1使用环境环境温度：4℃—55℃；相对湿度：小于95%RH。
2.1.2使用前准备检查所用溶液(如流动相，乙腈等)是否足够。
检查线路是否连接正常。
2.1.3设备操作方法具体操作如下：(1)依次开启泵开关，检测器开关，自动进样器开关，柱温箱开关；(2)打开软件，点击“i”按钮，出现联机界面，点击“Iinitialize”[i'iz]按钮，当文本框出现文字时，表示联机成功；(3)检查所用方法是否符合要求。
如不符合，进行设置；(4)开泵。
检测具体操作如下：(1)建立所需样品盒；(2)点击检测按钮，选择刚建立的样品盒；(3)首先进行走基线；(4)当基线走平时，点击系列样品检测按钮，进行标样，样品检测；(5)当标样检测结果出来时，打开结果窗口，选择所需标样结果，点击“Recalculate['ri:'klkjuleit]进行重新计算，然后点击“Calibration”[kli'brein]进行定标；(6)当样品结果出来时，打开结果窗口，选择所需样品结果，点击“Recalculate”['ri:'klkjuleit]进行重新计算，然后点击“ModifyReport”['mdifai,][ri'p:t,],出现结果报告，即可查看样品具体结果。
2.1.4更换流动相具体操作如下：(1)当流动相快不够时或异常时，及时更换流动相；(2)先把泵关闭，将流动相入口放入新流动相中；(3)将泵阀逆时针旋转，进行排气。
大约3分钟后，关闭排气功能；(4)排气完毕后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵；(5)走基线，当基线走平时，开始做标样，做样。
2.1.5关机具体操作如下：(1)先把泵关闭，将流动相入口更换为超纯水；(2)将泵阀逆时针旋转，进行排气。
大约3分钟后，关闭排气功能；(3)排气完毕后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵；(4)用超纯水冲洗管路大约20分钟；(5)把泵关闭，将超纯水更换为100%甲醇或100%乙腈；(6)将泵阀逆时针旋转，进行排气。
大约3分钟后，关闭排气功能；(7)排气完毕后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵；(8)用100%甲醇或100%乙腈冲洗管路大约30分钟；(9)关泵，关液相软件，关泵开关，检测器开关，自动进样器开关，柱温箱开关。
2.1.6维护保养、注意事项(1)进行旬维护检查工作，主要检查事项：软件是否正常、温度、清洗、进样器、泵单元；(2)每次测量前进行标样检测，斜率达到%要求才能检测样品，测完样品及时清理。
(3)按要求进行每天2个小时以上的清洗。
高效液相色谱-2695/24892.2.1开机自检具体操作如下：(1)打开Alliance['lains]2695和2489的电源开关至ON(1)的位置，仪器开始进行自检；(2)仪器将进行大约5分钟的自检过程，待仪器自我测试完毕后，出现以下画面，画面上方的状态显示区会出现“Idle”['aidl]状态，表示开机测试正常。
2.2.2流动相有机溶剂要求用色谱纯(进口名牌最好)，水或缓冲盐溶液要用超纯水(电阻率：18.2MΩ)，每48小时制备新鲜的水相流动相,尤其是100%含水流动相使用时间不超过两天。
6根管子都在液面以下。
溶剂的位置必须高于溶剂混合阀(GradientProportioningValve)。
['greidintpr'p:nivlv]清洗柱塞密封垫(SealWash)[si:l][w]的溶液：含5%～10%甲醇的超纯水。
洗针液(NeedleWash)['ni:dl][w]：50%甲醇：50%水(该比例仅适用于反相试验)。
注:以上溶剂或溶液均需用μm的膜过滤并超声脱气1分钟，用洁净的玻璃容器盛放,避免污染，同时玻璃容器应用超纯水来清洗而不能用自来水。
2.2.3灌注柱塞密封清洗清洗操作步骤：(1)回到Menu['menju:]画面，选择Diag；(2)确定SealWash[si:l][w]的管路放在正确的位置；(3)按PrimeSealWash[praim][si:l][w]，再按Start，直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，按Halt；[h:lt](4)按Close。
注意：密封圈清洗(Sealwash)[si:l][w]溶剂，在反相液相色谱中可使用Water/MeOH[methylalcohol甲醇]=90/10或Water/Acetonitrile[situ'naitril乙腈]=95/5(根据实际需要使用不同溶剂)。
2.2.4灌注针头清洗操作步骤：回到Main[mein]的画面，选择Diag，选择Prime[praim]NdlWash。
设定值为30秒，若想要多清洗几次时，请按StartAgain。
清洗溶剂：50%的甲醇溶液注意：若上述清洗溶剂无法避免进样时的交叉污染，使用较强的溶剂系统来进行清洗操作。
2.2.5打开真空脱气机如液相仪管路干，可进行使用，如管路不干则按照以下步骤进行操作：按“Menu/Status”['steits]键，进入Status(1)画面；利用方向键将光标移至“Degasser”[di:gs]位置，按Enter；利用上下键选择模式为ON。
注意：在开启除气装置时，要确认所有溶剂管路都充满溶剂；若没有溶剂时请执行溶剂的DryPrime[drai][praim]操作。
2.2.6执行干灌注确定流动相溶剂的管子放在正确的位置，检测器(Detector[di'tekt])废液管及定量环(SampleLoop[lu:p])的废液管是否放置于适当的废液容器中。
摇动溶剂瓶内的过滤器(SolventFilter)['slvnt]['filt]，防止气泡附着在过滤器的外表面。
将空的针筒插入抽液阀(Prime/Ventvalue)中，以逆时针的方向旋转3圈。
按“Menu/Status”['steits]键，进入Status(1)画面，按“DirectFunction”[di'rekt'fkn]功能键，选择DryPrime，按Enter。
按下面使用的溶剂开启阀门(例如:OpenA)，然后将针筒向外拉，抽出5～10mL溶剂并完全抽出溶剂管子内的气泡，完成后关闭Prime/Vent阀门。
在“Enteraduration”[dju'rein]中输入3分钟，按“Continue”键，泵即以min的流速进行清洗(Purge)。
可重复上两个步骤，将所要使用的流动相溶剂DryPrime。
2.2.7执行湿灌注按“Menu/Status”键，进入Status(1)画面，利用方向键将光标移至“Composition”[kmp'zin]字段，将欲WetPrime的溶剂输入100%。
按“DirectFunction”[di'rekt'fkn]功能键，选择WetPrime，按Enter。
WetPrime的原设定值，一般为FlowRate:min，Time:，然后按下“OK”键，泵即开始进行WetPrime操作。
重复上述的步骤直到所有溶剂WetPrime进行完毕。
2.2.8设定流动相平衡色谱柱按“Menu/Status”键，进入Status(1)画面，利用方向键将光标移至“Composition”[kmp'zin]字段，利用仪器面板右侧的数字键设置试验要求的溶剂组成比例，此时会在原溶剂比例表的下方出现新编辑溶剂比例表(NewComposition)。
设定好新的溶剂组成比例后，按“ChangeComp”[teind[kmp]功能键(改变溶剂组成比例changecomposition)，此设定的溶剂组成比例即为当前的比例。
利用方向键将光标移至“Flow”[flu]字段，利用仪器面板右侧的数字键设定流速，此时仪器即设定的溶剂组成比例和流速来平衡色谱柱。
特别提示:对于常规的反相色谱试验至少要用30倍柱体积来平衡，而对于离子对色谱的平衡可能需要多达500柱体积的流动相来平衡。
2.2.9冲洗进样器溶剂管理系统的前处理(Primethesolventmanagementsystem)要求如下：(1)改变溶剂;(2)发现注射针头内有气泡;(3)每天开机的时候。