耐低温肠球菌Enterococcussp_MB2_1产细菌素的生物学特性研究
铜绿假单胞菌的生物学特性及生命周期研究
铜绿假单胞菌的生物学特性及生命周期研究铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种常见的革兰氏阴性细菌，广泛存在于自然和人工环境中。
它是一种具有多样化的生物学特性和适应能力的病原微生物，引起了严重的医院获得性感染，并对免疫系统较弱的患者构成威胁。
铜绿假单胞菌具有以下生物学特性：1. 形态特征：铜绿假单胞菌呈革兰氏阴性菌杆状，通常具有1-3个鞭毛，有时可形成鞭毛阵列。
菌体长度约为2-3微米，直径约为0.5微米。
2. 营养特性：铜绿假单胞菌是一种通气性细菌，其营养需求较为广泛，能利用多种碳源、氮源和微量元素进行生长。
它还能以各种有机物为唯一的碳源和能源，表现出极强的代谢活力。
3. 耐受能力：铜绿假单胞菌具有出色的耐受性，能够适应各种环境条件。
它对高温、低温、酸碱度和氧浓度的变化具有较好的耐受能力，并且对抗生素、重金属等抗药物物质也具有一定程度的抵抗力。
4. 生物膜形成：铜绿假单胞菌能够在生长表面形成坚固的生物膜，这对于细菌的附着、生长和传播至关重要。
生物膜形成对病原性和抗药性的发展起着重要作用。
5. 代谢产物：铜绿假单胞菌代谢活跃，能够产生多种次级代谢产物，具有抗菌、抗真菌、抗白细胞凝集酶、氧化酶等活性物质，对宿主免疫系统产生影响。
铜绿假单胞菌的生命周期涉及两种生活方式：自由生活状态和共生状态。
铜绿假单胞菌在自由生活状态下，广泛存在于土壤、水体、植物根部和其他自然环境中。
在这个阶段，它以单个细胞或小菌落的形式存在，通过分裂和繁殖来扩大数量。
自由生活状态下的铜绿假单胞菌能够通过生物膜形成附着于物体表面，从而提供一定的保护并加强菌群的稳定性。
当铜绿假单胞菌进入共生状态时，它能够与其他生物形成关系，如与植物根部共生或与其他细菌共同形成菌落。
这种共生状态对于细菌的营养和生存都非常重要。
例如，铜绿假单胞菌与某些植物根部形成共生关系，通过与植物根系相互作用，细菌能够获得所需的营养物质，同时为植物提供抗病能力和其他益处。
枯草芽孢杆菌所产细菌素的理化性质及抑菌谱的研究
近年来，由于抗生素的滥用，在食品中抗生素、药物残留及防腐剂添加超标而导致的出口损失，已成为畜牧业发展的瓶颈。
人们迫切需要探寻一种能取代抗生素的抗菌剂，于是细菌素成为近年来研究的热点。
细菌素是细菌代谢过程产生的蛋白质或多肽，具有抑制某些微生物生长活性的作用[1-2]。
细菌素是一种蛋白类物质，可以被蛋白酶所降解，具有无抗药性、无残留、能够抑制或杀死某些致病菌等优点[3-4]。
枯草芽孢杆菌作为公认的益生菌，其产生的细菌素在养殖业和畜牧业中作为绿色饲料添加剂使用有着巨大的开发潜力。
为此，本文初步分析了枯草芽孢杆菌Nxc6所产细菌素的理化性质及其抑菌谱，以期为该细菌素在养殖业和其他领域的开发应用提供科学依据。
1材料与方法1.1菌株枯草芽孢杆菌Nxc6由山东宝来利来生物研究院从牛粪中分离，经数次传代，抗菌活性稳定。
指示菌：大肠杆菌O 1、金黄色葡萄球菌等，由山东宝来利来生物工程股份有限公司生物研究院保存。
1.2培养基细菌指示菌培养基：葡萄糖0.5%、蛋白胨1%、牛肉膏0.5%、氯化钠0.5%、进口琼脂1.5%、pH 7.0。
真菌指示菌培养基：PDA 培养基。
枯草芽孢杆菌Nxc6种子培养基：肉汤培养基。
枯草芽孢杆菌Nxc6发酵培养基：葡萄糖0.5%、蛋白胨1%、牛肉膏0.3%、pH 6.5。
1.3芽孢杆菌发酵液的制备从枯草芽孢杆菌Nxc6斜面上挑取一环至液体种子培养基中，37℃振荡培养24h ，然后以1%的接种量接种到发酵培养基中，置500mL 三角瓶中，装液量为100mL ，37℃振荡培养30h ，得到发酵液，待用。
1.4产细菌素的鉴定将发酵液3000rpm 离心15min ，去除菌体得上清液，首先测定上清液中pH 的变化，排除酸的影响，采用过氧化氢酶法进行过氧化氢的检测，以排除过氧化氢的干扰。
然后缓慢的向上清液中加入终质量分数为60%的硫酸铵进行盐析，4℃放置12h 使蛋白质充分沉淀，5000rpm 离心20min ，弃上清，将沉淀溶于原体积1/10的蒸馏水中，制成抗菌液，进行抗菌活性的测定。
屎肠球菌 M-2 产细菌素的纯化与特性分析
Tween 20 and tween 80 did not decrease the activity. However, SDS, span 80 and urea induced 40%~50% activity loss. Enterocin M2
could be inactivated by proteinase K and trypsin, and partially inactivated by papain and neutral proteinase. Mode of action of ente
spp.,
spp.,
spp. and etc, but also could inhib
ited several gramnegative bacteria, such as
,
spp. and etc. These results show that the bacteriocin has a
potential application as food additives and biopreservatives in food industry.
; bacteriocin; purification; characterization
乳酸菌细菌素是乳酸菌在代谢过程中通过核糖 体机制合成的一类具有抑菌活性的蛋白或多肽类物
质。它可被人体降解且无残留，具有作为生物防腐剂 应用于食品、医药及饲料等领域的潜力，因而引起广
* 基金项目：国家自然科学基金（No.30671482）、国家高技术研究发展计划(863)项目（No.2006AA10A208；2006AA10Z343）和“十一五”科技支撑项 目（No.2006BAD04A06）资助。
肠球菌介绍
肠球菌-病菌简介肠球菌肠球菌为院内感染的重要病原菌，不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心骨膜炎和脑膜炎，由于其固有耐药性，所致感染治疗困难。
本文就肠球菌的生物学特性、所致感染的临床表现、肠球菌在院内感染中的地位、致病性、耐药性及所致感染的治疗作一综述。
肠球菌（Enterococcus）属链球菌科，是人类和动物肠道正常菌群的一部分，通常在引起腹腔和盆腔感染所分离的混合菌丝中发现，既往认为肠球菌是对人类无害的共栖菌，但近年研究已证实了肠球菌的致菌力。
在需氧革兰阳性球菌中，它是仅次于葡萄球菌的重要院内感染致病菌[1]，肠球菌亦可引起院外感染。
肠球菌不仅可引起尿路感染、皮肤软组织感染，还可引起危及生命的腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等[2]。
肠球菌-生物学特性及分类肠球菌为圆形或椭圆形、呈链状排列的革兰阳性球菌，无芽胞，无鞭毛，为需氧或兼性厌氧菌。
本菌对营养要求肠球菌较高，在含有血清的培养基上生长良好。
在血平板上经37℃培养18小时后，可形成灰白色、不透明、表面光滑、直径0.5～1mm大小的圆形菌落，不同的菌株表现为不同的溶血现象。
与同科链球菌的显著不同在于本菌在生化反应上能耐受高盐和胆汁培养基，并对许多抗菌药物表现为固有耐药。
根据其利用糖类的特征可将肠球菌分为3组[3，4]：第一组以鸟肠球菌（E.avium）为代表；第二组以粪肠球菌(E.faecalis)等；包括尿肠球菌(E.faecium)等；第三组以坚韧肠球菌(E.durans)为代表。
其中对人类致病者主要为粪肠球菌和尿肠球菌[3，5]。
在临床分离菌中粪肠球菌占85%～95%、尿肠球菌占5%～10%，其余少数为坚韧肠球菌和其他肠球菌。
肠球菌-临床表现尿路感染为粪肠球菌所致感染中最为常见的，绝大部分为院内感染。
据报道16%的院内尿路感染由肠球菌引起，肠球菌仅次于大肠杆菌居第2位[1]。
其发生多与留置导尿管、其他器械操作和尿路结构异常有关[3]。
产细菌素苏云金芽孢杆菌的鉴定及其所产抗菌物质性质
※生物工程食品科学2010, Vol. 31, No. 11147产细菌素苏云金芽孢杆菌的鉴定及其所产 抗菌物质性质李 云，杨胜远 * ，林晓东，钟瑜红，苏 婷，刘湘嘉(韩山师范学院生物系食品与发酵工程研究所，广东 潮州 摘 521041)要：从腌制蔬菜表面分离到一株产细菌素的菌株 K2，其中和后的无细胞发酵液主要抑制革兰氏阳性细菌，特别是对芽孢杆菌有强烈的抑制作用。
发酵上清液经硫酸铵盐析和透析后，仍然有很强的抗菌活性，并对多种蛋白 酶敏感，表明抗菌活性物质为蛋白类物质。
通过形态培养特征、生理生化特征、16S rDNA 序列比对及系统发育 分析，鉴定菌株 K2 是苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。
菌株 K2 产生的抗菌物质在 pH6～9 条件下 80℃处理 30min 仍保持稳定的抗菌活性，其对敏感菌的作用主要是杀菌，而且对芽孢萌发有很好的抑制作用。
该抗菌物质 在菌体生长对数中期产生，在稳定期中期抗菌活性达到最大。
关键词：苏 云 金 芽 孢 杆 菌；细菌素；鉴定；抗 菌 物 质Identification of Bacteriocin-producing Bacillus thuringiensis and Properties of Its Antibacterial SubstancesLI Yun，YANG Sheng-yuan*，LIN Xiao-dong，ZHONG Yu-hong，SU Ting，LIU Xiang-jia (Food and Fermentation Engineering Institute, Department of Biology, Hanshan Normal University, Chaozhou 521041, China)Abstract： Strain K2 having the ability to produce bacteriocin was isolated from the surface of picked vegetables. The neutralized cell-free fermentation supernatant exhibited an inhibition effect against Gram-positive bacteria, especially strong inhibition effect against Bacillus strains. The inhibition activity of the fermentation supernatant still kept high after ammonium sulphate precipitation and dialysis, and the activity of the dialysis retentate was sensitive to a variety of proteases. These results indicated the protein nature of antibacterial substances contained in the dialysis retentate. Base on morphological, physiological and biochemical characteristics, 16S rDNA sequence and phylogenic analysis, the strain K2 was classified as Bacillus thuringiensis. The antibacterial substance from strain K2 remained strong antibacterial activity after heating treatment at 80 ℃ and pH 6 － 9 for 30 min, suggesting its excellent thermostable property and pH resistance. The antibacterial activity was generated from midlogarithmic growth phase and reached the maximum activity at mid-stationary phase. Key words：Bacillus thuringiensis；bacteriocin；identification；antibacterial substance 中图分类号：Q939.9 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2010)11-0147-06细菌素是某些细菌在代谢过程中通过核糖体合成机 制产生的一类具有生物活性的蛋白质或多肽，主要抑制 其他相近种类的细菌，一般产生菌自身对其细菌素具有 免疫性[ 1 ] 。
粪肠球菌
鉴别要点
1.本菌特征 革兰阳性球菌，触酶试验阴性，在6.5%NaCl中生长，胆汁七叶苷试验阳性，45℃中生长 。 2.与链球菌属和乳球菌属的鉴别 肠球菌属能在pH9.6的肉汤和45℃环境中生长，胆汁七叶苷和盐耐受试验阳性，而链球菌属和乳球菌属则相 反。 3.与屎肠球菌、鸟肠球菌的鉴别 粪肠球菌不分解L-阿拉伯糖，分解山梨觅醇。屎肠球菌能分解Ⅰ-阿拉伯糖，不分解山梨醇。鸟肠球菌分解 L-阿拉伯糖、山梨醇 。 4.与铅黄肠球菌、鹑鸡肠球菌的鉴别 粪肠球菌不分解鼠李糖，亚碲酸盐试定验阳性，铅黄肠球菌、鹑鸡肠球菌则相反。铅黄肠球菌与鹑鸡肠球菌 的区别，铅黄肠球菌产黄色素鹑鸡肠球菌则不产 。
简介
细菌分类学上，肠球菌属早期并不存在，现今的一些菌种本归属于链球菌属。肠球菌在分类学上已经过多次 变迁。1930年，肠球菌被归入 D群链球菌。1984年，DNA-DNA杂交和 16SrRNA测序表明屎链球菌（S．faecium） 和粪链球菌（S．faecalis）与其他链球菌显著不同。同年，Schle-ifer等提出肠球菌应从链球菌中脱离出来， 形成一个新的肠球菌属（Enterococcus）。到目前为止，以 16SrRNA测序和 DNA-DNA杂交作为分类基础，该属 已增加到 28种之多。不久之后，可能还会重新分类 。粪肠球菌为该属中最常见的即为代表种。该属通常指粪便 来的可以用氮钠分离鉴定的一群革兰氏阳性球菌。由于肠球菌的菌种均含有Lancefield的D群抗原，亦称D群粪肠 球菌或D群肠球菌。肠球菌的DNA G+C含量33%-39%mol。
粪肠球菌属于动物肠道内的正常菌群，一般认为粪肠球菌对动物或人的机体无害，是一种共生菌。近年研究 已证实，部分粪肠球菌在长期进化中出现毒力基因，可引起广泛的感染。而且由于抗生素的长期和大量不规范使 用，粪肠球菌获得性耐药性不断上升，治疗粪肠球菌感染日益困难 。
产细菌素屎肠球菌的筛选鉴定及其抑菌特性
产细菌素屎肠球菌的筛选鉴定及其抑菌特性张 明，罗 强，魏 婕，刘 巧，罗 璠*（西南民族大学生命科学与技术学院，青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室，四川 成都610041）摘 要：从采自四川红原的传统发酵酸乳中分离得到308 株疑似乳酸菌，通过96 孔板法初筛和平板打孔法复筛，筛选出1 株具有明显抑菌作用的菌株SC-Y112。
通过形态学观察、16S rDNA序列同源性分析和ropA管家基因序列同源性分析结合生理生化实验，鉴定该菌株为屎肠球菌（Enterococcus faecium）。
通过排酸及排除H2O2影响后，该菌株的发酵上清液仍具有明显抑菌活性，经蛋白酶处理后，抑菌效果明显消失或下降，说明发酵上清液中的抑菌成分具有蛋白质性质。
进一步探究该菌株所产细菌素的生物学特性、遗传稳定性及抑菌特性表明，该细菌素在菌株接种后6 h产生，12 h达到最高；菌株在连续传代86 代内，产细菌素能力较为稳定；细菌素在 pH 3.0～7.0的条件下稳定，在100 ℃处理30 min后仍具有抑菌活性；SC-Y112所产细菌素具有广谱抗菌性，对单核细胞性李斯特菌有明显的抑菌活性。
关键词：发酵酸乳；屎肠球菌；细菌素；抑菌Screening for and Identification for Bacteriocin-producing Enterococcus faecium and Its Antibacterial PropertiesZHANG Ming, LUO Qiang, WEI Jie, LIU Qiao, LUO Fan*(Key Laboratory of Qinghai-Tibet Plateau Animal Genetic Resource Reservation and Exploitation, Ministry of Education, College of Life Science and Technology, Southwest Minzu University, Chengdu610041, China)Abstract: A total of308 strains suspected of being Lactobacillus were isolated from traditional fermented yoghurt collected from Hongyuan, Sichuan province, and were screened by 96-well plate method and agar well diffusion method. Among these strains, SC-Y112 was selected for its obvious antibacterial effect. It was identified as Enterococcus faecium by morphological observation, 16S rDNA and ropA housekeeping gene sequencing analysis, and physiological and biochemical tests. After removing the influence of organic acid and hydrogen peroxide, the fermentation supernatant of the strain still had considerable antibacterial activity. The antibacterial effect decreased and even disappeared after being treated with protease, which indicated that the antibacterial components in the fermentation supernatant were proteins. Further, the biological characteristics, genetic stability and bacteriostatic characteristics of the bacteriocin produced by the strain were investigated, which showed that the bacteriocin was produced at 6 h and reached the maximum at 12 h after inoculation; the bacteriocin production ability was relatively stable within 86 consecutive generations; the bacteriocin was stable under the condition of pH 3.0-7.0 and heat-treatment at 100 ℃ for 30 min. The bacteriocin had a wide antibacterial spectrum, especially against Listeria monocytogenes.Keywords: fermented yogurt; Enterococcus faecium; bacteriocin; inhibitionDOI:10.7506/spkx1002-6630-20191213-147中图分类号：Q93.3 文献标志码：A 文章编号：1002-6630（2021）06-0171-07引文格式：张明, 罗强, 魏婕, 等. 产细菌素屎肠球菌的筛选鉴定及其抑菌特性[J]. 食品科学, 2021, 42(6): 171-177. DOI:10.7506/ spkx1002-6630-20191213-147. ZHANG Ming, LUO Qiang, WEI Jie, et al. Screening for and identification for bacteriocin-producing Enterococcus faecium and its antibacterial properties[J]. Food Science, 2021, 42(6): 171-177. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/ spkx1002-6630-20191213-147. 收稿日期：2019-12-13基金项目：西南民族大学研究生“创新型科研项目”（CX2017SZ046）第一作者简介：张明（1993—）（ORCID: 0000-0003-4252-5342），男，硕士研究生，研究方向为饲料微生物。
青贮饲料中优良乳酸菌的分离鉴定及其生物学特性研究
青贮饲料中优良乳酸菌的分离鉴定及其生物学特性研究何轶群;雷赵民;吴润;万学瑞;刁小龙;艾文娜【摘要】为筛选优良的青贮饲料添加剂,采用平板分离法从青贮饲料中分离乳酸菌,通过细菌形态学、生理生化特征鉴定和16S rRNA基因序列分析相结合的方法对分离出的细菌进行鉴定.通过产酸性试验和抑菌试验对分离出来的12株乳酸菌进行筛选,并对筛选出的6株乳酸菌进行生物学特性比较.结果显示,5株为戊糖片球菌,4株为植物乳杆菌,1株为发酵乳杆菌,1株为肠系膜明串珠菌肠膜亚种,1株为屎肠球菌；菌株B1-6、B1-7、B2-3、B2-8、B3-1、B5-2的产酸能力和抑菌效果较好；菌株B1-7和B5-2生长最快,8h后进入稳定期,其余菌株14 h后进入稳定期；菌株B1-7在培养温度高于45℃,培养基pH＞10和含盐量＞0.08g/mL时不再生长,其余菌株均具有良好的抗逆性具备青贮潜力,可作为秸秆青贮的生物添加剂做进一步研究.【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2013(000)005【总页数】7页(P177-183)【关键词】乳酸菌;16S rRNA;筛选;生物学特性【作者】何轶群;雷赵民;吴润;万学瑞;刁小龙;艾文娜【作者单位】甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;甘肃农业大学动物科学技术学院,兰州730070;甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;甘肃农业大学动物医学院,兰州730070【正文语种】中文近几年来，我国畜牧业发展迅速，动物养殖规模日益扩大，但由于我国耕地面积减少，用于生产饲料的原料严重不足，加之对秸秆类植物的利用率相对较低，养殖业和饲料生产的矛盾日益突出，这些问题严重制约着我国畜牧业的发展。
因此，发展饲料工业以及加大对秸秆类植物饲料化的转化是目前我国畜牧业迫切需要解决的问题。
目前对秸秆类粗饲料的加工处理主要有物理加工法、化学加工法和微生物发酵法，其中以微生物发酵法中的青贮法应用最为广泛。
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耐低温肠球菌Enterococcus sp. MB2-1产细菌素的生物学特性研究邓 梅1，王俊钢2，高 阳1，倪永清1,*(1.石河子大学食品学院，新疆 石河子832000；2.新疆农垦科学院农产品加工研究所，新疆 石河子832000)摘 要：从新疆阿勒泰地区额尔齐斯河流域冷水鱼肠道筛选到一株产细菌素的菌株MB2-1，牛津杯法实验显示该菌株抑制革兰氏阳性菌李斯特氏菌(Listeria monocytogenes )、 金黄葡萄球菌（Staphylococcus aureus ）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）以及革兰氏阴性菌大肠杆菌（Escherichia coli ）的生长。
通过形态学和16S rRNA 基因序列同源性分析初步鉴定该菌株隶属于Enterococcus 属。
菌株Enterococcus sp.MB2-1的最适生长温度在24℃左右，属于耐冷菌。
细菌素MB2-1对胃蛋白酶、胰蛋白酶及尿素敏感，过氧化氢酶、TritonX-100、 SDS 、Tween80、NaCl 和 EDTA 处理抑菌活性保持稳定，该细菌素具有良好的pH 稳定性（3.0-9.0）和热稳定性（100℃、60min ），但在121℃、20min 处理后抑菌活性消失。
在菌株生长9小时后发现抑菌活性，并且在生长稳定期检测到最高抑菌活性。
实验结果初步显示细菌素MB2-1在食品低温冷藏保鲜中具有较大的应用潜力，后续会对其生物安全性做更深一层的研究。
关键词：耐低温微生物；肠球菌；细菌素；16S rRNA 基因；抑菌活性中图分类号：Q939.121 文献标识码：A 文章编号：Biological Characterization of Bacteriocin, Produced by Cold-adapted Enterococcus sp.MB2-1DENG Mei 1，WANG Jun-gang 2，GAO Yang 1，NI Yong-qing 1,*(1. College of Food Science, Shihezi University, Shihezi Xinjiang 832000, China ；2. Agricultural ProductProcessing Research Institute, Xinjiang Academy of Agriculture, Shihezi Xinjiang 832000, China)Abstract ：Strain MB2-1, isolated from intestine of cold-water fish from Erqisi River in Aletai Xinjiang , produced a cold-active bacteriocin with inhibitory activity against several food spoilage bacteria and food borne pathogens, including the Gram-positive Listeria monocytogenes , Staphylococcus aureus , Bacillus subtilis , and the Gram-negative Escherichia coli . Strain MB2-1was identified as Enterococcus spp . by using both phenotypical test and 16S rRNA gene sequence analysis. Enterococcus sp. MB2-1 showed the optimal growth temperature ranging from 20 to 24℃℃. This bacteriocin, which was designated enterocin MB2-1, was sensitive to proteolytic enzymes. Enterocin MB2-1 exhibited strong heat stability (60 min at 100℃) and pH stability (pH 3.0–9.0). In addition, enterocin MB2-1 is not inactivated when treated with catalase, TritonX-100, SDS, Tween80, NaCl and EDTA. Production of enterocin MB2-1 started at the early exponential phase (approximate to 9 h) and reached its maximum at the early stationary phase (33h).These characters suggested that enterocin MB2-1 has potential for application in food preservation. The safety aspects of strain MB2-1 should be studied in deeper details in order to evaluate their potential for biotechnological applications.Key words ：Psychrotrophs ；Enterococcus ；Bacteriocin ；16S rRNA gene ；Antimicrobial activity基金项目：新疆生产建设兵团博士资金专项(2011BB009)；新疆生产建设兵团青年科技创新资金专项 (2011CB001)；石河子大学自然科学重点学科(ZRKX20104001)作者简介：邓梅(1989—)，女，硕士研究生，主要从事食品生物技术方向研究。
E-mail ：dengmeiabc41@ *通信作者：倪永清(1969—)，男，副教授，博士，主要从事微生物和分子生物技术方向研究。
E-mail ：niyqlzu@ 2012-12-05网络出版时间：2013-01-07 16:33网络出版地址：/kcms/detail/11.2206.TS.20130107.1633.039.html食品腐败菌和食品致病菌，如李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）、金黄葡萄酒菌( Staphylococcus aureus）等不仅危害人体健康，对食品也会造成污染。
尽管化学添加剂在某种程度上可以有效的抑制这些细菌的生长与繁殖，但是化学添加剂对人体健康可能造成不利影响，对环境也可能形成危害，从而备受争议。
研究发现，许多乳酸菌可以产生抑菌化合物比如有机酸、过氧化氢、双乙酰、酶以及细菌素[1]，这些物质可以有效的抑制腐败菌和致病菌的生长。
在这些抗菌化合物中，由于细菌素对蛋白水解酶的敏感性，使其在食品工业中作为生物防腐剂展现出很大的应用潜能，而且具有安全性[2]。
乳酸菌在自然界分布广泛，在人类及动物的肠道、奶制品及一些植物的表面都栖息着不同类型的乳酸菌。
不同来源、不同种类的乳酸菌生长温度范围和最适生长温度有差异，其中来源于低温环境中的乳酸菌由于相对最适生长温度范围较低，被称为低温乳酸菌。
根据微生物的生长温度，传统上将微生物分为三类，即低温微生物 (Psychrophiles)、中温微生物 (Mesophiles)和高温微生物(Thermophiles)。
根据Morita 的定义[3]，低温微生物可区分为两类，一类是专性低温微生物 (Obligate psychrophiles)，也称嗜冷微生物，这种微生物可以在0℃生长，最适生长温度在15℃左右，最高生长温度不超过20℃；另一类是兼性低温微生物(Facultative psychrophiles，或psychrotrophs)，也称耐冷微生物，这种微生物可以在0℃生长，最适生长温度在20-24℃。
低温乳酸菌及乳酸菌素在食品加工，尤其是生物保鲜中显示了极具潜力的应用价值，但是到目前为止没有得到充分的研究和开发[4]。
乳酸菌素是在乳酸菌（Lactic acid bacterium，LAB）代谢过程中合成并分泌到环境中的一类对革兰氏阳性菌（尤其是亲缘性较近的细菌）具有抑制作用的杀菌蛋白或多肽。
截至目前已发现的乳酸菌细菌素有百余种，分别是相应的乳酸菌产生的乳球菌素（Lactococcin）、片球菌素（Pediocin）、明串球菌素（Carnocin）、乳杆菌素（Lactocin）、双歧杆菌素（Bifidoxin）、肠球菌素（Enterocin）、肉食杆菌素（Carnobacteriocin）等 [ 5-7]。
由于耐低温乳酸菌在冷藏环境下具有很强的生长活性和比生长速率，能够产生具有很强抑菌活性的细菌素，在食品的低温生物保鲜中具有更大的应用潜能。
但从文献报道看[4]，目前对于低温环境中的乳酸菌资源开发及相关研究很少。
尤其开发食品级微生物乳酸菌及其代谢产物以其安全、高效、无毒等优点，成为开发生物保鲜剂的热点。
因此，筛选出高产细菌素的优质耐低温乳酸菌及其代谢产物作为生物保护剂，并对其细菌素进行分离纯化和深入的生物特性研究就很有必要。
本实验从新疆阿勒泰地区额尔齐斯河流域冷水鱼的肠道分离产细菌素的耐低温乳酸菌，筛选出具有高效抑菌活性的菌株，并对其产细菌素的特性及影响细菌素活性的因素进行了深入研究，以期为开发安全的食品生物保鲜乳酸菌及其生产应用奠定理论基础。
1材料与方法1.1 材料1.1.1 样品新疆阿勒泰地区额尔齐斯河流域冷水鱼（河鲈、九道黑、角鱼、乌鳢、银鲫、白鲦、丁鮻、银鲳及黑斑狗鱼）。
1.1.2 指示菌大肠杆菌（Escherichia coli）、李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）为实验室保存菌株，金黄葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CICC21600购买于中国工业微生物菌种保藏管理中心。
1.1.3 培养基改良MRS培养基[ 8]：蛋白陈10 g，牛肉膏10 g，酵母提取物5 g，K2HPO4 2 g，柠檬酸二铵2 g，乙酸钠5 g，葡萄糖20 g，吐温80 1 mL，MgS04.7H20 0.588 g， MnSO4.H20 0.25g，琼脂15g，蒸馏水1000ml，pH 6.2~6.4，121℃高压蒸汽灭菌15min。