产_氨基丁酸乳酸菌的筛选及分离鉴定
传统乳制品中产_氨基丁酸乳酸菌的筛选(精)
ｗｗｗ．ｃｈｉｎａｄａｉｒｙ．ｎｅｔｒｐｇｙ＠ｃｈｉｎａｊｏｕｒｎａｌ．ｎｅｔ．ｃｎ中国乳品工业CHINA dairy INDUSTRY传统乳制品中产γ－氨基丁酸乳酸菌的筛选冀林立，方芳，魏小雁，张彦斌，孟和毕力格（内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室食品科学与工程学院，呼和浩特０１００１８）摘要：采用薄层层析法和高效液相色谱法，对分离自传统发酵乳制品中的乳酸菌进行了γ－氨基丁酸生成能力的分析。
薄层层析结果显示，在质量浓度为１０ｇ／Ｌ的Ｌ－谷氨酸钠（Ｌ－ＭＳＧ）的ＴＹＧ液体培养基中，１８０株乳酸菌中有２０株菌可生成γ－氨基丁酸；通过高效液相色谱法定量分析，获得９株生成量较高的菌株，分别为Ｌ．ｌａｃｔｉｃｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓＷＨ１１－１（２．４７７ｇ／Ｌ）、Ｍ１０－４－３（１．４０５ｇ／Ｌ）、Ｌ．ｒａｆｆｉｎｏｌａｃｔｉｓＷＺ２０－２（１．１３２ｇ／Ｌ）、Ｌ．ｌａｃｔｉｃｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓＭ１１－３（１．１１５ｇ／Ｌ）、Ｌ．ｌａｃｔｉｃｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓＷＺ１－２（１．００６ｇ／Ｌ），Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍＳ１－１（０．５８１ｇ／Ｌ）、Ｌ．ｐｌａｎ－ｔａｒｕｍＭ５－１－１（０．３１０ｇ／Ｌ）、Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍＭ１１－２－１（０．２２５ｇ／Ｌ）和Ｌ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓＭ１１－１（０．０．２１１ｇ／Ｌ）。
该项研究为富含γ－氨基丁酸功能性乳制品的开发奠定了基础。
关键词：乳酸菌；γ－氨基丁酸；薄层层析；高效液相色谱法中图分类号：Ｑ９３－３３１文献标识码：Ａ文章编号：１００１－２２３０（２００８）０５－０００４－０４Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆγ－ａｍｉｎｏｂｕｔｙｒｉｃａｃｉｄｙｉｅｌｄｉｎｇｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｉｎｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｄａｉｒｙｐｒｏｄｕｃｔｓＪＩＬｉｎ－ｌｉ，ＦＡＮＧＦａｎｇ，ＷＥＩＸｉａｏ－ｙｅ，ＺＨＡＮＧＹａｎ－ｂｉｎ，ＭＥＮＧＨＥＢＩＬＩＧＥ（ＫｅｙＬａｂｏｆＤａｉｒｙＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉ－ｎｅｅｒｉｎｇ，ＩｎｎｅｒＭｏｎｇｏｌｉａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｕｈｈｏｔ０１００１８，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔｓ：ＴｈｅａｂｉｌｉｔｙｏｆＬａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｆｅｒｍｅｎｔｅｄｄａｉｒｙｐｒｏｄｕｃｔｓｆｏｒγ－ＡｍｉｎｏＢｕｔｙｒｉｃＡｃｉｄ（ＧＡＢＡ）ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｕｓｉｎｇＴｈｉｎＬａｙｅｒＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＴＬＣ）ａｎｄＨｉｇｈＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆＴＬＣｓｈｏｗｓｔｈａｔ２０ｓｔｒａｉｎｓｏｆＬＡＢｃａｎｓｙｎｔｈｅｓｉｓｅｄＧＡＢＡ．ＴｈｒｏｕｇｈｔｈｅＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄ，９ｓｔｒａｉｎｓｏｆＬＡＢｃａｎｐｒｏｄｕｃｅｄｍｏｒｅＧＡＢＡ．ＴｈｅｙａｒｅＬ．ｌａｃｔｉｃｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓＷＨ１１－１（２．４７７ｇ／Ｌ），Ｍ１０－４－３（１．４０５ｇ／Ｌ），Ｌ．．ｒａｆｆｉｎｏｌａｃｔｉｓＷＺ２０－２（１．１３２ｇ／Ｌ），Ｌ．ｌａｃｔｉｃｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓＷＺ１－２（１．１１５ｇ／Ｌ），Ｌ．ｌａｃｔｉｃｓｕｂｓｐ．ｌａｃｔｉｓＭ１１－３（１．００６ｇ／Ｌ），Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍＳ１－１（０．５８１ｇ／Ｌ），Ｌ．．ｐｌａｎｔａｒｕｍＭ５－１－１（０．３１０ｇ／Ｌ），Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍＭ１１－２－１（０．２２５ｇ／Ｌ）ａｎｄＬ．ｓａｌｉｖａｒｉｕｓＭ１１－１（０．０．２１１ｇ／Ｌ）．ＦｏｒｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｄａｉｒｙｐｒｏｄｕｃｔｓｒｉｃｈｉｎＧＡＢＡ，ｔｈｉｓｗｏｒｋｍａｙｅｓｔａｂｌｉｓｈｆｏｕｎｄａｔｉｏｎｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａ；γ－ＡｍｉｎｏＢｕｔｙｒｉｃＡｃｉｄ；ｔｈｉｎｌａｙｅｒｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ０引言乳酸菌广泛分布于自然环境和各种发酵食品中，尤其是在传统发酵乳制品中呈优势菌群影响着其风味和制品的功能性。
产_氨基丁酸乳酸菌的筛选及初步鉴定_李海星
天然产物研究与开发Nat Prod Res D ev 2007,19:455-457,510文章编号:1001-6880(2007)03-0455-04收稿日期:2006-06-20 接受日期:2006-12-15基金项目:江西省教育厅项目(赣教技字[2006]106号)*通讯作者Te:l 86-791-8327754;E-m ai:l yyss ccc @hot m ai .l co m产C - 氨基丁酸乳酸菌的筛选及初步鉴定李海星1,江英英1,曹郁生1,2*1南昌大学中德联合研究院;2食品科学教育部重点实验室,南昌330047摘 要:C -氨基丁酸是哺乳动物体内的一种抑制性神经递质,具有许多重要的生理功能。
利用M RS 培养基从自然生境中分离了1000余株细菌,经纸层析和HPLC 检测,发现其中一株能转化谷氨酸钠生成GABA,产量为4184g /L ;转化产物通过HPLC -M S 得到了证实。
通过形态特征和生化特性鉴定,初步判断该菌为乳酸菌。
关键词:C -氨基丁酸;谷氨酸脱羧酶;乳酸菌;筛选;鉴定中图分类号:Q 939.97文献标识码:AScreeni ng of GABA -produci ng Lactic A ci d Bacteri aand Its Preli m i nary IdentificationLI H a-i x i n g 1,JI ANG Y ing -y i n g 1,CAO Yu -sheng1,2*1J iangx i -OA I Jo int Research Instit ute ;2The K ey Laboratory of Food Science of M OE,N anc hang Universit y,N anchang 330047,Ch i naAbstract :C -Am i nobut y ric ac i d (GABA )is a m a j or i nhi b itory neuro trans m itter i n m a mma ls and has m any physi o log i ca l functi ons .A bou t 1000cultures w ere iso lated and pur ified fro m nat u ra l env iron m ents w ith MR S m edia .Am ong t he m,one stra i n can conv ert g l uta m a te i nto GA BA by screen i ng o f paper ch ro m a t og raphy and HPLC .The product was ver ifi ed by HPLC -M S .T he GABA y i e l d o f the stra i n w as 4.84g /L .T he stra i n w as pre li m i nar illy identifi ed as lactic ac i d bacter i a by m orpho logy and so m e bioche m ica l character istics .K ey word s :C -am inobuty ric acid ;g l uta m ate decarboxy lase ;l actic ac i d bacter i a ;sc reeni ng ;identifi cation谷氨酸脱羧酶(G l u ta m ate decar boxylase ,GAD,EC4.1.1.15)是一种吡哆醛类裂解酶,能专一地催化L-谷氨酸生成C -氨基丁酸(C -Am i n obutyric acid ,GAB A ),同时放出CO 2。
高产γ-氨基丁酸富锌乳酸菌的分离鉴定和发酵调控的初步研究的开题报告
高产γ-氨基丁酸富锌乳酸菌的分离鉴定和发酵调控的初步
研究的开题报告
一、研究背景
乳酸菌是产生优质发酵食品的重要微生物资源。
γ-氨基丁酸（GABA）是一种重要的生物活性成分，具有降血压、舒张血管、抗过敏、抗疲劳等生理功能。
锌是人体必需的微量元素，具有重要的调节作用。
因此，高产GABA富锌乳酸菌具有广泛的应用前景。
二、研究目的
本研究旨在从自然环境中分离高产GABA富锌乳酸菌，并对其进行初步的鉴定和发酵调控研究，为进一步开发GABA富锌乳酸菌及其产物提供基础数据和理论支持。
三、研究内容及方法
1. 分离高产GABA富锌乳酸菌。
从自然环境中采集橙色水果和蔬菜表面等样品，筛选含有乳酸菌的样品并进行分离纯化，筛选出高产GABA富锌乳酸菌。
2. 鉴定分离的菌种。
采用形态学、生理生化二级鉴定以及16S rDNA分子生物学方法鉴定分离的菌种。
3. 优化发酵条件。
通过单因素试验和正交试验优化分离到的GABA富锌乳酸菌的发酵条件，包括培养基组成、菌种接种量、发酵时间和发酵温度等参数的优化。
四、研究意义
本研究将分离出高产GABA富锌乳酸菌，并对其进行鉴定和发酵调控，为进一步开发GABA富锌乳酸菌的产物提供基础数据和理论支持。
同时，本研究可以丰富乳酸菌资源，提高发酵食品的品质和功能。
产γ-氨基丁酸乳酸菌的分离筛选
பைடு நூலகம்
Ｉ ｏ ａ ｏ ｎ ｃ ｅ ｎ ｎ ｆ Ｌａ ｔｃ ｉ ｃ ｅ ｉ ｏ ｏ ｕ ｉ ｇＹ－ ｓ ｌ ｔ ｎ ａ ｄ Ｓ ｒ ｅ ｉ ｇ ｏ ｃ ｄ Ｂａ ｔ ｒａ ｆ ｒＰｒ ｄ ｃｎ Ａｍ ｉ ｏ ｉ ｉ Ａｃ ｎ
Ａｂｔａ ｔ Ｌ ｃｉ ａｉ ｂ ｃ ｒ ｒ —ｍｉｏｂ ｔ ｉ ａ ｉ Ｇ Ｂ ｒｄ ｃｏ ｅｅｉ ｌ ｅ ｎ ｒｅ ｅ ｏ ｓｉ ｓ ｃ： ａｔ ｃ ａｔ ａｆ ｙ ａ ｎ ｕ ｒ ｃ （ Ａ Ａ１ ｏ ｕｔ ｎｗ ｒ ｓ ａ ｄａ ｄｓ ｅｎｄｆ ｍ ｏ ． ｒ ｃ ｄ ｅ ｏ ｉ ｙｃ ｄ ｐ ｉ ｏ ｔ ｃ ｒ ｌ
丫 一氨基 丁酸 （ 一 ｍｉ ｕｙｉ ａｉ， Ｇ Ａ）是 １Ａ ｎ ｂ ｔｒ ｃ ， ｏ ｃ ｄ ＡＢ
培养基 ，用于培养和保 藏乳酸菌 ；ＭＲＳ液体培养基 ， 用于种子发酵培养 ；Ｔ Ｇ液体 培养基 ， 于深层 发酵 Ｙ 用
培养。
由谷氨酸脱羧 生成的一种氨 基酸 。它 具有降血压 、调
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《 代 食 品科 技 》 现
Ｍ ｏ ｅｎＦ ｏ ｃｅｃ ｎ ｅ ｈ ｏｏ ｙ ｄ ｒ ｏ ｄＳ ｉｎ ｅ ｄＴ ｃ ｎ ｌｇ ａ
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文章篇号 ：０ ７２６ （０ ６０—０ ９０ １０ －７４ ２０ ）３０ ５— １ ８
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Ｋｅ ｗｏ ｄ ： ａ ｎ ｕ ｒ ｃｄ Ｌ ｃｉ ａ ｉ ａｔｒ ；ｓ ｌｔ ｎ Ｓ ｒ ｅ ｉｇ Ｉ ｅ ｔ ｃ ｔ ｎ ｙ ｒ ｓ ｙ—ｍｉｏｂ ｔ ｉ ａ ｉ； ａ ｔ ｃｄｂ ｃｅ ａ Ｉｏａｉ ； ｃｅ ｎｎ ；ｄ ｎｉ ａｉ ｙ ｃ ｃ ｉ ｏ ｉ ｆ ｏ
产_氨基丁酸的乳酸菌株筛选及诱变_夏江
文章编号:1000-8551(2006)05-379-04产γ-氨基丁酸的乳酸菌株筛选及诱变夏 江1 梅乐和1 黄 俊1 盛 清2 许 静3 吴 晖3(1.浙江大学化学工程与生物工程学系,浙江杭州,310027;2.浙江理工大学生命科学学院,浙江杭州,310018;3.中美华东制药有限公司,浙江杭州310011)摘 要:γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid ,GABA )是中枢神经系统一种重要的抑制性神经递质。
本研究从鲜奶中分离得到1株高产GAB A 的乳酸菌株hjxj -01,经初步鉴定为短乳杆菌。
实验结果表明,在含5%的L -谷氨酸钠的GYP 培养基中,此乳酸菌产GAB A 最大积累浓度为7g L 。
在此基础上,又先后使用了紫外线和γ射线对出发菌株进行了诱变处理。
以正突变率为标准确定诱变条件。
30W 的紫外灯下,距离45cm 照射及照射时间50s 为紫外线诱变的较佳条件;60Co 射线诱变的适宜剂量为300Gy 。
诱变后得到1株突变菌株hjxj -08119,经连续传代12次,遗传性状稳定,平均GAB A 产量达到17g L ,较出发菌株hjxj -01提高142.9%。
关键词:γ-氨基丁酸;诱变;60Coγ射线;紫外线照射SCREENING AND M UTAG ENESIS OF Lactobacillus brevis FORBIOSYNTHESIS OF γ-AMINOBUTYRIC ACIDXIA Jiang 1 MEI Le -He 1 HUANG Jun 1 SHENG Qing 2 XU Jing 3 W U Hui3(1.De partment of Chemical and Bioc he mical Enginee ring ,Zhejiang Univ ersity ,Hangzhou ,Zhejiang 310027;2.Coll ege of Life Science ,Zhe jiang Sci &Tec h Unive rsit y ,Hangzhou ,Zhejiang 310018;3.East -China Pharmac eutical Company ,Hangzhou ,Zhejiang 310011)A bstract :γ-a minobutyric acid (GAB A )is a major inhibitor y neurotransmitter in the central ner vous system .In this study ,a GABA -producing strain ,hjxj -01,was isolated from the milk sa mples and identified as Lactobacillus brevis .In the GYP medium containing sodium glutamate ,the highest GABA concentration accumulated by Lactobacillus brevis hjxj -01is 7g L .The strain was treated with UV and 60Co γ-rays .Based on high positive mutation rate ,the final mutagenesis conditions were UV light 30W ,irradiation distance 45cm ,irradiation time 50s ,and 60Co γ-rays irradiation of 500Gy .The mutant strain ,hjxj -08119,was bred by GAB A resistance selection .Cultured for 12generations continually ,the GAB A -producing capacity of hjxj -08119maintained stably .The fermentation results indicate that compared with the origin strain hjxj -01,the average yield of GABA by hjij -08119is 17g L ,which is 142.9%of the origin strain .Key words :γ-aminobutyric acid ;mutagenesis ;60Co γ-irradiation ;UV irradiation 收稿日期:2005-12-19基金项目:国家自然科学基金(30570411)、浙江省科技攻关项目、教育部和浙江省回国人员基金资助项目作者简介:夏江(1980-),男,浙江金华人,硕士,从事生物化工方面研究,Email :wos hixiajiang974@ 。
产_氨基丁酸乳酸菌的分离鉴定及发酵条件优化_王兴洁
MＲS 平板， 37 ℃ 培养 48 h。挑选溶钙圈明显的菌落， 多次划 线纯化， 对其进行接触酶试验与革兰氏染色， 将接触酶阴性 且革兰氏阳性的菌株接种于斜面培养后于 4 ℃ 冰箱中保存。 1． 2． 2 高产 GABA 乳酸菌的筛选 于斜面上挑取 2 环菌体 37 ℃ 培养 24 h 进行活化［13］ 。 于 5 mL 液体 MＲS 培养基中， 再按 2 mL /100 mL 接种于 100 mL MＲS 培养基（ Glu 浓度为 10 g / L） ， 30 ℃ 发酵 3 d； 以添加等量无菌生理盐水为空白对 12 000 r / min 离心15 min， 照。取 2． 0 mL 发酵液煮沸 5 min， 取上清液用甲醇定容至 2． 0 mL， 经纸层析定性与高效液相色 谱（ HPLC） 定量测定后选择高产 GABA 的菌株。 1． 2． 3 GABA 定性分析 展开剂组成： 冰醋酸 水 正丁 醇体积比为 1 2 2 ， 并添加 0． 4 g /100 mL 茚三酮。层析纸 经点样后在展开剂中层析 1 h， 层析完成后将层析纸置于 90 ℃ 显色 10 min。以 GABA 和 Glu 标准品以及无菌 MＲS 培养 基作对照， 根据标准品 Ｒf 值来进行定性判断 1． 2． 4 GABA 定量分析
第 32 卷第 7 期 2016 年7 月
DOI： 10． 13652 / j． issn． 1003 － 5788． 2016． 07． 010
Vol ． 32 ， No ． 7 Jul ． 2 0 1 6
产 γ- 氨基丁酸乳酸菌的分离鉴定及发酵条件优化
Isolation and identification of lactic acid bacteria producing γ aminobutyric acid and optimization of fermentation conditions 王兴洁
产氨基丁酸乳酸菌分离与发酵条件优化及饮料开发
4、初始糖浓度
随着初始糖浓度的增加，乳酸菌生长速度和产酸能力均有所提高。但当初始 糖浓度超过10%后，乳酸菌生长速度和产酸能力开始下降，饮料口感也变差。因 此，优化后的初始糖浓度为10%。
讨论
通过单因素实验结果的分析，发现发酵时间、温度、接种量、初始糖浓度等 因素对南酸枣乳酸菌饮料发酵的影响具有显著性差异。在优化的发酵条件下，乳 酸菌生长速度和产酸能力均得到显著提高，饮料口感也更加酸甜可口。
接下来，将菌悬液涂布在含有特定培养基的平板上，培养一段时间，让乳酸 菌在培养基上生长。常用的培养基包括罗伊氏乳杆菌培养基、MRS培养基等。
最后，从平板上挑选具有产氨基丁酸特性的菌落，进行分离和纯化。这个过 程中可以采用显微镜观察、生化反应等手段辅助鉴定和筛选。
2、发酵条件优化
优化发酵条件可以提高产氨基丁酸乳酸菌的发酵效率和产品质量。影响发酵 效果的因素包括培养时间、温度、初始pH值等。为了确定这些因素的最优组合， 可以采用以下方法进行实验：
产氨基丁酸乳酸菌分离与发酵 条件优化及饮料开发
01 引言
03 结论
目录
02 主体部分 04 参考内容
引言
随着人们健康意识的提高，功能性食品已成为市场上的热门需求。其中，富 含氨基丁酸（GABA）的乳酸菌饮料因其具有改善睡眠、调节血压等多种保健功能 而受到广泛。为了提高产氨基丁酸乳酸菌的发酵效率和产品质量，本次演示将探 讨其分离与发酵条件优化及饮料开发的相关问题。
结论
通过对南酸枣乳酸菌饮料发酵条件的优化研究，得到了以下结论：发酵时间 为10小时，温度为35℃，接种量为10%，初始糖浓度为10%时，南酸枣乳酸菌饮料 的品质和产量达到最佳水平。优化后的发酵条件在实际生产中具有重要的应用前 景，可以为南酸枣乳酸菌饮料的品质和产量提供有力保障。
产γ-氨基丁酸乳酸菌的分离鉴定及发酵条件优化
产γ-氨基丁酸乳酸菌的分离鉴定及发酵条件优化王兴洁;魏超;廖光敏;雷承延;李霜;胡露;刘书亮【期刊名称】《食品与机械》【年(卷),期】2016(032)007【摘要】从四川泡菜水中分离筛选出一株产γ-氨基丁酸(GABA)能力较强的乳酸菌W1-9,根据菌落和个体形态、生理生化指标及16S rDNA序列的系统鉴定,菌株W1-9为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum).菌株W1-9在含10 g/L谷氨酸(Glu)的MRS培养基中培养3d,可产生2.18 g/L GABA.通过对菌株发酵培养基及发酵条件优化,结果表明:以黄瓜汁为发酵培养基,初始pH 5.5,底物谷氨酸钠(MSG)添加量12 g/L,菌液接种量1.2％,在该条件下GABA产量达到7.62 g/L.【总页数】5页(P40-44)【作者】王兴洁;魏超;廖光敏;雷承延;李霜;胡露;刘书亮【作者单位】四川农业大学食品学院,四川雅安625014;四川农业大学食品学院,四川雅安625014;四川农业大学食品学院,四川雅安625014;四川农业大学食品学院,四川雅安625014;四川农业大学食品学院,四川雅安625014;四川农业大学食品学院,四川雅安625014;四川农业大学食品学院,四川雅安625014;四川农业大学食品加工与安全研究所,四川雅安625014【正文语种】中文【相关文献】1.海洋酵母菌Rhodotorula benthica OY92产γ-氨基丁酸发酵条件优化 [J], 刘姝;房耀维;吕明生;焦豫良;闫晨;高家盼;高于卜;王淑军ctococcus raffinolactis Y-12产γ-氨基丁酸发酵条件优化 [J], 黄德娜;李锋;曾承露3.一株产γ-氨基丁酸屎肠球菌的筛选和发酵条件优化及其益生特性分析 [J], 孙擎;曾林;谭霄;张恕铭;孙向阳;汪杰;胡琼;张庆4.糟鱼中乳酸菌的分离鉴定及鳓鱼发酵条件优化 [J], 贺林娟;汤海青;曹锦轩;谢诚;黄玲;廖媛媛;欧昌荣5.生产γ-氨基丁酸乳酸菌的选育及发酵条件优化 [J], 刘清;姚惠源;张晖因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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2009年第34卷第1期FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 食品科技γ-氨基丁酸(γ-amino butyric acid,GABA)是一种非蛋白质氨基酸，在1975年的第2届国际专题讨论会上GABA 被正式确认为哺乳动物中枢的一种抑制性递质[1]。
大量研究表明：GABA 具有降血压、增强记忆力、活化肾功能、改善肝功能、防治肥胖、营养神经细胞等作用[2]。
由于GABA 有着上述许多重要的生理功能，目前已经广泛应用于医药与食品领域。
在食品领域，GABA 的应用主要体现在植物富集和微生物发酵两个方面。
植物富集最具代表的是富含GABA 茶以及发芽糙米的开发，1986年日本成功地开发出富含GABA 的Gabaron Tea 茶，这种富含GABA 的茶已在市场上作为降血压功能食品销售[3]；而发芽糙米除了直接食用外，还可作为保健食品的配料添加到饮料、糕点、调味料等食品中。
微生物发酵富集GABA 主要是利用乳酸菌中的谷氨酸脱羧酶的活性将谷氨酸转化成GABA 。
利用乳酸菌发酵的食品范围广泛，如牛奶、大豆、米胚以及小管立军，李艳芳，程永强，鲁战会，李里特*(中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京100083)摘要：为得到高产GABA 的菌株，通过乳酸菌的初步筛选，及含1%谷氨酸的GYP 发酵液中GABA 含量的薄层层析与高效液相色谱分析复筛得到8株高产GABA 的菌株，产量在4.19～5.01mg/mL 之间，其中产量最高的为34#菌株。
经鉴定2#、9#、11#和34#菌株为植物乳杆菌，13#和15#菌株为弯曲乳杆菌，4#菌株为戊糖乳杆菌，8#菌株为短乳杆菌。
关键词：乳酸菌；γ-氨基丁酸；谷氨酸脱羧酶；发酵食品中图分类号：TS 252.1文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2009)01-0002-04产γ-氨基丁酸乳酸菌的筛选及分离鉴定Identification and screening of γ-amino butyricacid-producing lactic acid bacteriaGUAN Li-jun,LI Yan-fang,CHENG Yong-qiang,LU Zhan-hui,LI Li-te *(College of Food Science and Nutritional Engineering,China Agricultural University,Beijing 100083)Abstract:In order to get strains with high yield of GABA,we screened lactic acid bacteria firstly,and then measured the content of GABA in the GYP fermentation broth with 1%glutamic by thin layer chromatography and high performance liquid.8strains with high yield of GABA were screened,which was among 4.19mg/mL to 5.01mg/mL.The 34#strain had the highest yield.Finally the 8strains were identified as Lactobacillus plantarum,Lactobacillus curvatus,Lactobacillus pentosus and Lactobacillus brevis.Key words:lactic acid bacteria;γ-amino butyric acid (GABA);glutamate decarboxylase;fermented food收稿日期：2008-07-30*通讯作者基金项目：国家“十一五”科技支撑计划项目(2006BAD278809)。
作者简介：管立军(1983—)，男(回族)，硕士研究生，研究方向为微生物与大豆蛋白。
生物工程2009年第34卷第1期FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 食品科技麦胚芽都可以被乳酸菌发酵富集GABA ，在提高食品的营养价值的同时也提高了农副产品的附加值。
所以筛选高产γ-氨基丁酸的乳酸菌株，来开发出不同风味的富含GABA 的乳酸菌制品是国内外众多学者研究的热点。
我国在这方面的研究起步较晚，2002年江南大学许建军等[4]开始进行L-谷氨酸转化GABA 的菌种筛选工作，L-谷氨酸的转化率在16%。
2004年江南大学刘清等[5]率先通过实验筛选得到高产GABA 的乳酸菌SYFS-1008、SYFS-1009，在发酵条件优化实验之前，发酵液中GABA 的含量提高为55mg/100mL 。
2007年湖南农业大学的王婧等[6]得到产γ-氨基丁酸的优势乳酸菌B2，产量为1.18mg/mL 。
同年南昌大学的李海星等[7]筛得一株乳酸菌，在没有优化发酵条件的情况下，该菌的GABA 产量已达4.84g/L 。
本研究利用薄层层析进行初筛，高效液相色谱进行复筛，从泡菜、黄浆水以及发酵米粉中分离到8株产量在4.0mg/mL 以上的高产GABA 的细菌，其中产量最高的34#菌株产量为5.01mg/mL 。
鉴定结果表明：2#、9#、11#和34#菌株为植物乳杆菌；13#和15#菌株为弯曲乳杆菌；4#菌株为戊糖乳杆菌；8#菌株为短乳杆菌。
1材料与方法1.1实验材料与仪器1.1.1菌株来源以市售泡菜、自然发酵的黄浆水以及发酵米粉作为筛选菌株的来源。
1.1.2培养基MRS 选择培养基：蛋白胨10g 、牛肉提取物10g 、酵母提取物5g 、葡萄糖20g 、无水乙酸钠5g 、土温-801mL 、柠檬酸二胺2g 、磷酸氢二钾2g 、硫酸镁0.58g 、硫酸锰0.25g(固体培养基中加约15g 琼脂、3%碳酸钙)、蒸馏水1000mL ，pH6.6～6.8。
GYP 种子培养基[8]：葡萄糖10g 、酵母10g 、蛋白胨5g 、无水乙酸钠2g 、硫酸镁0.02g 、硫酸锰0.001g 、硫酸亚铁0.001g 、氯化钠0.001g 、蒸馏水1000mL ，pH6.8。
GYP 发酵培养基：向GYP 种子培养基中添加1%的谷氨酸。
1.1.3试剂GABA 标品、谷氨酸、OPA ：Sigma 公司；乙腈：色谱纯，DIMA 公司；细菌生化鉴定试剂：北京路桥技术有限责任公司；API 试剂：法国梅里埃公司；其他试剂：分析纯。
1.1.4仪器高效液相色谱：岛津公司；生物显微镜：OLYMPAS ；生化培养箱：东京理科；高压灭菌锅：上海博迅公司；硅胶板：德国Merk 公司。
1.2方法1.2.1乳酸菌的筛选取泡菜汤、发酵黄浆水与发酵米粉各5mL 接种于50mL MRS 培养基中在37℃下培养48h 。
将发酵液进行梯度稀释，然后平板涂布，于37℃培养48h 。
挑取产生溶钙圈的菌落进行革兰染色与接触酶实验，将革兰阳性接触酶阴性的菌株纯化后划线于MRS 固体斜面培养基上，4℃保存。
1.2.2产GABA 乳酸菌的筛选将保存在4℃冰箱的菌株接种于液体MRS 在37℃培养箱中活化24h ，以2%的接种量接种于GPY 发酵培养基中于30℃发酵3d 。
将5mL 发酵液于沸水域中煮沸5min 后，加入3倍体积无水乙醇于4℃冰箱沉淀蛋白(24h)，然后旋转蒸发除去乙醇，再定容至5mL ，经薄层层析与高效液相色谱分析选择可以转化谷氨酸为GABA 的菌株。
1.2.3GABA 的定性分析展开剂配制：正丁醇∶冰醋酸∶水=3∶2∶1，在其中加入0.4%的茚三酮。
以Glu 、GABA ，以及培养基作参比，将发酵液进行薄层层析，展开后于90℃显色10min 。
1.2.4GABA 的定量分析溶液的配制：(1)衍生试剂：将OPA 10mg 、β巯基乙醇20μL 溶于2.5mL 乙腈中。
(2)硼酸缓冲液：取硼酸2.47g 溶于100mL 蒸馏水中，用40%的氢氧化钠调pH 为10.4。
(3)乙酸钠缓冲液：取无水乙酸钠1.64g 溶于1000mL 二蒸水，加入三乙胺200μL ，用冰醋酸调pH 为7.3。
样品的衍生：吸取硼酸缓冲溶液400μL 、OPA80μL 、待测样品80μL ，混合均匀后室温反应5min ，取20μL 进样。
色谱条件：色谱柱4.6mm ×250mm ；流动相：流动相A 为乙酸钠缓冲溶液，流动相B 为乙腈；流动相A ∶流动相B=80∶20等度洗脱，流速0.8mL/min ，柱温40℃，检测波长238nm ，保留时间约为6.63min 。
标准曲线的绘制：将GABA 标品配制成0.1、0.25、0.5、0.75、1.0g/L 的梯度浓度，按照以上的衍生方法与色谱条件进行测定，然后按照浓度与峰面积的关系绘制标准曲线。
1.2.5菌株的表型性状鉴定形态观察：将分离后保存的菌种划线于MRS 固体培养基上，观察菌生物工程2009年第34卷第1期FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY食品科技2#4#8#9#11#13#15#34#图4各菌株的菌体形态落形态及大小、颜色以及菌落边缘以及隆起状况，在显微镜下观察革兰染色后的菌体形态特征。
生理特征：用划线法将菌株接种于MRS 固体培养基上，培养48h ，考察菌株的乳酸旋光性、生长温度(4、10、15、45℃)、耐酸碱性(37℃条件下pH4.5及pH9.6)以及耐盐性(37℃条件下NaCl6.5%及18%)。
生化特征：采用细菌微量生化鉴定试管对菌株分别进行接触酶实验、淀粉水解实验、吲哚实验、紫牛乳实验、葡萄糖产气实验、产硫化氢实验、硝酸盐还原实验、精氨酸产氨实验、明胶液化实验以及碳水化合物发酵实验(7叶苷等18种)。
1.2.6菌株的API 试剂鉴定挑取一定量的经过活化的幼龄乳酸菌菌株，接种至API 50CHL 液体培养基中，摇匀，接入API 50CH 菌种鉴定试剂条中，用无菌液体石蜡封口，30℃条件下培养记录试剂条在24、48h 的颜色变化，并经API LABPlus V5.0软件鉴定。
2结果与分析2.1高产GABA 乳酸菌的筛选结果2.1.1定性筛选结果从泡菜汤、发酵黄浆水与发酵米粉中共分离得到50株乳酸菌，将此50株菌株接种于GPY 发酵培养基，30℃培养3d 后按1.2.2方法处理发酵液，然后进行薄层层析，通过比较Glu 、GABA ，以及培养基中成分的Rf 值，选出可以将发酵液中的Glu 转化成GABA 的菌株共10株，见图1。
由图1可以看到，3#、6#、5#(由于菌株较多未一一列出)菌株几乎不能把培养基中的Glu 转化成GABA ，而4#、34#菌株转化GABA 的能力很强。