钩端螺旋体毒力因子研究进展
钩端螺旋体毒力因子研究进展
黑
龙
江
医
学
Ｖｏ ． ４． ． １ ３ Ｎｏ ６
ＨＥ ＯＮＧ ＪＡＮＧ ＤＩ ＡＬ Ｊ ＩＬ Ｉ ＭＥ Ｃ ＯＵＲＮ ＡＬ
Ｊｎ ２ １ ｕ ．０ ０
４ ２７
・
综
述 ・
钩 端 螺 旋 体 毒 力 因 子 研 究 进 展
曾维诚 综述 ， 张 英 审校
得 与钩 体 致 病 有 关 的 毒 力 因子 ， ： 多 糖 、 血 如 脂 溶
ｓｈ ｐ Ａ为代 表 。溶 血 素基 因 ｓｈ 编码 的蛋 白与绵羊 ｐＨ 红 细胞在 ３ ℃ 混合 作 用２ ｉ后 ， ７ ０ｒ ｎ 在透 射 电镜 下观 ａ 察 到红 细胞膜 上 有 小 孑 ， Ｌ 电子 云 密 度 降 低 ， 细胞 内 容物 渗漏 ， 胞 形 态 改 变 ， 阴性 对 照组 则 没 有 这 细 而
血 ， 以肺 出血 更 为严 重 ， 而 提 示 钩 体 病 的肺 弥 尤 从 漫性 出血可 能 与 Ｌ Ｓ有关 。钩体 Ｌ Ｓ能 促 进 中性 Ｐ Ｐ
粒细胞 与 内皮细 胞和 血小 板 的黏 附 ， 成 血 小板 聚 造
的培 养基 中生长 ， 些 物质 必 须要 靠 外界 供 给 。溶 这 血素 破坏红 细 胞 膜 使 其 裂 解 释 放 出游 离 脂 肪 酸 和 金属 离子 ， 其 自身生 长需 要 。同 时 ， 血 素 可 能 供 溶 还有 助于 钩体在 宿 主体 内的存 活 。 晚近 ， 过对 问号 钩 体黄 疸 出 血型 赖株 基 因组 通 Ｃｓ Ｄ 的分析 ， 已发 现 １ １个可 疑 的溶 血 素基 因 ， 分 均
的表 达较 慢 性 感 染 的 动 物 体 内 和 培 养 基 中 的 少 。
重组钩端螺旋体基因疫苗与不同毒力钩体交叉免疫研究
重组钩端螺旋体基因疫苗与不同毒力钩体交叉免疫研究江南;吴佳玉;陈道邦;戴保民【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2002(018)001【摘要】目的欲了解赖型钩端螺旋体(简称钩体)基因多肽疫苗与我国主要7群不同毒力致病钩体间的交叉免疫情况.方法常规制备不同毒力钩体超声变性抗原及钩体基因疫苗兔抗血清和全钩死疫苗(WCV)兔抗血清.以WCV抗血清与各株钩体反应为阳性对照,以非致病钩体、PT7-7(多肽疫苗保护性抗原基因DNA片段质粒载体)与WCV抗血清反应为阴性对照,进行EIA测定.结果 (1)多肽基因疫苗抗血清与强毒力钩体(黄疸出血型、秋季热型、澳洲型、巴叶赞型)具良好的免疫交叉反应(效价为1/524288～1/12800;WCV抗血清效价为1/ 262144～1/ 6400).(2)多肽基因疫苗抗血清与弱毒力钩体(犬型、流感伤寒型、七日热型、波摩拿型)也具良好的免疫交叉反应(效价为1/25600～1/12800;WCV抗血清效价为1/25600～1/ 6400).(3)多肽基因疫苗抗血清与非致病钩体 (Pa toc I)、PT7-7质粒载体阴性对照无明显免疫交叉反应(效价分别为1/1600,1/256;WCV抗血清效价分别为1/3200,1/ 512). 结论赖型钩体基因重组疫苗抗血清与不同毒力致病钩体具良好的免疫交叉反应.提示:该基因重组多肽疫苗有可能对我国主要流行之7群钩体感染具完全交叉保护,从而弥补了全钩死疫苗仅对部分钩体有交叉保护之不足.【总页数】2页(P68-69)【作者】江南;吴佳玉;陈道邦;戴保民【作者单位】四川省人民医院感染科,成都,610072;四川省人民医院感染科,成都,610072;华西医科大学;华西医科大学【正文语种】中文【中图分类】R392【相关文献】1.赖型钩体毒力相关基因ompL17的重组表达以及体外不同温度下的表达研究 [J], 张会东;郝牧;鲍朗;黄毕;高蕾2.重组钩体基因疫苗免疫豚鼠脾细胞rn LTT，IL-2，IL-6的活性测定 [J], 江南;戴保民;李胜富3.重组外膜脂蛋白LipL32与致病性钩端螺旋体抗体的免疫反应性及与不同血清群交叉反应性的Western blotting评价 [J], 段鸿元;刘志国;邱少富;何斌;赵海;宋利华;朱虹;端青4.应用重组DNA探针检测不同毒力钩端螺旋体 [J], 江南;戴保民5.大肠杆菌-钩端螺旋体重组穿梭质粒pGKINVA的构建及重组钩体的筛选 [J], 朱庆平;鲍朗;张会东;赵明才因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
钩端螺旋体病的疫苗研究与开发
钩端螺旋体病的疫苗研究与开发我一直在关注钩端螺旋体病的研究与疫苗开发。
钩端螺旋体病是一种由钩端螺旋体引起的传染病，主要通过接触受污染的水源传播。
这种疾病在全球范围内都有发生，尤其是在亚洲、南美和非洲的一些地区。
钩端螺旋体病可引起严重的急性感染，如肾炎、脑膜炎和黄疸等，甚至可能导致死亡。
因此，钩端螺旋体病的疫苗研究与开发显得尤为重要。
我了解到，钩端螺旋体病的疫苗研究与开发已经取得了一些进展。
目前，已经有几种疫苗被开发出来并用于预防钩端螺旋体病。
这些疫苗主要分为两类：全菌疫苗和成分疫苗。
全菌疫苗是一种含有活或死钩端螺旋体的疫苗，可以刺激人体产生免疫反应，从而预防钩端螺旋体病。
成分疫苗则是通过提取钩端螺旋体的某些成分，如外膜蛋白、鞭毛蛋白等，制成疫苗。
成分疫苗的优点是可以减少疫苗中的有害成分，减少疫苗的副作用，但需要使用佐剂来增强免疫效果。
在疫苗的安全性和有效性得到确认后，研究人员需要进行疫苗的生产和大规模制造。
这一步骤需要高度自动化的生产线和严格的质量控制，以确保疫苗的质量和一致性。
在疫苗的生产过程中，研究人员还需要对疫苗进行稳定性测试，以确保疫苗在储存和运输过程中不会失去活性和效力。
疫苗需要进行临床试验，以确定疫苗在人体中的免疫效果和安全性。
临床试验分为多个阶段，从小规模的初步测试到大规模的人体试验，每个阶段都需要严格的科学设计和数据分析。
只有经过临床试验的验证，疫苗才能够被批准上市，并用于预防钩端螺旋体病。
钩端螺旋体病的疫苗研究与开发是一个复杂而严格的过程，需要多学科的合作和高度的科学技术支持。
尽管目前已经有几种疫苗被开发出来并用于预防钩端螺旋体病，但仍然需要进一步的研究和改进，以提高疫苗的免疫效果和安全性，为人类的健康事业做出更大的贡献。
在我作为一名研究者的职业生涯中，钩端螺旋体病的疫苗研究与开发一直是我关注的焦点。
这种由钩端螺旋体引起的传染病，对人类健康构成了严重威胁，尤其是在全球一些特定地区。
问号钩端螺旋体重要蛋白研究进展
ｓ ｏ ｍｅ ｍａ ｉ ｎ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ ｏ ｕ ｔ ｅ ｒ ｍｅ ｍｂ ｒ ａ ｎ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｓ （ ＯＭ Ｐｓ ）ｏ ｆ Ｌｅ ｐ ｔ ｏ ｓ ｐｉ ｒ ａ ａ ｎ ｄ ｓ ｕ ｍｍａ ｒ ｉ ｚ ｅ ｔ ｈ ｅ ｉ ｒ ｃ ｅ ｌ ｌ ｕ ｌ ａ ｒ ｌ ｏ ｃ ａ ｌ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ，ｇ ｅ ｎ ｅ ｔ ｉ ｃ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ —
问号钩端螺旋体重要蛋 白研究进展
曹志 强 ， 蒋秀 高， 张翠彩
摘 要 ： 钩 端 螺旋 体 （ 简 称 钩体 ） 外 膜 蛋 白（ ｏ ｕ ｔ ｅ ｒ ｍｅ ｍｂ ｒ ａ ｎ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｓ ， Ｏ ＭＰ ｓ ） 位于钩体 表面 ， 与宿主细胞 直接接触 ， 是 重 要
ｔ ｕ ｒ ｅ ｓ ，ｅ ｘ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ ｓ ｔ ａ ｔ ｕ ｓ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｒ ｏ ｌ ｅ ｓ ｉ ｎ ｉ ｍｍｕ ｎ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｕ ｓ ａ ｎ ｉ ｍａ ｌ ｓ ．
成 为 可 能 。本 文 主 要 对 钩 端 螺 旋 体 几 种 重 要 Ｏ ＭＰ ｓ的细 胞 定 位 、 基 因结构、 在感染 动物 中的表达状 态、 在 免 疫 保 护 中的 作 用
等进 行 综 述 。
关键词 ： 问号 钩 端 螺 旋体 属 ； 细 菌 外 膜 蛋 白类 ｝ 抗 原
中 图分 类 号 ： Ｒ ３ ７ ７ 文献 标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ２ —２ ６ ９ ４ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ２ —０ １ ８ ０ —０ ６
Ｒｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ｏ ｎ ｓ ｉ ｇ ｎｉ ｆ ｉ ｃ ａ ｎ ｔ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎｓ ｏ ｆ Ｌｅ ｐｔ ｏ ｓ ｐｉ ｒ ａ ｉ ｎｔ ｅ ｒ ｒ ｏ ｇａ ｎｓ
钩端螺旋体毒力因子研究进展
钩端螺旋体毒力因子研究进展【中图分类号】R377【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2016）-07-062-03钩端螺旋体病（leptospirosis，简称钩体病）是由致病性钩端螺旋体（简称钩体）引起的钩端螺旋体病（钩体病）是一种全球性自然疫源性疾病，广泛分布在世界各地。
我国是受钩体病危害十分严重的国家，目前已发现有18个血清群75个血清型，遍布31个省份，自1955年以来病例数超过250万人，平均病死率约为1%。
钩体病虽然已发现一百多年，但其致病机制至今尚未完全阐明。
一般认为，钩体对机体的粘附和侵袭、其自身的运动性和趋向性以及其代谢产物等因素都与致病性相关。
近年来，随着分子生物学手段、测序技术及生物信息学分析水平的提高，使得与钩体致病有关的毒力因子如脂多糖、溶血素、鞭毛蛋白、外膜蛋白等的研究取得了较大进展，本文就这些研究成果进行综述。
1．脂多糖（Lipopolysacchride，LPS）钩体LPS能诱发家兔出现施瓦茨曼氏（Shwartzman）反应，给小鼠注射LPS能引起广泛性内脏出血，尤以肺出血更为严重，从而提示钩体病的肺弥漫性出血可能与LPS有关。
钩体LPS能促进中性粒细胞与内皮细胞和血小板的黏附，造成血小板聚集，并引发血小板减少症。
Isogai[1]等报道LPS可诱导小鼠淋巴细胞发生凋亡，并认为与LPS引起TNF-α的大量产生有关。
近来，Nally[2]等发现在急性感染钩体的动物模型体内，钩体LPS O抗原的表达较慢性感染的动物体内和培养基中的少，由此可见，通过调节LPS O抗原的表达可以决定钩体感染后是引发急性感染亦或是慢性感染。
目前，我国和巴西的科学家已分别完成了问号钩体黄疸出血群赖型赖株和哥本哈根型的全基因组测序工作，并对这两型基因组进行了比较分析[3]。
对基因组的分析发现钩体LPS合成和装配相关基因共有23～31个。
钩体间基因的差异被认为是钩体对不同的动物宿主的适应性和钩体型特异性的原因。
钩端螺旋体病的研究进展与挑战
钩端螺旋体病的研究进展与挑战近年来，钩端螺旋体病（Leptospirosis）的研究取得了显著进展，但同时也面临着一些挑战。
本文将从研究进展和挑战两个方面进行阐述。
一、研究进展1. 病原学特征钩端螺旋体属于细菌门，螺旋体科，是一类具有螺旋形的革兰氏阴性细菌。
目前已知的钩端螺旋体血清群有25种，我国流行的主要有莱姆病钩端螺旋体、犬钩端螺旋体和日本钩端螺旋体等。
钩端螺旋体具有较强的侵袭力和繁殖能力，能在多种宿主细胞中生长繁殖。
2. 传播途径钩端螺旋体主要通过接触传播，即人类通过接触含有钩端螺旋体的疫水（如尿液、雨水、泥土等）而感染。
钩端螺旋体还可经咬伤、索引传播等途径感染。
3. 病理变化钩端螺旋体侵入人体后，可引起急性肾炎、肝功能异常、心肌炎等症状。
严重者可能导致肺出血、脑膜炎、弥漫性血管内凝血等并发症，危及生命。
4. 诊断与治疗近年来，钩端螺旋体的检测技术取得了较大进展。
目前常用的诊断方法有显微镜检查、血清学检测和分子生物学检测等。
钩端螺旋体的治疗药物也有所更新，如四环素类、第三代头孢菌素等。
二、挑战1. 病原体检测难度大钩端螺旋体在宿主体内繁殖速度快，但在体外培养条件下生长缓慢，导致检测难度较大。
钩端螺旋体的检测方法较为繁琐，检测时间较长，不利于早期诊断。
2. 疫苗研发进展缓慢虽然钩端螺旋体疫苗的研究取得了一定进展，但目前尚无预防钩端螺旋体病的成熟疫苗。
现有的疫苗主要用于动物防疫，对人用疫苗的研究仍处于探索阶段。
3. 流行因素复杂钩端螺旋体的流行受多种因素影响，如气候、生态环境、宿主种类等。
这使得钩端螺旋病的防控工作面临较大挑战。
4. 临床诊断与治疗困难钩端螺旋病的临床表现多样，易与其他疾病混淆。
加之部分患者就诊时已进入晚期，导致临床诊断和治疗难度较大。
5. 防治知识普及不足钩端螺旋病在我国部分地区仍有较高发病率，但公众对该病的认识不足，防治知识普及程度较低。
这不利于钩端螺旋病的防控工作。
钩端螺旋体病的研究进展与挑战并存。
不同毒力钩端螺旋体引起THP-1细胞中细胞因子表达的研究
Ｐ Ｒ检测细胞表 面 Ｔ ｌ样 受体 ２ Ｔ Ｒ２ 、 Ｌ 及诱 导 型一氧 化氮合 酶 （ Ｃ ｏｌ （ Ｌ ）Ｔ Ｒ４ ｉ ） 因表 达水平 。结果 显示 ， ＮＯＳ 基
Ｌｉ ａ 株和 ＩＡＶ株引起 ＴＨＰ１细胞 中 ＴＬ Ｐ 一 Ｒ４和 ｉ ＮＯＳ基 因表 达升 高 ， ａｏ Ｐ ｔｃ１株 引起 Ｔ － 胞 中 Ｔ Ｒ２ ＨＰ１细 Ｌ 、 ＴＬ Ｒ４和 ｉ Ｓ基因表达升高 。Ｌ ｉ 引起 的 Ｔ 一 ＮＯ ａ株 ＨＰ １细胞 中 Ｔ ＭＣ 一 ＮＦ Ｐ１表达水平低于 ＩＡＶ 株和 Ｐ ｔｃ Ｐ ａｏ １ 株（ Ｐ＜Ｏ ０ ） ａ 株 引起 较低 水平细胞因子表达可能有 利于其逃 避宿 主天然免疫 反应 ， 而进一 步在宿 主 ．５ 。Ｌ ｉ 从 体 内播散 、 繁殖 。
・
论 著 ・
不同毒力钩端螺旋体 引起 Ｔ 一 ＨＰ １细 胞 中 细 胞 因 子 表 达 的 研 究
张彦 ， 姜叙诚 郭晓奎 汤道 强。 ， ，
１ ．上海交通 大学 医学 院病 原 生 物学 教 研 室 ， 海 ２ ０ ２ ；２ 上 ０ ０ ５ ．上 海 交 通 大 学 医学 院病 理 学教 研 室 ， 上海 ２ ０ ２ ； ．上海 交通大学医学 院附属仁济 医院 ， ００ ５ ３ 上海 ２ ０ ２ ０１７
标本 ， 用实时聚合酶链反应 （ Ｃ 和 酶联免 疫 吸附试 验 （ Ｌ Ｓ 检测 肿瘤 坏死 因子 ａ Ｔ —） ７干 扰素 应 Ｐ Ｒ） Ｅ ＩＡ） （ ＮＦ ｄ 、 （Ｆ ７ 、 ＩＮ一） 白细胞介素 １ （Ｌ １ ） ２ Ｉ 一２ 和单 核 细胞趋 化 蛋 白 １ ＭＣ ） 基 因和 蛋 白水平 的表 达 ， （ Ｐ１在 同时应 用 实时
关键 词 ： 钩端螺旋体 ； ＨＰ１Ｔ ｌ样受体 ２ Ｔ ｌ样受体 ４ 细胞 因子 Ｔ － ； ｏｌ ； ｏｌ ；
钩端螺旋体菌苗在临床研究中的应用
钩端螺旋体菌苗在临床研究中的应用钩端螺旋体（Leptospira interrogans）是引起钩端螺旋体病（Leptospirosis）的病原体，该疾病在全球范围内具有广泛分布并引起了严重的公共卫生问题。
钩端螺旋体菌苗在临床研究中的应用得到了广泛的关注，因为它是一种医学预防措施，可以有效减少钩端螺旋体病的发病率和致命率。
钩端螺旋体菌苗是一种以杀死的或者无活性的钩端螺旋体制备的疫苗，通过免疫接种，可以刺激人体产生特异性免疫反应，从而提高人体对钩端螺旋体的抵抗能力。
通过研究和应用钩端螺旋体菌苗，可以从以下几个方面对其在临床中的应用进行探讨。
首先，钩端螺旋体菌苗在预防和控制钩端螺旋体病方面具有显著的效果。
钩端螺旋体病主要通过人与动物的直接或间接接触传播，在病人临床症状出现之前的早期干预非常重要。
目前，钩端螺旋体菌苗的接种已经成为钩端螺旋体病防控的重要策略之一。
通过及时进行全民疫苗接种，可以有效降低人群中的感染率，减少病例的发生。
其次，钩端螺旋体菌苗的研究也为在高风险职业岗位从业人员的保护提供了重要的手段。
一些职业群体，如农民、兽医、水路工人等，由于其工作性质特殊，更容易与钩端螺旋体接触。
对于这些工作者，接种钩端螺旋体菌苗可以显著提高他们的免疫保护水平，减少钩端螺旋体病的感染风险，保护他们的身体健康。
此外，钩端螺旋体菌苗的研究还为控制钩端螺旋体病的大规模爆发提供了重要的策略。
在自然灾害等特殊情况下，人群的生活环境、卫生条件等均面临巨大挑战，容易引起钩端螺旋体病的爆发。
针对这类情况，钩端螺旋体菌苗的紧急接种临床试验研究可以及时提供抗体保护，有效遏制病情的扩散，减少病例的发生，保护人民的生命健康。
需要指出的是，钩端螺旋体菌苗在临床研究中的应用也存在一些挑战和问题。
首先，钩端螺旋体的菌株种类繁多，株系间存在差异，不同区域、不同菌株的菌苗效果可能有所不同。
因此，在钩端螺旋体菌苗研究和应用中，需要根据具体情况选择合适的菌株，研发多价菌苗以提高疫苗的适应性。
钩端螺旋体菌苗的毒理学研究
钩端螺旋体菌苗的毒理学研究钩端螺旋体是一种常见的人和动物感染性疾病引起者。
由于它的传播广泛以及对人类和动物的健康造成的潜在威胁，钩端螺旋体的病理学和毒理学研究一直备受关注。
在钩端螺旋体感染过程中，其产生的毒素是引发疾病的重要因素之一。
因此，钩端螺旋体菌苗的研究旨在评估其毒理学特性，以推动疫苗的开发和改进。
钩端螺旋体是一种引起钩端螺旋体病的革兰氏阴性螺旋菌，通过感染人和动物的血液来进行传播。
它主要通过螺旋体透皮钩、微钩、皮下刺激钩等结构，进入宿主体内并在器官中繁殖。
在感染过程中，钩端螺旋体产生的外毒素对宿主产生毒性作用，导致疾病的症状，例如高热、头痛、肌肉疼痛、乏力等。
为了有效控制钩端螺旋体病的传播，疫苗的研究和开发是至关重要的。
毒理学研究是评估和确保钩端螺旋体菌苗的安全性和有效性的基础。
首先，钩端螺旋体菌苗的毒理学研究需要对疫苗中的成分进行分析和评估。
这包括疫苗所含的有害物质、重金属、控制钩端螺旋体生长和增殖的成分等。
通过详细的化学分析，研究者可以确定这些成分是否存在潜在的毒性风险。
其次，毒理学研究需要包括动物实验。
实验动物种类的选择十分关键，常用的实验动物包括小鼠、大鼠和猴子。
在实验动物体内注射钩端螺旋体菌苗，通过观察动物对疫苗的反应，如免疫系统的激活、体重变化、器官损伤等，来评估其毒性。
这些实验可以帮助研究者了解疫苗对动物身体的影响，从而预测疫苗可能产生的潜在毒性反应。
另外，在钩端螺旋体菌苗的毒理学研究中，还应考虑到疫苗的长期毒性。
这可以通过对动物进行长期观察来实现。
例如，注射疫苗后，观察动物是否出现长期的免疫反应、器官功能的变化等。
长期毒理学研究的目的是确定疫苗是否会对动物的整体健康产生不利影响，以及疫苗是否可以安全地用于临床应用。
最后，毒理学研究还需要对钩端螺旋体菌苗进行质量控制。
这包括疫苗的生产过程中需要遵守的质量管理规范、疫苗的物理性质和生化特性的检测，以及针对不同批次产品的质量标准的制定。
钩端螺旋体菌苗的研发与应用进展
钩端螺旋体菌苗的研发与应用进展钩端螺旋体菌（Leptospira interrogans）是一种引起钩端螺旋体病（Leptospirosis）的细菌，它可以通过感染动物体液或患者的尿液等途径传播给人类，引起严重的健康问题。
钩端螺旋体病在全球范围内广泛存在，特别是在热带和亚热带地区，由于其高传染性和致死率，一直以来都是公共卫生领域的重点关注对象。
为了预防和控制钩端螺旋体病的传播，科学家们一直致力于钩端螺旋体菌苗的研发和应用。
目前，钩端螺旋体菌苗的研发已经取得了一定的进展，并在一些地区得到了应用。
首先，钩端螺旋体菌苗的研发已经涉及到多个方面，包括菌株选取、抗原分离和制备技术等。
针对不同的菌株，研究人员通过对其进行基因序列分析，确定了关键的抗原。
在此基础上，他们利用生物技术手段，通过重组蛋白技术和DNA疫苗技术等方法，成功地制备出了一系列的钩端螺旋体菌苗。
其次，对钩端螺旋体菌苗的应用也取得了一些进展。
疫苗的预防是遏制传染性疾病传播的最有效手段之一。
目前，已经有一些国家和地区在高风险地区开始使用钩端螺旋体菌苗进行预防接种，以减少钩端螺旋体病的发病率和病死率。
同时，科研人员也在探索其他应用场景，例如在动物预防和环境清洁方面的应用。
钩端螺旋体菌苗的研发和应用虽然取得了一些进展，但仍然面临一些挑战。
首先，钩端螺旋体菌存在多个亚型和菌株的变异性，因此需要研究人员根据流行病学数据进行合理的菌株选择，以确保疫苗的有效性。
其次，钩端螺旋体病的传播途径复杂，包括自然传播和人际传播，因此在疫苗的设计和应用过程中需要综合考虑多个因素，如不同菌株的地理分布和传播途径等。
此外，钩端螺旋体菌苗在推广和应用过程中还面临一些制约因素。
首先，由于钩端螺旋体病主要分布在一些经济欠发达地区，相关地区的卫生设施和人力资源较为有限，因此在疫苗的推广和接种方面存在一定的困难。
其次，在一些地方，人们对疫苗的认知和接受程度需要提高，这需要通过宣传教育和政策支持来实现。
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万方数据
第３４卷 ２０１０年第６期
黑龙江医学
ＨＥｌ ＬＯＮＧ ＪＩＡＮＧ ＭＥＤＩＣＡＬ ＪＯＵＲＮＡＬ
Ｖｏｌ。３４，Ｎｏ．６
Ｊｕｎ．２０１０
４２９
子。
４．４ ＬｉｐＬ４１
４．７
ＬｉｐｌＡ６［２５］
这是最新发现的一种外膜蛋白，由４１２个氨基 酸组成，分子量为４６ ｋＤａ，含有２１个氨基酸组成的 信号肽。它可溶解于ＴｆｉｔｏｎＸ一１１４，表明是一种脂 蛋白。表面免疫沉淀和全钩体ＥＬＩＳＡ试验提示：Ｕ— ｐＬ４６暴露于钩体表面，免疫组化证实急性感染钩体 的仓鼠血流中的钩体可表达ＬｉｐＬ４６。ＬｉｐｌＡ６还存 在于受染仓鼠的肝细胞间隙及脾巨噬细胞内。该 蛋白可被感染钩体的仓鼠的血清识别，表明它在感 染期间表达。这些研究提示：ＬｉｐＬ４６在钩体的体内 扩散过程中十分重要，可以作为一有用的血清学诊 断抗原。
４．５ ＬｉｐＬ３６
ＬｉｐＬ３６的ＯＦＲ含１
ｂｐ核苷酸，编码３６４个
４．８
ＯｍｐＬｌ７［２６’”］
氨基酸，分子量３６ ｋＤａ。在钩体生长培养过程中，Ｌｉ． ｐＬ３６的表达量不同。在对数生长早期ＬｉｐＬ３６表达 量最大，是钩体中表达最丰富的蛋白之一，但从对 数生长中期开始，ＬｉｐＬ３６表达水平显著下降。“． ｐＬ３６是温度调节蛋白，在３０。Ｃ时，钩体合成“－ ｐＬ３６；但在３７℃，钩体则不表达此蛋白。值得注意 的是：ＬｉｐＬ３６在动物感染中表达下调【２２］，这可能与 钩体的慢性感染机制有关，钩体通过下调外膜蛋白 表达量逃避宿主的免疫反应，从而在宿主体内长期 存活。因此，该蛋白可能成为致病钩体适应宿主机 制的标志分子旧引。
第３４卷 ２０１０年第６期
黑龙江医学
ＨＥＩ ＬＯＮＧ ＪＩＡＮＧ ＭＥＤＩＣＡＬ ＪＯＵＲＮＡＬ
Ｖ０１．３４，Ｎｏ．６
Ｊｕｎ．２０１０
４究进展
曾维诚综述，张英审校
（泸州医学院，四川泸州６４６０００）
关键词：研究；综述；钩端螺旋体；血清学；毒力因子
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４—５７７５．２０１０．０６．０１０
４．１ ＯｍｐＬｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ
ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ＯＭＰｓ）种
影响，他们以真核质粒为载体，构建ＤＮＡ疫苗免疫 沙鼠，发现免疫鼠可耐受３种不同型别钩体的攻 击，提示ＬｉｐＬ３２（Ｈａｐ一１）可以在沙鼠体内诱导交 叉免疫保护反应¨引，但有趣的是，重组ＬｉｐＬ３２蛋白 却不能诱导明显的保护性免疫。最近，Ｓｅｉｘａｓ【１６］等 用表达ＬｉｐＬ３２的重组卡介苗免疫仓鼠，再用致死剂 量的问号钩体哥本哈根型攻击，尸检和组织学检查 表明：接种重组卡介苗后，在注射了钩体的动物体 内没有找到发生钩体病的证据，进一步证实了Ｌｉ． ｐＬ３２的免疫保护效应。 迄今，在钩体感染的病人中，已发现了７种与 感染有关的蛋白，其中免疫印迹实验表明，ＬｉｐＬ３２ 的抗体ＩｇＧ在急性期和感染期病人血清中分别占 ３７％和８４％，具有很强的特异性和敏感性，提示“． ｐｉ＿３２可作为诊断钩体病的候选抗原。实际上，已有 多个研究证实了ＬｉｐＬ３２的诊断价值［１７，１８］。
万方数据
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第３４卷 ２０１０年第６期
黑龙江医学
ＨＥＩ ＬＯＮＧ ＪＩＡＮＧ ＭＥＤＩＣＡＬ ＪＯＵＲＮＡＬ
Ｖ０１．３４．Ｎｏ．６
Ｊｕｎ．２０１０
在胞浆中的旋转导致菌体的运动。从钩体细胞中 分离的鞭毛经双向凝胶电泳显示，鞭毛由分子量介
于３１．５～３６ ｋＤａ的７种蛋白组成。其中最为重要
４．２
ＬｉｐＬ３２
ＬｉｐＬ２１是一种新型表面暴露性脂蛋白¨９１，该 蛋白在问号钩体赖型赖株外膜蛋白中的含量仅次 于ＬｉｐＬ３２。ＬｉｐＬ２１无论在体内还是体外、是否缺铁 以及不同温度条件下均表达。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交显示， ＬｉｐＬ２１存在于所有致病菌株，而在被检的非致病菌 株中均未发现，提示ＬｉｐＬ２１是钩体的又一毒力因
４．３ ＬｉｐＬ２１
类繁多，在钩体黏附、免疫和致病中意义重大。较
目前，发现ＯｍｐＬｌ是钩体惟一的跨膜蛋白，由 ３２０个氨基酸组成，分子量３１ ｋＤａ。ＯｍｐＬｌ在致病钩 体表达的保守性和位于菌体表面，使其有可能成为 有效疫苗和诊断抗原的候选者。尽管单独使用含 有重组ＯｍｐＬｌ的大肠杆菌膜片段主动免疫金黄地 鼠，对同种钩体Ｋｉｒｓｅｈｎｅｒｉ基因种ＲＭ５２无显著的 保护作用，但使用含有重组ＯｍｐＬｌ和ＬｉｐＬ４１的大 肠杆菌膜片段免疫后，却出现了明显的保护作 用㈤］。Ｍａｎｅｅｗａｔｃｈ等＂】，用编码问号钩体黄疸出 血群哥本哈根型ＯｍｐＬｌ基因的质粒ＤＮＡ疫苗 （ｏｍｐＬｌ一ｐｃＤＮＡ３．１＋）免疫仓鼠，表明ＯｍｐＬｌＤＮＡ 疫苗可提供抗异种钩体的交叉保护作用。免疫印 迹试验显示：重组ＯｍｐＬｌ具有良好的抗原性， ＥＬＩＳＡ表明重组ＯｍｐＬｌ可与感染同型钩体的血清 发生强烈反应，提示该蛋白可作为广普疫苗和免疫 诊断抗原的候选者‘９｜。Ｒｅｉｔｓｔｅｔｔｅｒ ＲＥ［１叫等，亦有类 似的报道。可见ＯｍｐＬｌ在钩体病的诊断和预防上， 具有一定的价值。
４．６ Ｌｏａ ２２ Ｌｏａ
鲍朗等，应用抑制消减杂交技术，从赖型钩体 ０１７株中筛选出致病钩体赖型０１７株特有的、而非 致病钩体缺失的差异基因片段，半巢式ＰＣＲ扩增差 异基因片段相邻两侧未知序列，获得１
０２０
ｂｐ的
ＤＮＡ片段，测序并经生物信息学分析，表明其包含 一完整读码框，编码的蛋白是外膜蛋白，已登录在 ＧｅｎｅＢａｎｋ，命名为ＯｍｐＬｌ７。以其构建重组表达载 体在大肠杆菌中表达出约２８ ｋＤａ的蛋白，该蛋白可 以诱导豚鼠产生高滴度的特异性抗体，表明Ｏｍ． ｐＬｌ７具有良好的免疫原性。以基因打靶技术研究 ＯｍｐＬｌ７功能，证实ＯｍｐＬｌ７是赖型钩体的一个毒 性蛋白。因为灭活该基因的突变株的致病力较野
０９２ ０６５
ＬｉｐＬ４１由３５５个氨基酸组成，分子量为
４１
ｋＤａ，结构基因含１
ｂｐ核苷酸。ＬｉｐＬ４１在动
物感染时表达上升，且免疫沉淀试验显示其暴露于 外膜表面ⅢＪ。晚近发现ＬｉｐｌＡｌ还具有结合氯化高 铁血红素的能力，这可能对钩体的生长有一定的作 用。免疫保护实验证实，以ＬｉｐｌＡｌ或ＯｍｐＬｌ单独 免疫不能产生有效的保护作用，但两者共同免疫 时，免疫保护率明显提高。由此可见，ＬｉｐｌＡｌ与 ＯｍｐＬｌ有协同免疫保护作用心１｜。
学科分类代码：３１０．４１
中图分类号：Ｒ３７７．５
文献标识码：Ａ
钩端螺旋体病（１ｅｐｔｏｓｐｉｒｏｓｉｓ，简称钩体病），是 由致病性钩端螺旋体（简称钩体）引起的钩端螺旋 体病（钩体病）。是一种全球性自然疫源性疾病，广 泛分布在世界各地。我国是受钩体病危害十分严 重的国家，目前已发现有１８个血清群７５个血清 型，遍布３１个省份，自１９５５年以来病例数超过２５０ 万人，平均病死率约为１％。 钩体病虽然已发现１００多年，但其致病机制至 今尚未完全阐明。一般认为，钩体对机体的黏附和 侵袭、其自身的运动性和趋向性，以及其代谢产物 等因素都与致病性相关。近年来，随着分子生物学 手段、测序技术及生物信息学分析水平的提高，使 得与钩体致病有关的毒力因子，如：脂多糖、溶血 素、鞭毛蛋白、外膜蛋白等的研究，取得了较大进 展。本文就这些研究成果，进行综述。 １脂多糖（Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｅｅｈｒｉｄｅ，ＬＰＳ） 钩体ＬＰＳ能诱发家兔出现施瓦茨曼氏（Ｓｈｗａｒ－ ｔｚｍａｎ）反应，给小鼠注射ＬＰＳ能引起广泛性内脏出 血，尤以肺出血更为严重，从而提示钩体病的肺弥 漫性出血可能与ＬＰＳ有关。钩体ＬＰＳ能促进中性 粒细胞与内皮细胞和血小板的黏附，造成血小板聚 集，并引发血小板减少症。Ｉｓｏｇａｉ…等，报道ＬＰＳ可 诱导小鼠淋巴细胞发生凋亡，并认为与ＬＰＳ引起 ＴＮＦ—Ｏｔ的大量产生有关。近年来，Ｎａｌｌｙ【２１等，发现 在急性感染钩体的动物模型体内，钩体ＬＰＳ ０抗原 的表达较慢性感染的动物体内和培养基中的少。 由此可见，通过调节ＬＰＳ ０抗原的表达，可以决定 钩体感染后是引发急性感染亦或是慢性感染。 目前，我国和巴西的科学家已分别完成了问号 钩体黄疸出血群赖型赖株和哥本哈根型的全基因 组测序工作，并对这两型基因组进行了比较分 析【３ Ｊ。对基因组的分析，发现钩体ＬＰＳ合成和装配 相关基因共有２３～３１个。钩体间基因的差异被认 为是钩体对不同的动物宿主的适应性和钩体型特
异性的原因。因此，对ＬＰＳ的进一步研究，可能有 助于揭示钩体血清型特异性及多样性的分子机制。 ２溶血素（Ｈｅｍｏｌｙｓｉｎ） 钩体产生的溶血素分为两大类：鞘磷脂酶Ｃ类 溶血素和成孔蛋白类溶血素。到目前为止，鞘磷脂 酶Ｃ类溶血素仅在致病性钩端螺旋体中检测到，以 ｓｐｈＡ为代表。溶血素基因ｓｐｈＨ编码的蛋白与绵羊 红细胞在３７。Ｃ混合作用２０ ｍｉｎ后，在透射电镜下观 察到红细胞膜上有ｚＪ，？Ｌ，电子云密度降低，细胞内 容物渗漏，细胞形态改变，而阴性对照组则没有这 种现象，证实这种溶血素具有成孔型性。 溶血素的作用是破坏红细胞或其他细胞膜，增 加毛细血管的渗透性，使血管壁破裂造成皮下出 血，这可能是钩体感染宿主后造成机体组织器官的 病变，特别是毛细血管壁的渗漏、溶血性贫血以及 致命性肺弥漫性出血的一个重要原因。此外，溶血 素对钩体的生存也是必须的，钩体不能自身合成生 长所必需的碳源和能源，而且也不能在无金属离子 的培养基中生长，这些物质必须要靠外界供给。溶 血素破坏红细胞膜使其裂解释放出游离脂肪酸和 金属离子，供其自身生长需要。同时，溶血素可能 还有助于钩体在宿主体内的存活。 晚近，通过对问号钩体黄疸出血型赖株基因组 ＣＤｓ的分析，已发现１１个可疑的溶血素基因，均分 布在钩体大染色体上。除了ＬＡ０ １７７的氨基酸序 列较短，没有磷酸酯酶结构域外，其余基因根据其 所编码蛋白的功能可分为两类：鞘磷脂酶类和非鞘 磷脂酶类。即成孔蛋白类溶血素基因。其中的９个 基冈已在大肠杆菌ＢＬ２１ｐｌｙｓＳ克隆表达并成功地验 证了它们的溶血活性Ｈ１。但是，这些基因是否在宿 主体内表达以及其在体内的溶血活性和细胞毒性 如何，尚需实验验证。 ３鞭毛蛋白（Ｆｌａｇｅｌｌｉｎ） 钩体的鞭毛附着于钩体的两个亚末端，通过其