【CN109825645A】一种检测人类疱疹病毒6HHV6的RCA方法【专利】
人类疱疹病毒6型简介
人类疱疹病毒6型简介
目录
•1拼音
•2英文参考
•3注解
1拼音
rén lèi pào zhěn bìng dú
2英文参考
human herpes virus 6 ,hhv6
3注解
人类疱疹病毒6型（human herpes virus 6,hhv6）是1986年从淋巴增殖异常患者及爱滋病病人外周血单细胞首先分离到一种具有疱疹病毒形态和嗜淋巴细胞的新病毒，它志疱疹病毒科其他5个型病毒的抗原性和酶切图谱不同，故名hhv6。
人类感染hhv6十分普遍，但多为隐性感染。
免疫荧光试验可在60～80%儿童及成人血清中查到hhv6抗体。
hhv6是婴儿急疹（玫瑰疹）的病原，并证实与淋巴增殖性疾病、自身免疫病和免疫缺陷病人感染等有关。
随着器官移植的发展和爱滋病病人的增多，hhv6感染变得日益重要。
微生物学检查，可采取早期病人外周血单核细胞与经活化（用pha、il2）的脐带血淋巴细胞共培养，或用活化的t细胞系（为h *** 2）感染病人体液（唾液、尿液、血液等）进行病毒分离。
亦可用原性杂交和pcr技术检测感染细胞或组织中病毒dna。
及血清学试验（ifa，elisa）检测抗病毒lgm和lgg，以确定近期感染和流行病学调查。
常用治疗药物是磷乙酸和磷甲酸，两者均可抑制病毒聚合酶的活性，阻断dna复制。
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人类疱疹病毒6、7、8型实验室诊断方法的研究进展
分 ＨＨＶ － ６的 Ａ ／ Ｂ变种 ， 但其冗长 的过程不 适用于 临床检测 。
疫学 、 分 子 生 物 学 特 征 方 面存 在 较 大 差 异 ， ＨＨＶ－ ６ Ｂ 的 致 病 性 比 ＨＨ ｖ＿ ６ Ａ 强 。 ＨＨＶ 一 ７是 于 １ ９ ９ ０年 从 外 周 血 单 个 核 细 胞 （ Ｐ Ｂ ＭＣ ） 活化 Ｃ Ｄ ４ Ｔ 细 胞 中 纯 化 分 离 出 来 。 ＨＨ ｖ＿ ８又 名
疱 疹 病 毒 是 一 类 在 分 子 生 物 学 和 医 学 上 有 重 要 意 义 的病
疱 疹 病 毒 感 染 的 临床 界 定 和相 关 病 毒 的分 离 鉴 定 ， 已 经 证 实 了 其 中 的 ８种 与 人 类 疾 病 相 关 。根 据 这 ８种 病 毒 的 结 构 、 生 物 学 性质及其致 病 特点 等 ， 分为 ａ 、 ８ 、 ７ ３类 ， 见表 １ 。同 时 ， 又 按
关键 词 ： 疱疹病毒科感染 ； 实验 室技 术 和 方 法 ； 诊 断； 综 述 Ｄ ＯＩ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ５ ． ０ ２ ６ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章编号 ： １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ５ — ０ ５ ７ ３ — ０ ４
疱疹病毒如何检测
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生活常识分享疱疹病毒如何检测
导语：疾病有很多种，很多生病的原因不一样却有一些相似的病症。
所以不要自己盲目的判断是什么疾病。
就像疱疹病毒，如果被感染上了，这些病状也许
疾病有很多种，很多生病的原因不一样却有一些相似的病症。
所以不要自己盲目的判断是什么疾病。
就像疱疹病毒，如果被感染上了，这些病状也许和其他疾病相似，但是却又有本质的区别，所以我们一定要通过专业的知识去检测疱疹病毒，那么疱疹病毒到底是如何检测的呢？让我们一起来看看。
病毒分离和鉴定
病毒分离培养是当今临床上明确诊断疱疹病毒感染的可靠依据。
可采集皮肤、生殖器等病变部位的水疱液、脑脊液、角膜刮取物、唾液等标本，接种人二倍体成纤维细胞株WI38及其它传代细胞株如Vero、BHK等，经24～48小时后，细胞则出现肿胀、变圆、细胞融合等病变。
然后用HSV-1和HSV-2的单克隆抗体作免疫荧光染色鉴定或应用DNA限制性内切酶图谱分析来定型。
抗体检测
常用于抗体检测的方法有补体结合试验、中和试验、免疫荧光及酶联免疫吸附试验等，临床多用于急性感染诊断和器官移植患者的检测，以及流行病学调查。
如用于急性感染诊断，应采取急性期和恢复期双份血清，同时检测血清中的IgG和IgM。
DNA检测
取病变组织或细胞，提取病毒DNA，与标记的HSV DNA探针进行杂交或应用PCR检测HSV-1或HSV-2的gB糖蛋白基因来判断是否是HSV的感染。
这种方法已用于疑为HSV脑炎患者的诊断。
通过上面的专业分析，检测疱疹病毒有病毒分离和鉴定、抗体检测、。
【CN109825620A】一种检测巴西孢子丝菌的荧光PCR引物探针及试剂盒【专利】
( 12 )发明专利申请
(21)申请号 201910031041 .X
(22)申请日 2019 .01 .14
(71)申请人 中国疾病预防控制中心传染病预防 控制所
地址 102206 北京市昌平区昌百路155号传 染病所媒介室
申请人 吉林大学
(72)发明人 赵飞 张明瑞 张建中 李福秋 龚杰
(10)申请公布号 CN 109825620 A (43)申请公布日 2019.05.31 C12Q 1/04(2006 .01) C12R 1/645(2006 .01)
权利要求书1页 说明书8页 序列表2页 附图7页
CN 109825620 A
CN 109825620 A
权 利 要 求 书
1/1 页
背景技术 [0002] 孢子丝菌病(Sporotrichosis)是由双相真菌申克孢子丝菌复合体(Sporothrix schenckii complex)侵犯皮肤及皮下组织引起的慢性感染性疾病。病程长，皮损可固定于 局部 ，或延淋巴 管走行 ，严重者可通过血行系统播散 ，引起内脏器官的感染 ，也有报道称吸 入的孢子可直接引起肺部感染。早期人们对申克孢子丝菌认识有限 ，认为其为单一物种。随 着基因组学以及分子检测手段的不断发展，发现申克孢子丝菌是由多个亲缘种构成的复合 体，多数孢子丝菌为环境菌株，基本不致病，只有少数几种是临床致病菌。其中，巴西孢子丝 菌(Sporothrix brasiliensis，SB)是重要的临床致病菌，也是一种重要的人兽共患病。其 宿主除了人类之外，也可引起以猫等动物的感染，猫的口腔环境温度为37 .7-39 .1℃，pH值 为7 .5-8 .0，十分有利于巴西孢子丝菌酵母细胞生长繁殖。通过搔抓和撕咬，巴西孢子丝菌 不仅能够引起人类的感染，也可在动物之间传播，成为其主要的传播途径。作为重要的人畜 共患病，由巴西孢子丝菌引起的孢子丝菌病，常具有较重的临床表现，并且能够引起内脏及 邻近骨的感染，甚至侵犯中枢神经系统，导致宿主死亡。近些年，孢子丝菌病报道不断增多， 尤其是临床表现严重的 病例。有记载的巴 西孢子丝菌感染 病例就超过几千 例 ，并且由 于孢 子丝菌病不是必须上报的病种，其真实感染情况要远高于记载数据。 [0003] 随着对孢子丝菌复合体研究的深入，发现不同种之间在致病力及药物敏感性方面 存在明显差异 ，因此在孢子丝菌病的诊断及治疗过程中 ，对病原菌鉴定到种是十分必要的。 目前，临床上常用的孢子丝菌诊断方法包括直接镜检、培养、组织病理检查等。除培养外，都 不能对其鉴定到种水平。由于种内形态十分相似，常需要经验丰富的真菌学专家进行鉴定， 并且孢子丝菌培养耗时较长，通常需2-4周，不适用于临床早期诊断。目前常用的分子鉴定 手段主要包括对目的片段扩增及测序、限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)以 及特异性引物普通PCR检测等。 [0004] 由于局部皮损真菌含量少，直接镜检阳性率较低，早期孢子丝菌的诊断主要依赖 于组织病理及真菌培养。病理组织切片特殊染色，如过碘酸雪夫染色，六胺银染色可检测到 真菌孢子。组织真菌培养是检测的金标准，但耗时较长，至少需要1周时间，因此无法作为临 床快速诊断的依据。随着分子生物学技术发展，核酸检测技术逐渐应用到孢子丝菌的分型 和检测中 ，目前常 用的孢子丝菌检测及分型的靶基因主要有内转录间隔区 (internal transcribed spacer ,ITS)、钙调蛋白(calmodulin ,CAL)、延长因子(elongation factors , EF) 等 ，通过设计针对靶基因的 特异性 引物 ，扩增获得长度不同的目的 片段 ，进一步运 用琼 脂糖凝胶电 泳对其进行区分 ，从而对孢子丝菌进行 种内鉴定。2015年 ，Rod rig ues (参考文 献 ：Messias R A ,Sybren D H G ,Pires D C Z ,et al .Molecular Diagnosis of Pathogenic Sporothrix Species .PLOS Neglected Tropical Diseases ,2015 ,9(12):
【CN109750085A】一种精准快速检测目标超级细菌的检测方法【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910203710.7(22)申请日 2019.03.18(71)申请人 希拓生物科技有限公司地址 450000 河南省郑州市高新技术产业开发区长椿路23号11号楼(72)发明人 靳静 陈松建 王书伟 王山梅 王小亭 李亚辉 张改 李振江 张杰 (74)专利代理机构 郑州联科专利事务所(普通合伙) 41104代理人 时立新(51)Int.Cl.C12Q 1/66(2006.01)C12Q 1/06(2006.01)C12Q 1/04(2006.01)(54)发明名称一种精准快速检测目标超级细菌的检测方法(57)摘要本申请属于医疗卫生技术领域，具体涉及一种精准快速检测目标超级细菌的检测方法。
该方法以环境中浮游菌为样品采集对象；具体方法包括：采样并富集、筛选培养、定性或定量测定评价等步骤。
本申请利用噬菌体裂解处于存活状态的细菌所释放的ATP可使荧光素酶催化荧光素发光的特性，从而可较为直观的定性或定量判定“超级细菌”的类型或含量，而由于噬菌体的特异性，因此即使在含有混杂菌的样品中，也无需分离培养，即可快速和精准检测判定，因此具有较好的应用价值。
权利要求书1页 说明书6页 附图5页CN 109750085 A 2019.05.14C N 109750085A1.一种精准快速检测目标超级细菌的检测方法，其特征在于，该方法以环境中超级细菌为目标对象；具体筛选检测方法包括如下步骤：（1）采样并富集采集环境中浮游菌后，在含有抗生素的培养基中进行初步富集培养；所述抗生素为亚胺培南或美罗培南；本申请超级细菌，为：碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌、碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌、碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌、碳青霉烯类耐药大肠埃希菌；（2）筛选培养对步骤（1）中初步富集后试验样进行取样，一份作为对照样，一份作为筛选试验样；在筛选试验样中，加入荧光素和荧光素酶，同时加入噬菌体，继续培养0.5h~1h以使噬菌体充分裂解目标超级细菌；在对照样中，加入荧光素和荧光素酶，同样条件进行培养；（3）定性或定量测定评价利用发光检测仪，分别对步骤（2）中筛选试验样和对照样荧光强度进行测定和记录；从而对采集环境中是否含有目标超级细菌及超级细菌含量进行定性或定量判定；定性判定时，加入特定噬菌体后，如果筛选试验样出现不小于4倍荧光强度变化情况，判定采集环境中含有该噬菌体对应的超级细菌菌株；定量判定时，以步骤（2）中的取样时间作为评价因子，以筛选试验样裂解后荧光强度与对照样的荧光强度的比值作为评价标准，对采集环境中超级细菌含量进行评价。
人类疱疹病毒6型实时荧光定量PCR试剂盒[发明专利]
![人类疱疹病毒6型实时荧光定量PCR试剂盒[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/40504d222cc58bd63086bd24.png)
专利名称：人类疱疹病毒6型实时荧光定量PCR试剂盒
专利类型：发明专利
发明人：吴建国,刘为勇,艾洪武,石康,刘映乐,汤行春,熊鹰,项荣,程议锋,李彤亚,章琪,程念,张家云,何茜妮
申请号：CN201110066519.6
申请日：20110318
公开号：CN102154515A
公开日：
20110817
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明是人类疱疹病毒6型实时荧光定量PCR试剂盒，涉及生物技术领域中的PCR试剂盒。
本试剂盒包括人类疱疹病毒6型的一对特异性引物、一条特异性荧光探针、阳性对照、阴性对照、
5×PCR Buffer和Enzyme Mix；设计特异性引物：F：5'-ACAAAGCGAAATTATCCAGAGCGT-
3'；R：5'-GCGCTAGGTTGAGGATGATCGC-3'；设计特异性探针：FP:5'FAM-ACACCAGACGTCACACCCGAAGGAATT-TAMARA3'。
本发明检测周期短、效率高；检测病毒特异性强，准确率高；病毒定性分析的同时还能定量分析；灵敏度比普通PCR和免疫学检测方法高；操作简单、易于推广；实验结果重复性好。
申请人：武汉大学
地址：430072 湖北省武汉市武昌珞珈山
国籍：CN
代理机构：武汉宇晨专利事务所
代理人：黄瑞棠
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一种水痘-带状疱疹病毒病毒滴度的快速检测方法[发明专利]
![一种水痘-带状疱疹病毒病毒滴度的快速检测方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/6b9f77e53086bceb19e8b8f67c1cfad6195fe9df.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910662954.1(22)申请日 2019.07.22(71)申请人 长春祈健生物制品有限公司地址 130000 吉林省长春市高新开发区火炬路1号(72)发明人 朱晓文 李春明 沈红杰 李海燕 梁慧颖 刘延威 刘志强 周慧 赵海波 王玮 (51)Int.Cl.G01N 33/569(2006.01)(54)发明名称一种水痘-带状疱疹病毒病毒滴度的快速检测方法(57)摘要本发明的目的是提供一种水痘-带状疱疹病毒(VZV)病毒滴度的快速检测方法，该方法在传统的VZV抗原的双抗体夹心ELISA检测方法的基础上，通过增加已知滴度的VZV样品进行定量标定，绘制VZV抗原含量滴度曲线，来测定水痘-带状疱疹病毒的病毒滴度，该检测方法操作简单快捷，相对传统的pfu测定方法，极大提高了水痘-带状疱疹病毒滴度的检测效率，特别适用于的病毒快速测定。
权利要求书1页 说明书6页序列表8页 附图2页CN 110231481 A 2019.09.13C N 110231481A1.一种水痘-带状疱疹病毒(VZV)病毒滴度的快速检测方法，其特征在于：在基于VZV抗原的双抗体夹心ELISA检测方法上，将已知滴度的VZV样品进行系列稀释，进行抗原定量后绘制VZV抗原含量-病毒滴度曲线，然后对待检测VZV样品的滴度测定。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述双抗体夹心ELISA检测方法包括如下步骤：用抗VZV单克隆抗体抗体包被ELISA板后，封闭，加VZV抗原结合，加标记的抗VZV抗体，显色，酶标仪检测；优选地，所述抗VZV单克隆抗体为单克隆抗体mAb -11，所述标记的抗VZV 抗体为HRP酶标记的抗VZV单克隆抗体12-HRP。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用VZV双抗体夹心ELISA试剂盒对已知浓度的VZV样品进行抗原含量测定，确定其OD 450值；再利用VZV双抗体夹心ELISA试剂盒对系列稀释的已知滴度的VZV样品进行抗原定量，确定其OD 450值，根据上述OD 450值与VZV抗原、VZV 样品滴度关系，绘制VZV抗原含量-病毒滴度曲线。
用于人类疱疹病毒感染检测的试剂盒及其检测方法[发明专利]
![用于人类疱疹病毒感染检测的试剂盒及其检测方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/5ec76f2da66e58fafab069dc5022aaea998f4122.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 202010472509.1(22)申请日 2020.05.29(71)申请人 领航基因科技（杭州）有限公司地址 311227 浙江省杭州市萧山区南阳街道横蓬园区红山工业区(72)发明人 毛花英 夏江 (74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245代理人 陆惠中 田欢(51)Int.Cl.C12Q 1/70(2006.01)C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称用于人类疱疹病毒感染检测的试剂盒及其检测方法(57)摘要本发明属于生物医药领域，具体涉及一种用于人类疱疹病毒感染检测的试剂盒及其检测方法。
首先公开了一种同时检测多种疱疹病毒的试剂盒，所述试剂盒包括用于人类疱疹病毒感染检测的引物探针系统，所述引物探针系统包括如SEQ ID N0：1-21所示的核苷酸序列组。
使用该试剂盒进行疱疹病毒检测，检测周期缩短至3-4小时，能够快速、高效、准确的测定临床上常见的病毒感染。
并且本发明中的检测方法可实时、快速监测病毒感染患者体内的特定病毒的拷贝数变化，及时评估并为临床医生提供辅助治疗建议。
本发明中公开的高效的多重多色数字PCR实验方案，相对于传统的多重PCR方案，检测方法更加高效、准确。
权利要求书1页 说明书6页序列表4页 附图3页CN 111500788 A 2020.08.07C N 111500788A1.一种同时检测多种疱疹病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括用于人类疱疹病毒感染检测的引物探针系统；所述引物探针系统包括：用于检测HSV1的正向引物，其核苷酸序列如SEQ ID N0：1所示；用于检测HSV1的反向引物，其核苷酸序列如SEQ ID N0：2所示；用于检测HSV1的探针，其核苷酸序列如SEQ ID N0：3所示；用于检测HSV2的正向引物，其核苷酸序列如SEQ ID N0：4所示；用于检测HSV2的反向引物，其核苷酸序列如SEQ ID N0：5或SEQ ID N0：6所示；用于检测HSV2的探针，其核苷酸序列如SEQ ID N0：7或SEQ ID N0：8所示；用于检测VZV的正向引物，其核苷酸序列如SEQ ID N0：9或SEQ ID N0：10所示；用于检测VZV的反向引物，其核苷酸序列如SEQ ID N0：11所示；用于检测VZV的探针，其核苷酸序列如SEQ ID N0：12所示；用于检测EBV的正向引物，其核苷酸序列如SEQ ID N0：13所示；用于检测EBV的反向引物，其核苷酸序列如SEQ ID N0：14所示；用于检测EBV的探针，其核苷酸序列如SEQ ID N0：15所示；用于检测CMV的正向引物，其核苷酸序列如SEQ ID N0：16或SEQ ID N0：17所示；用于检测CMV的反向引物，其核苷酸序列如SEQ ID N0：18或SEQ ID N0：19所示；用于检测CMV的探针，其核苷酸序列如SEQ ID N0：20或SEQ ID N0：21所示。
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910189789.2
(22)申请日 2019.03.13
(71)申请人 湖北朗德医疗科技有限公司
地址 443000 湖北省宜昌市西陵经济开发
区西湖路产业孵化中心5号楼2层
(72)发明人 朱世新 朱玉华 石康
(74)专利代理机构 宜昌市三峡专利事务所
42103
代理人 成钢
(51)Int.Cl.
C12Q 1/70(2006.01)
C12Q 1/6844(2018.01)
(54)发明名称
一种检测人类疱疹病毒-6（HHV-6）的RCA方
法
(57)摘要
本发明公开了一种检测人类疱疹病毒-6
（HHV -6）
的RCA方法，按照如下步骤完成：（1）标本DNA的提取；（2）捕获探针的杂交，（3）锁式探针的
环化连接与酶切，（4）RCA扩增，再用琼脂糖凝胶
电泳，通过凝胶成像仪观察电泳结果。
本发明锁
式探针结合RCA技术是一种检测人类疱疹病毒-6
（HHV -6）的新方法，通过锁式探针特异识别靶基
因序列，RCA扩增放大检测信号。
该方法不需特殊
设备、操作简单、特异性好、灵敏度高，在病毒检
测方面具有独特优势。
权利要求书1页 说明书5页序列表1页 附图1页CN 109825645 A 2019.05.31
C N 109825645
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109825645 A
1.一种检测人类疱疹病毒-6(HHV-6)的RCA方法，其特征在于，按照如下步骤完成：
(1)将待测标本按Qiagen公司的病毒DNA提取试剂盒步骤处理，获得含人类疱疹病毒-6 (HHV-6)的基因组DNA样品；
(2)捕获探针的杂交：在反应管中依次加入含人类疱疹病毒-6(HHV-6)的基因组DNA样品、锁式探针、捕获探针，充分混匀，55±1℃水浴杂交，杂交完成后自然冷却至室温，加入溶于2×结合缓冲液的链霉亲和素包被的磁珠，混匀，室温放置，磁性分离，用1×结合缓冲液清洗磁珠数次，弃去洗液，得到杂交产物；
(3)锁式探针的环化连接与酶切：去离子水、步骤(2)制得的杂交产物和10×E.coli Buffer，轻轻混匀，在95±1℃下反应3-5min，然后再在45±1℃下孵育后，加入10×BSA缓冲液和E.coli DNA连接酶，混匀，在37±1℃进行环化连接反应；反应完成后加入10×Exonuclease Ⅰ Buffer和Exonuclease Ⅰ核酸外切酶，混匀，在37±1℃反应，反应完成后在95±1℃下条件下灭活Exonuclease Ⅰ核酸外切酶，得到探针环化连接产物；
(4)RCA扩增：取步骤(3)中制得的探针环化连接产物、加入引物和10×phi29 Buffer，混匀后在95±1℃下反应3-5min，然后进行冰浴；再加入phi29 DNA聚合酶、dNTPs液，混匀后在37±1℃进行RCA反应，得到扩增产物；
(5)取步骤(4)制得的扩增产物用的琼脂糖凝胶电泳，有肉眼可见条带扩增出来的为人类疱疹病毒-6(HHV-6)阳性，反之为人类疱疹病毒-6(HHV-6)阴性，即可完成对人类疱疹病毒-6(HHV-6)的检测；
所述步骤(4)中所设计用于RCA反应的引物是：
5’-ACCAGATCGACCACCTTATCGTTATCATAGAG-3’ SEQ NO1；
所述步骤(2)中的锁式探针为：
5’-CACCAAGAGTCTAGATAAACTAGATAAAAGCGGGAAGACCAACTACACGAATTCTGCTAACTTGCGATA CTAGTTAGCGACCGAATTCATTAGGTTTCAGTTTCAGACAACCACAGACACCGTCC-3’探针的5’端进行磷酸化修饰SEQ NO2；
所述步骤(2)中的捕获探针为：
Biotin-ACCAGATCGACCACCTTAAGTACCACGCACAAGCCTAAGTACCCTAGASEQ NO3。
2.根据权利要求1所述的检测人类疱疹病毒-6(HHV-6)的RCA方法，其特征在于，步骤(2)中锁式探针、捕获探针的浓度均为0.5-1.5μmol/L，且锁式探针、捕获探针相对于DNA样品体积的10-20％。
3.根据权利要求1所述的检测人类疱疹病毒-6(HHV-6)的RCA方法，其特征在于，步骤(3)中10×E.coli Buffer相对于步骤(2)制得的杂交产物体积的18-25％；10×BSA缓冲液相对于步骤(2)制得的杂交产物体积的18-25％；E.coli DNA连接酶相对于步骤(2)制得的杂交产物体积的1.5-2.5％；10×Exonuclease I Buffer相对于步骤(2)制得的杂交产物体积的18-25％；Exonuclease I相对于步骤(2)制得的杂交产物体积的18-25％。
4.根据权利要求1所述的检测人类疱疹病毒-6(HHV-6)的RCA方法，其特征在于，步骤(4)中引物的添加量为探针环化连接产物的1.8-3％；10×phi29 Buffer的添加量为探针环化连接产物的9.5-15％；phi29 DNA聚合酶的添加量为探针环化连接产物的1.8-3％。
2。