Southern Blot操作流程
Southern blot实验方法和操作步骤
Southern Blot原理及实验方法Southern Blot原理及实验方法原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。
如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。
用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。
试剂和器材一、试剂变性液：1.5mol/L NaCl，0.5mol/L NaOH。
中和液：0.5mol/L Tris-HCl (pH=7.5)，1.5mol/L NaCl。
20×SSC：3mol/L NaCl，0.3mol/L 柠檬酸钠。
以上溶液均在100Kpa灭菌20分钟。
2×SSC：用无菌移液管吸取20×SSC溶液5mL，加无菌水45mL。
6×SSC：用无菌移液管吸取20×SSC溶液15mL，加无菌水75mL。
二、器材22cm×15cm瓷盘操作方法1. 在琼脂糖凝胶上电泳分离DNA。
取出凝胶，切去边缘多于部分，EB染色，在紫外灯下照相（放一标尺，可从像片中读出DNA迁移的距离）。
2. 将凝胶置于200mL变性液中，浸泡45分钟，并温和地不断振荡，使凝胶上的ds-DNA转变为ss-DNA，然后用重蒸水冲洗凝胶几次。
3. 用中和液浸泡凝胶并不断地振荡45分钟，将凝胶中和至中性。
防止凝胶的碱性破坏硝酸纤维膜。
4. 取一个瓷盘，在底部放一块玻璃板（或一块海绵）使盛器内的20倍SSC转移滤液低于玻板表面，在玻板表面盖一张3mm的二号滤纸，滤纸两边浸没于20倍SSC溶液中，在玻璃和滤纸之间，赶掉所有的气泡。
5. 把凝胶底面朝上放在滤纸上，赶走两层之间出现的气泡。
southern blot法
Southern blot法是一种用于检测DNA序列的分子生物学技术。
它基于DNA变性和凝胶电泳的原理，通过将待测DNA样品与已知DNA片段进行杂交，然后使用放射性或荧光标记的探针来检测目标DNA的存在和相对丰度。
具体步骤如下：
1. 将待测DNA样品进行限制性内切酶消化，将其切割成一定大小的片段。
2. 将这些DNA片段通过琼脂糖凝胶电泳分离，根据其大小和形状在凝胶上形成条带。
3. 将凝胶中的DNA转移到硝酸纤维素膜上，使DNA片段与膜上的探针结合。
4. 使用放射性或荧光标记的探针与目标DNA杂交，检测目标DNA的存在和相对丰度。
Southern blot法可以用于研究基因结构、基因表达调控、基因组学等领域。
Southern blot实验方法和操作步骤
Southern Blot原理及实验方法Southern Blot原理及实验方法原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。
如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。
用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。
试剂和器材一、试剂变性液：1.5mol/L NaCl，0.5mol/L NaOH。
中和液：0.5mol/L Tris-HCl (pH=7.5)，1.5mol/L NaCl。
20×SSC：3mol/L NaCl，0.3mol/L 柠檬酸钠。
以上溶液均在100Kpa灭菌20分钟。
2×SSC：用无菌移液管吸取20×SSC溶液5mL，加无菌水45mL。
6×SSC：用无菌移液管吸取20×SSC溶液15mL，加无菌水75mL。
二、器材22cm×15cm瓷盘操作方法1. 在琼脂糖凝胶上电泳分离DNA。
取出凝胶，切去边缘多于部分，EB染色，在紫外灯下照相（放一标尺，可从像片中读出DNA迁移的距离）。
2. 将凝胶置于200mL变性液中，浸泡45分钟，并温和地不断振荡，使凝胶上的ds-DNA转变为ss-DNA，然后用重蒸水冲洗凝胶几次。
3. 用中和液浸泡凝胶并不断地振荡45分钟，将凝胶中和至中性。
防止凝胶的碱性破坏硝酸纤维膜。
4. 取一个瓷盘，在底部放一块玻璃板（或一块海绵）使盛器内的20倍SSC转移滤液低于玻板表面，在玻板表面盖一张3mm的二号滤纸，滤纸两边浸没于20倍SSC溶液中，在玻璃和滤纸之间，赶掉所有的气泡。
5. 把凝胶底面朝上放在滤纸上，赶走两层之间出现的气泡。
Southernblot(自总结2)
Southern blot （J 版）1. 提取植物总DNA (CTAB法)试剂：1) 2×CTAB提取缓冲液（低于15℃会析出，加入材料前先65℃预热）0.1 mol/L Tris-Cl (pH 8.0)1.4 mol/L NaCl20 mmol/L EDTA (pH 8.0)20 g/L CTAB （2%）20g/L PVP-40（2%）使用前加入2% (体积比) 的巯基乙醇。
步骤：1)提取前将植物材料在暗处放置24小时，以降低材料的淀粉含量。
2)剪取大约1g 叶片，置于研钵中，倒入液氮研成粉末（一定研磨细致，非常重要），分装入2ml离心管中（样品约占0.5ml的体积），每管加入900ul CTAB提取缓冲液，温和彻底的混匀，静置，使裂解彻底。
3)65℃水浴保温1-1.5小时。
4)冷至室温后加900ul 酚：氯仿：异戊醇（25：24：1），充分温和混匀直到叶片粉末由绿转白（水相，酚相混匀成乳状液）。
5)室温下13,000 rpm离心10 min，吸取上层水相。
6)取上清（约900ul）再用等体积的氯仿：异戊醇 (24：1)再抽提一次。
13,000 rpm离心10min。
7)取上层水相（约700ul），加入2倍体积无水乙醇沉淀DNA。
小心倒出每管中液体，将絮状DNA沉淀收集到一个新的 1.5ml EP管中（同一个样品）。
8)用70%乙醇洗涤沉淀3-5次，每次将沉淀适当浸泡以充分洗涤，最后一次稍加离心，将洗涤液尽量去除干净，通风橱中晾干约10min左右（不要过分干燥）。
9)加200ul灭菌的去离子水（或者TE），并加入2ul Rnase A（10mg/ml），37℃保温30-60min溶解沉淀，充分混匀，并消化RNA。
（可直接到第11步）10)（可省步骤）如需做此步骤，则上步中需用700ul ddH2O溶解沉淀，37℃保温消化RNA后再用等体积氯仿：异戊醇 (24：1)抽提，并离心，取上清。
生物化学实验southwestern blotting实验步骤 -回复
生物化学实验southwestern blotting实验步骤-回复生物化学实验：southwestern blotting实验步骤南方杂交（southwestern blotting）是一种用于检测DNA结合蛋白的实验技术。
在这项实验中，我们可以确定哪些蛋白与DNA结合，进而揭示它们在基因调控和细胞功能方面的作用。
下面将详细介绍southwestern blotting实验的步骤。
步骤一：制备RNA和DNA探针在进行southernwestern blotting实验之前，首先需要制备两个探针：一个用于检测特定DNA序列的DNA探针，另一个用于检测DNA结合蛋白的RNA探针。
DNA探针可以通过PCR扩增特定的DNA片段，然后用荧光标记的核苷酸或放射性同位素标记的核苷酸标记。
RNA探针则需要用逆转录酶将RNA反转录成cDNA，然后用荧光标记的核苷酸或放射性同位素标记的核苷酸标记。
步骤二：制备细胞核提取物1. 收集细胞：收集含有目标蛋白的细胞样品。
可以根据需要使用贴壁培养的细胞或悬浮培养的细胞。
2. 细胞裂解：将细胞悬液离心后，将细胞沉淀洗涤一次，然后用细胞裂解液裂解。
细胞裂解液可以根据实验要求自制，也可以购买商业提供的细胞裂解液。
3. 离心：将细胞裂解液离心，将上清转移至新离心管中。
4. 蛋白浓度检测：使用BCA或其他蛋白浓度检测试剂盒对离心上清中的蛋白质进行定量。
步骤三：SDS-PAGE凝胶电泳分离1. 准备SDS-PAGE凝胶：根据需要制备聚丙烯酰胺凝胶。
根据样品量的不同，选择不同的均聚丙烯酰胺百分比凝胶。
2. 添加样品和分子量标记物：向凝胶槽中加载约10-50微克的蛋白样品，并加入适当的分子量标记物。
3. 开始电泳：将凝胶槽放入电泳槽中，并加入足够的电泳缓冲液。
启动电泳仪，并根据需要调整电压和电流。
4. 疏水处理：电泳结束后，将凝胶浸入缓冲液中，使凝胶疏水。
步骤四：转移蛋白到NC膜1. 混合转移缓冲液：根据实验需要制备转移缓冲液。
southern bolt 步骤
southern blot是一种分子生物学技术，用于检测特定DNA序列在样本中的存在和数量。
以下是southern blot的步骤概括：
DNA提取：从样本中提取DNA，通常使用酚/氯仿/异戊醇法或柱层析法等方法。
DNA纯化：将提取的DNA进行纯化，去除杂质和其他分子。
DNA片段化：将纯化的DNA片段化成一定大小的片段，通常使用限制性内切酶（如EcoRI、BamHI等）进行切割。
凝胶电泳：将DNA片段进行凝胶电泳分离，使DNA片段按大小分开。
转膜：将凝胶上的DNA片段转移到NC膜上，可以使用毛细作用或真空转移的方法。
杂交：将标记的探针与NC膜上的DNA片段进行杂交，使特异的DNA序列被标记。
洗膜：去除未结合的探针，只留下特异的DNA序列与探针结合的部分。
检测：通过检测标记的探针来检测特异的DNA序列是否存在以及其数量。
以上步骤完成后，就可以得到southern blot的结果，并可以对结果进行分析和解读。
southern blot的中文操作步骤
一. 地高锌-DNA 标记1. 用51-4全长质粒做模板,用BspQ I 和Sca I双酶切,NEBBuffer：10 μLBspQ I： 3 μLSca I ： 2 μL质粒：60ul水：25μL100μL体系先放于37℃的培养箱10小时,然后于50℃水浴, BspQ I作用的温度为50℃, Sca I作用温度为37℃.2.胶回收全长片段(3.2kb)1．100μL酶切产物加loading buffer全上样，电泳后回收3000bp左右的片段。
2．称重加入3倍体积的QG（1g/3mL），50℃水浴10min融胶,其间颠倒2-3次。
3．将液体转移至柱子，13000rpm/min 1min，弃滤液。
4．加入500μLQG，13000rpm/min 1min，弃滤液。
(去除痕量的融胶)5．加入750μL PE，静置5min，13000rpm/min 1-2min.6．13000rpm/min空离2min7．置一新EP管上，加入40μL ddH2O，静置10min，13000rpm/min 1min，收集滤液备用。
用2ul测OD值.(51-4含量:0.28ug /ul)3. 探针反应用H2O 或Tris buffer溶解模板(胶回收的51-4),不能用TE,因为EDTA会抑制探针反应.步骤:1.取4ul 51-4胶回收产物,加双蒸水至16 ul.2. 100℃沸水中放置10min变性,冰上骤冷.3. 混匀DIG-High prime,取4ul DIG-High prime加到上述变性DNA溶液中,混匀,短暂离心,37℃孵化20小时4. 65℃水浴10min二.标记效率的检测1.倍比稀释探针探针反应后的探针量为23000ng .1000ng 模板→20h →probe 2300ng/20ul≈100ng/ul①第一次稀释：10ul probe①加入90ul DNA dilution buffer(10ng/ul)②第二次稀释：5ul ②加入45ul dilution buffer (1ng/ul)③第三次稀释：(2) Control DNA (5ng/ul)的倍比稀释吸取5 ul Control DNA (5ng/ul)加入20 ul的DNA dilution buffer(1 ng/ul)2.点膜(1)取1 ul Control DNA D2-D8点于尼龙膜上,与其相平行的一排点上地高辛标记的DNA D2-D8,最后各点一个dilution buffer.如下图所示.O O O O O O O O ControlO O O O O O O O DigD2 D3 D4 D5 D6 D7 D8 dilution buffer将尼龙膜放于滤纸上,在其上再放一张等大的滤纸,于80℃烤箱烘烤2 hour.拿出于室温放置.(2)将膜转移到含有20ml washing buffer的封口袋中,室温振摇2min,弃尽washingbuffer(3)加10 ml 1XBlocking solution振摇孵育30 min, 弃尽Blocking solution(4)加10 ml 稀释了104倍的antibody solution振摇孵育30 min,弃antibody solution(5)加10 ml 1Xwashing buffer 洗膜两次,2X15 min,弃washing buffer(6)加10 ml 1Xdetection buffer振摇平衡2-5 min(7)将膜取出放入有双层薄膜的一层薄膜上,加约4滴的CSPD ready-to-use 横跨尼龙膜表面,将袋子的第二层膜盖在含探针DNA的一层薄膜上,尽量不能有气泡.(8)室温孵育5 min(吸尽过量的液体,将薄膜四边封口)(9)37℃孵育10 min(10)进入暗室,压膜一定时间,把压好的片子先放于以1:9稀释好的100 ml的显影液中显影5 min左右,拿出来放入定影液中定影5 min左右,用水冲洗干净,白光下照相.3.探针结果分析A.D6的荧光强度为理想的标记DNA,如:DNA样品按上述方法稀释的,实际上含有20ng/ul标记探针.B.D5 出现荧光,是足量的标记DNA,如: DNA样品按上述方法稀释的,实际上约含有7 ng/ul标记探针C.D4出现荧光,标记DNA不够(确定DNA探针量后再进行下一步)D.计算出探针浓度后看需要多少的探针溶液来杂交,如:D6做探针时,每ml杂交buffer用1.25ul的20ng/ul DNA探针溶液在Southern blot检测DNA,D5做探针时,每ml杂交buffer用3.75ul的7 ng/ul DNA探针溶液(25 ngDNA 探针) 在Southernblot检测DNA,D4不能当探针,重做一个.三. 探针杂交southern blot DNA探针的杂交流程在琼脂糖上分离DNA样品条带(30min-2h)↓转移DNA到尼龙膜上(southern blot)A.脱嘌呤和变性DNA(1h)B.用毛细管转移DNA到尼龙膜上(过夜)C.烘烤固定DNA(30 min-2h)↓用DIG-Easy Hyh进行预杂交(30 min)↓DIG-labeled DNA与DNA进行杂交A.孵育标记了DNA探针的尼龙膜(4-16h)B.洗膜,将未杂交的探针洗掉(45 min)1.DNA的电泳分离(1)用TBE配置一块琼脂糖凝胶,胶越薄越好.(注:为了得到理想结果,在胶里不能放EB染色或跑过的buffer,(Ethidium)乙啡啶,假如电泳条带跑的不够长可能会引起背景不均匀的问题. (2)点上少量目的DNA,一般地,目的DNA的浓度要低,如:每个泳道点2.5-5ug人类基因组DNA 或假如基因组比人类DNA还复杂的,每个泳道就跑10ug以上或每个泳道跑<1ng的质粒DNA (3)点上分子量的Marker,相应的每泳道点上5ul的DIG-labeled DNA Marker.(注:需要量依赖于杂交产量,确保点的Marker量足够显示出样品同样位置的条带.(4)跑胶直到DNA分离的很好,用30-50V电压跑胶大约5h左右.(5)为了评价目的DNA 的质量,以0.25-0.5ug/ml EB染色,在紫外灯下成像.(15-30 min)2.把DNA转移到尼龙膜上1).凝胶里变性DNA:用变性溶液(0.5M NaOH,1.5M NaCI)浸没凝胶2X15 min,室温温和振摇,之间用无菌双蒸水冲洗凝胶.2).中和:用中和液(0.5M Tris-HCI,PH 7.5;1.5M NaCI )室温浸没凝胶振摇2X15 min ，之间用无菌双蒸水冲洗凝胶3).用20XSSC平衡凝胶,振摇至少10 min4).按照下述进行blot,避免产生气泡:●放一张已经沾有20XSSC溶液的Whatman 3 MM纸于桥上,然后往槽里放20XSSC●把凝胶放在浸湿了的Whatman 3 MM纸上,用无菌吸管在凝胶与纸之间吸走所有气泡●剪一块与凝胶大小的尼龙膜●放这张膜于含有DNA的凝胶上,按上述方法用移液器消除气泡●然后再加上一层Whatman 3 MM纸,一叠纸巾,一快玻璃板和一个重200-500g的重物,完成印记转移的三明治模式.5).印记过夜在20XSSC溶液里转移，如图示(5cm)封口膜或X片20×SSC6).当印记还湿润时,用下面方法固定DNA到印记上●用2XSSC(不含SDS)简单冲洗膜●在80℃烘考此膜1h.7).膜可继续下面实验或者保存干燥印记(用两张Whatman 3 MM纸包裹密封)4℃保存.3.用DIG easy Hyb进行印记杂交1．杂交●注意：在任何时候都不要让膜干燥。
southern_杂交实验流程
SOUTHERN BLOTTING实验操作流程A.小麦基因组DNA的提取1)采集5g鲜嫩的小麦幼苗，将其剪成2cm左右的片段，用液氮冷冻后在研钵中将其研成粉末（研磨15min左右）。
2)将研磨好的样品转移到预冷的50ml离心管中，加入20ml预热的S buffer，颠倒混匀。
S Buffer成分100mM Tris.Cl pH8.5100mM NaCl50mM EDTA pH8.02％ SDS3)于65℃水浴锅中温育1-2h，并不时轻柔混匀。
4)加入20ml（等体积的）酚/氯仿，轻柔地颠倒混匀，直至呈乳状（注意：保证混匀。
为有效除去蛋白，此步可以重复）。
5)用水平转子离心机以2000rpm的转速离心20-30min。
6)加入等体积的氯仿，轻柔地颠倒混匀，2000rpm离心20min。
7)转移上清到1个灭菌的50ml离心管中，加入0.6倍体积的异丙醇，颠倒混匀，室温放置一段时间，用玻璃勾将DNA钩出。
8)用70％的乙醇清洗DNA 2-3次后，将其挑在玻璃钩上晾干，然后溶解在5ml 1×TE中。
9)待DNA完全溶解后接入10μl RNase，于37℃恒温箱中温育1h。
10)加入等体积的酚/氯仿，轻柔颠倒混匀，以2000rpm的转速离心15min。
11)转移上清至1个灭菌的离心管中，加入等体积的氯仿，混匀，以2000rpm的转速离心15min。
12)转移上清至1个灭菌的离心管中，加入1/10 体积 3M pH 5.0的乙酸钠（终浓度为0.3M），混匀后再加入2倍体积95％的乙醇，混匀。
13)用玻璃勾将DNA钩出，然后用70％的乙醇清洗2-3次，晾干后加入1.8-2ml 1×TE溶解。
14)待DNA完全溶解后，取1μL DNA电泳，检测DNA的浓度和完整性。
15)DNA样品可以放在4℃保存备用。
B.小麦基因组DNA的酶切1）通常情况下采用下列酶进行谷类作物DNA分析。
识别6碱基序列的酶识别4碱基序列的酶Apa I Hind III Bam HI Alu I Mbo I Hha ISal I Bgl I Sst I Dde I Msp I Taq IDra I Pvu II Eco RV Hae III Rsa I Hinf IEco RI Xba I2）如果一次酶切DNA的量在10μg左右，一般采用30μL反应体系。
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Southern Blot 操作流程
1、哺乳动物基因组DNA 的提取（或用OMEGA 试剂盒E.Z.N.A.TM Tissue DNA Kit ） 1、 取约30mg 样品，加入600 ul SNET ，再加入12 ul （20.2mg/ml ）的蛋白酶
K ，使蛋白酶K 的终浓度为400ug/ml ； 2、 55℃振荡过夜；
3、 加入0.6 ul RNaseA ，室温下孵育10 min ，后置于65℃ 10 min ；
4、 加入300 ul Tris 饱和酚，288 ul 氯仿和12 ul 异戊醇，室温下振荡30 min ；
5、 17,000 g 离心5min ，转移上层水相（600 ul ）至一新的离心管；
6、 加入等体积（600 ul ）的异丙醇沉淀DNA ，于4℃下13,250 g 离心15 min ；
7、 小心除去异丙醇，加入1 ml 70%的乙醇。
离心5 min 后除去乙醇，室温下干
燥15~20 min ；
8、 加入100 ul TE ，使核酸沉淀溶解。
一、 酶切
1、 拷贝数的计算
哺乳动物基因组全长3.0×109个碱基对，按插入基因单拷贝计算如下：
()
g
plasmid
of mass bp
bp DNA of Insertion
μ10100.39
=
⨯
2、 酶切体系
基因组DNA 10 ug 10*Buffer 10 ul 酶(10U/ul) 10 ul Total
100 ul
3、 混合后置于适宜酶切温度进行酶切反应；
4、 对酶切产物进行纯化，用30 ul TE 洗脱；
5、 制备1%浓度的琼脂糖凝胶（不加EB ）；
6、 将纯化后的酶切产物敞开盖子于70℃放置15 min ，以除尽残留乙醇和消除
酶切后产生的粘性末端；
7、电泳：1v/cm。
二、转膜
1、碱变性：把胶条转移到含碱变性液的器皿中，摇床处理15 min；重复一次；
2、中和：倒出器皿中的碱变性液，加入中和液，摇床处理15 min；重复一次；
3、倒出中和液，加入20×SSC，摇床处理15 min；
4、转膜：
1）在一干净的容器中放入一包吸水纸，倒入20×SSC，浸湿；
2）放上一张与胶条大小相当的sigma 3M滤纸，倒上一层20×SSC，防止产生
气泡；
3）将预先剪裁好的尼龙膜放入ddH2O中充分浸润2分钟；
4）小心把胶条铺在滤纸上面，用玻璃棒擀平，赶走气泡；
5）往胶上倒上一层20×SSC，将尼龙膜铺在胶条上，再向上倒上一层20×SSC；6）再放上一张与胶条大小相当的sigma 3M滤纸；
7）用保鲜膜把胶条四周封上，在上面压上一包吸水纸，再用一个约250mg的物体压在吸水纸上面；
8）转膜过夜；
5、固定
将膜放在用10×SSC浸湿的滤纸上面，使含DNA面朝上，放入紫外交联仪中，以1.5J，254n，2.5min的程序将DNA固定在尼龙膜上。
三、杂交
1、标记探针：可用随机引物法或PCR方法标记探针；
2、将尼龙膜有DNA 的一面朝内，卷成筒状放入杂交管中，加入10 ml 经预热至50℃的DIG Easy Hyb，于50℃预杂交30 min；
3、取10 ul经标记的探针，热水浴5 min变性，然后迅速放入冰水混合物中；
4、将变性后的探针加入4 ml预热的DIG Easy Hyb中，混匀，并防止气泡的产生（气泡会产生背景）；
5、倒出预杂交液，加入含探针的杂交液，杂交4h或过夜。
6、杂交温度的计算
T m=49.82+0.41（%G+C）-（600/I）[I=length of hybrid in base pairs]
T opt= T m-20 to 25℃
四、洗膜
1、室温下用W1洗液洗5min，重复一次；
2、68℃下用W2洗液洗15min，重复一次；
3、将膜用Washing Buffer浸润5min；
4、25~50℃下，用100ml Blocking Solution孵育30min，保持摇动；
5、25~50℃下，用20ml Antibody Solution孵育30min，保持摇动；
6、用100ml Washing Buffer洗15min，重复一次；
7、用20ml Detection Buffer平衡5min；
8、将膜放入杂交袋中，使含DNA面朝上，滴加1ml CSPD ready-to-use，将杂交袋合上，并赶走气泡，于15~25℃孵育5min；
9、挤出多余的液体，将潮湿的膜置于37℃孵育10min，以增强发光反应。
五、显影
直接用成像系统成像。
DNA提取的溶液配制
1.Tris-HCl (1mol/L ；PH 8.0)
用800ml蒸馏水溶解12.1g Tris碱，加浓HCl（约42ml）调PH至8.0，应使溶液冷却至室温后，方可最后调定PH值，加水定容至1L。
高压灭菌。
***如果溶液出现黄色，应予以丢弃，并使用质量更好的Tris。
2.EDTA（0.5 mol/L ；PH 8.0）
186.1 g EDTA·Na·2H2O加入800ml水中，用NaOH调节PH至8.0（约需20gNaOH），定容至1L，高压灭菌。
***EDTA·Na需在PH接近8.0时才会溶解。
3.NaCl (5 mol/L)
292g NaCl加入800ml水中，定容至1L，高压灭菌。
4.SDS（20%，m/v）十二烷基磺酸钠
200g SDS加入900ml水中，加热到68℃有助于溶解，定容至1L。
***无须灭菌，不要蒸汽高压。
5.SNET
20 mmol/L Tris-HCl(PH 8.0)
5 mmol/L EDTA(PH 8.0)
400 mmol/L NaCl
1%(m/v) SDS
6.TE(PH 8.0)
100 mmol/L Tris-HCl(PH 8.0)
10 mmol/L EDTA(PH 8.0)
Southern 缓冲液配制（修正版）
1.Washing buffer：
分子量1L体系5L体系0.1M 马来酸（116.07）：11.607g 58.035g 0.15M NaCl （58.45）：8.768g 43.838g 用NaOH 调pH至7.5 （20℃）
灭菌
0.3% Tween20：3ml 15ml
2.Maleic acid buffer：
分子量1L体系5L体系0.1M 马来酸（116.07）：11.607g 58.035g 0.15M NaCl （58.45）：8.768g 43.838g 用NaOH 调pH至7.5（20℃）
灭菌
3.Detection buffer:
分子量1L体系5L体系0.1M TRIS Base（121.14）：12.114g 60.57g 0.1M NaCl （58.45）： 5.845g 29.225g 用HCl调pH至9.5（20℃）灭菌
4. 10% SDS
1L 体系
SDS溶液100g SDS
用0.45um滤器进行灭菌（不能进行高温灭菌）
5. 20*SSC
分子量1L体系
3M NaCl （58.45）：175.3g
0.3M 柠檬酸钠（294.10）：88.2g
用HCL调pH至7.0
灭菌
6.碱变性液
分子量1L体系
0.5M NaOH（40.0）20g
1.5M NaCl （58.45）87.68g
不需灭菌
7.中和液
分子量1L体系
0.5M Tris 121.14 60.57g
1.5M Nacl 58.44 87.66g。