高中基因工程典型例题
基因工程高考题
生物基因工程高考真题1、【来源】 2020年高考真题江苏卷第33题8分如果已知一小段DNA的序列，可采用PCR的方法，简捷地分析出已知序列两侧的序列，具体流程如下图（以EcoRⅠ酶切为例）：请据图回答问题：(1) 步骤Ⅰ用的EcoRⅠ是一种酶，它通过识别特定的切割特定位点。
(2) 步骤Ⅱ用的DNA连接酶催化相邻核苷酸之间的3′−羟基与5′−磷酸间形成；PCR循环中，升温到95∘C是为了获得；Taq DNA聚合酶的作用是催化。
(3) 若下表所列为已知的DNA序列和设计的一些PCR引物，步骤Ⅲ选用的PCR引物必须是（从引物①②③④中选择，填编号）。
(4) 对PCR产物测序，经分析得到了片段F的完整序列。
下列DNA单链序列中（虚线处省略了部分核苷酸序列），结果正确的是（）A. 5′−AACTATGCG⋯⋯⋯AGCCCTT−3′B. 5′−AATTCCATG⋯⋯⋯CTGAATT−3′C. 5′−GCAATGCGT⋯⋯⋯TCGGGAA−3′D. 5′−TTGATACGC⋯⋯⋯CGAGTAC−3′1 、【答案】 (1) 限制性核酸内切（或限制）;核苷酸序列;(2) ;DNA单链;以DNA为模板的DNA链的延伸;(3) ②④;(4) B;【解析】 (1) 步骤Ⅰ中的EcoRⅠ酶是一种限制性核酸内切酶，简称限制酶；EcoRⅠ酶能够识别并切割双链DNA分子的某种特定核苷酸序列。
(2) 步骤Ⅱ用的DNA连接酶催化DNA分子每一条链中特定部位的两个核苷酸之间形成磷酸二酯键；PCR循环中，升温到95∘C是为了断开DNA两条链间的氢键，得到DNA单链；Taq DNA聚合酶是一种热稳定性高的DNA聚合酶，其作用是催化以DNA为模板的DNA链的延伸。
(3) 引物是根据目的基因的一段核苷酸序列合成的，且与模板DNA链根据碱基互补配对合成，引物的3′端和DNA模板链的5′端根据碱基互补配对原则连接，由题目中已知序列5′−AACTAT⋯⋯−，对应的引物为3′−TTGATA⋯⋯−即④选项，由题目中另一段已知序列5′−AGAGGC⋯⋯−，对应的引物为3′−TCTCCG⋯⋯−即②选项。
基因工程【题组2】
基因工程【题组2】【14重庆】下图是利用基因工程培育抗虫植物的示意图。
以下相关叙述，正确的是A．②的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与B．③侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到④的染色体上C．④的染色体上若含抗虫基因，则⑤就表现出抗虫性状D．⑤只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异【解析】②为重组Ti质粒，其构建需要限制性核酸内切酶和DNA 连接酶；③含重组Ti质粒的农杆菌侵染植物细胞后，重组Ti质粒上的T-DNA整合到受体细胞的染色体上，并非整个重组Ti质粒整合到④的染色体上；目的基因导入受体细胞后不一定能成功表达，所以抗虫基因导入植物细胞后，培育成的植株也不一定具有抗虫性状；转基因抗虫植株是否培育成功，可以从个体水平上进行检测，即观察植株是否具有抗虫性状，如果具有抗虫性状则说明发生了可遗传变异。
【14江苏】下列关于基因工程技术的叙述，正确的是A.切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别6个核苷酸序列B.PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应C.载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因D.抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达【解析】每种限制酶只能识别特定的核苷酸序列，大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸对组成，也有少数限制酶识别的核苷酸序列由4、5或8个核苷酸对组成；PCR技术中温度在90～95℃时，DNA 解旋为单链，温度为55～60℃时，引物与作为模板的单链DNA上特定部位互补结合，温度为70～75℃时4种脱氧核苷酸在DNA聚合酶作用下，合成新的DNA链；作为标记基因的通常是抗生素抗性基因；抗虫基因成功导入受体细胞，也未必能正常表达，是否表达需要分子水平和个体水平上的检测和鉴定。
【13广东】从某海洋动物中获得一基因，其表达产物为一种抗菌体和溶血性均较强的多肽P1。
目前在P1的基础上研发抗菌性强但溶血性弱的多肽药物，首先要做的是A．合成编码目的肽的DNA片段B．构建含目的肽DNA片段的表达载体C．依据P1氨基酸序列设计多条模拟肽D．筛选出具有优良活性的模拟肽作为目的肽【解析】蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过对基因的修饰或基因的合成，对现有的蛋白质进行改造，或制造出一种新的蛋白质，以满足人类生产生活的需求。
高考生物基因工程专题训练
高考生物基因工程专题训练在高考生物中，基因工程是一个重要且具有一定难度的专题。
基因工程作为现代生物技术的核心领域之一，不仅在科学研究中发挥着关键作用，也是高考中的重点考查内容。
基因工程，又称为重组 DNA 技术，是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外 DNA 重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
基因工程的操作工具，包括限制性核酸内切酶、DNA 连接酶和运载体。
限制性核酸内切酶能够识别特定的核苷酸序列，并在特定的切点上切割 DNA 分子。
DNA 连接酶则能将切割后的 DNA 片段连接起来，形成重组 DNA 分子。
而运载体，常见的有质粒、噬菌体和动植物病毒等，它们能够将目的基因导入受体细胞。
在基因工程的操作步骤中，首先要获取目的基因。
这可以通过从基因文库中获取、利用PCR 技术扩增，或者通过人工合成等方法来实现。
获取目的基因后，需要构建基因表达载体。
这是基因工程的核心步骤，目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在并表达。
接下来是将基因表达载体导入受体细胞。
根据受体细胞的不同，导入的方法也有所不同。
例如，将目的基因导入植物细胞可以采用农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；导入动物细胞常用的方法是显微注射法；而导入微生物细胞则通常用感受态细胞法。
导入受体细胞后，还需要对目的基因进行检测与鉴定。
这包括检测转基因生物染色体的 DNA 上是否插入了目的基因，检测目的基因是否转录出了 mRNA，以及检测目的基因是否翻译成蛋白质等。
基因工程在农业、医药、环境保护等领域都有着广泛的应用。
在农业方面，通过基因工程可以培育出抗虫、抗病、抗逆的农作物新品种，提高农作物的产量和品质。
例如，抗虫棉就是通过基因工程技术将苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因导入棉花细胞中培育而成的。
在医药领域，基因工程可以用来生产胰岛素、生长激素、干扰素等药物。
利用基因工程生产的药物具有成本低、效率高、质量好等优点。
人教版高中生物必修2-6.2《基因工程及其应用》例题解析2
第2节基因工程及其应用【例1】下列有关基因工程中限制性内切酶的叙述，错误的是（）A.一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列B.限制性内切酶的活性受温度的影响C.限制性内切酶能切割RNAD.限制性内切酶可以从原核生物中提取【解析】考查限制性内切酶的相关知识,此类酶主要存在于微生物中，可以从细菌等核生物中提取；每种限制酶只能识别一种特定的脱氧核昔酸序列并从特定切点切割DNA分子，它不能对RNA分子发挥作用。
【答案】C【例2】利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需的产品。
下列各项中能说明目的基因完成了在受体细胞中表达的是（）A.棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因B.大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNAC.山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列D.酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白【解析】基因在受体细胞中成功表达的标志是合成出具有正常生物活性的蛋白质分子。
只检测目的基因或其转录出的mRNA不能说明表达成功。
【答案】D【例3】1978年，美国科学家利用基因工程技术，将人类胰岛素基因拼接到大肠杆菌的DNA分子中，然后通过大肠杆菌的繁殖，生产出人类胰岛素。
请回答：（1）在利用大肠杆菌繁殖生产人类胰岛素的过程中，所用的基因的“剪刀”是______，基因的“针线”是________，基因的“运载工具”是________。
（2）上述人类胰岛素的合成是在___________处进行的，其决定氨基酸排列顺序的mRNA是_________基因转录而成的。
（3）合成人类的胰岛素含51个氨基酸，由2条多肽链组成，则胰岛素分子中含肽键______个，这51个氨基酸是经过________方式合成胰岛素，相对分子质量比原来减少______。
【解析】本题是一道综合题，考查基因工程的工具，细胞的结构和功能，细胞的氨基酸合成蛋白质的方式。
肽键数=氨基酸数-肽键数，氨基酸脱水缩合形成蛋白质相对分子质量减少的是H 2O 的质量。
(完整版)高中生物基因工程试题
阶段质量检测（一）基因工程（时间:45分钟，满分:100分）一、选择题（每小题3分，共45分）1.下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（）A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和载体B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C.只要是细菌中的质粒都可以直接作为基因工程中的载体D.载体必须具备的条件之一是有多个限制酶切割位点，以便与外源基因进行连接2.（浙江高考）天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。
现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是（）A.提取矮牵牛蓝色花的mRNA,经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因BB.利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因BC.利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞D.将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞3.日本下村修、美国沙尔菲和钱永健因在发现绿色荧光蛋白（GFP）等研究方面做出突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。
GFP在紫外光的照射下会发出绿色荧光。
依据GFP 的特性，你认为该蛋白在生物工程中的应用价值是（）A.作为标记基因，研究基因的表达B.作为标记蛋白，研究细胞的转移C.注入肌肉细胞，繁殖发光小白鼠D.标记噬菌体外壳，示踪DNA路径4•下列有关质粒的叙述，正确的是（）A.质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器B.质粒是细菌细胞质中能自主复制的小型环状DNAC.质粒只有在侵入宿主细胞后，才能在宿主细胞内复制D.基因工程中常用的载体除了质粒外，还有核DNA、动植物病毒以及入噬菌体的衍生物5•下列有关基因工程的叙述正确的是（）A.用同种限制性核酸内切酶切割载体与含目的基因的DNA片段可获得相同的黏性末端B.以蛋白质的氨基酸序列为依据合成的目的基因与原基因的碱基序列相同C.检测到受体细胞中含有目的基因就标志着基因工程育种已经成功D.质粒上抗生素的抗性基因有利于质粒与外源基因连接6•下列有关基因工程和蛋白质工程步骤的叙述不正确的是（）A.将基因表达载体导入小鼠的受精卵中常用显微注射法B.设计扩增目的基因的引物时不必考虑表达载体的序列C.蛋白质工程是通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新蛋白质的技术D.蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质7.利用细菌大量生产人的胰岛素，下列叙述错误的是（）A.用适当的酶对载体与人的胰岛素基因进行切割与黏合B.用适当的化学物质处理受体细菌表面，将重组DNA导入受体细菌C.通常通过检测目的基因产物来检测重组DNA是否已导入受体细菌D.重组DNA必须能在受体细菌内进行复制与转录，并合成人的胰岛素8.下列关于图中P、Q、R、S、G的描述，正确的是（）A.P代表的是质粒RNA，S代表的是外源DNAB.Q表示限制酶的作用，R表示RNA聚合酶的作用C.G是RNA与DNA形成的重组质粒D.G是转基因形成的重组质粒DNA9.下列关于目的基因的检测与鉴定的叙述，错误的是（）A.目的基因在真核细胞中能否稳定遗传的关键是目的基因是否插入质粒DNA中B.检测受体细胞是否含有目的基因及其是否成功转录的方法都是分子杂交法C.目的基因的鉴定通常是在个体水平上进行的D.如在受体细胞内检测到目的基因表达的蛋白质，可确定目的基因首端含有启动子10.科学家利用生物技术将人的生长激素基因导入小鼠受精卵的细胞核中，经培育获得一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中，在医学研究及相关疾病治疗方面都具有重要意义。
2024届高三一轮复习生物：必考大题03——基因工程练习
必考大题03 基因工程1. 科研工作者在盐碱地中找到了一种生长良好且耐盐碱的植物(以下简称植物a)。
研究人员发现，植物a的液泡膜上特有一种Na＋/K＋逆向转运蛋白，这种蛋白是植物a耐盐碱的原因，并在植物a 中找到控制该蛋白合成的Na＋/K＋逆向转运蛋白基因(TaNHX2基因)。
该基因就是研究人员要找的耐盐碱的目的基因。
研究人员进一步获得了如下图所示的物质结构。
拟利用这些材料，用基因工程技术培育转基因棉花。
含有目的基因的DNA片段农杆菌Ti质粒结构示意图注：Sau3AⅠ、Eco RⅠ、Bam HⅠ为三种限制酶，Sau3AⅠ、Bam HⅠ切割形成的黏性末端相同。
用基因工程技术培育转基因棉花的操作程序包括四个步骤：(1)目的基因的获取：将植物a不同基因的DNA片段导入受体菌的群体中储存，再根据目的基因的特定序列从受体菌中提取该基因，这种获取目的基因的方法称为。
(2)构建基因表达载体：计划用Eco RⅠ分别切割上图中DNA片段和上图所示质粒，以构建基因表达载体。
①构建表达载体除限制酶外还需要的工具酶是________；②本方案的缺陷是：可能导致______________________以及目的基因与质粒的反向连接。
③为避免上述缺陷，最佳方案是用______________切割上图的DNA片段，用____________切割上图质粒。
(3)将________导入受体细胞。
成功导入受体细胞后，还需要利用________技术才能得到转基因棉花幼苗，这一技术的原理是。
(4)目的基因的检测与鉴定：要在个体生物学水平上检测耐盐新品种的培育效果，检测方法是。
2.研究发现人溶菌酶(hLZ)是天然抗生素替代品。
科学家培育出转人溶菌酶基因山羊，以大规模生产人溶菌酶(从乳汁中提取)，过程如下图所示。
其中编号①～⑨表示过程；质粒S中的基因Leu 通过控制相关酶的合成而影响亮氨酸的合成(亮氨酸是山羊细胞维持生命活动必不可少的一种必需氨基酸)，基因GFP控制合成绿色荧光蛋白。
高中生物选修三基因工程作业
1．苏云金杆菌(Bt)能产生具有杀虫能力的毒素蛋白。
图21是转Bt 毒素蛋白基因植物的重组DNA 形成过程示意图；图22是毒素蛋白基因进入植物细胞后发生的两种生物大分子合成的过程，据图回答下列问题。
（1）将图21①的DNA 用Hind Ⅲ、BamH Ⅰ完全酶切后，反应管中有 种DNA 片段。
过程②需要用到 酶。
（2）假设图21中质粒原来BamH Ⅰ识别位点的碱基序列变为了另一种限制酶Bcl Ⅰ的碱基序列，现用Bcl Ⅰ和Hind Ⅲ切割质粒，则该图21中①的DNA 右侧还能选择BamH Ⅰ进行切割，能获得所需重组质粒吗？并请说明理由 。
（3）若上述假设成立，并成功形成重组质粒，则重组质粒A ．能被BamH Ⅰ也能被Hind Ⅲ切开B ．能被BamH Ⅰ但不能被Hind Ⅲ切开C ．不能被BamH Ⅰ也不能被Hind Ⅲ切开D ．能被Hind Ⅲ但不能被BamH Ⅰ切开 （4）图22中α链是 。
不同组织细胞的相同DNA 进行过 程③时启用的起始点 （在“都相同”、“都不同”、 “不完全相同”中选择），其原因是 。
（5）要想检测导入的Bt 毒素蛋白基因是否表达，在分子水平上可 用 进行检测，如果出现杂交带，说明目的基因已经表达 蛋白质产品，转基因植物培育成功。
2．基因工程又叫做基因拼接技术。
该技术能够通过对生物的基因进行改造和重新组合，产生出人类所需要的基因产物。
自20世纪70图1和图2示基因工程部分操作过程：⑴从表中四种酶的切割位点看，可以切出平末端的酶是__________。
⑵将目的基因与质粒DNA 缝合时，两条链上的磷酸、脱氧核糖在__________酶的作用下连接起来，形成磷酸二酯键；两条链间的碱基对通过__________连接起来。
⑶图2中的质粒分子可被表中__________酶切割，切割后的质粒含有_____个游离的磷酸基团。
⑷若对图中质粒进行改造，插入的Sma I 酶切位点越多，质粒的热稳定性越_____。
高中基因工程 典型例题
关于酶切的几道题：1. (08江苏生物)将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。
以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。
请根据以上图表回答下列问题。
（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是。
（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。
表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。
请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？__________。
（3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？。
（4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为。
（5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。
①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。
②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。
1.（1）耐高温2）引物对B （3）否（4）农杆菌（5）①2 ②1解析：答题需要以准确画出黏性末端序列为前提2、(08海南)图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，amp R为青霉素抗性基因，tct R为四环素抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。
已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。
（1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有_________________________________、_________________________________、______________________三种。
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关于酶切的几道题：1. (08江苏生物)将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。
以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。
请根据以上图表回答下列问题。
（1）在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是。
（2）PCR过程中退火（复性）温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。
表1为根据模板设计的两对引物序列，图2为引物对与模板结合示意图。
请判断哪一对引物可采用较高的退火温度？__________。
（3）图1步骤③所用的DNA连接酶对所连接的DNA两端碱基序列是否有专一性要求？。
（4）为将外源基因转入马铃薯，图1步骤⑥转基因所用的细菌B通常为。
（5）对符合设计要求的重组质粒T进行酶切，假设所用的酶均可将识别位点完全切开，请根据图1中标示的酶切位点和表2所列的识别序列，对以下酶切结果作出判断。
①采用EcoRⅠ和PstⅠ酶切，得到_________种DNA片断。
②采用EcoRⅠ和SmaⅠ酶切，得到_________种DNA片断。
1.（1）耐高温2）引物对B （3）否（4）农杆菌（5）①2 ②1解析：答题需要以准确画出黏性末端序列为前提2、(08海南)图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRI、BamHI的酶切位点，amp R为青霉素抗性基因，tct R为四环素抗性基因，P为启动因子，T为终止子，ori为复制原点。
已知目的基因的两端分别有包括EcoRI、BamHI在内的多种酶的酶切位点。
（1）将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有_________________________________、_________________________________、______________________三种。
若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行。
（2）用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞接种到含四环的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是。
（3）目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是，其合成的产物是。
（4）在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶时。
2、（1）目的基因—载体连接物载体--载体连接物目的基因--目的基因连接物分离纯化（每空2分，共8分）（其他合理答案也给分）（2）载体--载体连接物（2分）；（3）启动子mRNA（每空2分，共4分）（4）EcoRI和BamHI（2分）（只答一个酶不给分）3.（2010届海淀高三第一学期期末）某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamH I三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。
利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。
（1）将含有目的基因的DNA与质粒分别用Sal I酶切，酶切产物用______________催化连接后，两个DNA片段的连接结果有种。
（2）在构建重组质粒时，应选用两种酶对进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。
（3）为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入__________________，理由是。
（4）将转入抗盐基因的烟草细胞培育成完整的植株需要用_____________________技术，愈伤组织经进而形成完整植株，此过程除营养物质外还必须向培养基中添加。
3.（1）DNA连接酶 3（2）SalⅠ、Hin dⅢ【共1分】质粒和含抗盐基因的DNA【各1分】（3）氨苄青霉素重组质粒中含抗氨苄青霉素基因而抗四环素基因被破坏【各1分】（4）植物组织培养细胞增殖和分化【各1分】植物激素（生长调节剂或生长素和细胞分裂素）4. (2011届海淀第一学期期中)图12示组织型纤维酶原激活剂（tPA）的生产过程。
二氢叶酸还原酶（DHFR）能催化二氢叶酸还原成四氢叶酸，缺少该酶的仓鼠卵巢细胞不能合成四氢叶酸，只能在添加胸苷、甘氨酸和嘌呤的培养基中生长，转入DHFR基因的缺失型细胞可在不含胸苷、甘氨酸和嘌呤的培养基中生长。
叶酸的类似物氨甲喋呤存在时，可与叶酸竞争DHFR并抑制它的活性，使细胞死亡。
当DHFR基因大量扩增并表达时，氨甲喋呤不足以结合全部的DHFR，细胞能在含有氨甲喋呤的培养基中存活。
请回答：（1）图中HindⅢ和EcoRⅠ示两种限制酶的酶切位点，将组织型纤维酶原激活剂（tPA）基因插入载体时，用HindⅢ和EcoRⅠ两种限制酶同时切＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，与只使用EcoRⅠ一种限制酶相比，其优点是可以防止＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。
同时，在酶切的反应体系中加入＿＿＿＿＿＿＿酶，即可得到＿＿＿＿＿＿。
（2）已知HindⅢ酶的识别序列是AAGCTT，酶切位点在AA之间，请写出此酶切割后的粘性末端：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿（3）载体上的DHFR基因在基因工程中称为＿＿＿＿＿＿＿＿，1号培养基中不应该加入＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿，2号培养基中应该加入＿＿＿＿＿＿＿＿＿，1号和2号培养基在功能上属于＿＿＿＿＿培养基。
（4）在2号培养基上存活的细胞还需进行＿＿＿＿＿＿＿＿活性的检测，才能大规模培养以获得相应的产品。
图124．（1）质粒和tPA基因（载体和目的基因）图22图23质粒或tPA 基因（载体或目的基因）自身连接 DNA 连接 重组载体（重组DNA ） （2）（3）标记基因 胸苷、甘氨酸、嘌呤 氨甲喋呤 选择（4）tPA （组织型纤维酶原激活剂）关于筛选 5.（2010届海淀零模）多聚半乳糖醛酸酶（PG ）能降解果胶使细胞壁破损。
番茄果实成熟中，PG 合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜。
利用基因工程的方法减少PG 基因的表达，可延长果实保质期。
科学家将PG 基因反向接到Ti质粒上，导入到番茄细胞中，得到转基因番茄。
请据图22 回答：（1）提取目的基因①若已获取PG 的mRNA ，可通过获取PG 基因。
②在该基因上游加结构A 可确保基因的反向转录，结构A 上应具有 结合位点。
得到的目的基因两侧需人工合成BamH I 黏性末端。
已知BamH I 的识别序列如图23-甲所示，请在图23-乙相应位置上，画出目的基因两侧的黏性末端。
③重组质粒转化到大肠杆菌中的目的是 。
（2）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有 的培养基进行筛选，与此同时，为能更好地达到培养目的，还需在培养基中加入 。
培养24～48h 后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞 现象来鉴别细胞壁是否再生。
（3）由于导入的目的基因能转录反义RNA ，且能与 互补结合，抑制PG基因的正常表达。
若转基因番茄的保质期比非转基因番茄，则可确定转基因番茄成功。
（4）获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用方法使子代保持转基因的优良性状。
5．（1）①逆转录（或cDNA文库）②RNA聚合酶③大量复制目的基因（克隆目的基因）（2）卡那霉素植物激素（生长素和细胞分裂素）是否发生质壁分离（3）天然PG基因转录的mRNA 长（4）植物组织培养解析：根据DNA分子的结构得出反向基因与正常基因的转录产物间的关系正常基因转录出正常mRNA序列3’----UCCCG----5’启动子5’----AGGGC----3’启动子3’----TCCCG----5’反义基因转录出反义mRNA序列3’----CGGGA----5’启动子5’----GCCCT----3’启动子3’----CGGGA----5’6.科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。
下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。
请据图回答问题（1）步骤①和②中常用的工具酶是______________和______________。
（2）图中质粒上有抗氨苄青霉素和抗四环素两个标记基因，经过①和②步骤后，有些质粒上的______________基因内插入了外源目的基因，形成重组质粒，由于目的基因的分隔使得该抗性基因失活。
（3）步骤③是____________________________的过程，为了促进该过程，应该用______________处理大肠杆菌。
（4）步骤④将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养，目的是筛选______________，能在C中生长的大肠杆菌有_______种。
（5）步骤⑤：用无菌牙签挑取C上的单个菌落，分别接种到D（含氨苄青霉素和四环素）和E（含四环素）两个培养基的相同位置上，一段时间后，菌落的生长状况如图所示。
含目的基因的菌落位于_____（D、E）上，请在图中相应的位置上圈出来。
6.（1）限制性核酸内切酶 DNA连接酶（2）氨苄青霉素抗性基因（3）将重组质粒（目的基因）导入大肠杆菌（受体细胞） CaCl2溶液（4）含四环素抗性基因的大肠杆菌（含抗性基因的大肠杆菌给分，回答含目的基因的大肠杆菌不给分） 2 （5）E（评分标准：在两个菌落中圈一个也可给分）。