马铃薯植物组培
马铃薯组织培养
继代和生根培
继代和生根培养成功的马铃薯脱毒苗，经 ELISA （试剂盒）鉴定后（试管苗应每 3月检测一次，每年 4 次） 鉴定后，采用固体、液体培养基相结合方法扩繁。 取试管苗单节切段扦插在 （或平放）固体培养基上，每瓶可插 20 个左右茎段，经 20d左右发育成 5~10cm 高小植株，继续进行切段繁殖，此法速度快，每月可繁殖 5~8倍，试管苗多节接种在液体培养基上，进行浅层静止 液体培养。 滨 州 职 业 学 院培养基,MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸钙 10,3%蔗糖,20-25度,30004000LX,14-16小时光照，每 3周继代一次，单芽茎段约 1 厘米，可插也可平放，原则试管苗用 2年 — 3年。 滨 州 职 业 学 院滨 州 职 业 学 院
三、马铃薯组织培养参考资料
取材和培养一般多采用在室内发芽，芽经热处理 （ 38℃ ） 2周。然后取顶芽或侧芽 1厘米的茎尖，在自 来水下冲洗干净，无菌条件下先用 70％的酒精浸润组织 15-20秒， 再用 2％的次氯酸钠溶液浸泡 4--5min， 然后用无菌水冲洗 3次。把消毒好的芽放在解剖镜下仔细 剥离，逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，可以留 1-2个 叶原基,0.2— 0.3毫米，随即接种于 MS液体培养基上，每升加 0.1mgNAA, 0.2mgGA3,0.5BA,2%蔗糖,p H 值 5.8。培养条件,21~25℃,20003000 lx,12h/d。 2-3周愈伤,4-5周绿点,3--6月长成 2-3厘米小芽，越慢越好， 出芽很快的扔掉。
马铃薯的组织培养
生物工程学院 生物技术及应用12043班 李江涛
目录
一、马铃薯的简介 二、马铃薯的生物学习性 三、马铃薯组织培养参考资料 四、我的设计方案
马铃薯组织培养
马铃薯组织培养前言：马铃薯组织培养的意义 .马铃薯（Solanum tuberosum）属茄科茄属植物! 常见的育种途径有: 常规二倍体杂交法,四倍体水平的品种间杂交法,远缘种间杂交法 ,2n配子利用法。
这些途径都是通过有性生殖产生马铃薯变异体，通过系谱，回交，轮回选择的方法，需经过6-8代选出附合目标性状的新个体。
进入 20世纪90年代后，随着生物技术的深入发展，人类对植物细胞遗传行为，基因表达传递行为达到分子水平深入了解，作物育种工作者开始引入了除单纯户外有性杂交育种之外，又一育种方法室内体细胞无性系变异育种法，其中组织培养（tissue culture）诱导再生植株的突变就是最常用的一种。
当马铃薯外植体（茎尖脱毒分生组织）培养时，由于组培环境引发了细胞异染色质 DNA延迟复制, 产生了较田间自然突变率高出500倍的大量变异。
这一现象已越来越被马铃薯育种工作者所认可，并成为一条马铃薯育种的有效途径。
现从组织培养及组织培养在马铃薯育种上的发展历史，研究意义，研究方式以及未来展望等方面逐一论述。
马铃薯的市场效益（为什么选马铃薯作试验材料）马铃薯是世界上仅次于小麦、水稻和玉米的第四种主要农作物就单位面积出产的干物质而言，它高于小麦、大麦和玉米，就单位面积出产的蛋白质而言，分别为小麦、水稻和玉米的2.02，1.33和1.20倍。
目前我国马铃薯常年种植面积为467万公顷左右，鲜薯年总产量5 500万吨，居世界第一位。
种植区域主要分布在黑龙江、吉林、内蒙古、山西、甘肃、青海、云南、贵州、四川等广大地区。
但是我国的马铃薯加工业发展十分缓慢，基本上以鲜食为主，少部分用于传统食品加工和制取粗淀粉，深加工产品很少，而且加工生产规模小，工艺落后。
20世纪90年代国内以马铃薯为原料的食品工业进入了一个蓬勃发展的时期然而产品与外同类产品相比，无论是在色泽、口味、品质，还是在包装上均存在一定差距。
马铃薯块茎水分多、脂肪少、单位体积的热量相当低，所含的维生素C是苹果的10倍，B族维生素是苹果的4倍，各种矿物质是苹果的几倍至几十倍不等，土豆是降血压食物膳食中某种营养多了或缺了可致病。
马铃薯组培生产流程
马铃薯组培生产流程介绍马铃薯组培是一种无性繁殖技术，通过将马铃薯的离体培养提供适宜的营养条件和激素刺激，使其快速增殖。
组培技术被广泛应用于马铃薯种苗生产、病毒清除和基因转化等领域。
下面将详细介绍马铃薯组培的生产流程。
步骤一：材料准备与消毒1.选择适宜的母本马铃薯作为组培的起始材料。
母本应选取无病虫害、无病毒污染、形状规则的健康马铃薯。
2.将选取的母本进行消毒处理。
首先用水清洗去除表面的土壤和杂质，然后将马铃薯浸泡在10%含氯消毒液中，保持30分钟。
之后，用去离子水反复冲洗3-4次，确保彻底去除消毒剂。
步骤二：组织切割1.将消毒后的马铃薯切割成5mm×5mm的组织块，每块含有一个芽眼。
切割时要确保刀具和工作台的消毒，避免污染。
2.切割好的组织块放入含有抗生素的高浓度杀菌剂中，进行再次消毒处理，时间为30分钟。
步骤三：愈伤组织诱导1.将消毒后的组织块放置在含有适宜激素的培养基上，培养基中添加有机植物激素，如生长素（NAA）和维生素B6（PA）等，以促进愈伤组织的形成。
2.将培养瓶或培养皿密封，放置在光照适宜、温度适宜、湿度适宜的培养箱中。
通常，培养温度为20-25摄氏度，光照强度为3000-5000勒克斯，湿度控制在60-70%。
步骤四：愈伤组织块增殖1.经过适当时间的培养（通常为4-6周），愈伤组织块开始增殖。
此时，可以将它们转移到新的含有低浓度激素的培养基中，以促进增殖。
常用的增殖培养基包括MS培养基、SH培养基等。
2.愈伤组织块的增殖可分为两个阶段，即缩小增殖和快速增殖。
在缩小增殖阶段，愈伤组织块的增殖速度较慢，所需时间较长。
而在快速增殖阶段，增殖速度显著加快，愈伤组织块数量迅速增加。
步骤五：愈伤组织分化1.当愈伤组织块增殖至一定数量时，可以进行愈伤组织的分化。
将增殖后的组织块转移到含有适宜激素的培养基中，培养出新的植株。
2.分化培养基的选择要根据所要培养的植株部位而定。
例如，若要培养出根系，可选择含有较高浓度生长素（IBA）的培养基；若要培养出茎叶，可选择含有较高浓度细胞分裂素（KT）的培养基。
马铃薯组织培养综述
马铃薯组织培养技术综述摘要：马铃薯是我国重要粮食作物之一，其组织培养技术日益成熟，目前已大量应用于生产实践和科学研究。
掌握马铃薯组织培养的基本原理与方法，了解影响培养结果的因素，有利于完善培养技术，解决马铃薯组织培养过程中的常见问题如污染、褐变和玻璃化等。
目前国内专述马铃薯组织培养技术的文献不多，本文参考相关研究，就上述方面对马铃薯组织培养技术进行综述。
关键词：马铃薯；组织培养；影响因素；常见问题。
1 前言植物组织培养是指从植物体内取出组织或细胞，在离体的条件下模拟体内的生理环境，使其生存、生长、繁殖，近年来在生产实践上显示出广泛的应用前景。
马铃薯属茄科茄属植物，是粮菜兼用作物，产量仅次于水稻、小麦、玉米，居世界第四位，我国是种植面积最大的国家【1】。
马铃薯生产中多采用块茎进行无性繁殖，在其繁殖过程中，易受病毒和细菌侵染导致产量下降，经数代积累可使种性退化【2】。
通过植物组织培养技术，可以生产马铃薯的脱毒苗，缩短其生长周期，进行批量快速繁殖。
除了满足生产实践的需要，在科学研究上马铃薯是细胞培养和农杆菌介导转化的模式植物之一。
因此，马铃薯组织培养是植物组织培养技术的重要应用领域。
2 植物组织培养概述植物细胞具有全能性。
细胞全能性是指植物体任何一个细胞都携带者一套发育成完整植株的全部遗传信息，在离体培养情况下，这些信息可以表达产生出完整的植株。
根据这一理论，植物组织培养技术在20世纪初建立起来，至今发展已比较成熟，而且随着研究的深入不断涌现新的技术。
植物组织培养需要经过脱分化和再分化的过程。
分化了的植物根、茎、叶细胞，通过脱分化培养可以产生愈伤组织。
愈伤组织是一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团。
愈伤组织经过进一步的分化培养，提供不同的营养和激素成分，又可再生出完整的小植株。
植物组织培养常见应用领域包括脱毒和快速繁殖、育种研究、低温储存及种质库的建立、药物及其他生物制剂的工业化生产等【3】。
3 马铃薯组织培养技术3.1基本方法3.1.1表面灭菌由于在培养基上，真菌和细菌的生长远远快于植物试材，导致过盛生长而杀死植株。
马铃薯组培生产流程
马铃薯组培生产流程马铃薯组培生产流程马铃薯是世界上重要的粮食和工业作物之一。
传统的马铃薯种植方法存在许多问题，如土壤污染、病虫害等，给农民带来很大的经济损失。
为了解决这些问题，马铃薯组培生产技术应运而生。
本文将介绍马铃薯组培生产的主要流程。
1. 材料准备组培生产的第一步是收集马铃薯的组织细胞。
通常，我们会选用新鲜、健康的马铃薯作为材料。
然后，将马铃薯切成小块，用含有植物生长素和细胞分裂素的培养基进行处理。
2. 培养基制备培养基是组培生产的关键。
它提供了细胞分裂和植物成长所需的营养和激素。
通常，马铃薯培养基中含有葡萄糖、无机盐、维生素和胰蛋白胨等物质。
3. 细胞培养与增殖将经过处理的马铃薯细胞块放入培养基中，并在暗室中进行保温处理，使其不受外界干扰。
此时，细胞逐渐长成植物体，并逐渐增殖。
4. 植株分化将培养好的细胞块移植到含有植物生长素和细胞分裂素的新培养基中，可以促进细胞的不定向分化，形成不定芽、根和茎。
然后，将不定芽、茎、叶和根分开移植，进行标准化处理和定向培养，最终形成真正的植株。
5. 普通育苗和大田试验植株培育好之后，将其移植到普通的苗床中进行管理。
在它们长成健康的马铃薯苗后，会进行大田试验，以确保它们在真实环境下的适应性和生产能力。
6. 入市销售经过上述步骤的马铃薯植株可以投放市场销售，它们可以用来繁殖更多高质量的马铃薯，并在硬化、销售和应用等环节进行处理。
通过以上流程，马铃薯组培生产技术可以确保生产出高品质、高产量的马铃薯，从而提高效率降低成本，增加农民收入。
这种技术也可以避免植物疾病的传播和土壤污染等问题，减少对环境的影响，是一种非常值得推广的作物生产技术。
马铃薯组织培养技术
Zhongfeinongyao
马铃薯组织培养技术
刘志强
一、马铃薯的组织培养
1、种薯的茎尖脱毒 植 物 组 织 培 养 也 叫 PlantTissueCul－ ture，广义指在特定条件下，植物生长过程
灯火焰下 10cm 以内接入到三角瓶内，每 遍，要求认真细心，避免折断薯苗，清洗后 瓶接种 10 段左右，火焰封口后，贴上标签， 的薯苗再置于一定浓度的杀菌剂溶液中浸 标签上要标注接种时间、品种及接种人。重 泡 5min 后，立即移栽。按 6～8cm 的株距移
接种人员先换上拖鞋、剪掉手指甲、用
香皂洗净双手后，进入到缓冲间内。换上拖 鞋及工作服后，进入接种室，用 75%的酒精 对双手、套袖进行喷雾消毒，然后就座于超
移栽前一天揭开封口膜。移栽时，小心
的用手洗去根部附着的培养基，水温在 22℃左右，去掉培养基的苗再用清水洗两
活。因此要采取防治手段，主要有下面几 点：①使用固体培养方法，提升琼脂浓度，
品，每次接种前需将超净工作台用紫外灯 改变了人为的条件，短时间中组培苗适应 组织结构发生变化，生理功能产生异常，主
进行杀菌半小时左右，20min 后工作人员 不能适应。因此，组培苗必须移出培养室， 要体现为分化能力下降，不能独立增殖成
方可进入。
在室温下炼苗 3-5 天。
芽或者生根，移栽到自然界中更是很难成
管斜面上，每个试管内接种一块愈伤组织， 生长出浓密而粗壮的不定根，以提高组培 操作环境方法减少真菌产生。另外植物组
在 25℃左右的培养室进行培养。脱毒培养 苗对外界环境的适应力及驯化移栽的成果 织培养过程中，内源菌污染的处理工作比
基一般为 MS 培养基中加入 0.5mg·L-16- 率，获得更多高质量的商品苗。马铃薯组培 较复杂。该污染指外植体材料内部中微生
马铃薯组培实验室总体管理细则
马铃薯组培实验室总体管理细则
1、实验室在任何时候必须保持干净整洁，不允许在实验室内吃零食，工作完成后带走室内所有垃圾。
2、各无菌室和组培室及接种使用的镊子、剪刀、工作服、口罩等必须定期消毒，工作人员出入无菌室和组培室也必须严格做好消毒工作，严禁在实验室周围吸烟。
3、无菌操作人员必须严格按操作规程进行，标好名称、代号、时间、接种人员信息等，并由管理人员及时清点计数。
进行品种分类登记，并及时分类分批上架。
培养架上排放的材料必须规整，充分利用培养架的空间。
4、每瓶接种20株脱毒苗，每人的接种速度必须达到70瓶以上，污染率必须控制5%以内，
5、不浪费材料，下班时及时切断电源、水源，关锁好门窗，如发现灯亮或水池漏要追究当班人责任。
在上班过程中如发现隐患问题组长必须及时上报。
6、实验室内不得随意领闲杂人员出入，如工作需要、务必做好消毒工作
7、培养基制备人员严格按操程序进行，做到安全、及时、有效，药品的称量，必须准确，并做到及时登记，母液的配置和存放必须按规定进行。
如在实际工作中发现的问题及解决办法：
1对实验室常用的超净工作台、灭菌锅、蒸馏水器，冰箱、
日光灯和紫外灯等定期派人进行检修。
一些常用配件随时损坏将会导致生产延误，应多备些易损易耗的配件。
2.实验室内的湿度过大，墙面与天花板出现长霉现象，霉菌大面积繁殖会引起脱毒苗的大面积污染，极大地影响生产进度，最好能在易长霉菌的地方铺上防潮材料。
马铃薯组织培养
马铃薯组织培养1、繁殖瓶苗将待繁脱毒苗在无菌条件下每叶节切一段，接种在仅含大量元素、微量元素和铁盐的无激素M S固体或液体（可用纸桥）培养基的组培瓶中，置培养室内培养。
培养条件为：光照1000-3000lx,光周期13-16h/d,培养温度（25±2）℃，空气相对湿度50%-60%，自然通风。
叶节段接种30-50d后长成3-5片叶的幼苗。
记录苗芽发生时间，生长状况，污染率。
再按照上述方法重复进行扩繁，直到达到要求繁殖数量为止。
2、繁殖微型薯将上述具有3-5片叶幼苗，加入液体培养基（MS+BA2-10mg/L)或（MS+BA2-10mg/L+IAA1m g/L+CCC100-500mg/L+糖80-100g/L),放入培养室，遮光全黑暗或光照时数少于8h/d，温度（20±2）℃，空气相对湿度50%-60%，自然通风。
经40-70d后，在植株叶腋处长出微型薯。
记录微型薯发生时间，生长状况，污染率。
马铃薯组织培养及原原种生产技术摘要：本文作者根据自己多年的工作经验，详细地介绍了马铃薯组织培养方法和原原种生产技术。
关键词：马铃薯组织培养原原种生产技术病毒和类病毒的累积性感染是引起马铃薯种性退化的重要因素，而通过组织培养获取无病毒种薯来恢复种性的方法已被马铃薯生产地区广泛采用。
现将马铃薯组织培养方法和原原种生产技术介绍如下：1 马铃薯组织培养1.1外植体培养从已催出芽（芽长一般2—4cm）的干净健康马铃薯块茎上掰下芽，用自来水冲洗干净，放入0.1—0.15%的升汞溶液中浸泡8—10分钟，在超净工作台上消毒完后，放入无菌水中浸泡6次，每次5分钟，然后接种到MS＋6－BA1.5mg/L （毫克/升）＋GA30.5mg/L＋IBA0.5mg/L＋琼脂8g/L＋蔗糖30g/L（PH值为5.8）的培养基上，每个培养瓶接种1—5个外植体。
1.2茎尖剥离及初代培养外植体培养20天后，在超净工作台上解剖镜下用解剖针将生长点0.1——0. 5mm部分剥离出来，转接到MS＋肌醇100mg/L+6－BA1.5mg/L＋GA30.5mg/L＋泛酸钙1.5mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂8g/L＋活性炭0.17g/L（PH值为5.8）的培养基上，每个培养瓶接种4—5个生长点。
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马铃薯的块茎组织培养的研究
生命科学学院生物工程132班组长：林伟平组员：温楚婷凌琦雯刘钰荧
一,实验目的
(1)以马铃薯的块茎为材料，研究经过器官分化或愈伤组织增殖与再分化途径，获得较多的试管苗，掌握植物快速繁殖的基本方法和过程。
(2)观察和分析不同糖类对外植体愈伤组织诱导，增殖和器官分化的影响。
二,实验原理
在植物组织培养体系中，从外植体形成再生植株有不同的再分化途径，会受到培养基中不同浓度的糖的影响。
植物的快速无性繁殖是指以合适的外植体为起始材料，在无菌条件下，通过合适的培养技术，在有限的空间，短时间内快速生产大量植株的技术。
三,实验材料，试剂与器具
(1)实验材料：马铃薯块茎
(2)试剂：实验十一配制的各种培养基母液，蔗糖，葡萄糖，琼脂，蒸馏水，1mol/LHCl,1mol/LNaOH,HgCl或次氯酸钠，吐温20，75%乙醇或20g/L新洁尔灭，无菌水等。
(3)器具：高压灭菌锅，分析天平，酸度计，光照培养箱，微波炉，冰箱，培养架，果酱瓶，烧杯（1000mL,500mL,100mL,50mL）,移液管，量筒，不锈钢镊子，剪刀，解剖刀，脱脂棉，培养皿，称量纸，记号笔，标签纸，药匙，玻璃棒，洗耳球，洗瓶，电炉，酒精灯
四,实验内容
1,确定培养基配方，MS+2，4-D1.0mg/L+6-BA1.0mg/L+8g/L琼脂+不同浓度的葡萄糖/不同浓度的蔗糖（分别为1%，2%，3%，4%的葡萄糖或蔗糖）
3,移液与溶化：将所需的各储存母液按顺序摆放好，将洁净的量筒，烧杯，移液管，玻璃棒，漏斗等放在指定的位置，准备好蒸馏水及瓶盖，包装纸等，取100mL小烧杯一只，用50mL 量筒量取大量元素，用各母液专用移液管分别吸取微量元素母液，铁盐母液，有机附加物母液，2，4-D母液，6-BA母液。
取1000ml烧杯一只，先用量筒取1000mL蒸馏水倒入烧杯中，用记号笔画好液位线，将蒸馏水倒出一半，准确称取8g琼脂倒入烧杯中，置于电炉煮沸，待琼脂完全溶化后，加入10g葡萄糖，充分溶解后，将准备好的含大量元素，微量元素，铁盐，有机附加物和植物生长调节物质的母液混合物倒入烧杯中，用蒸馏水将盛过母液混合物的小烧杯洗三次，一并倒入1000mL烧杯中，加热至沸腾，将烧杯远离火源，并加蒸馏水定容至设定的液位线。
4,调节pH：用酸度计测定培养基的pH，用1mol/LHCl或1mol/LNaOH溶液将培养基的pH调整至5.8到6.0。
调整时，应用玻璃棒不断搅拌。
5,分装：将溶化的培养基趁热均匀的分装于果酱瓶，每瓶30mL培养基，分装3瓶，随即封
口。
6,重复步骤3到步骤5，步骤3中分别加入20g葡萄糖，30g葡萄糖，40g葡萄糖，10g蔗糖，20g蔗糖，30g蔗糖，40g蔗糖。
7,含有每个浓度的糖的培养基分装三个果酱瓶。
一共24个果酱瓶。
8,将分装好的培养基及用报纸包扎好的剪刀，镊子，解剖刀，含有滤纸的培养皿和果酱瓶装蒸馏水等，置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121℃，压力为1.1Kg/cm2,灭菌时间20min。
9,对外植体进行消毒，接种：（1）准备工作，接种前，用75%乙醇棉球擦拭超净工作台台面，将培养基，无菌水及接种用具，废液杯等放入超净工作台台面适当的位置，打开超净工作台紫外灯，照射30min后关闭，然后打开风机，10min后，再打开日光灯进行无菌操作。
（2）外植体表面消毒与整理，将马铃薯块茎在自来水下冲洗干净，用小刀切取块茎芽眼部位，置于50mL烧杯中，用75%乙醇浸泡30s后，立刻除去乙醇，在超净工作台上，在烧杯中加入含有1到2滴吐温20的0.1%氯化汞溶液，浸泡10min，倒去消毒液，用无菌水洗三次，将马铃薯块茎置于经灭菌处理过的垫有无菌滤纸的培养皿中，使用镊子和解剖刀将马铃薯切成小块。
（3）接种，在酒精灯上方，左手握住果酱瓶，右手打开瓶盖，将瓶盖朝上置于台面，右手用镊子将马铃薯块茎平放于培养基表面。
（4）培养与观察，将接种后的培养瓶置于组织培养室内，有光培养。
五，实验结果统计分析
蔗糖和葡萄糖的浓度各四个，分别为1%,2%,3%,4%,每个浓度做三个，一共二十四个果酱瓶，每四天观察一次。
愈伤组织诱导结果
器官分化与植株再生结果
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