体内药物分析复习资料

1 简述体内药物分析方法建立的一般步骤。

确定合适的分析方法→纯品试验→空白溶剂试验→ 空白生物基质试验→模拟生物基质试验→实验生物样品的测定（预处理→分离分析→数据处理）
3 为什么进行生物样本预处理？
（1）使药物从缀合物及结合物中释放出来，以测定药物的总浓度；
（2）生物样品介质组成复杂，干扰多，而药物组分是微量的，必须先经过预处理，使纯化富集；（3）为了适应和符合测定方法所要求的灵敏度；
（4）为了防止分析仪器的污染、劣化，提高测定灵敏度、准确度、精密度和选择性等。

4 影响血药浓度的因素。

（1）机体因素：包括生理、病理、遗传因素
（2）药物因素：包括剂型因素、药物相互作用
（3）其他因素：大气污染、食品、烟、酒、茶等
5 体内药物分析的特点。

（1）干扰杂质多（2）被测浓度低（3）供试样品量少（4）待测物的易变性（5）要求较快提供结果（6）要有一定的仪器设备（7）工作量大
6 请简述液液萃取法、蛋白沉淀法和固相萃取法的优缺点。

（1）液液萃取法：
优点：有选择性缺点：存在乳化现象
（2）蛋白沉淀法：
优点：快速简便缺点：待测物含量低时，不适用。

（3）固相萃取法：
优点：①引入干扰物质少②完全避免乳化的形成③在优化条件下，有较高的萃取率④可以用少量的样品⑤柱子可弃，无污染⑥使用的溶剂大多可以与水混合⑧易于自动化。

缺点：①价格昂贵②技术要求高③批与批之间有差异④柱子易阻塞，影响分离效果⑤样品需要经过预处理
7 液液提取法的原理、影响因素及提取技术。

原理：药物与干扰成分在互不相容的两相溶剂中的分配系数不同，选择性地提取生物基质中的药物。

影响因素：水相pH。

提取溶剂种类、离子强度。

提取技术：通常在戴塞的试管中进行，多半进行一次提取，用酸碱回提时也只是一次，不考虑提取尽药物。

8 液固提取法的原理，固相萃取的主要步骤，及固相萃取的影响因素。

原理：将样品液通过合适的固相小柱，利用药物与杂质对固相小柱亲和力的差别，用适当溶剂冲洗、洗脱，使药物得到净化。

步骤：（1）固相柱选择（2）固相柱处理（3）样品液上样（4）分离净化（5）待测物洗脱。

提取率、选择性的影响因素：（1）流速（2）样品装载量（3）固相柱使用要求（4）样品上柱前的处理。

8 生物样品分析中，常用的分析方法及其适用测定对象。

①色谱分析法，对象：蛋白质，多肽等生物大分子类药物或内源性物质的检测与分析
②免疫分析法，对象：应用于临床TDM及生物大分子类物质的药物动力学及其相关研究
③生物学方法，对像：用于抗生素类药物的体内分析
9 需要进行哪些稳定性试验？
①短期室温稳定性②长期储存稳定性③冻融稳定性④储备液稳定性⑤待测溶液稳定性⑥样品处理过程稳定性
10 生物样品制备时应考虑哪些问题？
（1）药物的理化性质和存在形式（2）待测药物的浓度范围（3）药物测定的目的（4）选用的生物样品类型（5）样品预处理与分析技术的关系
12 生物样品选择的基本原则，常用的生物样品及其应用特点。

选择原则：
①必须能反映浓度与药效的关系②易于获得③便于处理④根据不同目的要求选取
常用生物样品及应用特点：
血液优点：较好体现药物浓度与治疗的关系
缺点：（1）损伤性取样，取样量有限制（2）需要专业人员操作
尿液优点：（1）非损伤性取样（2）药物浓度高（3）收集方便
缺点：（1）浓度变化大、与血药浓度相关性差（2）不易采集、保存（3）肾功不全、婴儿不宜用唾液优点：（1）非损伤性取样（2）含蛋白浓度低，易处理（3）C S/C P较恒定时，可代替血样进行TDM 及药物动力学研究
缺点：（1）适用药少（2）取样量变化大
毛发优点：（1）取样方便，可重复取样（2）通过测某特定代谢物区别滥用药、临床药（3）可获得长期用药信息
缺点：（1）预处理繁杂，干扰多（2）分析对象含量低，需精密仪器
14 体内药物分析方法的建立时需要通过哪些实验对色谱条件进行优化？
在进行分离条件筛选时，应考察生物基质中的内源性物质及代谢产物对分离与检测的干扰，步骤如下：
（1）空白溶剂试验—溶剂(方法特异性)（2）空白生物基质试验—(方法特异性)
（3）质控样品实验—方法效能指标（4）实际生物样品测试—代谢产物(方法特异性)
15 体内药物分析方法验证的内容。

效能指标
（1）特异性（专属性）—避免干扰（2）标准曲线（3）线性范围—覆盖所有浓度范围
（4）准确度—与实际状况相符（5）精密度—结果可重现（6）定量限—LLOQ和ULOQ 样品（1）稳定性—确保所有样品准确测定（2）提取回收率—确保准确度
16 生物样品的预处理技术有哪些？
A: 有机破坏法B: 除蛋白法C: 分离、纯化与浓集D: 缀合物水解E: 化学衍生化法
1 试简述常见的生物种类及其制备、贮存的方法。

答：种类及其制备：
（1）血液：血清样品：室温下放置至少30min到1h，待凝结出血饼后，用细竹捧或玻璃棒轻轻
地剥去血饼，以2500～3000rpm离心5min使与血细胞分离，分取上清液即得；血浆样品：置含有抗凝剂的试管中，混合，以2500～3000rpm离心5min使与血细胞分离，分取上清液即得；全血样品：置含有抗凝剂的试管中混合，不离心。

（2）尿液：测定一定时间内（如8h、12h或24h等）尿液中药物的总量将排泄的尿液全部储在起来，并记录其体积，取其一部分测定药物浓度，然后乘以尿量求得排泄总量。

尿液采集后需立即测定或加入适当的防腐剂保存。

（3）唾液：测量体积，静置分层后离心（3000rpm,5min)，取上清。

放置后分为泡沫部分、透明部分、灰乳白色沉淀部分。

（4）组织：先将组织均匀化，脏器组织用生理盐水清洗后，滤纸吸干表面水分，称重，加入一定量的水或生理盐水等，在匀浆机中匀浆，使被测药物溶解，之后可直接可取上清液，或用加入蛋白沉淀剂，加入一定量酸或碱，酶解法等方法萃取。

（5）毛发：清洗，反复清洗2～3次，再有机破坏，最后提取（甲醇、酸碱液、酶解）。

贮存：
（1）冰冻（短期保存：可置4℃冰箱中冷藏；长期保存：需置-20℃或更低温度冰柜中冷冻；临时来不及处理：先置冰屑或冰块中，然后再进行冷冻贮存；小体积分装贮存）。

去活性：
加防腐剂，改变生物样品pH。

2 简要说明直接沉淀法、液液萃取法、固相萃取法3种生物样品预处理技术的操作步骤、注意事项，并比较三者。

答：（1）直接沉淀法：将一定量生物样品加蛋白沉淀剂，涡旋，离心，取上清夜进样。

注意沉淀剂体积、沉淀剂的选择及对药物稳定性的影响（氧化、对酸不稳定）。

液液萃取法：取一定量生物样品加有机提取溶剂，涡旋，离心，取有机层，氮气吹干，流动相溶样进样。

注意⑴水相pH值，⑵提取溶剂选择，⑶有机相和水相的体积。

固相萃取法：将不同填料作为固定相装入微型小柱，当含有药物的生物样品溶液通过时，由于受到“吸附”或“分配”或“离子交换”或其它亲和力作用时，药物或杂质被保留在固定相上，用适当溶剂洗除杂质，再用适当溶剂洗脱药物。

注意⑴流速，⑵装样量，⑶缓冲液pH及用量。

（2）比较：直接沉淀法：待测物浓度较高，特异性和灵敏度达到检测要求时可用。

直接沉淀法可使结合型的药物释放出来，操作简单，但缺点在于容易发生乳化现象。

液液萃取法：有选择性，基于其提取溶剂的性质，能与多数内源性物质分离，缺点在于乳化现象的产生；有机溶剂易挥散、有毒性、对环保不利及不能自动化也是该法的不足之处。

固相萃取法：萃取剂与样品有很大的接触面，短时间内可有效的萃取，可自动化；可以避免乳化的形成；柱子可弃，无污染。

缺点在于价格昂贵，技术要求高，批与批之间有差异，柱子易阻塞，影响分离效果。