两性霉素B微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法适用性验证方案
微生物限度检查方法适用性试验方案验证方案组织与实施微生物限度检查方法适用性试验工作应由质量管理部门负责组织，质量管理部门有关人员组成验证小组，参与实施。
方案起草方案审核方案批准目录一、概述二、验证目的和风险评估三、验证内容四、方法判定五、再验证周期六、参考文献七、结果评价及结论1、概述：微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。
检查项目包括需氧菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌检查。
当建立产品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法的适用性试验和控制菌检查方法的适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌、霉菌和酵母菌数的测定和控制菌检查。
依照中国药典2015版，需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采用平皿法进行方法适用性试验。
2、试验目的和风险评估：验证目的：确认所采用的需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制菌检查方法适合我公司所生产产品的微生物限度检查。
风险评估：3、验证内容：3.1、培养基来源：确认人：确认日期：3.2、检查用培养基配制方法：确认人：确认日期：3.3、使用仪器确认人: 确认日期：3.4、验证试验用菌种：确认人：确认日期：3.5试验方法：取供试品10 ml加PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供试液。
需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌采用常规法。
3.6菌液的制备：3.6.1取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金饵，加入胰酪大豆胨液体培养基中置30～35℃培养箱中培养18～24h，取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养物1ml加入9ml0.9％无菌氯化钠溶液中，制成10-1 的菌液，依法10倍稀释至10～7，分取各菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基20ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。
两性霉素B微生物限度检查方法验证方案
两性霉素B微生物限度检查方法验证方案两性霉素B微生物限度检查方法验证方案目录一、验证目的二、验证参与人员与职责三、验证方案内容四、验证数据收集五、验证结果与评价要求六、验证方案批准两性霉素B微生物限度检查方法验证方案一．验证试验目的通过本次验证试验制定出一整套具体有效的方法，对两性霉素B原料的药微生物限度项目进行检查，其中包括细菌、霉菌、酵母菌计数方法，大肠埃希菌检查方法及沙门氏菌检查方法，通过这些检查方法对两性霉素B原料药的微生物限度进行严格控制，以确保产品质量。
二．验证参与人员与职责三．两性霉素B微生物限度检查验证方案内容1．验证对象：两性霉素B原料药2．验证依据：企业标准3．实验设备恒温培养箱30℃～35℃、35℃～37℃移液枪4．验证所使用的供试品、菌种及试剂供试品：两性霉素B原料药供试品批号：AI070401AI070402AI070501菌种：①大肠埃希菌[CMCC（B）44102]②金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26003]③白色念珠菌[CMCC(F) 98001]④乙型副伤寒沙门菌[CMCC(B) 50 094]试剂：营养琼脂培养基、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、4-甲基伞形酮葡萄苷酸培养基、四硫磺酸钠亮绿基础培养基、胆盐硫乳琼脂培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、蛋白胨、靛基质5．验证的测定方法5.1菌种培养及计数从大肠埃希菌斜面上取一环大肠埃希菌培养物，至营养肉汤培养基中，置30℃～35℃恒温培养箱中培养22小时。
从金黄色葡萄球菌斜面上取一环金黄色葡萄球菌培养物，至营养肉汤培养基中，置30℃～35℃恒温培养箱中培养18小时。
从白色念珠菌斜面上取一环白色念珠菌培养物，至改良马丁培养基中，置23℃～28℃恒温培养箱中培养24小时。
从沙门氏菌斜面上取一环沙门氏菌培养物，至营养肉汤培养基中，置35℃～37℃恒温培养箱中培养22小时。
2020微生物限度检查方法验证方案
2020微生物限度检查方法验证方案
2020微生物限度检查方法验证方案的具体步骤如下：
1. 确定验证样品：选择与待验证方法相似的样品，确保样品中含有合适的微生物，并且样品中不含任何可能影响验证结果的其他因素。
2. 准备验证样品：收集足够数量的样品，并且确保样品没有受到外界污染。
然后将样品分为若干等份，每份使用不同的验证方法进行检测。
3. 进行验证测试：按照待验证方法和验证方法的流程进行操作，进行微生物限度检查。
确保每一步操作准确无误，并且严格控制所有可能的干扰因素。
4. 检测结果分析：根据检测结果，对比待验证方法和验证方法的结果，评估两种方法的准确性、可靠性和适用性。
5. 数据统计和处理：对验证结果进行统计分析，包括计算平均值、标准差等。
如果有需要，可以使用统计学方法进行数据处理。
6. 结果评估：根据统计分析的结果，评估待验证方法和验证方法之间的差异。
如果验证方法的结果与待验证方法一致并且符合要求，则认为验证成功。
7. 编写验证报告：根据验证结果，编写验证报告。
报告应包含验证方法的详细
描述、样品信息、检测结果和分析、结论等内容。
以上是2020微生物限度检查方法验证方案的一般步骤，具体步骤可能会因实验目的、样品特性和验证要求等而有所不同。
在进行验证前，应仔细阅读国家相关规定和标准文件，确保验证过程符合法规要求。
同时，为了确保验证结果的准确性和可靠性，建议在验证过程中进行合适的实验室质量控制，例如采用质控菌株、系统重复性分析等。
两性霉素B效价测定方法的改进
两性霉素B效价测定方法的改进常艳;胡昌勤【期刊名称】《中国抗生素杂志》【年(卷),期】2013(038)006【摘要】目的改进两性霉素B效价含量测定方法,提高方法的可靠性与可操作性.方法管碟法.新制培养基pH6.0～6.2；pH7.0磷酸盐缓冲液(含1％聚山梨醇)；检定菌为啤酒酵母(ATCC9763);培养温度为(36±1)℃；培养时间为(20±2)hr;高、低剂量分别为10和5u/mL.结果抑菌圈大小符合规定,边缘清晰可以使用仪器进行测量;在1.09～10.90u/mL浓度范围内线性良好(回归方程:y=0.10763x+0.50076,r=0.99965);重现性与重复性好,日内精密度RSD=0.46％(n=6),日间精密度RSD=1.25％(n=12).结论可以作为两性霉素B的常规质量控制方法.%Objective Improve the potency determination method of amphotericin B for the reliability and operability of the method.Methods The cylinder plate method with new medium(pH6.0～6.2) and pH7.0 phosphate buffer (1％ tween-80) was used.The test organism was Saccharomyces cerevisiae (ATCC9763); Incubation lasted 18～22 hours at the temperature(36±1)C.The high and low doses were 10 and 5 amphotericin B units per mL respectively.Results The size of circular area (zone) of growth inhibition around the cylinder was moderate and thebrim of ones was clear.The linearity was achieved over the range of 1.09～10.90u/mL (y=0.10763x+0.50076,r=0.99965).The reproducibility and recovery were acceptable.The average relative standard deviation (RSD) ofintraday repeatability was 0.46％ (n=6) and the average RSD of inter-day repeatability was 1.25％ (n=12).Conclusion The method has the potential to become the routine quality control method for amphotericin B in pharmacopoeias.【总页数】6页(P434-439)【作者】常艳;胡昌勤【作者单位】中国食品药品检定研究院,北京100050;中国食品药品检定研究院,北京100050【正文语种】中文【中图分类】R978.5【相关文献】1.复方庆大霉素膜效价测定方法的改进 [J], 吴美华2.麦迪霉素效价测定方法的改进 [J], 蔡红3.绒促性素原料及其制剂生物效价测定方法的改进 [J], 赵淑媛;刘彩霞;方稚萍;蔡志真4.注射用两性霉素B脂质体效价测定法的改进 [J], 蔺娟;蔡阳;常艳5.家畜繁殖学实验中马绒毛膜促性腺激素效价测定方法的改进 [J], 邓亮;姜午旗;朱玉博;王维因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
微生物限度检查方法验证方案
微生物限度检查方法验证方案1.目的：为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准2.范围：本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。
3.规范性引用文件：根据《中国药典》2010年版二部附录Ⅺ J 微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。
4.验证实施：4.4.1 试验前的准备:4.4.1.1 试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜（孔径0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌30 min，在3天内使用。
4.4.1.2试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖苷酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制说明，用纯化水配制、分装后，在2小时内，放于湿热灭菌器中，在121℃，灭菌15 min，在3周内使用。
4.4.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期内的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min，在3周内使用。
4.4.2 试验菌的制备和稀释：4.4.2.1细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证用菌液：4.4.2.1.1取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少许接种至10ml营养肉汤中，在30～35℃培养18～24小时；取白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，在23～28℃培养24～48小时；取黑曲霉的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天。
药品微生物限度检查方法验证步骤及示教
药品微生物限度检查方法验证一般步骤1.样品及确定验证项目样品要求：不含菌或少量菌验证项目：根据药品用药途径、处方、制法确定。
细菌、霉菌及酵母菌计数验证（一般必作）；控制菌检查如为中药制剂必须查标准，根据用药途径、处方、制法确定控制菌检查项目。
特殊的如滴眼剂、用于烧伤、严重创伤等应根据制剂通则项下要求及微生物限度标准来确定。
2. 确定供试液制备方法3. 方法选择预试验（1）目的：确定样品对试验菌有无抑菌活性及计数验证各试验菌的回收试验方法。
（2）查资料，根据样品的功能、主治及所含成分等确定方法选择预试验方案。
（3）根据预试验结果确定各试验菌计数验证方法控制菌验证方法4. 验证试验：选择3个批号样品进行3次独立实验，证明方法的有效性；5. 据验证结果优化试验条件，建立微生物限度检查方法SOP。
6. 写出验证资料。
示教内容11.5.上午：菌液制备方法：一. 新鲜浓菌液制备（要求学员练习操作的内容）新鲜浓菌液接种：细菌大肠埃希菌[CMCC（B）44102]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]生孢梭菌[CMCC（B）64941]（厌氧梭菌）铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]培养基：营养肉汤3-5ml、硫乙醇酸盐流体培养基3-5ml接种及培养：1.分别取各试验菌半个--1个菌落分别接种营养肉汤（充分研匀、摇匀），36±1℃培养16-18小时。
2.生孢梭菌新鲜培养物取0.1ml接种硫乙醇酸盐流体培养基（临用前排氧）36±1℃培养18-24小时。
霉菌及酵母菌白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]培养基：改良马丁培养基3-5ml；改良马丁琼脂培养基斜面1.取白色念珠菌的菌落接种改良马丁培养基23-28℃培养24小时（可用36±1℃培养18-24）。
2.黑曲霉孢子悬液的制备：沾取黑曲霉孢子接种改良马丁琼脂培养（红字为示教内容基，培养5-7天待培养物黑色孢子生长（全部变黑，已制备好斜面培养物示教）加入5-10ml0.9%氯化钠溶液，小心振挡洗脱表面的黑色孢子1-2次，吸出洗脱液（注意不要触到菌丝体）即为孢子悬液。
微生物限度检查方法适用性试验方案
微生物限度检查方法适用性试验方案一、试验目的本试验旨在验证微生物限度检查方法的适用性，并评估其在实际样品中的准确性、精密度和灵敏度，以确保检测结果的可靠性。
二、试验范围本试验适用于各类药品、食品、环境以及生物制品等样品的微生物限度检查。
三、试验设备与试剂1. 培养基：本试验需使用适当的培养基，如大肠杆菌培养基、沙门氏菌培养基等，以满足特定微生物的培养需求。
2. 灭菌设备：试验中的培养基、工具及试剂需经过灭菌处理，以保证试验环境的无菌状态。
3. 微量移液器：用于准确取样和移液，确保实验的精确性。
4. 微生物培养箱：用于提供适宜的温度和湿度条件来培养微生物样品。
四、试验步骤1. 样品制备：按照相关规定和标准采集样品，并根据不同样品的特性进行适当处理，以便得到具有代表性的样品。
2. 培养基接种：将样品按照试验要求接种到相应的培养基中，并在一定条件下进行培养，以促使微生物生长。
3. 培养基培养：将接种过样品的培养基置于微生物培养箱中，根据微生物的生长特性进行培养，通常包括温度、湿度和培养时间等方面的控制。
4. 结果观察与记录：根据实验要求，观察培养基上是否有微生物的生长，并记录对应的观察结果。
5. 试验数据处理与分析：根据试验结果进行数据处理与分析，并评估微生物限度检查方法的适用性、准确性和灵敏度。
五、试验评价指标1. 准确性：通过与参考方法的比对，评估限度检查方法的准确程度。
2. 精密度：利用不同实验者、设备和试剂的重复试验，评估方法的可重复性和稳定性。
3. 确定度：评估方法的灵敏度和特异性，以确定方法对微生物的检测能力。
4. 可靠性：综合以上评价指标，评估方法在实际应用中的可靠性和适用性。
六、试验结果与分析根据试验评价指标，通过一系列试验和数据分析，我们可以得出以下结论：1. 限度检查方法在各类样品中的准确性良好，能够准确反映样品中微生物的含量。
2. 试验结果表明，方法具有较好的重复性和稳定性，不同实验者、设备和试剂的试验结果相对一致。
两性霉素B含量的HPLC测定
两性霉素 3是七烯大环内酯类抗真菌抗生素 E其 " G, O 含量测定在有关法定标准 N 中均采用 微 生物 法 测 定 其效 价 2 由于本 品常含 有 其 他 多 烯 类 且 具 一 定 生 物 活 性 的小组分化合物 2 因此采用微生物法测定效价不仅 误差大而且专属性差 E本方法在文献报道的 45 6 7方 N + 2 F O 法 的 基 础 上2 作 了 改 进2 使测定结果专属性和重现 性更好 E P 仪器与试剂 两 性 霉 素 3对 照 品 " " # #型 高 效 液 相 色 谱 仪 L 45 批号 % 由中国生物制品检定 所提 供 L 两 性 霉素 ( + , F # ) * 批号 ’ 和 注 射 用 两 性 霉 素 3( 批号 % # H * 3原 料 ( 均由先锋药业公司提供 L 磷酸 ’ H # + # " 2 ’ H # + # ) 2 ’ H # + # F * 二氢钾 2 二甲亚砜均为分析纯 L 甲醇 2 乙腈均为光学纯 E Q 色谱条件 以 采用 RS " ) ; F ; & F 2 T U V89 :柱 ( <<W+ <<2 D <* 为流动 # ; # " ? & & A, + * <= > 6磷 酸 二 氢 钾 溶 液 @ 乙 腈 ( N + O 相 2 检测波长 + 流速 " 柱温 , 进 " # ; # ? 2 # X 2 B <2 <> <C B 7 样量为 " # E D >
表P
放置时间 . / 8Q B + 5 + 7 + % ’ + % = + 室温 . ’ + R/ 峰面积 % 3 ’ % ’ % 3 % 5 ’ % 3 + 7 $ % $ ? 6 6 % $ ? ’ ? + " 3 % " + % " 3 % " ? 降解 . G/
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
两性霉素B微生物限度检查方法验证方案两性霉素B微生物限度检查方法验证方案目录一、验证目的二、验证参与人员与职责三、验证方案内容四、验证数据收集五、验证结果与评价要求六、验证方案批准两性霉素B微生物限度检查方法验证方案一．验证试验目的通过本次验证试验制定出一整套具体有效的方法，对两性霉素B原料的药微生物限度项目进行检查，其中包括细菌、霉菌、酵母菌计数方法，大肠埃希菌检查方法及沙门氏菌检查方法，通过这些检查方法对两性霉素B原料药的微生物限度进行严格控制，以确保产品质量。
二．验证参与人员与职责三．两性霉素B微生物限度检查验证方案内容1．验证对象：两性霉素B原料药2．验证依据：企业标准3．实验设备恒温培养箱30℃～35℃、35℃～37℃移液枪4．验证所使用的供试品、菌种及试剂供试品：两性霉素B原料药供试品批号：AI070401AI070402AI070501菌种：①大肠埃希菌[CMCC（B）44102]②金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26003]③白色念珠菌[CMCC(F) 98001]④乙型副伤寒沙门菌[CMCC(B) 50 094]试剂：营养琼脂培养基、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、胰蛋白胨大豆琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、4-甲基伞形酮葡萄苷酸培养基、四硫磺酸钠亮绿基础培养基、胆盐硫乳琼脂培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠、蛋白胨、靛基质5．验证的测定方法5.1菌种培养及计数从大肠埃希菌斜面上取一环大肠埃希菌培养物，至营养肉汤培养基中，置30℃～35℃恒温培养箱中培养22小时。
从金黄色葡萄球菌斜面上取一环金黄色葡萄球菌培养物，至营养肉汤培养基中，置30℃～35℃恒温培养箱中培养18小时。
从白色念珠菌斜面上取一环白色念珠菌培养物，至改良马丁培养基中，置23℃～28℃恒温培养箱中培养24小时。
从沙门氏菌斜面上取一环沙门氏菌培养物，至营养肉汤培养基中，置35℃～37℃恒温培养箱中培养22小时。
取1ml菌悬液至9ml 0.9%灭菌生理盐水中，制成10-1菌悬液。
取1ml10-1菌悬液至9ml 0.9%灭菌生理盐水中，制成10-2菌悬液。
依此类推至10-9菌悬液。
在薄膜过滤器中加入适量0.9%生理盐水，分别取1ml10-5、10-6、10-7、10-8、10-9菌悬液加至0.9%灭菌生理盐水中，抽干后用镊子取出薄膜，大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌薄膜菌面朝上贴在营养琼脂培养基上，置30℃～35℃恒温培养箱中培养24小时后计数，沙门氏菌薄膜菌面朝上贴在营养琼脂培养基上，置35℃～37℃恒温培养箱中培养24小时后计数，白色念珠菌薄膜菌面朝上贴在改良马丁琼脂培养基上置于23～28℃培养箱中培养48小时后计数，选取50～100cfu/ml 的稀释级菌液作为试验菌。
5.2 两性霉素B原料药细菌、霉菌、酵母菌计数5.2.1 供试品制备取供试品3g置锥形瓶中并加入30ml氯化钠—蛋白胨溶液，摇匀，制成10-1稀释级供试液。
吸取1ml10-1稀释级供试液置含有9ml氯化钠—蛋白胨溶液的试管中，制成10-2稀释级供试液。
取18个无菌平皿，分别注入1ml10-1 和10-2稀释级供试液，并在平皿中注入胰蛋白胨大豆琼脂培养基，每批供试品平行制备3份，分别快速加入50～100cfu大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌菌液，摇匀，凝固，置30～35℃培养箱中培养5天后计数。
5.2.3 供试品对照组取6个无菌平皿，分别注入1ml10-1 和10-2稀释级供试液，并在平皿中注入胰蛋白胨大豆琼脂培养基，摇匀，凝固，置30～35℃培养箱中培养5天后计数。
5.2.4 稀释剂对照组取3个无菌平皿，分别注入1ml稀释剂，并在平皿中注入胰蛋白胨大豆琼脂培养基，分别快速加入50～100cfu大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌菌液，摇匀，凝固，置30～35℃培养箱中培养5天后计数。
5.2.5 菌液组取3个无菌平皿，注入胰蛋白胨大豆琼脂培养基，并分别快速加入50～100cfu大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌菌液，摇匀，凝固，置30～35℃培养箱中培养5天后计数。
5.2.6菌落计数取出培养好的平皿，对细菌数、霉菌数、酵母菌数的总数计数。
5.2.7回收率计算试验组的菌回收率（%）=（试验组平均菌落数－供试品对照组平均菌落数）/菌液组的平均菌落数×100%稀释剂对照组的菌回收率（%）=稀释剂对照组的平均菌落数/菌液组的平均菌落数×100%稀释剂对照组的回收率应均不低于70%。
若实验组回收率均不低于70%，则照该计数方法测定供试品细菌、霉菌、酵母菌数；若任一次试验中回收率低于70%，则重新进行方法验证。
5.3 两性霉素B原料药大肠埃希菌检查5.3.1 供试品制备取供试品3g置锥形瓶中并加入30ml氯化钠—蛋白胨溶液，摇匀。
取10ml供试液置胆盐乳糖培养基中，并加入50～100cfu大肠埃希菌菌液，置35℃～37℃恒温培养箱中培养18～24小时。
取出胆盐乳糖培养基，取0.2ml培养物至MUG培养基中，置35℃～37℃恒温培养箱中培养24小时。
将MUG试管置366nm紫外光下观察，若管内培养物呈荧光，为MUG阳性；若不呈现荧光，为MUG阴性。
在培养管中加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。
试验组应呈MUG阳性、靛基质阳性，以此可确定本实验方法能有效检查出两性霉素B原料中的大肠埃希菌。
5.3.3 阴性对照组取10ml供试液置胆盐乳糖培养基中，并加入50～100cfu金黄色葡萄球菌菌液，置35℃～37℃恒温培养箱中培养18～24小时。
取出胆盐乳糖培养基，取0.2ml培养物至MUG培养基中，置35℃～37℃恒温培养箱中培养24小时。
将MUG试管置366nm紫外光下观察，若管内培养物呈荧光，为MUG阳性；若不呈现荧光，为MUG阴性。
在培养管中加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。
阴性对照组应呈MUG阴性、靛基质阴性，以此可确定本试验的专属性。
5.3.4 供试品对照组取10ml供试液置胆盐乳糖培养基中，置35℃～37℃恒温培养箱中培养18～24小时。
取出胆盐乳糖培养基，取0.2ml培养物至MUG培养基中，置35℃～37℃恒温培养箱中培养24小时。
将MUG试管置366nm紫外光下观察，若管内培养物呈荧光，为MUG阳性；若不呈现荧光，为MUG阴性。
在培养管中加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。
MUG阳性、靛基质阳性，判断供试品检出大肠埃希菌。
MUG阴性、靛基质阴性，判断供试品未检出大肠埃希菌。
5.3.5 稀释剂对照组取10ml稀释剂置胆盐乳糖培养基中，置35℃～37℃恒温培养箱中培养18～24小时。
取出胆盐乳糖培养基，取0.2ml培养物至MUG培养基中，置35℃～37℃恒温培养箱中培养24小时。
将MUG试管置366nm紫外光下观察，若管内培养物呈荧光，为MUG阳性；若不呈现荧光，为MUG阴性。
在培养管中加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。
稀释剂对照组应呈MUG阴性、靛基质阴性，以此可确定在操作过程中无大肠埃希菌污染。
5.4 两性霉素B原料药沙门氏菌检查5.4.1 试验组取供试品10g，加至200ml营养肉汤培养基中，并加入50～100cfu沙门氏菌菌液，置35℃～37℃恒温培养箱中培养22～24小时。
从培养瓶中取1ml培养物，置四硫磺酸钠亮绿培养基试管中，置35℃～37℃恒温培养箱中培养22～24小时。
从试管中沾取1～2环培养液划于胆盐硫乳琼脂培养基及曙红亚甲蓝琼脂培养基平板上，置35℃～37℃恒温培养箱中培养22～24小时。
5.4.2 阴性对照组取供试品10g，加至200ml营养肉汤培养基中，并加入50～100cfu金黄色葡萄球菌菌液，置35℃～37℃恒温培养箱中培养22～24小时。
从培养瓶中取1ml培养物，置四硫磺酸钠亮绿培养基试管中，置35℃～37℃恒温培养箱中培养22～24小时。
从试管中沾取1～2环培养液划于胆盐硫乳琼脂培养基及曙红亚甲蓝琼脂培养基平板上，置35℃～37℃恒温培养箱中培养22～24小时。
5.4.3 供试品对照组取供试品10g，加至200ml营养肉汤培养基中，置35℃～37℃恒温培养箱中培养22～24小时。
从培养瓶中取1ml培养物，置四硫磺酸钠亮绿培养基试管中，置35℃～37℃恒温培养箱中培养22～24小时。
从试管中沾取1～2环培养液划于胆盐硫乳琼脂培养基及曙红亚甲蓝琼脂培养基平板上，置35℃～37℃恒温培养箱中培养22～24小时。
5.4.4 结果观察观察培养妥的胆盐硫乳琼脂培养基及曙红亚甲蓝琼脂培养基平板，胆盐硫乳琼脂培养基平板上长又无色至浅橙色，半透明，菌落中心带黑色或全部黑色或无黑色的菌落，则呈阳性；曙红亚甲蓝琼脂培养基平板长有无色至浅橙色，透明或半透明，光滑湿润的圆形菌落，则呈阳性。
无菌生长或有菌生长但非沙门氏菌典型菌落，则呈阴性。
试验组应呈阳性，以此可确定此试验方法能有效的检出两性霉素B以此可确定本实验方法能有效检查出两性霉素B原料中的沙门氏菌。
阴性对照组应呈阴性，以此可确定本试验的专属性。
四．验证数据收集填写原始记录五．验证结果与评价方法要求在整个验证过程结束后，由负责验证的人员对以上所需的各验证数据进行收集，并根据验证结果对各验证项目进行评价。
然后交技质部审核后，对验证情况进行综合评价，最后报质量总监审核批准。
六．验证方案批准技质部对验证方案审核无误后，交质量总监批准，在准备就绪后，验证小组人员开始实施验证方案。