果胶酶活性测定实验报告
果胶酶实验报告
实验报告果胶酶在果汁生产中的作用一．实验目的1.探究不同温度对果胶酶活性的影响;2.探究不同 ph 对果胶酶活性的影响;3.探究果胶酶的用量对果汁生产的影响。
二．实验原理1.果胶酶的活性受温度影响。
处于最适温度时，活性最高。
果肉的出汁率、果汁的澄清度与果胶酶的活性大小成正比。
2.果胶酶的活性受ph影响，处于最适ph，酶的活性最高，高于或低于此值活性均下降。
果肉的出汁率、果汁的澄清度与果胶酶的活性大小成正比。
3.在一定的条件下，随着酶浓度的增加，果汁的体积增加；当酶浓度达到某一数值后，在增加酶的用量，果汁的体积不再改变，此值即是酶的最适用量。
三．实验材料与用具苹果、果胶酶、盐酸溶液、榨汁机、电子天平、恒温水浴锅、烧杯、量筒、试管、漏斗、温度计、玻璃棒、滤纸、滴管、三脚架四．实验步骤（一）温度对果胶酶活性的影响1.制备果汁选取一个中等大小的苹果( 约 200g) 洗净后，不去皮，切成小块，放入榨汁机中，加入约 200ml 水，榨取 2min，制得苹果泥。
量取一定体积的苹果泥，不同条件下处理后，用滤纸进行过滤即可得到果汁；2.取9支试管编号并分别加入等量的果汁和果胶酶；3.将9支试管分别放入30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃、65℃、70℃的水浴锅中保温10分钟；4.过滤果汁用量筒测量果汁的里量，并记录数据。
（二）ph 对果胶酶活性的影响1.制备果汁；2.取5支试管编号并分别加入等量的果汁和果胶酶；3.将5支试管放入40℃恒温水浴锅中加热；4.待试管内温度稳定后在5支试管分别加入ph分别为5、6、7、8、9的盐酸溶液；5.恒温保持10min；6.过滤果汁用量筒测量果汁的里量，并记录数据。
（三）果胶酶的用量对果汁生产的影响1.配制不同浓度的果胶酶溶液准确称取纯的果胶酶1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg，配制成相等体积的水溶液，取等量放入9支试管中，并编号1～9。
果胶酶实验报告
一、实验目的1. 学习果胶酶的提取方法。
2. 探究不同提取条件对果胶酶活性的影响。
3. 测定果胶酶的活性。
二、实验原理果胶酶是一种复合酶，主要包括果胶分解酶、果胶酯酶和果胶酶等。
它们能将果胶分解为低聚果胶、果胶酸和果胶单糖等，从而降低果胶的粘度，提高果汁的澄清度。
本实验通过提取果胶酶，并测定其活性，旨在了解果胶酶的提取方法和活性。
三、实验材料1. 材料：新鲜柑橘皮、硫酸铵、吐温-80、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、葡萄糖标准液、蒸馏水等。
2. 仪器：电子天平、高速离心机、恒温水浴锅、分光光度计、烧杯、量筒、移液器、试管等。
四、实验方法1. 果胶酶的提取（1）将新鲜柑橘皮洗净，去皮，切成小块。
（2）将柑橘皮与蒸馏水按1:10（质量比）的比例混合，置于高速离心机中，以4000 r/min离心10分钟。
（3）取上清液，加入硫酸铵，使硫酸铵的终浓度为0.5 mol/L，置于4℃冰箱中沉淀过夜。
（4）将沉淀物重新溶解于蒸馏水中，加入吐温-80，使吐温-80的终浓度为1%，混匀后置于高速离心机中，以4000 r/min离心10分钟。
（5）取上清液，用0.1 mol/L磷酸缓冲液（pH 6.0）透析，去除硫酸铵，透析时间为4小时。
（6）透析后的溶液即为果胶酶提取液。
2. 果胶酶活性测定（1）绘制标准曲线：以葡萄糖标准液为参比，采用紫外分光光度法测定葡萄糖浓度，绘制标准曲线。
（2）酶活性测定：取1 mL果胶酶提取液，加入0.5 mL 0.5%果胶溶液，混匀后置于恒温水浴锅中，在40℃下反应30分钟。
（3）终止反应：向反应体系中加入1 mL 1 mol/L NaOH溶液，混匀。
（4）测定吸光度：用分光光度计测定反应体系的吸光度，根据标准曲线计算葡萄糖浓度。
（5）计算酶活性：根据葡萄糖浓度和反应体系体积，计算果胶酶活性。
五、实验结果与分析1. 果胶酶提取结果通过实验，成功提取了果胶酶，提取液呈淡黄色，说明果胶酶提取成功。
果胶酶活力测定
实验目的： 一.实验目的 实验目的 1.学习果胶酶的作用和测定原理，并掌握其测定方法。 学习果胶酶的作用和测定原理，并掌握其测定方法。 学习果胶酶的作用和测定原理 2.了解果胶酶的应用 了解果胶酶的应用
实验原理： 二.实验原理： 实验原理
1.果胶酶的测定原理 果胶酶的测定原理 果胶酶水解果胶，生成半乳糖醛酸，后者具有还原性醛基， 果胶酶水解果胶，生成半乳糖醛酸，后者具有还原性醛基，可用 次亚碘酸法进行定量测定， 次亚碘酸法进行定量测定，所生成半乳糖醛酸的量可用于表示果胶 酶的活力。 酶的活力。 果胶酶 酶解反应： 果胶 酶解反应： 半乳糖醛酸 (C6H10O7 )
mol/L碘液 碘液5ml，摇匀，暗处放置 分钟，加2 mol/L硫酸 分钟， 硫酸2ml，用 碘液 ，摇匀，暗处放置20分钟 硫酸 ，
0.025 mol／L硫代硫酸钠滴定至淡黄色。 ／ 硫代硫酸钠滴定至淡黄色。 淀粉指示剂1 ， （4）接着加 ）接着加0.5%淀粉指示剂 ml，硫代硫酸钠继续滴定至蓝色消失 淀粉指示剂 为止，记下所消耗的硫代硫酸钠 数 为止，记下所消耗的硫代硫酸钠ml数（A）。 ）。 同样进行滴定， （5）空白对照取混合液 5 ml同样进行滴定，记录所消耗硫代酸钠的 ） 同样进行滴定 ml数（B）。 数 ）。
(4) 果胶酶溶液：取0.1g果胶酶用 ml柠檬酸 柠檬酸钠缓冲液溶解 果胶酶溶液： 果胶酶用10 柠檬酸 柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液溶解 果胶酶用 (5) 0.025 mol/L硫代硫酸钠溶液：0.62g固体定容至 硫代硫酸钠溶液： 固体定容至100ml ，稀释 倍 稀释20倍 硫代硫酸钠溶液 固体定容至 (6) 1 mol/L碳酸钠溶液，0.53g Na2CO3固体定容至 碳酸钠溶液， 固体定容至5ml 碳酸钠溶液 (7) 2 mol/L 硫酸，取5.6ml硫酸溶液缓慢加到 硫酸， 硫酸溶液缓慢加到94.4ml水中 硫酸溶液缓慢加到 水中
实验报告果胶酶
一、实验目的1. 了解果胶酶的提取方法；2. 掌握果胶酶活性的测定方法；3. 探究不同提取方法对果胶酶活性的影响。
二、实验原理果胶酶是一种复合酶，主要由果胶分解酶、果胶酯酶和半乳糖醛酸酶组成。
它能够分解植物细胞壁中的果胶，使植物组织变得柔软，便于提取。
本实验通过提取黑曲霉等真菌中的果胶酶，并测定其活性，以了解果胶酶的特性。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 黑曲霉菌种- 柑橘皮- 硫酸铵- 乙酸乙酯- 氯化钠- 碳酸氢钠- 磷酸氢二钠- 磷酸二氢钠- 果胶- 水浴锅- pH计- 离心机- 移液器- 烧杯- 试管- 滴定管- 酶标板- 酶标仪2. 实验试剂：- 磷酸盐缓冲液（pH 6.8）- 果胶酶提取液- 果胶溶液- 氯化钠溶液- 碳酸氢钠溶液- 磷酸氢二钠溶液- 磷酸二氢钠溶液四、实验方法1. 果胶酶提取（1）将黑曲霉菌种接种于装有马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基的培养皿中，培养48小时。
（2）将培养好的黑曲霉菌种接种于装有马铃薯葡萄糖液体培养基的三角瓶中，培养48小时。
（3）将培养好的菌液以4,000 r/min离心10分钟，收集菌体。
（4）将菌体用pH 6.8的磷酸盐缓冲液洗涤三次，去除杂质。
（5）将洗涤后的菌体加入硫酸铵溶液中，搅拌溶解，调节pH至7.0。
（6）将溶液以4,000 r/min离心10分钟，收集沉淀。
（7）将沉淀用pH 6.8的磷酸盐缓冲液洗涤三次，去除杂质。
（8）将洗涤后的沉淀加入乙酸乙酯溶液中，搅拌溶解，去除蛋白质。
（9）将溶液以4,000 r/min离心10分钟，收集沉淀。
（10）将沉淀用pH 6.8的磷酸盐缓冲液洗涤三次，去除杂质。
（11）将洗涤后的沉淀加入氯化钠溶液中，搅拌溶解，调节pH至7.0。
（12）将溶液以4,000 r/min离心10分钟，收集沉淀。
（13）将沉淀用pH 6.8的磷酸盐缓冲液洗涤三次，去除杂质。
（14）将洗涤后的沉淀加入碳酸氢钠溶液中，搅拌溶解，调节pH至7.0。
分光光度计法测定果胶酶活力的方法研究
分光光度计法测定果胶酶活力的方法研究果胶酶是指分解果胶质的多种酶的总称，它可分为内切型和外切型两大类。
果胶酶广泛应用于果品的加工工业中，主要作用是果品榨汁时降低果浆泥的粘稠度，提高榨汁效率、出汁率、果汁澄清度和稳定性等。
果胶酶的活力对果品的加工品质影响很大，因此测定果胶酶的活力显得尤为重要。
测定酶活力的方法主要有还原法、色原底物法、粘度法等，其中还原法中的3，5一二硝基水杨酸比色法(简称DNS法)具有操作简便，对试剂、仪器等条件要求不高等优点。
该方法是利用果胶酶在一定温度、时间和条件下水解果胶，释放出还原性D一半乳糖醛酸，与3，5一二硝基水杨酸共热产生棕红色的氨基化合物，即发生显色反应。
在一定范围内，水解生成D一半乳糖醛酸的量与吸光度成正比，与果胶酶活力成正比，通过分光光度计测定吸光度，可以计算出果胶酶的活力。
该方法(又称分光光度计法)简单易行，但操作中影响因素较多，往往影响测定结果的准确性。
本研究就测定中各影响因素进行了优化实验，试图提出果胶酶活力测定的最佳技术参数。
1 材料与方法1．1 材料与仪器乙酸钠(CH3 C00Na·3H2O)、冰乙酸(CH3C00H)、氢氧化钠、无水亚硫酸钠、酒石酸钾钠(C 4H4KNaO6.4H2O)、苯酚以上试剂均为市售分析纯；3，5一二硝基水杨酸国药集团化学试剂有限公司；D一半乳糖醛酸97％，沃凯化学试剂有限公司；果胶、果胶酶天津利华酶制剂厂生产；实验用水均为去离子水。
TU一1810紫外分光光度计北京普析；电热恒温水浴锅上海宝磊。
1．2 实验方法1．2．1 试剂配制1．2．1．1 乙酸一乙酸钠缓冲溶液(pH4．8) 首先制备0．2mol／L 的乙酸溶液和0．2mol ／L 的乙酸钠溶液，然后将0．2mol／L 乙酸溶液410．0mL 与0．2mol／L 乙酸钠溶液59 0．0mL混合均匀，用酸度计测定。
1．2．1．2 DNS试剂(3g／L) 称取3．00g 3，5一二硝基水杨酸，溶解于500mL蒸馏水中，再逐步加入10．4gNaOH、9l、0g C4H4KNaO6.4H2O、2．5g苯酚和2．5g无水亚硫酸钠，温水浴(不超过4 8oC)中不断搅拌，直至溶液清澈透明。
果胶酶的实验
“果胶酶在果汁生产中的作用”的实验设计和实施陆奇(Lu Qi)（江苏省扬州市新华中学 225009）摘要“果胶酶在果汁生产中的作用”这一课题要求学生尝试利用酶活力测定的一般原理和方法探讨酶在食品制造方面的应用，本文提供的案例介绍了如何在普通高级中学实验室允许的条件下开展此定量实验，还对课题的实验步骤及设计、实验结果分析等具体问题进行讨论。
关键字：果胶酶酶的最适用量最适温度最适pH值中国图书分类号：G633.91 文献标识码：C1、简介在果汁加工中，果胶不仅会影响出汁率，还会使果汁混浊。
果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，它可以使榨取果汁更容易，得到的果汁更澄清。
“果胶酶在果汁生产中的作用”是人教版普通高中课程标准实验教科书《生物技术实践》（选修一）专题四“酶的研究与应用”中的课题一，课题要求学生能设计实验探究温度和pH对果胶酶活性的影响以及果胶酶的最适用量，此内容与学生的日常生活联系紧密，并且又有必修一“探究影响酶活性的条件”作基础，因此对于学生来说并不困难，适合进行实际动手操作。
但是，课题比较偏重实验方案的设计，考虑的变量相对较多，还涉及到实验变量的梯度设计，要想获得理想的结果，必须进行反复多次的实验和摸索。
学生在探究过程中，对教材和参考资料中的实验设计、方案进行了讨论和实际操作，提出了不同的问题和改进措施，笔者选取了一个较合理的案例，小结如下，仅供参考。
2、实验材料与实验方法2.1 实验材料本实验选用苹果作为实验材料，榨成汁后使用；实验中使用的果胶酶购自上海蓝季生物技术有限公司，配成质量分数为2%溶液后使用。
2.2 实验方法2.2.1 实验总体设计图1本实验设计方案2.2.2 制备果汁的方法选取一个中等大小的苹果（约200g左右）洗净后，不去皮，切成小块，放入榨汁机中，加入约200mL水，榨取2min，制得苹果泥。
量取一定体积的苹果泥，不同条件下处理后，用滤纸进行过滤即可得到果汁。
2.2.3 果胶酶活性的检测指标果胶酶能将果胶分解成小分子物质，小分子物质可以通过滤纸，苹果汁的体积大小反应了果胶酶催化分解果胶的能力。
检测果胶酶活性
酶(enzyme)是在生物体活细胞中合成的。多数酶在细 胞内直接参与生物化学反应，少数的酶要分泌到细胞 外发挥作用。
2．酶是怎样提取出来的？
如果提取存在于细胞内的酶，需要破碎生物组织细胞，可 用破碎仪、研磨器或匀浆器等机械将组织细胞破碎，使酶 从活细胞中释放出来，进入细胞外的溶液中，经过滤、离 心制备成粗酶液。对于唾液淀粉酶、胰蛋白酶等分泌到细 胞外的酶，可以直接从动物分泌物或细胞外的组织间隙中 提取。
3．酶的活性是指什么?
是指酶催化一定化学反应的能力。
4.酶活性的高低一般用什么指标表示？
其高低可以用在一定条件下，酶所催化的某一化学反 应的反应速度来表示。 酶反应速度：用单位时间内、单位体积中反应物的减 少量或产物的增加量来表示。
5.影响酶活性的主要因素有哪些?
温度、pH和酶的抑制剂等条件都会影响酶的活性．
③根据你对酶的特性的了解，画出实验结果的可能坐标曲线．
巩固练习及作业
１.果胶酶常在0-4℃下 保存。其原因是 C Ａ．此温度条件下，酶的活性最高。 Ｂ．此温度条件下，酶变性失活。 Ｃ．低温可降低酶的活性，但酶不变性失活。 Ｄ.自然条件下，果胶酶常在0-4℃下发生催化作用。
２．关于果胶及果胶酶的叙述中，正确的是 B Ａ．果胶酶不溶于乙醇。 Ｂ．果胶不溶于乙醇。 Ｃ．加热使果胶变性失活。 Ｄ．加热使果胶酶活性增强。
３. 为研究温度对果胶酶活性的影响．某学生设计了如下实验： ①将果胶酶与苹果泥分装于不同试管，在10℃水浴中恒温处理 10分钟（如图A）。
②将步骤①处理后的果胶酶和苹果泥混合，再次在10℃水浴中 恒温处理10分钟（如图B）。 ③将步骤②处理后的混合物过滤，收集滤液，测量果汁量（如 图C）。 ：
果胶酶实验
3.果胶酶降解果胶的因素 ①温度
10 ～ 50℃ ② pH值 最适pH值为3.2～5.0 ③作用时间 ④酶的用量 ⑤酶抑制剂
二、探究制作果汁的最佳条件、检 测酶的活性
1、实验材料和用具
• 苹果、 2%果胶酶、 • 水果刀、匀浆机、水浴锅、微量可调移液 器、吸头盒、吸头、500ml烧杯、滤纸、三 角漏斗
2.实验步骤
• 1、将苹果洗净、切开，去皮、籽、柄，切 成小块，将切成小块的苹果放入匀浆机中， 榨取苹果汁
• 2、将榨取的苹果汁倒出，用双层纱布过滤 后装入烧杯中备用。
• 3、取4支试管，用记号笔写上标记，用微 量可调移液器分别向每支试管中加入4mL苹 果汁，然后向1号、2号试管中加入1mL果胶 酶溶液，向3号、4号试管中加入1mL蒸馏水， 振荡混匀，放入45℃水浴锅中10—20min后 可以观察到1号、2号、3号、4号管的变化 情况？
一、果胶酶的基础知识
1.果胶酶的简介
果胶酶并不特指某一种酶，而是分解果 胶的一类酶的总称，包括多聚半乳糖醛酸 酶、果胶分解酶和果胶酯酶等。
2.果胶酶的作用
果胶是植物细胞壁以及胞间层的主要组 成成分之一，它是由半乳糖醛酸聚合而成 的一种高分子化合物，不溶于水。在果汁 加工中，果胶不仅会影响出汁率，还会使 果汁浑浊。 因此，果胶酶能够使果胶分解，提高水 果的出汁率并使果汁变得澄清。
处理
加热
加入酒精前现象
分层十分明显，果汁变 的更加澄清
加入酒精后 现象 果汁被稀释 果汁被稀释 产生絮状沉 淀
不加 热
加热
分层十分明显，没有1号 试管澄清
液体混浊，比4号稍有澄 清。 液体混浊
不加 热
产生大量絮 状沉淀
果胶酶降解果胶的因素温度10ph值最适ph值为3250作用时间酶的用量酶抑制剂苹果2果胶酶水果刀匀浆机水浴锅微量可调移液器吸头盒吸头500ml烧杯滤纸三角漏斗1将苹果洗净切开去皮籽柄切成小块将切成小块的苹果放入匀浆机中榨取苹果汁2将榨取的苹果汁倒出用双层纱布过滤后装入烧杯中备用