实验二 微量凯氏定氮法测定总氮量
凯氏定氮法测定食品中氮含量
凯氏定氮法测定食品中氮含量摘要:凯氏定氮法首先将含氮有机物与浓硫酸共热，经一系列的分解、碳化和氧化还原反应等复杂过程，最后有机氮转变为无机氮硫酸铵，这一过程称为有机物的消化。
为了加速和完全有机物质的分解，缩短消化时间，在消化时通常加入硫酸钾、硫酸铜、氧化汞、过氧化氢等试剂，加入硫酸钾可以提高消化液的沸点而加快有机物分解,使用时常加入少量过氧化氢、次氯酸钾等作为氧化剂以加速有机物氧化。
消化完成后，将消化液转入凯氏定氮仪反应室，加入过量的浓氢氧化钠，将NH4+转变成NH3，通过蒸馏把NH3驱入过量的硼酸溶液接受瓶内，硼酸接受氨后，形成四硼酸铵，然后用标准盐酸滴定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。
滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数，通过计算即可得出总氮量。
在滴定过程中，滴定终点采用甲基红-次甲基蓝混合指示剂颜色变化来判定。
测定出的含氮量是样品的总氮量，其中包括有机氮和无机氮。
关键词:1.实验部分：1.1实验仪器及样品1.1.1 材料与试剂浓H2SO4、K2SO4、CuSO4·5H2O、NaOH、HCl、H3PO4、硼酸溶液（20g/L）30%氢氧化钠(分析纯)溶液；甲基红、乙醇、溴甲酚绿、定量滤纸等。
40 %NaOH 溶液：40 g NaOH 溶于100 mL水中；0.05 mol/LHCl标准液：4.2 mL HCl 溶于1000 mL 水中，碳酸钠法标定盐酸；2 % H3BO3溶液：H3BO3 2 mL 溶于100 mL 水中；硫酸钾-硫酸铜混合物：硫酸钾与硫酸铜以3:1 (W/W)配比混合研磨成粉末加速剂：K2SO4 150 g ，CuSO4·5H2O 10 g 仔细混匀研磨。
甲基红—溴甲酚绿混合指示剂：甲基红溶于乙醇配成0.1 % 乙醇溶液，溴甲酚绿溶于乙醇配成0.5 % 乙醇溶液，两种溶液等体积混合，阴凉处保存（保存期三个月以内）。
混合指示剂：0.1%甲烯蓝乙醇溶液50ml与0.1%甲基红乙醇溶液200ml 混合配成(贮于棕色瓶备用，这种指示剂酸性时为紫色，碱性时为绿色，变色范围窄且灵敏)硼酸-指示剂混合液： 2%硼酸溶液100ml，滴加混合指示剂贮备液，摇匀后溶液呈现紫红色即可(约加1ml左右混合指示剂)。
微量凯式定氮法
实验原理生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义，如蛋白质的含氮量约为16％，测出含氮量则可推知蛋白含量。
生物材料总氮量的测定，通常采用微量凯氏定氮法。
凯氏定氮法由于具有测定准确度高，可测定各种不同形态样品等两大优点，因而被公认为是测定食品、饲料、种子、生物制品、药品中蛋白质含量的标准分析方法。
其原理如下：1. 消化：有机物与浓硫酸供热，使有机氮全部转化为无机氮——硫酸铵。
为加快反应，添加硫酸铜和硫酸钾的混合物；前者为催化剂，后者可提高硫酸沸点。
这一步约需30min至1 h，视样品的性质而定。
2. 加碱蒸馏：硫酸铵与NaOH(浓)作用生成(NH4)OH, 加热后生成NH3, 通过蒸馏导入过量酸中和生成NH4Cl而被吸收。
3. 滴定：用过量标准HCl吸收NH3，剩余的酸可用标准NaOH滴定，由所用HCl摩尔数减去滴定耗去的NaOH摩尔数，即为被吸收的NH3摩尔数。
此法为回滴法，采用甲基红卫指示剂。
HCl＋NaOHNaCl +H2O本法适用于0.2 ~ 2.0 mg的氮量测定。
1.热源2. 烧瓶3. 玻璃管4. 橡皮管5．玻璃杯6. 棒状玻塞7. 反应室8. 反应室外壳9.夹子10. 反应室中插管11. 冷凝管12. 锥形瓶13. 石棉网图3.4 微量凯氏蒸馏装置示意图试剂和器材一、试剂浓硫酸；30％过氧化氢溶液；10 M氢氧化钠；0.01M的标准盐酸；标准硫酸铵（0.3mg氮/mL）。
催化剂：硫酸铜：硫酸钾＝1：4混合，研细。
指示剂：0.1％甲基红乙醇溶液。
二、测试样品牛血清白蛋白。
三、器材微量凯氏定氮仪；移液管1mL（×3）；2mL（×1）；微量滴定管5mL（×1）; 烧杯200mL （×2）；量筒10mL（×1）；三角烧瓶150mL（×4）；凯氏烧瓶50mL（×4），吸耳球（×1）；电炉；分析天平。
操作方法一、样品处理称取牛血清白蛋白50mg，加入2个凯氏烧瓶中，另2个凯氏烧瓶为空白对照，不加样品。
实验二微量凯氏定氮法测定(1)(精)
NH 4 H 2 BO3 HCL NH 4CL H 3 BO3
实验材料与试剂
实验材料：食用面粉 实验试剂： 浓硫酸 30%氢氧化钠溶液 克氏催化剂 2%硼酸 指示剂 0.01M HCL
实验器材
凯氏烧瓶 电炉 凯氏定氮蒸馏装置 锥形瓶 100ml容量瓶 酸式滴定管
注意事项
本法适用于0.05-3.0mg氮，样品中含氮量 过高时，则应减少取样量或将样液稀释。 勿使样品粘于烧瓶颈部。放置液体样品时， 需将吸管插至烧瓶底部再放样：如固体样 品，可将样品卷在纸内，平插入烧瓶底部， 然后再将烧瓶直起，纸卷内的样品即完全 放在烧瓶底部。
蒸馏完毕，先将蒸馏出口离开液面，继续蒸馏
操作步骤
消化： 准确称取1克食用面粉，用称量纸卷好小心送入至50毫升 的凯氏烧瓶底部，切勿沾于瓶口或瓶颈上。向另一烧瓶加 入1ml水作空白对照。 在每个烧瓶内加入硫酸钾—硫酸铜混合物（克氏催化剂） 少许，浓硫酸10ml，小瓷片两粒，摇匀。将烧瓶约60度 角固定在铁架上，每个瓶口放一小漏斗，在通风厨内的电 炉上消化。 在消化开始时，应控制火力，不要使液体冲到瓶颈。待瓶 内水汽蒸完，硫酸开始分解并放出SO2白烟后，适当加强 火力，继续消化，直至消化液呈透明绿色为止。消化完毕， 待烧瓶内容物冷却后，加蒸馏水10ml（注意慢加，边加 边摇）。冷却后将瓶内容物转入100ml的容量瓶中，并用 蒸馏水洗烧瓶数次，溶液一并倒入容量瓶，最后定容至刻 度摇匀，做上记号备用。
B、蒸馏：用酒精灯加热（应用挡风板将灯 围拢，维持火力恒定，沸腾不可高于Y管口 以免A室溶液从Y管倒吸，待第一滴蒸馏液 从冷凝柱F顶端滴下时起，继续蒸3-5分钟， 然后将锥形瓶放低，使导管离开液面再蒸2 分钟，最后用蒸馏水洗导管外壁，蒸馏完 毕，取下锥形瓶，随即将蒸馏器洗净。） C、样品及空白蒸馏：用吸量管分别吸取 2ml样品和2ml空白按上述操作步骤进行蒸 馏。
总氮量的测定——凯氏(Micro—Kjeldahl)定氮法
实验一总氮量的测定 ----- 凯氏（Micro — Kjeldahl）定氮法一、目的学习凯氏定氮法的原理和操作技术。
二、原理常用凯氏定氮法测定天然有机物（如蛋白质、核酸及氨基酸等）的含氮量。
含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢2元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铉。
此过程通常称为“消化”。
但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。
甘氨酸的消化过程可表示如下：CH2NH2COOH+3H2SO4, —2CO2+3SO2 + 4H2O + NH32NH3+H2SO4 一（NH 4）2SO4浓碱可使消化液中的硫酸铉分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸僻到一定量、一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中的氢离子浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的摩尔数（相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待测物中的总氮量。
三、试剂1、消化液（过氧化氢：浓硫酸：=3: 2: 1）200mL2、粉末硫酸钾一硫酸铜混合物16gK2S04与CuS04 • 5H201~2 3: 1配比研磨混合3、30%氢氧化钠溶液 1 000 mL4、 2 %硼酸溶液5、标准盐酸溶液（约0. 01 mol/L）6、混合指示剂（田氏指示剂）由50mL0. 1%甲烯蓝乙醇溶液与200mL0. 1%甲基红l醇溶液混合配成，贮于棕色瓶中备用。
这种指示剂酸性时为紫红色，碱性时为绿色。
变色范围很窄且灵敏。
7、市售标准面粉和富强粉①各2g 四、操作方法1、凯氏定氮仪的构造和安装凯氏定氮仪由蒸汽发生器、反应管及冷凝器3部分组成蒸汽发生器包括电炉及一个1-2L （升）容积的烧瓶。
蒸汽发生器借橡皮管与反应管相连, 反应管上端有一个玻璃杯，其上端通过反应室外层与蒸汽发生器相连，下端靠近反应室的底部。
反应室外层下端有一开口，上有一皮管夹，由此可放出冷凝水及反应废液。
凯氏(Kjeldahl)定氮法
为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。
计算所得结果为样品总氮量，如欲求得 样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6.25即得。
凯氏定氮法适用范围广泛，测定结果准确,重现性好，但操作复杂费时,试剂消耗量大。若采用模块式消化炉代替传统的消化装置, 可同时测定几份样品，节省时间,提高了工作效率，适用于批量蛋白质的测定,具有准确、快速、简便、低耗、稳定的优点。
1. 2 特点
凯氏定氮法是目前分析有机化合物含氮量常用的方法，是测定试样中总有机氮最准确和最简单的方法之一，被国际国内作为法定的标准检验方法。凯氏定氮法样品的最佳消化条件为硫酸铜2.50 g, 硫酸钾0.10 g,浓硫酸4.00 mL；硫酸铜的用量为影响消化时间的主要因素,硫酸钾和浓硫酸用量为第二和第三主要因素；用此最佳条件做实验, 消化时间仅为12 min；与其他硫酸铜、硫酸钾、浓硫酸用量方法对比,该法所需消化时间最短,试剂用量减少,可降低实验成本,也降低了对环境的污染。
一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法
1. 原理
凯氏定氮法测定蛋白质分为样品消化、蒸馏、吸收和滴定4 个过程。其原理是样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化，含氮有机物分解产生氨,氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。然后加碱蒸馏放出氨, 氨用过量的硼酸溶液吸收,再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：
CH2COOH
| + 3H2SO4——2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3 (1)
实验二 改良微量凯氏定氮法测定血清蛋白质总量
改良的微量凯氏定
氮法测定血清蛋白质含量
前
言
• 蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最 常用、最基本的分析方法之一。目前常用 的有四种古老的经典方法，即定氮法，双 缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法 （Lowry法）和紫外吸收法。还有二种近十 年才普遍使用起来的新的测定法，即考马 斯亮蓝法（Bradford法）和BCA法。
稀释血清 1.00ml 无蛋白滤液 1.00ml
置于硬质管中
加消化液 0.20ml
各加一粒 玻璃珠
无→黑
于外焰均热后 加热5～8分钟
白烟→棕色→无色
冷却后 显色
木夹夹住，距管口 1/3～2/3交界处
4、显色
测定 硫酸铵标准液 （0.04mgN/ml） 消化液ml 蒸馏水ml 纳氏试剂ml － － 6.90 3.00 NPN － － 6.90 3.00 标准 1.00 0.20 5.80 3.00 空白 － 0.20 6.80 3.00
根据蛋白质中氮元素含量相当恒定（一般平均 为16％）这一特点即可得到血清蛋白质含量。
血清总含氮量?
非蛋白含氮量?
1.氧化并固定有机氮质（消化）
血清 总含 氮量
含氮有机 硫酸亚硒酸 化合物 加热
NH3↑＋ CO2↑＋ SO2↑＋ H20↑
2.显色,比色:（NH4）2SO4与碱性钠氏试剂作用
（NH4）2SO4＋2NaOH→Na2SO4 ＋2NH4OH 2NH4OH＋ (KI2) · HgI2 → NH2Hg2I3 ＋4KI ＋NH4I ＋2 H20
1、无蛋白滤液的制备
取血清 0.25ml
置于中 试管中
加蒸馏水 4.00ml
混匀
加10％钨酸 钠0.25ml
总氮量的测定凯氏定氮法实验报告
总氮量的测定凯氏定氮法实验报告《凯氏定氮法测定总氮量实验报告》一、引言总氮是指在样品中以无机氮和有机氮的形式存在的氮元素总量。
凯氏定氮法是一种常用的测定总氮量的方法，其原理是将样品中的有机氮转化为氨，并以氨的形式与硫酸亚铁反应生成氨铁配合物，再用硫酸亚铁标准溶液滴定至终点，从而计算出样品中的总氮含量。
本实验旨在通过凯氏定氮法测定样品中的总氮量，并对实验结果进行分析和讨论。
二、实验方法1. 样品准备：将待测样品称取适量，经过研磨和筛分后得到均匀的样品粉末。
2. 样品消解：将样品粉末放入消化瓶中，加入适量的硫酸和过氧化钾，进行样品的消解反应。
3. 凯氏反应：将消解后的样品转移至凯氏管中，加入蒸馏水稀释，然后依次加入碱性硼酸和硫酸亚铁溶液进行凯氏反应。
4. 滴定终点：用硫酸亚铁标准溶液滴定至溶液由黄色转变为淡绿色，记录所需的滴定体积。
5. 对照实验：进行空白对照实验，重复以上步骤，但不加入样品，用以校正滴定体积。
三、结果与分析根据实验操作，得到了样品的滴定体积V和对照实验的滴定体积V0，计算出样品中总氮含量的浓度公式如下：总氮浓度（mg/L）= （V-V0）×C/样品体积其中，C为硫酸亚铁标准溶液的浓度，单位为mol/L。
根据实验数据计算得到样品的总氮浓度为X mg/L。
需要注意的是，由于样品的不同性质和不同来源，其总氮浓度可能会有较大的差异。
因此，在结果分析中应对样品的来源和性质进行综合考虑，避免结果的片面性。
四、误差分析在实验过程中，可能会存在一些误差，主要包括以下几个方面：1. 滴定终点的判断误差：滴定终点的判断需要较高的观察力和经验，不同实验人员的判断可能会有差异，从而导致滴定体积的误差。
2. 样品的不完全消解：样品的消解过程中，可能会存在未完全消解的情况，导致样品中总氮的含量被低估。
3. 实验仪器的误差：实验仪器的精确度和灵敏度也会对实验结果产生一定的影响，因此在实验中应严格控制仪器的使用和操作条件。
总氮量的测定-微量凯氏定氮法
微量凯氏定氮法目的1. 掌握微量凯氏定氮法测定样品总氮量和蛋白质的原理和方法2. 学会使用凯氏定氮仪原理凯氏(Kjeldahl)定氮法常用于测定天然有机物(如蛋白质，核酸及氮基酸等)的含氮量。
天然含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢被分别氧化成CO 2和H 2O ，而氮则变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵，是为“消化”。
该反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾/硫酸钠以提高反应的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂促进反应的进行。
以甘氨酸为例，其消化过程可表示如下：NH 2浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量及一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨与溶液中的氢离子结合，生成铵离子，使溶液中氢离子浓度降低。
然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的当量数(相当于待测物中氨的当量数)计算出待测物中的氮量。
OH NH SO Na NaOH SO NH 4424222)4(+→+↑+→324NH O H OH NH324333BO H NH BO H NH →+334324BO H CL NH HCL BO H NH +→+滴定时用甲烯蓝和甲基红混合指示剂，其指示范围为pH5.2~5.6，将NH 4H 2BO 3的蓝/绿色滴至原来H 3BO 3的蓝紫色即为终点。
本法适用范围0.2~1.0mg 氮，相对误差应小于2%。
材料、试剂与器具材料卵清蛋白等含蛋白质样品试剂1. 浓硫酸(化学纯)2. 30%氢氧化钠(分析纯)溶液3. 0.9%NaCl 溶液4. 硫酸钾-硫酸铜混合物：硫酸钾与硫酸铜以3:1 (W/W)配比混合研磨成粉末5. 2%硼酸6. 混合指示剂(田氏)：0.1%甲烯蓝乙醇溶液50ml 与0.1%甲基红乙醇溶液200ml 混合配↑↑↑+++→+32224224323NH O H SO CO SO H COOH CH 424423)(2SO NH SO H NH →+成(贮于棕色瓶备用，这种指示剂酸性时为紫色，碱性时为绿色，变色范围窄且灵敏)7. 0.0500M HCl8. 硼酸-指示剂混合液：2%硼酸溶液100ml，滴加混合指示剂贮备液，摇匀后溶液呈现紫红色即可(约加1ml左右混合指示剂)。
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五、操作方法
1.样品处理 固体样品: 某一固体样品中的含氮量是用100g该物质(干重) 中所含氮的g数来表示(％)。 一般样品烘干的温度都采用105℃，因为非游离的水都不能 在100℃以下烘干。 在称量瓶中称一定量磨细的样品(如0.1 g左右的干燥面粉)， 然后置于105℃的烘箱内干燥4小时。用坩埚钳将称量瓶放人 干燥器内，待降至室温后称重，按上述操作继续烘干样品。 每干燥1小时后，称重一次，直到两次称量数值不变，即达恒 重。 若样品为液体(如血清等)，可取一定体积样品直接消化测定。
三、试剂
1、浓硫酸 2、粉末硫酸钾―硫酸铜混合物 氢氧化钠溶液 4、2％硼酸溶液 5、标准盐酸溶液(0.0098 mol／L) 6、混合指示剂(田氏指示剂) 由50mL0．1％甲烯蓝乙醇溶液与200mL0．1％甲基 红乙醇溶液混合配成，贮于棕色瓶中备用。 酸性时为紫红色，碱性时为绿色。变色范围很窄且 灵敏。 7、样品—面粉1g
3 蒸馏过程：
准备: 取50 mL锥形瓶3个，各加入5 mL 2％硼 酸溶液和1―2滴指示剂，溶液 呈淡紫色，用表面皿覆盖备用。 打开冷凝水，置换成冷水。将一个盛有硼酸和指示剂溶液的锥形瓶放在冷 凝器下，并使冷凝器下端浸没在液体内。 加样: 用移液管取5 mL消化液（空白液和消化液分别做），细心地加入反应室， 随后用小量筒加入30％NaOH溶液5mL，关闭自由夹，在加样漏斗中加 少量水做封口。 蒸馏: 关闭自由夹，打开冷凝水(注意不要过快过猛，以免水溢出,实验过程中， 冷凝水可一直打开)。 点燃酒精灯，蒸馏开始，当观察到锥形瓶中的溶液由淡紫色变绿时(约 2―3分钟)，开始计时，蒸馏3分钟，移开锥形瓶，使冷凝器下端离开液 面约1cm，同时用少量蒸馏水洗涤冷凝管口外侧，继续蒸馏1分钟，取下 锥形瓶，用表面皿覆盖瓶口。 蒸馏完毕后，应立即清洗反应室，方法如前所述。 如此3～5次。最后将 自由夹同时打开，将蒸汽发生器内的全部废水换掉，继续下一次蒸馏。 待样品和空白消化液均蒸馏完毕，同时进行滴定。
4.滴定
全部蒸馏完毕后，用标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，硼酸指示 剂溶液由绿变淡紫色为滴定终点。
注意：使用前检查酸式滴定管漏不漏？漏的话，涂凡士林
滴定时一边滴一边摇，防止滴定过头！ 及时记录读数
要求：空白消化液1次，样品消化液2次
5.计算
总氮量(%)=C(V1-V2)×0.014 × 100 × 消化液量(ml) / 滴定消耗用液量(ml) × w
关键:搞清水管系统
蒸馏器的洗涤
１． 接通冷凝水，先向蒸汽发生器中加入一定量的水(以排水口高度为宜) 。 ２．水的自动喷出： 将蒸馏水由加样室加入反应室，加样口水封，用酒精灯将其加热烧开 将酒精灯移开片刻，反应室内水自动喷出到蒸汽发生器 打开蒸汽发生器出水口，放水。 如此反复清洗3-5次。 ３．清洗后在冷凝管下端放一锥形瓶盛有5 mL，2％硼酸溶液和1～2滴指示 剂的混合液。打开冷凝水，进行蒸馏，如3-5min不变色则表明蒸馏装置内部 已洗涤干净。
c为标准盐酸溶液摩尔浓度(0.0098M)； V1为滴定样品消化液用去的盐酸溶液平均mL数； V2为滴定空白消化液用去的盐酸溶液平均mL数； w为样品重量(1g),消化液量500ml,滴定消耗用液 量5ml。 14为氮的相对原子质量。 样品蛋白质含量(％)=总氮量×6.25
思考题
定容：冷却后，加蒸馏水约10 mL。(注意慢加，随加随摇)。然后将瓶中溶物倾入50 或100 mL的容量瓶中，并以蒸馏水洗烧瓶数次，将洗液并入容量瓶，用水稀释到刻 度，混匀备用。
蒸馏: 改进型凯氏定氮仪结构
特点：将蒸汽发生器、蒸馏器和冷凝器组成一个整体，体积小，安装容 易，操作简便。
(1)水蒸汽发生器和反应室 (2)冷凝器和通气室 (3)排水柱
1、何谓消化？如何判断消化终点？ 2、在实验中加入粉末硫酸钾―硫酸铜混合物的作用是什么？ 3、固体样品为什么要烘干？ 4、蒸馏时冷凝管下端为什么要浸没在液体中？ 5、如何证明蒸馏器洗涤干净？ 6、本实验应如何避免误差？
2、消化
取凯氏烧瓶 标号。各加几颗玻璃珠; 在1及2号瓶中各加样品0.1g，催化剂(K2S04+CuS04.5H2O)200 mg，浓硫酸5 mL。 在3及4号瓶中各加相同量的催化剂和浓硫酸，作为对照，用以测定试剂中可能含有的 微量含氮物质。每个瓶口放―漏斗，在通风橱内的电炉上消化。 注意加样品时应直接送人瓶底，而不要沾在瓶口和瓶颈上。 消化开始时应控制火力，不要使液体冲到瓶颈。待瓶内水汽蒸完，硫酸开始分解并 放出SO2白烟后，适当加强火力，继续消化，直至消化液呈透明淡绿色为止。
实验二 总氮量的测定―凯氏定氮法
一 目的： 学习凯氏定氮法测定蛋白质含量的原理 掌握蒸馏、滴定操作技术
二、原理
生物材料的含氮量测定在生物化学研究中具有一定的意义，蛋白质的含氮量 约为16％，测出含氮量则可推知蛋白含量。
消化：有机物与浓硫酸供热，使有机氮全部转化为无机氮——硫酸铵。为加 快反应，添加硫酸铜和硫酸钾的混合物；前者为催化剂，后者可提高硫酸沸 点。 甘氨酸的消化过程可表示如下： CH2NH2COOH+3H2SO4 2CO2+3SO2十4H2O十NH3 2NH3+H2SO4 (NH4)2SO4 蒸馏：浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸 馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中的氢离子浓度 降低， (NH4)2SO4+2NaOH 2NH3+2H2O+Na2SO4 2NH3+4H3BO3 (NH4)2B4O7+5H2O 滴定：用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止，最后根 据所用标准酸的摩尔数(相当于待测物中氨的摩尔数)计算出待测物中的总氮量。 (NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O (NH4)2SO4+4H3BO3 本法适用于0.2 ~ 2.0 mg的氮量测定。