BCA微量蛋白浓度测定试剂盒使用说明
P0012S BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书
使用说明：
1. 取0.8ml蛋白标准配制液加入到一管蛋白标准(20mg BSA)中，充分溶解后配制成25mg/ml的蛋白标准溶液。配制后可立即 使用，也可以-20℃长期保存。
2. 取适量25mg/ml蛋白标准，稀释至终浓度为0.5mg/ml。例如取20l 25mg/ml蛋白标准，加入980l稀释液即可配制成 0.5mg/ml蛋白标准。蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见，也可以用0.9%NaCl或PBS 稀释标准品。稀释后的0.5mg/ml蛋白标准也可以-20℃长期保存。
15. Zong-Chun Yi, Hong Wang, Guang-Yao Zhang, Bing Xia. Downregulation of connexin 43 in nasopharyngeal carcinoma cells is related to promoter methylation. Oral Oncol. 2007 Feb 14;
注: 也可以室温放置2小时，或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时，颜色会随着时间的延长不断加深。并且显色反 应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适合在较高温度孵育，或适当延长孵育时间。 7. 测定A562，540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
常见问题：
1. 测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。 可能的原因是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质，详细的BCA法的兼容性列表请参考碧云天如下网页: /Compatibility Chart For BCA Kit.pdf
9. Le-Feng Zhang, Shuang-Qing Peng, Sheng Wang. Influence of lead (Pb2+) on the reactions of in vitro cultured rat aorta to 5-hydroxytryptamine. Toxicology Letters 159 (2005) 71–82.
BCA蛋白浓度测定试剂盒使用说明
BCA蛋白浓度测定试剂盒BCA蛋白浓度测定试剂盒保质期：本试剂盒自订购之日起一年内有效。
BCA蛋白浓度测定试剂盒产品内容：BCA产品简介：碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫蓝色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。
实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford 蛋白浓度测定试剂盒。
BCA蛋白浓度测定试剂盒操作说明：一. 微孔酶标仪法1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。
BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 稀释标准品：取10微升BSA标准品用PBS稀释至100微升（样品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/ml。
将标准品按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白标准品孔中，加PBS补足到20微升。
3. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。
由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
4. 各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置15-30分钟。
用酶标仪测定A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度。
使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。
二. 分光光度计法如没有酶标仪，可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。
步骤如下：1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。
BCA蛋白浓度测定说明书
BCA蛋白浓度测定试剂盒产品编号产品名称包装CHEM001 BCA蛋白浓度测定试剂盒102ml包装清单：产品编号产品名称包装CHEM001A BCA试剂A 100mlCHEM001B BCA试剂B 3mlCHEM001C 蛋白标准（2mg/ml） 1.2ml—说明书1份产品简介：增强型BCA蛋白浓度测定试剂(Enhanced BCA Protein Assay)是常用蛋白浓度测定方法之一。
Viagene的BCA测定试剂测定方法简单，稳定性好，灵敏度高和抗干扰性强。
增强型BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20, 60, 80。
能够耐受低浓度的EDTA、EGTA、二硫苏糖醇，但高浓度螯合剂和还原剂可能会对测定有影响。
增强型BCA蛋白浓度测定试剂适合用于测定Western Blotting样品，EMSA核提取液的蛋白浓度。
检测灵敏度达到10μg/ml。
按照本说明书操作，每套试剂可进行145次比色杯法测定或500次微板法测定。
比色杯法测定的BCA工作液用量较微板法多，但抗干扰性强，结果更准确。
使用说明：A.比色杯法测定1、根据待测定样品数算出所需BCA工作液总体积（每个测定需0.7ml工作液），按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50：1）配制适量BCA工作液，充分混匀。
BCA工作液在室温可稳定24小时。
2、试管编号，按以下操作。
管号S0 S1 S2 S5 S10 S20 S40 样品xH2O （µl）20 19.5 19 17.5 15 10 0 20样品制备液（µl） 4 4 4 4 4 4 4 －蛋白标准液（µl）0 0.5 1 2.5 5 10 20 －样品体积－－－－－－－ 4反应体积24 24 24 24 24 24 24 24 BCA工作液（ml）0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7 0.7蛋白浓度（µg/µl）0 1 2 5 10 20 40 待定注：1）标准曲线一般做4个点加一个空白。
BCA蛋白定量
BCA蛋白定量试剂盒配制及内部操作SOP一、BCA试剂盒配制流程1、标准品配制：配制2mg/ml的BSA标准品，以50ml为例，各成分加入量如下表：原料浓度加入量（mg）厂家货号牛血清白蛋白（BSA）0.2%100北京（二楼生产部提供）YSCW2500氯化钠（NaCl）0.9%450国药集团化学试剂有限公司10019308叠氮化钠0.05%25成都金山化学试剂有限公司/注意：为了确保检测的准确性，应用微量天平精准称量100mg，然后定容至50ml，1ml/管分装，4℃保存。
2、工作液配制由于A液和B液加入比例为50:1，因此配制工作液时A液各成分加入量按照1000ml配制量加入，B液成分按照25ml配制量加入。
原料浓度加入量（g）厂家货号A液（1000ml）二喹啉甲酸（BCA）1％10aladdin B107658无水碳酸钠2％20天津博迪化工股份有限公司/碳酸氢钠0.95%9.5国药集团化学试剂有限公司10018960酒石酸钠0.16% 1.6国药集团化学试剂有限公司30169818氢氧化钠0.4％4国药集团化学试剂有限公司10019762B液（25ml）硫酸铜4％1国药集团化学试剂有限公司81005261备注：A液各成分混合之后，调节PH至11.25。
二、BCA法蛋白定量操作SOP1、标准品稀释按照下表制备一组蛋白质标准品。
将一安瓿的牛血清白蛋白标准品（BSA）稀释到几个干净的小瓶中，最好使用与待测样品相同的缓冲液。
每一个1mL安瓿的2mg/mL牛血清白蛋白标准品足够用于制备下表中所列出的任意一组稀释范围的标准品；每个稀释浓度的标准品的体积足够用于3次重复检测。
用于标准方案的稀释方法（检测范围=20-2,000ug/mL）如下：标准液编号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）标准液终浓度（ug/ml）A03002000B125375ul的A1500C325325ul的A1000D175175ul的B750E325325ul的C500F325325ul的E250G325325ul的F125H400100ul的G25I40000用于试管增强方案的稀释方法如下（检测范围=5–250ug/mL）：标准液编号稀释液体积（ul）标准品体积（ul）标准液终浓度（ug/ml）A700100250B400400ul的A125C450300ul的B50D400400ul的C25E400100ul的D5F400002.样品稀释：根据需要，将样品用用PBS或者与待测样品缓冲液相同的溶液稀释至线性范围内（所用稀释液与标准品稀释液应保持一致）。
普利莱基因技术微量蛋白质定量试剂盒 (BCA 法) 使用说明说明书
微量蛋白质定量试剂盒(BCA法)使用说明P1513描述：Bicinchoninic acid(BCA)法是近来广为应用的蛋白定量方法。
其原理与Lowery法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。
BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nm处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。
与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。
与Bradford 法相比，BCA法的显著优点是不受去垢剂的影响。
组成与储存：(1)BCA Reagent100ml，室温保存；(2)Cu Reagent2.5ml，室温保存；(3)BSA standard4mg/ml1ml，−20ºC冻存。
1.5年有效。
可进行500次微板(microplate)测定或100次1ml比色杯测定。
所需设备：比色计、酶标仪、或微板比色仪，最佳工作波长562nm，可在540-590nm之间。
工作溶液(Working Reagent,WR)配制：将50体积BCA Reagent与1体积Cu Reagent混合即为WR工作试剂，呈嫩绿色，立即使用或者4℃保存不超过一天。
标准蛋白溶液配制：用双蒸水、0.9%生理盐水、PBS、或与待测蛋白样品匹配之缓冲液进行倍比稀释,得到BSA标准溶液80、40、20、10、5、2.5、1.25µg/ml。
蛋白测定微量蛋白质浓度线性检测范围为1-100µg/ml。
标准测定用1cm光程玻璃或塑料比色皿，反应终体积1.2ml，用比色计测定。
微板测定用96孔板，反应终体积240µl，用酶标仪、微板比色仪测定。
1.标准测定：将0.2ml标准品或待测样本与1ml WR工作溶液混合。
微板测定：将40µl标准品或待测样本与200µl WR工作溶液混合。
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明BCA法（bicinchoninic acid assay）是一种用于测定蛋白质含量的常用方法。
BCA法蛋白含量测定试剂盒使用说明如下：试剂盒组成：1.BCA试剂A：含有重铜离子和碱性溶液。
2.BCA试剂B：含有双咪唑试剂和碱性溶液。
3.蛋白标准溶液：一系列已知浓度的牛血清蛋白标准溶液。
4.BCA试剂C：含有特殊缓冲溶液。
注意事项：1.所有试剂和样品在使用前均需室温下静置至少30分钟。
2.打开试剂盒后，避免将试剂直接暴露于空气中，以免影响试剂稳定性。
3.在所有步骤中，使用干净且蛋白污染的工具可能会导致错误的结果。
步骤1：制备标准曲线1.准备一系列不同浓度的蛋白标准溶液，如0、20、40、60、80和100μg/mL。
2.取0.1mL蛋白标准溶液加入1.9mL去离子水，即配制出100μg/mL的稀释溶液。
3.以同样的方法依次配制出20、40、60和80μg/mL的稀释溶液。
4.将每个稀释溶液的0.2mL与2mLBCA试剂A混合，放置30分钟。
5.加入0.5mLBCA试剂B，再次混合均匀。
6.将混合液放置37°C加热反应30分钟后冷却至室温。
7. 使用紫外-可见光谱仪测定吸光度，以280 nm为波长，绘制标准曲线。
步骤2：测定待测样品1.取待测样品，如细胞裂解液，加入BCA试剂C进行稀释，使得样品中的蛋白质浓度在标准曲线范围内。
2.取样品0.1mL加入1.9mL去离子水，配制出与标准曲线相同浓度的稀释液。
3.加入1mLBCA试剂A混合均匀，放置30分钟。
4.加入0.2mLBCA试剂B，再次混合均匀。
5.将混合液放置37°C加热反应30分钟后冷却至室温。
6. 使用280 nm波长的紫外-可见光谱仪测定吸光度。
步骤3：计算蛋白质含量1.将待测样品的吸光度值与标准曲线进行比较，根据吸光度值确定样品中蛋白质的含量。
2.通过线性拟合标准曲线计算待测样品中蛋白质的浓度。
博迈德BCA试剂盒说明书
博迈德BCA试剂盒说明书产品简介蛋白质定量是蛋白质研究的基础工作之一。
博奥森开发的BCA蛋白质检测试剂(bicinchonicacid）是理想的蛋白质定量方法;是当前比Lowry法更优越的专用于检测总蛋白质含量的产品。
该方法以快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小而倍受专业人士的青睐。
BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。
在组织细胞裂解实验中，常用浓度的去垢剂SDS，TritonX-100，Tween 不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA、)还原剂(DTT巯基乙醇)和脂类的影响。
实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
该产品不受此影响，因此与之配合使用，可免除您实验中的许多烦恼。
基本原理碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
主要特点1.准确XX线性XX:BCA试剂的蛋白质测定范围是10-2000ug/ml;2.快速:45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。
3.经济实用:在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。
4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马氏亮蓝。
包装及保存BCA试剂A70ml室温保存BCA试剂B1.4ml室温保存蛋白标准C0.5ml-20C保存(5mg/1mlBSA)本试剂盒自订购xx一年内有效。
注意事项1·在低温条件或长期保存出现沉淀时，可搅拌或37C温育使溶解，如发现细菌污染则应丢弃。
2.样品中若含有EDTA、EGTA、DTT硫酸铵、脂类会影响检测结果，请试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒;高浓度的去垢剂也影响实验结果，可用TCA沉淀去除干扰物质。
3.更为精确的蛋白浓度结果，每个蛋白梯度和样品均需做复孔均应做标准曲线。
BCA蛋白定量试剂盒使用说明书
BCA蛋白定量试剂盒使用说明书一、产品简介BCA 蛋白定量试剂盒是一种常用的蛋白质浓度测定方法，具有操作简便、灵敏度高、准确性好等优点。
本试剂盒适用于细胞裂解液、组织匀浆、血清、血浆等多种样品中总蛋白浓度的定量测定。
二、试剂盒组成1、 BCA 工作液：A 液与 B 液按 50:1 的比例混合而成，现配现用。
2、蛋白标准品（2mg/ml）：牛血清白蛋白（BSA）溶液。
3、 96 孔板三、所需设备1、酶标仪（波长 562nm）2、移液器（量程分别为20μl、200μl、1000μl）3、涡旋振荡器4、离心机四、操作步骤1、标准曲线的绘制（1）将蛋白标准品（2mg/ml）用 PBS 或生理盐水稀释成一系列浓度梯度，如0μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml、600μg/ml、800μg/ml、1000μg/ml、1500μg/ml、2000μg/ml。
（2）在 96 孔板中，每个浓度梯度设置 2 个复孔。
分别向孔中加入25μl 不同浓度的标准品溶液。
（3）向每个孔中加入200μl BCA 工作液，轻轻振荡混匀，37℃孵育 30 分钟。
（4）使用酶标仪在 562nm 波长下测定吸光度值（OD 值）。
（5）以蛋白浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品测定（1）将待测样品用 PBS 或生理盐水适当稀释（若样品浓度过高，可能会超出标准曲线范围）。
（2）在 96 孔板中，设置样品孔和空白孔（仅加25μl 稀释液和200μl BCA 工作液）。
向样品孔中加入25μl 稀释后的样品。
（3）向每个孔中加入200μl BCA 工作液，轻轻振荡混匀，37℃孵育 30 分钟。
（4）使用酶标仪在 562nm 波长下测定样品孔和空白孔的吸光度值（OD 值）。
（5）样品的蛋白浓度可根据标准曲线计算得出。
五、注意事项1、 BCA 工作液应现配现用，避免长时间放置导致失效。
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BCA微量蛋白浓度测定试剂盒
货号：PC0050
规格：500微孔(500T)/1000微孔(1000T)/2000微孔（2000T）
保质期：本试剂盒自订购之日起一年内有效。
产品内容：
包装500微孔1000微孔2000微孔保存
BCA试剂100ml2×100ml4×100ml室温
Cu试剂3ml6ml12ml室温
PBS稀释液30ml60ml120ml室温
BSA蛋白标准
0.3ml0.5ml1ml-20℃
(5mg/ml BSA)
产品简介：
碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。
实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明：
一.微孔酶标仪法
1.配制工作液:根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。
BCA工
作液室温24小时内稳定。
2.稀释标准品：先用PBS将BSA标准品稀释至终浓度为0.8mg/ml备用。
再依次稀释至80、40、20、10、5、2.5ug/ml.。
3.高浓度蛋白可将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。
4.各孔加入200微升BCA工作液和40ul稀释后的蛋白或标准品溶液，对照孔加入PBS稀释液。
37℃放置4小时。
用酶标仪测定A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度。
使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。
二.分光光度计法
如没有酶标仪，在离心管中混匀样品后加入比色皿，用分光光度计比色。
采用分光光度计测定蛋白浓度方法与酶标仪法相似，只需要按照分光光度计比色皿容量要求按照比例配置相应的BCA工作液和标准品溶液。
常规比色皿用量为200ul有样本加入1mlBCA工作液或400ul样本加入2mlBCA工作液。
微量比色皿用量为20样本加入100ul BCA工作液。
或根据仪器情况自行调整。
附：样本及标准品稀释示意图
样本管号A B C D E PBS稀释液用量180100100100……
标准品用量20（原液）
100
（从A管吸出）
100
（从B管吸出）
100
（从C管吸出）
……
终浓度（ug/ml）80402010……
注意事项：
1.长期不用时，Cu试剂与PBS稀释液可置于2-8℃保存，如发现细菌污染则应丢弃。
BCA试剂在低温条件下出现结晶沉淀时，可37℃温育使其完全溶解,不影响使用。
2.样品中若含有较多干扰物质时，请采用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
相关试剂：
PC0001BSA标准品（5mg/ml）
PC00155×G250(蛋白定量用)
PC0021BCA试剂
PC0030Lowry法蛋白浓度测定试剂盒
PC0010Bradford法蛋白浓度测定试剂盒
R0010高效RIPA组织/细胞快速裂解液
PR1600预染低分子量蛋白MARKER
R0050核蛋白抽提试剂盒
P10154×蛋白上样缓冲液（含DTT）
P1300SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
D106010×电泳转移缓冲液
PE0010ECL Plus荧光检测试剂(ECL超敏发光液)。