线性范围验证两种方法比较
线性范围及检测限之欧阳法创编
线性与范围 (linearity and range)分析方法的线性是在给定范围内获取与样品中供试物浓度成正比的试验结果的能力。
换句话说，就是供试物浓度的变化与试验结果(或测得的响应信号)成线性关系。
所谓线性范围是指利用一种方法取得精密度、准确度均符合要求的试验结果，而且成线性的供试物浓度的变化范围，其最大量与最小量之间的间隔，可用mg ／L ~ mg／L、 ug／ml ~ ug／ml等表示。
线性与范围的确定可用作图法(响应值Y／浓度X)或计算回归方程(Y＝a+bX)来研究建立。
测定样品时所有生物药物分析方法都必须同时作标准曲线。
每次作标准曲线时，方法应与分析方法考核时完全一致。
标准浓度应包括一定梯度的5-8个浓度(非线性者如免疫分析可适当增加)，每个浓度只需测定一次(免疫分析可测定两次并取均值)；标准曲线应覆盖样品可能的浓度范围，对于含量测定要求一般浓度上限为样品最高浓度的120％，下限为样品最低浓度的80％ (但应高于LOQ)；目前仍广泛采用相关系数(r)表示标准曲线的线性度、并控制r≥0.9900。
对照品的LOQ必须包括在线性范围。
线性范围是指与检测器响应信号成线性关系的样品的含量范围.一般情况下,标准曲线的最低和最高值是包含在线性范围内的,而且不同人做的标准曲线,他所取的最低和最高值也不会都相同,打个比方来说,A做5个点的标准曲线,所选择的标准样品的浓度分别为:1,5,10,15,20,那么最低最高值分别为1和20,而对于这种要检测的物质来说,它的线性范围可能是10E5,要远大于制作标准曲线所选择的浓度范围.通常在建立一个新方法的时候可以通过文献查到一些物质的线性范围,而实际工作中,要确切知道某种物质的线性范围必要性可能也不大。
S/N=3时的浓度是检测限，也就是峰高约在基线噪音高的3倍，注入液相色谱仪的对照品百分浓度％。
S/N=10是定量限，也就是峰高约在基线噪音高的10倍时，注入液相色谱仪的对照品量。
线性范围试验[要诀]
![线性范围试验[要诀]](https://img.taocdn.com/s3/m/502e773bec630b1c59eef8c75fbfc77da269978d.png)
实验5 线性范围试验在光谱分析中，测定该实验条件下被测物质符合Beer定律的浓度范围(线性范围)，是评价分析方法准确性和实用性的重要工作。
通过线性范围测定，选择线性段作为该方法的分析范围，直线上任何一点的待测物浓度与吸光度的比值均为一常数，其斜率tanθ都相等，即tanθ=，此处的值称为校正常数，可用于计算测定结果。
这样，可使具有临床意义的标本测定值都限定在此范围内，以保证测定结果的可靠。
线性误差表现为溶液的浓度与吸光度不成线性关系，出现正偏离或负偏离的现象。
这种偏离，按Beer定律现象来自两个方面：一是溶液本身不符合Beer定律，这种现象叫做化学偏离；二是仪器本身各种因素的影响，使吸光度与浓度之间不成线性，这种现象叫仪器偏离，如杂光、有限带宽、检测器噪声、环境条件的变化、波长的变动、比色杯的误差、辐射光的非平行性、检测器本身的非线性等。
因此，在做方法学线性范围评价实验时，良好的仪器性能是必须的。
【原理】使用不同浓度的葡萄糖标准溶液，用GOD-POD法试剂测定各自的吸光度，以标准浓度为横坐标，以其对应的吸光度为纵坐标，在方格纸上作图，即可绘制出一条直线，即剂量反应曲线(dose-respones curve)。
一般测定方法的线性范围要求能覆盖临床上的参考值和常见疾病的医学决定水平，以减少标本稀释重测的机会。
【试剂】1．40mmol/L葡萄糖标准溶液称取已干燥恒重的无水葡萄糖0.7208g，溶于12mmol/L 苯甲酸溶液约70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。
2h后方可应用。
2．其它试剂同GOD-POD法试剂。
【操作步骤】按表2-1操作表2-1血糖与GOD-POD试剂剂量反应曲线的制作加入物标准管0 1 2 3 4 5葡萄糖标准液(μl) 0 2 4 6 8 10 蒸馏水(μl) 10 8 6 4 2 0 GOD-POD试剂(ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5下同GOD-POD法，读取各管吸光度。
临床验证线性样本选择
临床验证线性样本选择临床实验室方法学评价包括精密度，正确度，参考区间和线性等。
线性评价是评价某一被测物在某一浓度范围内，其测定值与实际浓度或活性在数学上有明确直线关系的能力。
线性是临床实验室测定方法的重要特性，某种检测方法线性范围的宽窄决定为临床服务能力的大小，例如线性上限的不足就不能很好的对患者病情进行预后评估和监测，线性下限不足会影响患者根治手术的效果评估。
目前，临床常用的方法学线性评估方法分别为目测法，改良doumas法，《临床化学设备线性评价指南》(卫生行业标准)以及美国临床实验室标准化研究所(clsi)ep6-a法。
目测法简单直观，但是不能对线性做出精确的判断，故一般只作为初步评估线性的一种手段。
改良doumas法首先拟合成一条直线，然后基于统计学原理判断斜率(b)是否与1无差异，截距(a)是否与0无差异。
这种判断方法过于严格，得到的线性范围往往较窄，且不能判断具体哪个点偏离了线性。
《临床化学设备线性评价指南》和ep6-a都是采用多项式回归分析，但当出现非线性时，前者不能很好的判断此非线性是否能为临床接受。
ep6则能运用“差值法”直观显示非线性程度和非线性位置。
ep6采用多项式模型，若非线性系数与0比较差异有统计学意义，仅表示检测到了非线性。
若此非线性引入的误差不超过临床允许误差时，则称为临床可接受线性。
ep6法更具有临床实用性。
除了对单个检测系统进行线性评价外，还需要对多系统或多个实验室进行线性验证，如美国病理学会(cap)的能力验证计划(pt)中包含多个线性计划，如ln-2，ln-6，ln-30等。
线性评价的科学性在于样本的配制，传统方法是采用加样枪的方法，但是容易受到吸样量不准的影响，并且没有评估高低值的样本混合之后的混合液体积的变化。
低检测限与线性范围试验
影响因素
仪器噪音
仪器本身的噪音水平会影响检测限， 因此需要选择低噪音仪器。
样品基质
样品基质中的其他组分可能会干扰待 测物的测量，需进行基质匹配或消除 干扰。
测量方法
选择合适的测量方法，如光谱法、色 谱法等，以提高检测灵敏度。
环境因素
环境温度、湿度等环境因素可能影响 仪器的性能和稳定性，需进行控制。
联用技术
尝试与其他分离、富集技术联用，进一步提 高目标组分的检出限和准确性。
标准化与规范化
制定该方法的操作规程和标准，推动其在行 业内得到更广泛的应用和认可。
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生态毒理学研究
低检测限与线性范围试验在生态毒理学研究中用于检测环境中的有毒物质对生物体的影响。这些研究有助于了解有毒 物质对生态系统的影响，并为环境保护和可持续发展提供科学依据。
放射性核素测量
低检测限与线性范围试验在放射性核素测量中用于精确测量放射性物质的活度和浓度。这些测量有助于 核能安全、核废料处理和核医学等领域的研究和管理。
药物分析
01
药物质量控制
低检测限与线性范围试验在药物分析中用于药物质量控制，确保药物的
有效性和安全性。这些试验用于检测药物中的杂质、降解产物和溶剂残
留等，以确保药物的质量和稳定性。
02
药代动力学研究
低检测限与线性范围试验在药代动力学研究中用于测量药物在体内的浓
度。这些研究有助于了解药物在体内的吸收、分布、代谢和排泄过程，
验证仪器性能
在确定的线性范围内，对仪器进行验 证，确保其性能理
对试验数据进行处理，包括数据清洗、异常值剔除等。
线性关系评估
根据标准曲线的斜率和截距，评估仪器与标准品之间的线性关系。
标准曲线的线性范围
标准曲线的线性范围标准曲线的线性范围是指在一定浓度范围内，检测方法对浓度与响应值之间呈线性关系的范围。
在实际分析中，线性范围的确定对于准确测定样品的浓度至关重要。
本文将详细介绍标准曲线的线性范围的概念、确定方法以及实际应用。
标准曲线的线性范围概念。
标准曲线的线性范围是指在一定浓度范围内，检测方法对浓度与响应值之间呈线性关系的范围。
在该范围内，样品的浓度与检测方法的响应值成正比，可以通过线性方程进行描述。
一般来说，线性范围越宽，检测方法对样品浓度的测定范围也就越广。
确定方法。
确定标准曲线的线性范围的方法有多种，常用的方法包括逐点法、最小二乘法、相关系数法等。
逐点法是最直观的确定方法，即通过一系列标准溶液的浓度与检测方法的响应值进行绘图，观察曲线的线性范围。
最小二乘法则是通过最小化实测值与拟合值之间的误差平方和来确定线性范围。
相关系数法则是通过计算相关系数来确定线性范围，相关系数越接近于1，线性范围越宽。
实际应用。
在实际分析中，确定标准曲线的线性范围对于准确测定样品的浓度至关重要。
首先，确定线性范围可以帮助选择合适的标准溶液浓度范围，避免溶液浓度过高或过低而导致测定结果不准确。
其次，确定线性范围可以帮助评价检测方法的灵敏度和准确性，为方法的优化提供依据。
最后，确定线性范围可以帮助验证检测方法的可靠性，确保在一定浓度范围内测定结果准确可靠。
总结。
标准曲线的线性范围是确定检测方法对浓度与响应值呈线性关系的范围，其确定方法包括逐点法、最小二乘法、相关系数法等。
在实际分析中，确定线性范围对于准确测定样品的浓度至关重要，可以帮助选择合适的标准溶液浓度范围、评价检测方法的灵敏度和准确性，以及验证检测方法的可靠性。
因此，对于每种检测方法，都应该进行严格的线性范围确定，确保测定结果的准确可靠性。
检定或校准结果的验证方法
检定或校准结果的验证方法以检定或校准结果的验证方法为标题，写一篇文章在科学研究和工程领域中，检定和校准是非常重要的步骤，用于验证仪器设备的准确性和可靠性。
然而，仪器设备的检定或校准结果本身也需要进行验证，以确保其准确性和可信度。
本文将介绍一些常用的验证方法，以帮助读者更好地理解和应用这些方法。
一、重复性验证重复性验证是一种常见的验证方法，用于评估同一台仪器设备在相同条件下的重复测量结果的一致性。
在进行重复性验证时，需要选择一组样本，并在相同条件下进行多次测量。
然后，通过计算测量结果的方差或标准差来评估重复性。
如果重复测量结果的方差或标准差较小，则说明仪器设备的重复性较好，结果较为可信。
二、准确度验证准确度验证是用于评估仪器设备测量结果的接近程度的一种验证方法。
在进行准确度验证时，需要选择一组已知浓度或已知值的样本，并使用该仪器设备进行测量。
然后，将测量结果与已知值进行比较，通过计算误差或偏差来评估仪器设备的准确度。
如果测量结果与已知值的误差较小，则说明仪器设备的准确度较高，结果较为可靠。
三、灵敏度验证灵敏度验证是一种用于评估仪器设备对测量目标变化的敏感性的验证方法。
在进行灵敏度验证时，需要选择一组不同浓度或不同值的样本，并使用该仪器设备进行测量。
然后，通过分析测量结果与浓度或值之间的关系，来评估仪器设备的灵敏度。
如果测量结果能够准确地反映浓度或值的变化，且变化越大测量结果的差异越明显，则说明仪器设备的灵敏度较高，结果较为可靠。
四、线性范围验证线性范围验证是一种用于评估仪器设备在一定浓度或值范围内测量结果的一致性的验证方法。
在进行线性范围验证时，需要选择一组不同浓度或不同值的样本，并使用该仪器设备进行测量。
然后，通过分析测量结果与浓度或值之间的线性关系，来评估仪器设备的线性范围。
如果测量结果能够准确地反映浓度或值的变化，并且变化范围越大测量结果的线性关系越好，则说明仪器设备的线性范围较广，结果较为可信。
如何评估体外诊断试剂盒线性范围
如何评估体外诊断试剂盒线性范围线性范围评估资料是评价拟上市试剂盒有效性的重要依据，也是诊断试剂盒注册所需的重要申报资料之一。
目前我国定量体外诊断试剂盒注册检验包括线性范围、准确度、特异性、最低检出限、精密度等指标。
本文根据《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则》（征求意见稿）对体外诊断试剂盒线性范围评估进行分析。
要求：体外诊断试剂盒校准品的浓度应覆盖整个厂家声明的线性范围的系列浓度。
绘制散点图及离群值的发现和处理：散点图的绘制对于线性范围评价非常重要，其作用包括：①初步获得数据的线性关系（直线、抛物线或S型曲线等），以初步核实企业标准中声明的线性回归方程的正确性。
②观察数据的精密性，当与其他浓度相比某个浓度水平精密度较低时，特别是发生在声明的线性范围的两端，应注意线性范围是否过宽的情况；发现离群值，明显的离群值可以通过观察散点图被容易的发现。
若只有一个离群值，则可剔除，不必重复实验，但当离群值多于一个时，应仔细分析，找出问题所在并重复实验，然后使用新数据进行分析。
线性回归分析：使用企业声明的方程，通过适当的软件，对数据进行回归分析，置信水平一般为双侧0.05，计算方程的相关系数r或确定系数R2，应符合企业注册标准中的规定。
根据行业标准，相关系数r的绝对值一般应不小于0.98。
当散点图明显提示拟合的曲线可能过原点时，或数据计算是已扣除零点样本读数时，应注意检验回归方程中的截距项。
利用样本对体外诊断试剂盒线性范围评价要求：定量体外诊断试剂产品注册检验线性评价涉及的样本通常是临床样本、企业内部校准品、国家参考品或国际标准品等。
样本应不少于5个、能覆盖整个厂家声明的线性范围，每个浓度水平样本测定应不少于2次。
各样本可以是绝对浓度或相对值来标识。
理想的情况下，应使用高值和低值临床样本按比例混合得到系列浓度的样本，这主要考虑的是基质效应对检测结果的影响。
绘制散点图及离群值的发现和处理：同校准品的线性范围评价。
标准曲线线性范围
标准曲线线性范围标准曲线线性范围是指在一定的条件下，检测方法所能检测物质浓度的线性范围。
在实际的实验室工作中，我们经常需要对样品中的物质进行定量分析，而标准曲线线性范围的确定对于准确的定量分析至关重要。
因此，本文将就标准曲线线性范围的概念、确定方法以及应用进行详细介绍。
首先，标准曲线线性范围是指在一定的浓度范围内，检测方法所能检测物质浓度的线性范围。
一般来说，线性范围越宽，说明检测方法对于样品中物质浓度的测定范围越广。
而线性范围的确定需要通过实验数据来进行验证，一般来说，线性范围的确定是通过制备一系列不同浓度的标准溶液，进行测定后绘制标准曲线来确定的。
其次，确定标准曲线线性范围的方法一般有两种，一种是直接法，另一种是间接法。
直接法是指通过制备一系列不同浓度的标准溶液，进行测定后绘制标准曲线来确定线性范围。
而间接法则是通过对样品进行稀释，使其浓度适应已知的线性范围，然后进行测定，最后通过反算来确定线性范围。
这两种方法各有优缺点，需要根据实际情况选择合适的方法进行确定。
在实际应用中，确定标准曲线线性范围对于定量分析具有重要意义。
首先，确定了标准曲线线性范围后，可以根据待测样品的浓度选择合适的稀释倍数，使其浓度适应已知的线性范围，从而保证测定结果的准确性。
其次，对于不同的检测方法和仪器，线性范围的确定也有所不同，因此在实际工作中需要根据具体情况进行合理选择。
总之，标准曲线线性范围的确定对于定量分析具有重要意义。
通过实验数据的验证，可以准确地确定检测方法所能检测物质浓度的线性范围，从而保证定量分析结果的准确性和可靠性。
因此，在实际工作中需要重视标准曲线线性范围的确定，并根据实际情况选择合适的确定方法，从而保证实验数据的准确性和可靠性。
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1个——去掉后进行下一步计算
2个及以上——找出问题，重新测量数据1个——去掉后进行下一步计算
2个及以上——找出问题，重新测量数据不精密度在不同浓度大致相同rij不同浓度下各个测量值
CAP-IRC 1.计算不精密度
在选定范围内为线性
有意义EP-6a
1.每个浓度点均符合要求，统计学上非线性，但非线性误差小于设定
#需要在进行回归分析后计算此步骤
回归分析
没有意义非线性系数
（b2，b3）根据
t值确定是否有加权线性模型，非常复杂，专业人员计算
2.不精密度与
临界值比较，观察
是否符合要求
ri该浓度下平均值
不精密度在不同浓度大致相同
（在不同浓度，不精密度明显差异）
目测法，找出明显差值CAP-IRC Grubbs检验法
计算不精密度EP-6a 数据EP-6a
CAP-IRC
检查离群值EP-6a
CAP-IRC 计算最优拟合曲线
与直线平均差值
与临界值比较，确定是否为线性；
目标，误差不重要，实际工作中可以认为线性。
2.有一个浓度点不符合要求，非线性（若在两端可以去除值后重新计算，缩小线性范围）。