第五章指纹图谱

红外光谱图
小蓟丁酮提取物的红外 指纹图谱
• 中国药典规定：小 蓟在开花时采。
• 根据1384cm-1处 吸收峰的有无，可 以鉴别其采集时间 是否正确。
质谱（ＭＳ）
• 按照带电粒子的质荷比（ｍ／ｚ）和其相 对丰度大小排列组成图谱。
• 中药特征提取物置质谱仪中进行轰击裂解 为不同的碎片，获得提取物中化学成分的 MS图，不同中药由于所含化学成分的种类 及组成比例的不同，所得质谱图中分子离 子峰和碎片离子峰亦不一致。
色谱指纹图谱
薄层色谱
●可在同板同时分析多达18个样品， 时效高
●所用的是正相展开剂，其组成变化 灵活，可适应多种成分的分离
●离线操作，即可直观比较图谱，又 可扫描得到轮廓图和处理数据
●占机时间短
●展距局限在 10cm~20cm ，‘柱效’ 相对较低，对复杂组分 不提高分离度则难以提 取指纹特征的药材受到 限制。
2 .基因组学指纹图谱： 用以阐明中药作用的个体差异和特定基因的作用模 式。
3.蛋白组学指纹图谱： 全面提供中药负杂物质基础的大量信息，同时还能 提供量效的相关信息，具有鉴定和研究的双重作 用，对于制剂可以确定该制剂的主要活性物质。
第二节中药指纹图谱研究程序及技术要求
固定产地、采收期 和加工炮制的中药
代表性 均一性
10批以上中药
预处理
中药未 知检品
图谱测试、相似度评价 方法检验
评价标准
图
药效学试验
谱
相关性
评
价
供试品溶液
选择测试条件 方法建立考察
中药指纹图谱
测定图谱参数
图谱分析
图谱信息
不同产地、采收期 和加工炮制的中药
一、样品收集
1. 最关键的步骤 真实性 代表性 2. 10批以上 3. 原药材 ：不同产地、不同采收季节等
●流动相选择范围宽
●灵敏度高
●色谱柱可多次重复使用
●流出组分可以收集
●采用多种检测器，可同时获 取保留值信息和化合物的光谱、 质谱信息
诃子指纹图谱
I
II
III 诃子
小诃子 大诃子 绒毛诃子
（1） 紫外可见分光光度法和红外光谱法 这两种方法能够给出药效物质基础的结构信息
，但所给出的信息是所有化学物质结构结构信息的加 和，不具备指纹特征，但可作为中药指纹图谱研究的 辅助方法。
●分离效能高 ●分析速度快 ●高分辨率 ●可与紫外、荧光、电化学、质 谱、拉曼光谱等联用，可提供更 丰富的化学结构信息
H P C E 指 纹 图 谱
反相高效液相色谱 (RP-HPLC)
●适用范围广 ●分离性能好 ●分析速度快
对较为复杂的色谱实 验条件要求比较苛刻，由 此带来不同实验室之间重 现性的难度增大
●可提供保留值信息，与质 谱联用，还可提供更丰富的 化学结构信息
• 分辨率高，得到的 色谱组份非常复杂， 尤其是含挥发油药材， 单萜类成分组成很不 稳定，样品间差异可 能很大，处理数据和 判别相似度时一定程 度的取舍
肉桂油的气相色谱指纹图谱
羌活GC指纹图谱 独活GC指纹图谱
毛细管电泳 Capillary Electrophoresis
●开放系统，对环境温 度、相对湿度要求较高
●具有色彩参数，可获得色彩丰富的 色谱图像，直观性强；同时辅以功能 团显色剂还可提示成分的类别，提高 鉴别的专属性。
TLC举例：区分不同品种
TLC举例：监控工艺
气相色谱 Gas Chromatography (GC)
●分离效能高
●分析速度快
●适用于植物的挥发油成分 及其它易挥发性成分或可转 化为可挥发的成分测定
中药指纹图谱的含义
中药经适当处理后，采用一定的 分析手段，得到的能够标示该中 药特征的共有峰的图谱。
中药指纹图谱的特性
能反映中药 有效部位所 含大部分成 分的种类， 或指标成分 的全部
能特征地区 分中药的真 伪与优劣
稳定性（重现性）
在规定的方法与条件下，不同的操作者和 不同的实验室应能重复
第一节 概述
二、供试品溶液制备
原则 1. 确保中药中的主要化学成分或有效成分在 图谱中得以体现 2. 所含成分的理化性质和检测方法
第五章 中药指纹图谱
Fingerprints of Chinese MateriHale Waihona Puke Baidu Medica
第一节 概述 指纹图谱的起源与发展
指纹图谱技术应用于植物药质量控制，是从20世纪 70 年 代 ， 色 谱 技 术 的 发 展 ， 人 们 大 量 采 用 薄 层 色 谱 （ TLC）方法，将植物中化学成分展载于由各种担体铺成 的薄层板上。根据薄层板上的斑点的位置、斑点大小、 斑点颜色、斑点数目的多少进行定性鉴别，这种薄层鉴 别方法具备了指纹图谱的特征。
指纹图谱中应包含的信息
1. 对于中药材和中药饮片：种的共性，用药 部位的共性，产地的个性，采收期、炮制 方法的个性信息。
2. 对于半成品和中药制剂：原药材（甚至辅 料）的信息；工艺信息等。
3. 药效信息：药效信息。
中药指纹图谱构建方法
TLC
色谱技术 HPLC, LC/MS
GC, GC/MS
HPCE, CE/MS 光谱技术 UV IR 波谱技术 MS NMR X-射线衍射法 分子生物学技术
X射线衍射法（XRD）及核 磁共振法（NMR）
• 这两种方法能给出药效物质基础的结构信 息，部分信息也可能与特定化学成分直接 关联。但该两种方法所使用的仪器在国内 尚未普及，不适应该方法的应用与推广。 在中药指纹图谱研究过程中不建议采用X射 线衍射法及核磁共振法。
生物学方法
1. DNA指纹图谱： 用于中药真伪、品种及种质资源的鉴定。
（1） 紫外可见分光光度法和红外光谱法
操作简便（不需要复杂的提取 仪器）、快速、准确、经济、 溶剂低毒、重复性高、实用性 强。
●几乎所有的物质都有特征的 红外光谱。
●虽然植物中药提取物还是一 个混合物，但是由于不同物 质的红外光谱具有加合性， 因此，植物中药提取物的红 外光谱能反映出所有成分的 综合信息因而具有全息光谱 的特点。
建立中药指纹图谱检测标准的必要性
中药 ➢ 药材 ➢ 饮片 ➢ 提取物 ➢ 中成药
特点与问题
➢ 来源于生物，化 学成分变化大
➢ 化学成分复杂， 有效成分尚未阐 明
➢ 多成分、多靶点 作用
➢ 种植技术与生产 过程控制水平差
单指标或少数 指标定性、 定量分析
？
特征图谱鉴别 指纹图谱整体
成分控制
药品 ➢ 质量一致性 ➢ 生物等效性 ➢ 使用安全性