ELISA实验常见问题
ELISA常见问题和处理
问题可能原因解决方法1、无颜色试剂孵育的时间没有按说明书操作。
确定生物素化抗体，连接的HRP试剂或链霉亲和素-HRP使用的时间是否适当。
2、不同试剂盒或不同批号的试剂混用。
重新检查试剂的标签，确准所有组分都属于正使用的试剂盒中的。
不能混用不同试剂盒或不同批号的试剂。
3、漏加酶检查操作流程，注意不要漏加5、HRP酶污染了叠氮钠使用新配制的试剂，禁含叠氮钠标准品有问题(若在标本孔中有信号)按说明书检查标准品的制备使用1瓶新标准品某一容器未洗净,残留灭活酶物质尽可能用试剂盒内容器,另觅一定要洁净、可靠使用含血清的缓冲液配制/复溶抗体重新确认所选用的试剂.漏加显色剂A或B加显色剂后观察一下液面高度试剂配制/使用有误将实验重做；严格按说明书操作，每次配制和使用前看清标签。
缓冲液污染配制新新鲜的缓冲液显色弱超过有效期的产品可能会产生很弱的信号。
检查产品的有效期加入试剂的体积和时间有误确定所使用的每一个试剂的体积正确的和加入的时间是适当的。
试剂、样品用前未能平衡用前试剂、样品置室温平衡10分钟左右缩短孵育时间能使实验的信号变弱。
检查孵育的时间。
在温度变化的环境内孵育酶标板。
确定孵育的温度，应避免温度的变化。
使用了被污染的试剂检查试剂是否被污染。
标准品/标本制备方法不规范检查标准品/标本的制备，标准品应按说明书进行复溶和稀释。
低温贮存的标本避免反复冻融，严禁使用溶血标本。
样品用NaN3防腐,抑制了酶的反应显色底物制备不规范检查底物的制备，如体积是否正确，混合是否恰当充分。
检测时间不当是否在规定的时间内检测。
仪器设定不正确，滤光片不匹配。
仪器是否设定正确，滤光片的使用等。
高背景(本底)洗涤操作不规范洗板不充分，使用手工洗板常出现。
最好使用洗板机，或使用洗瓶洗涤。
每孔应完全充满洗涤缓冲液，倾出时应迅速。
若使用洗板机，应校准并设定足够充满每孔的体积量。
板的内侧不应接触设备。
检查每孔是否有残留的洗液或每孔加样量的体积是否准确。
ELISA 出现的问题及解决方法
ELISA试剂盒可能出现的问题及解决方法问题及现象原因解决办法1整块板最终反应未产生颜色或整体吸光度值偏低1.室温过低或试剂未回至室温。
2.试剂失效。
3.试剂过失效日期。
4.试剂开启时间过长，污染。
5.移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸头内壁挂液太多或者内壁不清洁。
6.反应时间不足。
7.洗涤时冲击力太大，洗涤液浸泡时间太长，洗涤次数增加。
1.控制室温并确保试剂回至室温。
2.与我公司联系。
3.更换新批号的试剂盒。
4.试剂开启后尽快用完。
5.校正移液器，吸头要配套，每次装吸头要吻合紧密。
移液不宜过快，排放应完全。
吸头内壁要清洁，最好一次性使用。
6.准确计时。
7.减少洗涤冲击力，按说明书要求浸泡时间，准确记住洗涤次数8.蒸馏水水质有问题。
9.样品添加了防腐剂，抑制了酶的反应8.测定蒸馏水配剂对酶联免疫的影响9.样品中不能添加防腐剂2整行或整列板孔最终反应产生颜色深，无梯度10.手工洗板时相对应的吸头与移液器接触不严，导致未吸上洗涤用水或吸上的水量不够。
11.洗板机洗板时相对应的管路阻塞，导致未注入洗涤用水或水量不够。
10.洗板前检查吸头是否接牢固，是否高矮一致并且在一条直线上。
如果在安装吸头时感觉不易安装牢固请不要使用。
曾发现过有的国内厂商的吸头不直，不易安装牢固，请不要使用，避免造成实验失败。
11.检查管路是否阻塞，出水不畅并疏通，检查注水量是否充分。
3标准曲线不成良好的S型，请与盒中的质检报告曲12.加完酶标记物之后的手工洗板步骤失败。
洗涤用水被板孔中游离的酶标记物污染。
12.注意加洗涤水的移液器吸头尖必须置于微孔板上方约1厘米处打出洗涤水，绝对避免注入板孔中的液体接触到或溅到移液器管尖上而将板孔线对比13.加完酶标记物之后的洗板机洗板步骤失败。
洗涤次数不够及注水量不够。
14.洗板后未立即进行下一步操作，中间间隔过长。
15.当板孔中含有两种以上的试剂时未能充分混均。
中游离的酶标记物带回到洗涤用水中。
ELISA实验做不好？我们为您汇总了常见的30个问题！
ELISA实验做不好？我们为您汇总了常见的30个问题！ELISA（免疫酶联吸附实验）是免疫学基础实验之一，大部分生命科学领域的科研工作者对其都不陌生。
因为其特异性强，灵敏度高，可精确定量的特性，在基础科研和临床诊断中，ELISA技术都应用广泛，相信很多关注我们的小伙伴也都做过ELISA。
ELISA实验步骤少，流程短，购买的即用型试剂盒也都有指导性很强的操作说明书，单次实验3-6小时即可得到结果，实验小白也可以很快的上手。
但是，各位同学可不要轻视哦，ELISA和WB、IHC等基础免疫实验一样，都是易学难精，上手容易，但想要得到稳定的结果，还是要花一点心思的。
小编在这里汇总了一些做ELISA的客户咨询我们的问题，把其中有代表性的集中做成了FAQ，大家快看看这其中有没有困扰你ELISA实验的问题吧~Q: ELISA可以检测胞内蛋白么？A:可以的，大部分ELISA指标均为炎症因子、趋化因子等分泌类型蛋白，支持的样本类型也多为血清、血浆、细胞培养上清等液体样本。
如需检测胞内蛋白，首先需要确认待测指标是否在胞内表达，然后选用支持组织匀浆样本的ELISA试剂盒即可，将组织样品或细胞样品进行裂解，提取胞内蛋白后进行蛋白定量，保证每孔上样总蛋白量一致即可。
Q: ELISA可以测DNA的表观么？A:不可以，ELISA是利用免疫学原理，定量检测蛋白质表达的技术。
测DNA表观遗传学，主要是检测DNA甲基化，可以选用ChIP 技术。
Q:夹心法ELISA实验中的捕获抗体和检测抗体是同一个抗体么？A:不是的，在双抗夹心法ELISA实验中，会同时用到捕获抗体和检测抗体，这两个抗体是针对同一抗原蛋白的不同抗原位点的两种抗体，这样才可以同时结合抗原分子。
这也是双抗夹心法ELISA不适用与小分子抗原和半抗原等待测指标的原因。
Q:试剂盒里面有捕获抗体么？A:即用型ELISA试剂盒中，捕获抗体已经预包被至试剂盒中的ELISA板上，没有单独的捕获抗体提供，直接使用ELISA板孵育稀释后的样本及标准品即可。
ELISA常见问题
1、ELISA试验的稳定性问题做ELISA实验时，结果老是重复性不上，相同的材料和相同的操作方法做出的结果就截然不同，上午做时其OD在1.5，下午做时就是0.9了，所以都没有办法下结论，为什么会差异这么大呀？（1）多设平行空孔，请别人代劳，以判断究竟是否操作问题（2）对于活性非常高的包被物和酶标记物，如果第一次选择的范围恰好在其平台位置边缘，那么在重复的时候，每次取样带来的微量误差就很容易导致大的偏差了，特别是线性比较好的原料试剂，这个就很正常了。
建议每次取样的时候只使枪尖一点点位于液面下，以免吸嘴外面沾有少量抗原or抗体or酶而使结果重复不上。
2、酶不稳定，有何高招？（1）保存浓度尽量高些，（2）另外可以添加牛血清白蛋白等蛋白保护剂，以避免其被吸附或沉降以及被蛋白酶所降解。
（3）加入50%甘油-20度保存、避免反复冻融。
（4）还可以加入防腐剂防止长菌（注意不能用叠氮钠，其对HRP活性有很大影响）（5）现在一些公司也有商品化的酶标保护剂供应，可以考虑一下酶类的稳定性与保存方法的很大关系。
干燥的制品一般比较稳定，在低温情况下其活性可在数日甚至数年无明显变化，贮藏要求简单，只要将干燥的样品置于干燥器内（内装有干燥剂）密封，保持0－4度冰箱即可。
液态稳定性较差，贮藏时应注意以下几点：1、样品不能太稀，必须浓缩到一定浓度才能封装贮藏，样品太稀易降解、变性。
2、一般需加入防腐剂和稳定剂，酶常用的稳定剂有硫酸铵糊、蔗糖、甘油等，也可加入底物和辅酶以提高其稳定性。
此外，钙、锌、硼酸等溶液对某些酶也有一定保护作用。
3、贮藏温度要求低，避免反复冻融。
3、ELISA试验中不加标本的OD值反而高于加人的阴性标本的OD值，是什么原因呀？做夹心法ELISA试验中不加标本的OD值反而高于加人的阴性标本的OD值，是什么原因呀？最大的原因是封闭的效果不好，应该调整封闭液；可以尝试不同的封闭剂（BSA、胶脂奶粉、明胶等）、不同的封闭浓度、时间，试试哪个效果好阴性的里面的其他蛋白起到了封闭的效果4、边缘的阴性OD值老是比中间的偏高，什么原因呢？我做ELISA时，有一段时间在板的最后一条板孔的阴性的OD值经常比在中间的高，有时候高出0.1个OD，导致实验经常重复，但原因也找不到在哪里？这可能是由于ELISA的边缘效应造成的。
ELISA中常见问题及解决方法：
ELISA中常见问题及解决方法：ELISA试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。
我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。
下面分析Elisa试验操作中可能影响结果的原因，并给出相应的解决办法1 选择试剂选择质量优良的检测试剂，严格按照试剂说明书进行操作，操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。
2 加样可能原因：1)血清或血浆标本分离不好即进行加样；2)手工操作中，加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)；3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。
解决办法：1) 标本为血清：最好将血液先自然存放1-2小时后，再用3000rmp离心15分钟；标本为血浆：必须使用含抗凝剂的血液标本收集管，采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次，放置一段时间后，3000rpm离心15分钟；若在几天内检测，可放在2-8℃冰箱中，若要贮存，则置于-20℃的低温冰箱内。
2) 加样后及时放入孵箱。
3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。
4) 如果采用AT或其他全自动加样，最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。
5) 标本较多时，请分批操作。
3 孵育可能原因：1) 孵育时未贴封片或加盖，使标本或稀释液蒸发，吸附于孔壁，难于清洗彻底；2) 孵育时间人为延长，导致非特异性结合紧附于反应孔周围，难以清洗彻底。
解决办法：1) 贴封片或加盖；2) 按说明步骤严格控制操作时间。
4 洗板可能原因：1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。
2) 采用半自动洗板机洗板时，洗液量不足，导致洗板不彻底；洗板针堵塞，抽吸不完全；洗板不畅，导致洗板效果差。
3) 反应板过多造成洗板等待时间长。
解决办法：1) 保证洗液注满各孔，洗板针畅通，洗完板后最好在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干；2) 合理安排，或多用几台洗板机。
ELISA实验操作中常见问题分析
ELISA实验操作中常见问题分析1 标本及采集、贮运因素严峻溶血，以HRP 为标记的ELISA 测定中，残留在孔内的血红蛋白具有过氧化物酶样活性，催化底物显色造成假阳性；混有红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗净；如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应；标本凝固不全，有时为了争取时刻快速检测，常在血液还未开始凝固时即强行离心分离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中能够形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；采血试管洗涤不完全、反复使用易交叉污染；塑料试管能吸附抗原物质，样本久置在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。
血清标本宜在新奇时检测，严峻溶血标本禁用。
一样说来，在5 天内测定的血清标本可放置于4℃，标本在冰箱中储存时刻过长导致血清IgG 聚合，使间接法的试剂本底加深。
超过一周测定的需－20℃储存。
冻结血清融解后，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混匀并幸免产动气泡。
混浊或有沉淀的血清标本应先离心或过滤，澄清后再检测。
反复冻融会使抗体效价跌落，因此测抗体的血清标本如需储存作多次检测，宜少量分装冰存；最好使用一次性玻璃试管或真空管采血管；并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，可能与高浓度肝素具有强大的负电荷能吸附酶标记物不易洗脱有关；EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性；血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。
2、试剂的阻碍ELISA 诊断试剂经历了从合成肽向基因工程抗原的过渡。
由于历史的缘故，人们往往以反应本底的好坏来衡量ELISA 反应试剂盒，因此有些厂家为了保持较好的本底采纳了单片段基因工程抗原及合成肽包被，该类试剂盒的流行病学敏锐度不够，稳固性也成问题。
也有厂家坚持试剂盒高的流行病学敏锐度，科学地对待反应结果。
基因工程抗原较合成肽抗原有无可比拟的优越性，就HCV-ELISA 试剂盒来讲，第一代产品为合成肽抗原，要紧是HCV 特异性抗原决定簇的肽片段；第二代产品包被的抗原既有基因工程抗原又有合成肽，只是当时的基因工程抗原不全，仅包括了HCV 的核心区片段；第三代产品差不多上采纳了基因工程抗原，而且这些抗原包括更多、更稳固、纯度更高的HCV 特异性抗原。
ELISA 出现的问题及解决方法
ELISA试剂盒可能出现的问题及解决方法问题及现象原因解决办法1整块板最终反应未产生颜色或整体吸光度值偏低1.室温过低或试剂未回至室温。
2.试剂失效。
3.试剂过失效日期。
4.试剂开启时间过长，污染。
5.移液器吸量不足，移液抽吸排放太快，吸头内壁挂液太多或者内壁不清洁。
6.反应时间不足。
7.洗涤时冲击力太大，洗涤液浸泡时间太长，洗涤次数增加。
1.控制室温并确保试剂回至室温。
2.与我公司联系。
3.更换新批号的试剂盒。
4.试剂开启后尽快用完。
5.校正移液器，吸头要配套，每次装吸头要吻合紧密。
移液不宜过快，排放应完全。
吸头内壁要清洁，最好一次性使用。
6.准确计时。
7.减少洗涤冲击力，按说明书要求浸泡时间，准确记住洗涤次数8.蒸馏水水质有问题。
9.样品添加了防腐剂，抑制了酶的反应8.测定蒸馏水配剂对酶联免疫的影响9.样品中不能添加防腐剂2整行或整列板孔最终反应产生颜色深，无梯度10.手工洗板时相对应的吸头与移液器接触不严，导致未吸上洗涤用水或吸上的水量不够。
11.洗板机洗板时相对应的管路阻塞，导致未注入洗涤用水或水量不够。
10.洗板前检查吸头是否接牢固，是否高矮一致并且在一条直线上。
如果在安装吸头时感觉不易安装牢固请不要使用。
曾发现过有的国内厂商的吸头不直，不易安装牢固，请不要使用，避免造成实验失败。
11.检查管路是否阻塞，出水不畅并疏通，检查注水量是否充分。
3标准曲线不成良好的S型，请与盒中的质检报告曲12.加完酶标记物之后的手工洗板步骤失败。
洗涤用水被板孔中游离的酶标记物污染。
12.注意加洗涤水的移液器吸头尖必须置于微孔板上方约1厘米处打出洗涤水，绝对避免注入板孔中的液体接触到或溅到移液器管尖上而将板孔线对比13.加完酶标记物之后的洗板机洗板步骤失败。
洗涤次数不够及注水量不够。
14.洗板后未立即进行下一步操作，中间间隔过长。
15.当板孔中含有两种以上的试剂时未能充分混均。
中游离的酶标记物带回到洗涤用水中。
ELISA实验中的常见问题
ELISA实验中的常见问题1. 产品有哪几种规格？可检测多少个样本？产品规格为96T。
每次实验的标准曲线一般设7个不同浓度，加上空白孔，标准曲线一共需要8个孔。
因此，一个96T试剂盒最多可以测定88个样本（不做重复且一次用完）。
板条可拆卸，可满足您少量多次实验需求。
2. 产品的稳定性如何？产品在研发前期已通过严格的稳定测试，发货前亦须通过检测并提供质检报告，在市场上深受广大客户的赞许！3.一次ELISA实验需要多长时间？双抗体夹心ELISA法一次实验需要3.5-4小时，竞争ELISA法一次实验需要2-2.5小时。
4.血清样本如何处理？全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 血浆样本如何处理？建议选择EDTA或者柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，于1000×g离心15分钟，仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6.细胞上清液样本如何处理？检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（1000×g）。
仔细收集上清。
7.细胞裂解液样本如何处理？检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融或者超声破碎，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心10分钟左右（5000×g）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
8.组织样本如何处理？用预冷的PSB (0.01M,pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
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使用前看清标签。
缓冲液污染
配制新新鲜的缓冲液
加入试剂的体积和时间 有误
确定所使用的每一个试 剂的体积正确的和加入
的时间是适当的。
试剂、样品用前未能平 用前试剂、样品置室温
衡
平衡10分钟左右
缩短孵育时间能使实验 的信号变弱
检查温育的时间
在温度变化的环境内孵 确定孵育的温度，应避
显色弱
育酶标板
免温度的变化
试剂？
是否可增加 或
减少标本的 体积？
商品化的试剂盒所需加入的标本体积是优化的， 应按说明说操作，不建议更改所加标本的体积。
是否可重确 定
自己的标准 曲线
的点
可以。说明书上有建议的制备标准曲线时标准品 的稀释度，可改变稀释倍数和增加曲线的点，但 是必须在实验范围内，高于试剂盒中最高标准品
的点和低于灵敏度以下的点是无效的
加30秒的浸泡。
高背景（本 底）
实验中孵育温度和时间 确定每一实验步骤的孵
不适当
育温度和时间是否适当
酶加量过多
加酶前验看移液器调节 量是否准确。检查稀释 度，若必要进行效价测
定
封闭不完全
检查封闭液的计算量； 提高封闭时间
标本或标准品中的干扰 物质
做适当的对照
显色剂受光照时间较 显色剂A和B应于使用前
确定每两步骤间，酶标 板应保持湿润。使用封 板膜封口，注意每步使
用新鲜的封板膜。
高CV值 （CV：
Coefficient of
由于操作失误或板子质 量差（结合不均匀）造
成包板不均匀。
稀释用的PBS中不要加 其它蛋白，检查包被和 封闭液体积、时间和试 剂加入的方法。检查所 使用的酶标板，使用 ELISA板子（不要使用组
使用了被污染的试剂 检查试剂是否被污染
显色弱
标准品/标本制备方法 不规范
检查标准品/标本的制 备，标准品应按说明书 进行复溶和稀释。低温 贮存的标本避免反复冻 融，严禁使用溶血标
本。样品用NaN3防 腐，抑制了酶的反应。
显色底物制备不规范
检查底物的制备，如体 积是否正确，混合是否
恰当充分。
检测时间不当
是否在规定的时间内检 测。
仪器设定不正确，滤光 检查仪器是否设定正
片不匹配
确，滤光片的使用等
洗涤操作不规范
洗板不充分，使用手工 洗板常出现。最好使用 洗板机，或使用洗瓶洗 涤。每孔应完全充满洗 涤缓冲液，倾出时应迅 速。若使用洗板机，应 校准并设定足够充满每 孔的体积量。板的内侧 不应接触设备。检查每 孔是否有残留的洗液或 每孔加样量的体积是否 正确。在两次洗板之间
织培养板）
variation）， 花板
移液器不准确，吸头重 复使用
检查并校准移液器。每 次取样必须换吸头。回 顾标本的加入步骤，确 保每次加样的准确性， 保证吸取的液体按所设 定的体积吸入和排出， 连续加样时注意检查吸 头，确保所加液体的体
积。
样品离心处理不全，反 应孔内发生凝集或残留
标本充分离心，严禁使
细胞成分
用凝血（溶血）标本
缓冲液污染
制备新鲜的缓冲液
酶结合物不足
检查稀释度，必要时进 行效价测定
标准曲线 可
得到，但两 点之
间区别很差 （低
或平地曲 线）
检查所使用的酶标板，
捕获抗体没有很好结合 到板上
使用ELISA板子（不要使 用组织培养板）稀释用 的PBS中不要加其它蛋
白
检测抗体不足
检查稀释度，必要时进 行效价测定
无颜色
HRP酶污染了叠氮钠
使用新配制的试剂，禁 含叠氮钠
按说明书检查标准品的
标准品有问题（若在标
制备
本孔中有信号）
使用新标准品
某一容器未洗净，残留 灭火酶物质
尽可能用试剂盒内容 器，另觅一定要洁净、
可靠
使用含血清的缓冲液配 制/复溶抗体
重新确认所选用的试剂
将实验重做；严格按说 试剂配制/使用有误 明书操作，每次配制和
备
漂移
在所有试剂加入孔前，
试剂没有按说明书平衡 确保它们已平衡至室
至室温
温，除非说明书中有另
外的要求
是否可更 改
试剂盒提供 的实
验操作步 骤？
一般厂商为确保最高的灵敏度和特异性，对试剂 盒都进行了优化，为确保每一试剂盒实验的规范
性应按说明书操作
是否可混 用
不同试剂盒 不行。绝大多数试剂在每批试剂盒中是特异的。 中的
板子显色不足
延长底物孵育实验 使 用推荐品牌的底物溶液
操作不慎
回顾ELISA操作流程，消 除任何擅自修改的程序
标准曲线稀释度计算有 核查计算的情况，制备
误
新的标准曲线
标准曲线很好 但是没有任何期
在标本中无相应的细胞 因子
使用内参照重复实验， 重新考虑实验的相应参
数
望的阳性信号产 生
标本基质遮盖检测
将标本至少做1:2相应 的稀释，或进行系列稀
长，或污染
10分钟从冰箱取出
整批样品放置时间过 样品应保持新鲜，或低
长，样品污染
温保存，防止污染
缓冲液污染
制备新鲜的缓冲液
高背景（本 底）
吸头重复使用，未洗净 或消毒不完全而用于加 吸头尽可能一次性使用
酶或显色剂
按说明书洗板、加样、 操作不慎或洗涤不充分 显色。洗板尤为重要，
如上所述
出现干板，没有使用封 板膜、封板膜重复使用
释观测它的恢复性
标准曲线很 好
但是标本的 标本中含的细胞因子水 将标本做稀释并再次实
判读
平超过实验范围
验
值很高
当使用HRP 酶
结合物时， TMB
底物加终止 液后
孔中的试剂显色不充分
显绿色
轻轻震荡板子
边缘效应
工作环境温度不均衡
避免将板子在变化温度 环境中孵育
整个实验应连续操作：
实验过程中出现间断
在实验开始前将所有标 准品和标本做适当的准
问题
ELISA实验常见问题 可能原因
解决方法
试剂孵育的时间没有按 说明书操作
确定生物素抗体，连接 的HRP试剂或链霉亲和 素-HRP使用的时间是否
适当
ห้องสมุดไป่ตู้
不同试剂盒或不同批号 的试剂混用
重新检查试剂的标签， 确准所有组份都属于正 使用的试剂盒中的。不 能混用不同试剂盒或不
同批号的试剂
漏加酶或显色剂
检查操作流程，注意不 要漏加