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雷帕霉素增强RSL3对睾丸癌细胞I-10的增殖、侵袭与迁移的抑制作用
睾丸癌是青年人群中最常见的恶性肿瘤［1］。
西方国家发病率在过去20年中上升,手术和以顺铂为基础的化学疗法的结合使得睾丸癌患者的治愈率大于90%［2］。
尽管如此，10%~20%患有转移性疾病的睾丸癌患者不能通过基于顺铂的化疗治愈［3］。
因此，探索治疗睾丸肿瘤的新方法具有研究价值。
铁死亡是一种铁依赖形式的非凋亡细胞死亡，其特征是脂质ROS 的积累［4］。
在细胞和小鼠中进行的遗传学研究确定硒酶谷胱甘肽过氧化物酶（GPX4）是这种形式的细胞死亡的关键调节因子。
GPX4将脂质氢过氧化物转化为脂质醇，这一过程阻止了铁（Fe 2+）依赖的有毒脂质活性氧（ROS ）的形成。
GPX4功能的抑制导致脂质过氧化，并可诱导铁死亡［5,6］。
近年来，人们在设计和开发基于铁死亡诱导的抗癌药物方面做了大量工作，在癌症治疗中引入铁死亡具有很好的治疗潜力［7］。
RSL3是一种常用的铁死亡诱导剂，通过抑制谷胱甘肽Rapamycin enhances inhibitory effect of RSL3on proliferation,invasion and migration of testicular cancer I-10cells in vitroLI Bin,WANG Yue,HOU Fengwei,DU Jiaru,TONG XuhuiSchool of Pharmacy,Bengbu Medical College,Anhui Provincial Engineering Research Center for Biochemical Pharmaceuticals,Bengbu 233030,China摘要：目的探究雷帕霉素增强RSL3对睾丸癌细胞I-10的增殖、侵袭与迁移能力的抑制作用。
方法MTT 法检测RSL3（Type II ）及合用雷帕霉素（RAPA ）作用后I-10细胞的存活率。
将RSL3（0~16μmol/L ）分别以及联合16μmol/L 雷帕霉素作用于睾丸癌细胞I-10，采用MTT 法检测I-10细胞增殖抑制情况，利用集落克隆形成实验检测细胞增殖能力，采用划痕实验和Transwell 小室检测I-10细胞的迁移与侵袭能力，采用流式细胞术检测I-10细胞的脂质活性氧水平，采用GSH 和MDA 检测试剂盒检测细胞中GSH 和MDA 含量，利用Western blot 检测细胞GPX4蛋白表达。
FlowJo中文使用说明书
FlowJo中文实用手册（软件版本：FlowJo7.6.5 2012/06/20 更新）第一章 FlowJo简介 (1)一、FlowJo对电脑配置的要求 (1)二、FlowJo的安装过程(Windows) (1)三、FlowJo的工作台 (5)第二章 FlowJo分析单标样本 (6)一、由原始数据生成单参数直方图的过程 (6)二、图形的输出和保存 (10)第三章 FlowJo分析多色标记样本 (13)一、由原始数据生成二维点图的过程 (13)二、二维点图的设门原则 (16)三、多色标记分析说明 (16)第四章 FlowJo软件荧光补偿 (18)一、用FlowJo做荧光补偿并进行数据分析的步骤 (18)二、FlowJo荧光补偿的具体步骤 (18)三、双指数转换 (24)第五章 FlowJo的批处理功能 (27)一、设门分析的批处理 (27)二、表格分析的批处理 (32)三、图形分析的批处理 (35)第六章 FlowJo分析细胞凋亡样本 (43)一、细胞凋亡概述 (43)二、FlowJo分析凋亡数据的过程 (44)三、凋亡数据结果分析 (45)第七章 FlowJo软件分析细胞周期样本 (47)一、细胞周期分析概述 (47)二、FlowJo分析细胞周期数据的过程 (48)三、细胞周期拟合的调整方法和步骤 (51)四、细胞周期结果分析 (53)第一章 FlowJo简介FlowJo是美国斯坦福大学Leonard Herzenberg（FACS机器的发明者）实验室在90年代研发的一款流式数据分析软件。
FlowJo由于功能强大，简单易用，已经被领域内的科学家、实验室广泛引用；同时FlowJo也是各高影响力核心期刊引用最多的流式数据分析软件。
一、FlowJo对电脑配置的要求1. PC电脑：操作系统：Windows XP，Vista，Windows7内存：512MB及以上网络连接：使用试用序列号及联网序列号必需要有网络连接；加密狗无需网络2. 苹果电脑：操作系统：OSX10.3或者更高版本内存：512MB及以上网络连接：使用试用序列号及联网序列号必需要有网络连接加；密狗无需网络二、FlowJo的安装过程(Windows)•请到我们的网站上下载最新版本：/content/download在此，我们下载V7.6.5 为例/sites/default/files/7.6.5_X32.exe 将文件下载到桌面之后，就可以看到FlowJo安装程序图标。
ANNEXIN V-FITC PI 凋亡检测试剂盒说明书
第1页，共3页ANNEXINV-FITC/PI 凋亡检测试剂盒说明书注意：本产品试剂浓度发生变化，使用前请仔细阅读说明书。
货号：CA1020规格：20T/50T /100T保存：2-8°C ，避光保存，有效期1年。
产品说明：细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面，这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外，使PS 暴露在细胞膜外表面。
PS 是一种带负电荷的磷脂，正常主要存在于细胞膜的内面，在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS 暴露在细胞膜外。
Annexin V 具有易于结合到磷脂类如PS 的特性，对PS 有高度的亲和性。
因此，该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS 。
PS 转移到细胞膜外不是凋亡所独特的，也可发生在细胞坏死中。
两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的，而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就破坏了。
因此，可以采用Annexin V 与PI 双染的方法，通过流式检测细胞早期凋亡。
操作步骤:1.细胞样品的准备：a)对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。
用不含EDTA 的胰酶消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。
再次收集到离心管内。
1000rpm 左右离心5min ，沉淀细胞。
对于特定的细胞，如果细胞无法完全离心至离心管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。
小心吸除上清，可以残留约50µl 左右的培养液，以避免吸走细胞。
加入约1ml 4℃预冷的PBS ，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。
b)对于悬浮细胞：1000rpm 左右离心5min ，沉淀细胞。
对于特定的细胞，如果细胞无法完全离心至离心管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。
小心吸除上清，可以残留约50µl 左右的培养液，以避免吸走细胞。
流式细胞术基本原理与实用技术
流式细胞术基本原理与实用技术流式细胞术（Flow Cytometry）是一种常用的细胞分析技术，它基于光学、电子和计算机技术，能够对单个细胞进行快速、准确的多参数分析。
本文将介绍流式细胞术的基本原理和实用技术。
一、基本原理流式细胞术的基本原理是利用细胞在液体中悬浮的特性，在流动状态下通过一个细胞计数器，同时对细胞进行多参数的检测和分析。
其主要包括以下几个步骤：1. 细胞样品的制备：将待检测的细胞样品进行预处理，如离心、洗涤等，以获得单细胞悬浮液。
2. 细胞的进样：将细胞悬浮液通过微细管道进入流式细胞仪的流动系统中，形成单细胞的液体流。
3. 细胞的定位和聚焦：利用激光束对细胞进行定位和聚焦，使其逐个通过探测区域。
4. 细胞的激发和发射：通过激光束的照射，激发细胞中的荧光染料或标记物，使其发射特定波长的荧光信号。
5. 光信号的收集和处理：收集细胞发射的荧光信号，并经过光学系统进行分光、分束、分光和聚焦，最后通过光电倍增管或光电二极管转换为电信号。
6. 数据的获取和分析：将电信号转化为数字信号，并通过计算机系统进行数据采集、存储和分析，得到细胞的各项参数及相关统计学分析。
二、实用技术1. 细胞标记技术：为了能够准确地检测和分析细胞的特定性质，常常需要对细胞进行特异性的染色或标记。
常用的标记方法包括荧光染料、抗体标记和基因表达标记等。
2. 多参数分析技术：流式细胞术可以同时检测多个参数，如细胞大小、形态、表面标记物的表达、细胞周期等。
通过合理选择和配置荧光染料和滤光片组合，可以实现多重标记和多参数分析。
3. 数据分析软件：流式细胞术产生的数据量庞大，需要借助计算机软件进行数据的分析和解读。
常用的数据分析软件有FlowJo、CellQuest、ModFit等，它们可以对细胞的分布、比例、相关性等进行统计学分析和图形展示。
4. 高通量流式技术：随着科学研究的深入和技术的发展，高通量流式技术逐渐兴起。
它通过提高仪器的样品处理速度和自动化程度，实现对大量样品的快速检测和分析，广泛应用于生物医学研究和临床诊断。
flowjo里面geometric mean的用法
flowjo里面geometric mean的用法FlowJo中的geometric mean什么是geometric mean?Geometric mean（几何均值）是一种统计概念，用于度量一组数据的中心趋势。
它通过将所有数据取对数后进行平均，并然后再求出平均的指数值来计算，以减小极端值的影响。
FlowJo中的几何均值FlowJo是一种流式细胞仪数据分析软件，其中的geometric mean 功能可以用来对流式细胞仪实验生成的数据进行处理和分析。
使用geometric mean的优势•减小极端值的影响：通过将数据取对数，geometric mean可以减小异常值对结果的影响，使得结果更加健壮可靠。
•适应非对称分布：当数据呈现非对称分布时，geometric mean可以更准确地代表数据的中心趋势。
在FlowJo中使用geometric mean的常见场景1.在流式细胞仪实验中，对荧光信号进行处理时，常常会使用geometric mean来计算样本中各细胞亮度的中心趋势。
2.在细胞蛋白质表达分析中，使用geometric mean可以有效地处理亮度值的偏斜分布，得到更准确的结果。
3.在细胞计数的过程中，使用geometric mean可以减小离群值的影响，从而得到更可靠的细胞数统计结果。
使用方法在FlowJo中使用geometric mean非常简单。
只需按照以下步骤操作：1.在FlowJo软件中打开待处理的数据文件。
2.选择需要进行geometric mean计算的样本或数据。
3.在菜单栏中选择“统计（Statistics）”。
4.在统计选项中找到“geometric mean”并点击。
5.FlowJo会自动计算并显示geometric mean的结果。
注意事项•在使用geometric mean时，需要注意数据是否符合对数正态分布，以确保结果的可靠性。
•如果数据中存在零值或负数，需要进行数据的修正或转换，以保证geometric mean的计算正确。
Invitrogen Attune NxT 流式细胞仪应用手册说明书
Invitrogen Attune NxT流式细胞仪应用手册成就稀有细胞超灵敏高通量分析梦想实现全血样本无需裂解无需洗涤夙愿21人全血样本免洗免裂解白细胞分析(三种方法)...............................................................................................2人全血6色T 细胞无需补偿且免洗免裂解检测................................................................................................6人全血10色免疫表型分析.....................................................................................................................10人全血13色免疫表型分析.....................................................................................................................13人全血吞噬细胞检测...........................................................................................................................17小鼠脾细胞10色免疫表型分析...............................................................................................................22小鼠调节性T 细胞检测........................................................................................................................25藻类存活率分析...........................................................................................................................28使用Attune NxT 流式细胞仪进行荧光蛋白检测...........................................................................................30hPSC 来源的心肌细胞分化过程中转录因子表达的流式细胞分析......................................................................37利用Attune NxT 流式细胞仪检测全血中的血小板............................................................................................42利用Attune NxT 流式细胞仪设计T 细胞基础配色方案......................................................................51利用Attune NxT 流式细胞仪快速准确地进行植物细胞核DNA 含量分析................................................................59使用 ModFit LT 软件分析 Attune NxT FCS 数据文件的操作指南 . (66)利用Invitrogen Attune NxT 流式细胞仪对单细胞生物中的中性脂进行检测 (74)利用Attune NxT 流式细胞仪进行精确浓度测定的推荐方法 (78)Attune NxT 自动进样器实现流式高通量自动化检测：在所有板孔和微孔板之间保持结果的一致性 (80)使用FlowJo 软件分析Invitrogen Attune NxT FCS 数据文件的操作指南 (88)使用FCS Express 6软件分析Attune NxT FCS 数据文件 (96)目录2人全血免洗免裂解白细胞分析(三种方法)无需洗涤/裂解检测人全血中的白细胞简介从人的全血中分离并检测白细胞的传统方法十分耗时，且通常需要大量处理和富集方可进行分析。
流式淋巴细胞亚群检测技术原理
荧光染料标记法
荧光染料的选择
根据抗原特异性选择相应的荧光染料，如异硫氰酸荧光素 （FITC）、藻红蛋白（PE）等。
标记过程
将荧光染料与特异性抗体结合，形成荧光标记的抗体，再 与待检测的淋巴细胞样本反应，使抗原抗体结合，形成荧 光标记的淋巴细胞亚群。
检测结果
通过流式细胞仪检测荧光信号，实现对淋巴细胞亚群的定 性和定量分析。
数据分析
使用专业软件对原始数据进行分析，包括细胞亚群的识别、计数和比 例计算等。根据实验结果，可以对患者的免疫状态进行评估和诊断。
05 流式淋巴细胞亚群检测技 术应用领域
免疫学领域应用
免疫细胞分型
利用流式细胞术对淋巴细胞进行分型，研究不 同亚群的免疫学特性。
免疫细胞功能研究
通过检测淋巴细胞亚群的表面标志物和胞内因 子，研究其在免疫反应中的功能。
喷嘴和流动室
喷嘴是连接样品管和流动室的通道， 它的直径通常很小，以便形成高速流 动的细胞悬液。流动室是检测细胞的 场所，它通常是一个透明的石英玻璃 管，内部充满鞘液。当细胞悬液通过 喷嘴进入流动室时，它们会被鞘液包 裹并排列成单行，以便后续的光学检 测。
信号检测与处理
信号检测
在流式细胞术中，信号检测通常包括前向散射光、侧向散射光和荧光信号的检测。前向散射光与细胞的大小和折 射率有关，侧向散射光与细胞的内部结构和颗粒度有关，而荧光信号则与细胞内特定成分的含量和性质有关。这 些信号可以通过光电倍增管等光电转换器件转换为电信号进行后续处理。
数据处理软件介绍及操作指南
01
FlowJo软件
功能强大的流式数据分析软件，支持多种格式数据导入和导出，提供丰
富的数据处理和分析工具。
02
Cytobank平台
流式细胞凋亡检测步骤
流式细胞凋亡检测步骤引言：细胞凋亡是一种正常的生理现象，它在维持机体稳态和调节细胞数量方面起着重要作用。
流式细胞凋亡检测是一种常用的方法，用于定量测量细胞凋亡程度。
本文将介绍流式细胞凋亡检测的步骤，并详细阐述每一步的操作方法和注意事项。
一、细胞准备在进行流式细胞凋亡检测之前，首先需要获得待检测的细胞样品。
这些细胞可以是体外培养的细胞系，也可以是从动物或人体组织中分离得到的原代细胞。
细胞样品应该在合适的培养条件下生长，确保其细胞活力和凋亡状态的稳定。
二、细胞收集细胞收集是流式细胞凋亡检测的关键步骤之一。
常用的方法有机械剥离、消化酶处理和离心等。
在收集过程中，需要注意尽量减少细胞损伤和凝聚物的形成。
收集的细胞应该进行适当的洗涤，以去除培养基中的残留物。
三、细胞固定细胞固定是为了防止细胞在后续处理过程中的损伤和凋亡。
常用的固定剂有甲醛、乙醛和乙酸等，可根据实验需要选择合适的固定剂和浓度。
固定处理后的细胞需要进行洗涤，以去除固定剂的残留物。
四、细胞染色细胞染色是流式细胞凋亡检测的核心步骤。
常用的染色剂有荧光素酶标记的Annexin V和PI（propidium iodide）等。
Annexin V 用于检测细胞外磷脂外翻的现象，而PI则用于判断细胞膜完整性。
染色剂的选择应基于实验目的和细胞类型，同时需要根据厂家提供的说明书进行操作。
五、流式细胞仪检测流式细胞仪是流式细胞凋亡检测的重要工具。
在进行检测之前，需要对流式细胞仪进行校准，包括激光功率、流速和检测通道的设置等。
校准后，将染色后的细胞悬浮液注入流式细胞仪中，通过激光的照射和细胞的流动，测量细胞的荧光强度和散射信号。
六、数据分析流式细胞仪检测得到的数据需要进行后续的分析和解释。
常用的数据分析软件有FlowJo、ModFit和Cyflogic等。
通过设置门，可以将细胞分为不同的亚群，分析细胞的凋亡率和凋亡类型等。
此外，还可以进行统计学分析，比较不同实验组之间的差异。
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FlowJo处理数据步骤
FlowJo是一款专业的流式细胞术数据分析软件，广泛用于分析和可视化流式细胞仪产生的多变量数据。
本文将为您详细介绍FlowJo的数据处理步骤，帮助您更好地理解和应用该软件。
一、导入数据
首先，我们需要将流式细胞仪产生的原始数据导入到FlowJo中。
FlowJo 可以支持多种常见的文件格式，如FCS、CSV、BDF等，您可以选择适合您数据格式的方式导入数据。
通过打开FlowJo软件，您可以在主界面上选择“导入”按钮，然后选择合适的数据文件格式进行导入。
导入后，您可以为数据设置适当的标题和实验说明，以便更好地管理和识别数据。
二、数据矫正和清洗
在导入数据后，您可能需要进行一些数据矫正和清洗的步骤，以确保数据的准确性和一致性。
FlowJo提供了一系列的工具和功能，用于处理和清洗数据。
例如，您可以通过设置门（Gates）来排除噪声或异常数据，选择适当的控制样品进行数据矫正，调整仪器设置等。
您还可以使用FlowJo 提供的统计学算法，如均值、中位数、百分位数等，对数据进行清洗和排除异常值。
三、标记和分组
数据导入和清洗后，您可以开始对样本进行标记和分组。
流式细胞术通常使用多种荧光染料来标记不同的细胞亚群或生物标记物。
FlowJo提供了丰富的标记和分组工具，以便您对数据进行分类和组织。
您可以根据染色体类型、标记物的强度或共表达等特征创建标记或分组策略。
FlowJo还支持自定义标注方法，让您根据实验设计和目标需求进行个性化标记和分组。
四、绘制和分析
标记和分组完成后，您可以开始使用FlowJo的分析功能进行数据可视化和绘制图形。
FlowJo提供了多种绘图工具，如散点图、直方图、线图等，用于可视化和展示您的数据。
您可以在图表中添加坐标轴标记、图例、标题等，以便更好地展示数据信息和结果。
FlowJo还支持多种数据分析方法，如聚类分析、细胞分型、统计学测试等，帮助您从数据中提取更多的信息和结论。
五、结果解释和导出
最后，分析和绘制图表后，您可以开始解释并导出您的结果。
FlowJo提供了丰富的结果解释和报告功能，允许您创建专业的图表和报告，以便与团队成员或其他研究人员共享和交流。
您可以选择导出图像文件、表格数据、PDF文件等多种格式，根据自己的需求和要求进行结果导出和共享。
总结
以上就是使用FlowJo处理流式细胞术数据的基本步骤。
导入数据、数据矫正和清洗、标记和分组、绘制和分析以及结果解释和导出是关键步骤，可以帮助您更好地理解和应用FlowJo软件。
通过应用FlowJo的分析功能，您可以深入挖掘流式细胞术数据的潜力，更好地解读和理解细胞亚群的组成和功能。
希望本文对您在使用FlowJo处理数据时有所帮助。