核酸检测在血液筛查中的应用PCR(新)
实时荧光定量PCR 核酸检测在献血者HIV 病毒筛查中的应用价值分析
２０２１年６月 第１１期影像学及诊断检验实时荧光定量ＰＣＲ核酸检测在献血者ＨＩＶ病毒筛查中的应用价值分析邵长年山东省济宁市中心血站，山东 济宁 272100【摘要】目的：研究在献血者人类免疫缺陷病毒(HIV)筛查中通过实时荧光定量PCR核酸检测的应用价值。
方法：抽取本站于2019年9月到2020年9月，此期间接受HIV病毒筛查的献血者共640例，对其血液样本均采用核酸测定(NAT)与酶联免疫吸附剂测定(ELISA)方式，其中核酸检测采用PCR-实时荧光定量法。
结果：NAT阳性样本19例，HIV病毒筛查阳性率为2.97%；ELISA阳性样本15例，HIV病毒筛查阳性率为2.34%；ELISA阳性、NAT阴性标本7例，约占1.09%；ELISA阴性、NAT阳性标本为11例，约占1.72%。
ELISA或NAT检测结果呈阳性的26例血液样本进行复检，共有23例确认为HIV感染。
与ELISA(+)NAT(-)相比，ELISA(-)NAT(+)、ELISA(+)NAT(+)的HIV病毒检出率更高；且与ELISA(-)NAT(+)相比，ELISA(+)NAT(+)的HIV病毒检出率更高。
结论：实时荧光定量PCR核酸检测对于提高HIV病毒筛查准确率，提高临床输血安全性等有十分重要的意义。
【关键词】献血者；筛查；应用价值；HIV病毒；实时荧光定量PCR核酸检测[中图分类号]R440 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2021)11-0153-02由于异体输血可能会造成艾滋病等传染病的传播，而艾滋病是一种由HIV病毒引发的感染性疾病，传染性与致死率较高[1]。
而对献血者血液样本进行筛查，是降低HIV感染的有效方式，可杜绝由于输血导致的疾病感染[2]。
有相关报告指出，将实时荧光定量PCR核酸测定应用于献血者HIV病毒筛查中，收效较为理想[3]。
可排除HIV 病毒阳性血液，降低输血传播病毒的风险，使血液使用更加安全。
核酸扩增技术在血液筛查中的应用研究
核酸扩增技术在血液筛查中的应用研究摘要：目的探究采用核酸扩增技术进行血液筛查的应用价值。
方法选取2013年6月—2014年4月在我献血站进行无偿献血者的血液标本32202例，且按筛选方法分为实验组和对照组。
实验组采用双试剂酶联免疫吸附试验（ELISA）对血液进行筛查，对照组采用核酸扩增技术（NAT）对血液进行筛查。
将两组标本的筛查结果进行统计学比较。
结果实验组32202例中检出HBV DNA阳性286例，其阳性检出率为1.77%，对照组32202例中检出HBV DNA阳性346例，其阳性检出率为2.15%。
结论 NAT对HBV DNA的阳性检出率明显高于ELISA，不仅避免了血液筛查中漏检情况的出现，很大程度上降低了输血传播疾病的风险，而且保证了临床上的输血安全，值得在临床上推广应用。
关键词：核酸扩增技术；血液筛查；窗口期；输血安全随着社会经济的快速发展，因输血引起的相关传染病的预防和控制已经引起了全社会的高度关注，而预防和控制输血相关传染病的源头就是要对献血者的血液标本进行严格的筛查。
双试剂酶联免疫吸附试验，临床上简称ELISA，是在免疫酶技术基础上发展而来的一种免疫测定技术，其过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上为包被，加待测抗体（抗原），再加相应酶标记抗体（抗原），生成抗原（抗体）--待测抗体（抗原）--酶标记抗体（抗原）的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物，最终借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。
待测抗体（抗原）的定量与有色产物的生成量成正比[1]。
核酸扩增技术，临床上简称NAT，包括聚合酶链反应技术、荧光定量PCR技术和其他核酸扩增技术（核酸序列依赖性扩增、连接酶链反应和分枝DNA信号放大系统），其中最主要且最常用的是聚合酶链反应技术，其基本原理类似于DNA的体内复制，首先将待扩增的DNA模板加热至变性解链，随之将反应混合物冷却至一定的温度，且这一温度可将引物与它的靶序列发生退火，之后再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶的作用下延伸，这个过程就是PCR的一个循环，也就是说这种循环在适合的条件下是不断重复的[2]。
PCR技术在新冠病毒核酸检测中的应用分析
PCR技术在新冠病毒核酸检测中的应用分析【摘要】目的：新冠冠状病毒检测内使用PCR技术的效果。
方法：从2020年2月-2022年10月疑似新冠5例新型冠状病毒肺炎患者作为实验研究对象，通过对研究人员展开回顾性分析。
对患者使用PCR技术，分析检测效果。
结果：PCR技术系统用于新冠病毒检测内，其检出阳性率较高，特异性以及敏感度较好。
结论：将PCR技术用于新冠病毒临床检测内，可以根据其检查结果为医生提供部分数据依据，值得临床应用，但最终结果仍需结合其他数据以及患者症状确诊。
关键词：PCR技术；新冠病毒；核酸检测新型冠状病毒肺炎患者在患病的早期症状和感冒、上呼吸道感染十分相似，早期患者会出现发热以及呼吸道的表现，患者进行CT影像学检查并不存在显著的表现，很难和其他的肺炎疾病所区分[1]。
众所周知，当前检测新型冠状病毒肺炎患者地首选方法，是核酸鼻咽拭子检测[2]。
基于此，本文从2020年2月-2020年4月我院收入的5例新型冠状病毒肺炎患者作为实验研究对象，通过对研究人员展开回顾性分析，从而分析PCR技术系统在新型冠状病毒检测价值，如下。
1 资料与方法1.1一般资料从2020年2月-2022年10月疑似新冠5例新型冠状病毒肺炎患者作为实验研究对象，通过对研究人员展开回顾性分析。
实验研究人员的年龄范围主要集中在22-45周岁，平均年龄范围则大约为（36.84±2.69）周岁。
参与本次临床实验研究的患者中，男2例，女3例。
获取实验研究患者的痰液标本与咽拭子。
纳入标准：（1）知情同意，且积极参与。
（2）确诊为新冠肺炎患者。
排除标准：（1）无法正常沟通。
（2）存在呼吸道病变。
1.2方法采用全自动核酸提取仪，实验所用试剂盒均采用国家批准的试剂。
病毒采集过程中需使用拭子涂抹患者的动咽后壁，保证力度适中，避免接触舌根，迅速将采集后的拭子放入采集管内，靠近顶端部位折断拭子管，旋转盖子封闭保存。
随后严格按照说明书对患者进行核酸提取、标本稀释、核酸扩增等处理。
核酸检测技术在基层血站血液筛查中的应用
核酸检测技术在基层血站血液筛查中的应用吴洪明【摘要】目的:探讨核酸检测技术在基层血站血液筛查中的应用及存在的问题.方法:对2016年3月-2017年3月本血站采用ELISA进行检测后,对检测结果为阴性的无偿献血血液标本进行HIV、HBV、HCV核酸检测,分析检测结果,以了解核酸的检出率和阳性标本的感染性.结果:对21214例血液标本进行筛查,HBV-DNA阳性标本的共有70例,阴性标本共有21144例,阳性率为0.329％,本次血液标本中未发现HCV RNA、HIV-RNA.结论:核酸检测技术应用于基层血站的血液筛查,能够有效提高对血液传播性疾病的筛查水平,配合相关血清学检测,可显著提高临床用血的安全性.【期刊名称】《医学理论与实践》【年(卷),期】2018(031)001【总页数】2页(P111-112)【关键词】核酸检测;基层血站;血液筛查;ELISA;血清学检测【作者】吴洪明【作者单位】福建省莆田市中心血站 351100【正文语种】中文【中图分类】R446.6临床常用的检测血液标本的筛查方法为血清学检测和核酸检测[1]，筛查血液疾病病原体对于提高用血安全、预防血液传播性疾病、提高血液制品的安全性方面有重要的意义。
我国通常采用ELISA(酶联免疫法)联合乙肝五项等血清学检测[2]，但诸如隐匿性感染、窗口期感染等因素的影响，可能产生部分假阳性或假阴性结果，造成了输血传播性疾病的风险有所增加，特别是间接检测的标志物，其检测窗口期的时间较长，例如免疫滴度、病毒变异等因素难以被消除，血液传染性疾病仍然不时有发生，而NAT(核酸检测技术)作为一种直接检测的标志物[3，4]，能够直接对病原体基因进行检查，且其敏感性高、特异性强，能够有效缩短窗口期的时间，对感染的情况进行明确，进而提高了血液制品的使用安全，本站对2016年3月—2017年3月开展的核酸检测技术情况进行汇报如下。
1 材料和方法1.1 材料来源选取本站2016年3月—2017年3月采集到的21 214例无偿献血者的标本，所有献血者的筛选均符合卫计委《献血者健康检查要求》的标准，献血者的年龄在18～55岁，排除HBsAg阳性、ALT>50U/L的血液标本，每位献血者均采集2管血液，其中1管血液量为5ml，用于NAT的监测，1管血液量为5ml，用于ELISA监测和保存，所有血液标本均保存于2～8℃的环境中，在采血后的4h内，在正常室温环境下，1 600g离心20min，待分离出血浆后，放入2～8℃的环境中，核酸标本在72h内完成检测工作。
核酸检测技术在国内外血液筛检中的应用
关于血液筛查核酸检测
关于血液筛查中HBV、HCV、HIV核酸检测
答：
（1）HBV、HCV、HIV是输血传播疾病的主要病原体，为防止因输血引起的HIV、HBV及HCV传播，目前国内外已广泛将核酸检测技术应用于血液筛查，核酸检测可以缩短病毒的“窗口期”。
（2）目前血液筛查核酸检测运用的方法主要是实时荧光定量PCR法和TMA法。
●实时荧光定量PCR法是在普通PCR基础上在反应体系中加入荧光基团，利
用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行总量分析或通过Ct值对模板进行相对定量。
●TMA法是指利用RNA聚合酶和逆转录酶在约42℃等温条件下从靶核酸产生
大量RNA扩增子的靶核酸扩增方法。
（3）下面主要介绍实时荧光定量PCR法检测HBV、HCV、HIV病毒核酸
●HBV基因组是部分双链的环状DNA，HCV基因组为单股正链RNA，HIV
基因组是双股正链RNA。
因为HCV和HIV基因组为RNA，所以扩增前需要将基因组RNA逆转录成cDNA再进行PCR。
●一般情况下根据三种病毒基因组的保守区域设计引物和探针，HBV可以选
择S、C、P、X编码区基因进行设计，HCV主要选择5′UTR进行设计，HIV 可以选择gag、env、pol、tat基因中某些核苷酸序列进行设计。
●将DNA或cDNA模板、DNA聚合酶、引物和探针、PCR反应底物和缓冲液
等加入PCR反应管中进行PCR，经过几十个变性—退火—延伸循环后，通过扩增曲线的Ct值了解病毒核酸检测情况，Ct值越小表明病毒载量越高，反之，Ct值越大表明病毒载量越低或没有。
核酸检测技术在无偿献血者血液筛查中的应用分析
漏检 ， 而近 年来 发展 的 高度 敏感 、 异 的核 酸扩增 技术 （ Ａ 特 Ｎ Ｔ）
可使 ＨＢ ＨＣ Ｖ、 Ｖ和 ＨＩ 毒 的 “ 口期 ”明显缩短 ， Ｖ病 窗 大大提
高 了输 血和血 液 制 品的 安 全。现 将 笔者 所 在血 站 ２ １ ０ ０年 １ ２
月 ～ ０ 年 ７月 Ｅ ＩＡ检 测阴性献 ｍ者 的标本进行 Ｎ Ｔ检测 ２１ １ ＬＳ Ａ
剂 ： Ｖ、 Ｖ、 Ｖ （ Ｏ Ａ Ａｍ ｌ ｒｐ Ｃ Ａ Ｔ ｑ ｎ） ＨＩ ＨＣ ＨＢ Ｃ ＢＳ ｐｉ ｅ ／ ＯＢ Ｓ ａ Ｍａ ， ｐ
ｅｅ ｓｓ ０ ０电化 学发光分 析仪 配套试 剂。 以上 所使用 的试剂 ｌｃｙ １ ２ 均 为 国家生 物检定所批批 检定合格 ， 且存有效 期内使用 。
偿 献血者 血液筛查 ， 有助于提 高献血者 的血 液质量 ， 保证输血 安全 。
［ 关键词 】 酸检测 ； 核 无偿献 血者 ；粗液筛查 ； 口其 窗 ｝ 】
［ 中图分类号 】 ４ ６６ Ｒ４． ［ 文献 标识码 】 Ａ ［ 文章编 号 ］ ０ ５ ０ １ ２ １ ） ９ ｌ— ２ ２ ９ — ６ ６（ ０ ｌ 一 ６ ０ １
６ ％１， 一 Ｖ阳性牢也 达到了 ３２ ， ０ 抗 ＨＣ ．％１ 艾滋病也 有快速发展 的趋 势 。现 有 的血清学方 法避免 不 了对 病毒感染 “ 口期 ”的 窗
Ｅ ＩＡ筛查 试剂 ： Ｂ Ａ 上海科 华 、 ＬＳ Ｈ ｓ ｇ（ 厦门新创 ）Ｈ Ｖ （ ， Ｃ 上
海 科华 、 门新 创 ） Ｈ Ｖ（ 海 丽珠 、 京 万 泰 ｏＮ Ｔ试 剂 ： 厦 ， Ｉ 珠 北 Ａ 核 酸定 性 筛查 试 剂盒 （ ｏ ａ Ｔ ｑ ｃｅｎ Ｃ ｂｓ ａ Ｓ ｒｅ ＭＰ ｔｓ ｏ确 证试 Ｘ ｅｔ
核酸检测技术在血液检测中的应用
2020年5月第12卷第10期45核酸检测技术在血液检测中的应用李 岚【摘要】 目的 探讨核酸检测技术应用于血液检测的价值。
方法 抽取2019年1月至3月5000份献血者血液标本展开研究，先进行受ELISA 检测，对于两种试剂均无反应或是对1种试剂有反应的样本进行核酸检测。
分析检测结果。
结果 ELISA 检测结果显示5000份血液样本中有4992份样本经过HBsAg、抗-HIV-1/2均无反应或是只对1种试剂有反应；4992份样本接受核酸检测，52份样本的检测结果呈现为阳性结果，阳性检出率为1.12%（56/4992）。
阳性结果使用HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA 进行分项定量确证，结果56份样本中有48份结果为HBV DNA 阳性，阳性率为85.71%（48/56），其余8例样本未检出HCV RNA、HIV RNA 的阳性。
结论 血液检测中应用核酸检测技术能够在很大程度上弥补ELISA 检测的不足，更早的发现HBV、HCV、HIV 病毒，对相应疾病的早期诊断和早期治疗有重要意义，也对输血安全有重要意义。
【关键词】血液检测；核酸检测；应用价值文献表明核酸检测技术能够提高多种病毒检出率，与ELISA 检测方法形成良好的互补，弥补血液检测的缺陷，。
但是也有研究指出，核酸检测方法会受到多种不同因素的影响，导致结果不准确[1]。
本文对我院血液检测中应用核酸检测技术的结果和价值展开回顾性分析，详情如下：1 资料与方法1.1 一般资料 血液样本收集于2019年1月至3月，来源于与我院门诊采血科室，抽取了5000份，其中包括2736份全血标本和2264份单采血小板样本，本次研究所使用的血液样本均符合《献血者健康检查标准》。
1.2 方法 所有患者均采集2管血液，1管使用抗凝真空管采集5ml 用于ELISA 方法检测，另一管使用带分离胶及EDTA 抗凝真空采血管采集8ml 用于核酸检测，所有样本均由专业护士采集，采集后放入4摄氏度冰箱中进行保存，在24h 内需要离心处理分离血浆并放入冰箱待检查。
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由于标本多，还要进行pooling。为便于管理， 由于标本多，还要进行pooling。为便于管理， 减少人为错误，最好使用全自动工作站，这样 POOLING号、标本号都统一自动记录，不易搞错 POOLING号、标本号都统一自动记录，不易搞错
提高工作效率
降低工作强度, 降低工作强度,缩短实验时间
试剂的稳定性Leabharlann 试剂的灵敏度 试剂内标的最佳标准 试剂与全自动工作站的磨合
完善实验室管理
• • •
技术要求更高 操做要求更专业 质量控制更严格
降低ELISA检测的阳性率 降低ELISA检测的阳性率
完善采血前的筛查制度 提高血液初筛试剂的质量
完善的NAT阳性献血员的追踪制度 完善的NAT阳性献血员的追踪制度
由于有内标进行每管阳性质控，因此批阳性质控 主要目的是监控实验细微的系统误差。因此阳性 质控浓度选择要低 过低的质控会影响工作，因此不宜使用最低灵敏 度浓度 建议灵敏度的3 建议灵敏度的3-5倍较好
多阳性和阴性质控
不宜固定位置，最好随机分布 由于有内标，多阳性质控偶有个别出现问题，实 验结果也有保证
内标的作用：避免假阴性 内标的作用：避免假阴性
内标的种类：
同源、异源
内标的作用： 内标的作用：
真实反应扩增效率 避免假阴性：假阴性是目前血液筛查中最 重视的问题之一，内标全程进行质量监控 质控
核酸检测中遇到的问题 与解决方案
人员素质和清洁很重要
血筛用NAT对低浓度要求太高，高灵敏 血筛用NAT对低浓度要求太高，高灵敏 度的试剂操作对人员要求高，同样的 平台不同的实验员有很大的差距。
标本处理
标本留样和处理：也是核酸检测质量控制体 系中的重要环节，否则在检测之前病毒核酸已 降解，造成假阴性检测结果。 临床基因扩增检验实验室工作规范》 《临床基因扩增检验实验室工作规范》临床用 RNA(如 RNA)扩增检测的血标本建议进行 于RNA(如HCV RNA)扩增检测的血标本建议进行 抗凝处理，并尽快(3小时以内)分离血浆， (3小时以内 抗凝处理，并尽快(3小时以内)分离血浆，以 避免RNA的降解。如未作抗凝处理， RNA的降解 避免RNA的降解。如未作抗凝处理，则抽血后 必须在1小时内分离血清。 必须在1小时内分离血清。 《全国艾滋病检测技术规范》用于核酸定性检 全国艾滋病检测技术规范》 测时，采集的抗凝全血应在4 8h内分离PBMC和 测时，采集的抗凝全血应在4∼8h内分离PBMC和 血浆，否则应在24∼48h内分离血浆和血细胞。 血浆，否则应在24∼48h内分离血浆和血细胞。
特异性
核酸的特异性高，几乎没有方法学假阳性 但要防止污染
内标（内对照）
为避免假阴性，要求每管阳性质控
自动化
大规模、高通量
关于灵敏度的几个问题
厂家宣传的灵敏度均指单人份检测，而非推荐 pooling方案的实测灵敏度 pooling方案的实测灵敏度 实际应用灵敏度=宣传灵敏度×pooling数 实际应用灵敏度=宣传灵敏度×pooling数 IU才有可比性：WHO标准品以及国家一级标准品均以 IU才有可比性：WHO标准品以及国家一级标准品均以 IU为单位 IU为单位 HCV、HIV窗口期浓度高，因此对灵敏度要求较低。 HCV、HIV窗口期浓度高，因此对灵敏度要求较低。
实时荧光优点 实时荧光优点
特异性好
引物、探针双重保证特异性 方法学假阳性很少
扩增检测同时进行，速度快，且不对扩 增产物进行处理，不易污染 荧光检测灵敏度高 罗氏第二代的NAT试剂也是使用实时荧 罗氏第二代的NAT试剂也是使用实时荧 光检测
内标设计原理
内标
样本
内标为一已知低含量 的与模板扩增效率相 似的一段DNA片段，将 似的一段DNA片段，将 它加入PCR反应液中， 它加入PCR反应液中， 与模板共同扩增，以 反应每管真实的扩增 情况，如果内标和样 品都未扩增出结果， 则表示该管扩增无效 ，应重新做。
缺点：
成本较高、并需要一定的仪器(半自动、全自动) 成本较高、并需要一定的仪器(半自动、全自动) 。完全手工工作量太大
实时荧光定量 PCR技术原理 PCR技术原理
所谓的实时荧光定量 PCR 就是 通过对 PCR 扩增反应 中每一个循环产物荧光信号 的实时检测从而实现对起始 模板定量及定性的分析。在 实时荧光定量 PCR 反应中, 反应中, 引入了一种荧光化学物质， 随着 PCR 反应的进行，PCR 反应的进行，PCR 反应产物不断累计，荧光信 号强度也等比例增加。每经 过一个循环，收集一个荧光 强度信号，这样我们就可以 通过荧光强度变化监测产物 量的变化，从而得到一条荧 光扩增曲线图 。
美国FDA要求，HCV、HIV5000IU/ml能在pooling方案中被 美国FDA要求，HCV、HIV5000IU/ml能在pooling方案中被 检出
HBV的窗口期标本在30-300IU/ml之间，因此对灵敏 HBV的窗口期标本在30-300IU/ml之间，因此对灵敏 度要求高 低于灵敏度也有检出的可能，这与取样几率有关
目的和要求不同
定性与定量
临床使用核酸检测主要目的是定量监测，进行疗效分析。 血筛用于病原体的定性筛查
灵敏度和特异性
临床在漏检与误差之间更重视误差 血液筛查用核酸目的是保证用血安全，更重视漏检
质控要求不同
临床用与血液筛查用质控要求也不同。临床试剂以定量准确和防 止误报为质控目标 血筛用以防止漏检为主要目的
血液筛查常用的NAT技术 血液筛查常用的NAT技术
核酸提取均使用磁珠法
磁珠提取的原理：
将磁珠上标记特异性吸附核酸的物质特异性吸附 核酸，并通过磁分离技术将病毒核酸从裂解液中 提取出来
步骤：
裂解—吸附—洗涤—洗涤—洗涤— 裂解—吸附—洗涤—洗涤—洗涤—洗脱
优点：
磁珠提取特异性高，受标本因素影响小，灵敏度 高 易于实现自动化
平台建立初期会有较大问题 对人员素质要求与自动化程度成反比
实验室及仪器清洁很重要
由于少有高浓度标本，因此大面积的污染 不易发生。但由于试剂灵敏度高，如不随 时注意清洁，污染有积累效应，会出现散 发性样本污染，引起假阳性
采血样管的处理
玻璃器皿在使用前应高压处理，因为 玻璃器皿常含有不易失活的RNA酶。最 玻璃器皿常含有不易失活的RNA酶。最 好是热灭菌，250℃烘烤4 好是热灭菌，250℃烘烤4小时以上可 使RNA酶永久性失活。异硫氰酸胍盐 RNA酶永久性失活。异硫氰酸胍盐 (Guanidine thiocyanate,GITC)可使 thiocyanate,GITC)可使 DNA酶和RNA酶立即失活。 DNA酶和RNA酶立即失活。
阳性率也不同
临床更多的阳性；血筛更多是阴性
对自动化要求不同
临床更多用于病人,单人份检测, 临床更多用于病人,单人份检测,标本量少 血筛更多用于正常人，因此检测量不同，对自动化的要求也不同
血筛用NAT平台的要求 血筛用NAT平台的要求
灵敏度
HBV≤10IU/ml；HCV、HIV≤ HBV≤10IU/ml；HCV、HIV≤200IU/ml
标本汇集
利用STAR工作平台, 利用STAR工作平台,编制汇集软件。 合理的Pooling方案 合理的Pooling方案
Pooling方案 Pooling方案
灵敏度因素
检出血液中最低的病毒含量与标本汇集数 量呈正比
成本因素
试剂价格以test为单位，检测单位成本与 试剂价格以test为单位，检测单位成本与 pooling方案有关 pooling方案有关
核酸检测在血液筛查中的应用
无偿献血的新动态
“ 定期无偿献血者是低危的献血者” 定期无偿献血者是低危的献血者 ” ， 但是“ 以体检为目的定期无偿献血 但是 “ 者是高危献血者” 者是高危献血者 ” 而且这部分人群的 献血队伍正在扩大。 献血队伍正在扩大 。 这部分人群窗口 期的机率高于其他人群。 期的机率高于其他人群 。 因为在他们 中间高危的传播行为经常发生。 中间高危的传播行为经常发生。 经过治疗后的HBsAg 转阴， ELISA 方法 经过治疗后的 HBsAg转阴 ， ELISA方法 检测阴性的献血者。 检测阴性的献血者。
检测标本量及检测时间因素
扩增检测量=提取量×3(HBV、HIV、 扩增检测量=提取量×3(HBV、HIV、HCV) 与仪器密切相关
影响灵敏度因素
Pooling方案 Pooling方案 内标的浓度 标本的加样量 磁珠的量和混匀 模板制作过程的损失和提取量
批质控的选用及设定
使用低浓度样本为批阳性质控
完善制度 持之以恒 不断总结
内标与结果的判定
内对照（IC）使质控成为每管质控 内对照（IC）使质控成为每管质控
使用双免荧光，保证内对照和样本反应条件绝对 一致 竞争性设计，保证受影响因素一致 结果判断原则：
样本检测阳性，无诊IC情况均报阳性 样本检测阳性，无诊IC情况均报阳性 样本检测阴性：
内对照阳性，可以报阴性结果 内对照阴性，需要复检
NAT与ELISA互补 NAT与ELISA互补
病毒变异 免疫静默期 实验操作失误 病毒感染的窗口期
病毒检测窗口期
项目 HBsAg 抗-HCV 抗-HIV ELISA窗口期 ELISA窗口期 项目 56 72 22 HBV HCV HIV NAT窗口期 NAT窗口期 25 59 11
血筛用NAT试剂与临床用的不同 血筛用NAT试剂与临床用的不同
通过软件自动判断，但建议要人工复核
核酸实验室管理软件
在实验室管理软件的基础上增加核酸 检测的管理模块，实现计算机管理, 检测的管理模块，实现计算机管理,检 验结果自动控制。
NAT与ELISA检测的配合 NAT与ELISA检测的配合
1 同步检测 2 先做常规检测，再做核酸检测
自动化要求
保证质量
核酸检测对技术要求高，特别是血筛用对灵敏度 要求更高，所以自动化保证质量的持续性