内参即是内部参照
内参基因1
内参基因内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如 Northern blot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量, 弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。
管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小，而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因高度保守并且在大多数情况下持续表达，因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。
内参基因通常是各种看家基因，在细胞内组成稳定性表达，有助于保持细胞的功能。
理想的内参基因应该满足以下条件：1, 不存在假基因（Pseudogene），以避免基因 DNA的扩增； 2,高度或中度表达，排除低表达； 3,稳定表达于不同类型的细胞和组织（如正常细胞和癌细胞），而且其表达量是近似的，无显着性差别；4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关；5, 其稳定的表达水平与目标基因相似；6, 不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响.近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷，在不同类型的细胞和组织细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通常变异较大。
内参基因的概念和作用.doc
内参基因的概念和作用内参即是内部参照 ,它们在各组织和细胞中的表达相对恒定 ,在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差 ,保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差 ,这样半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如 Northern b lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量, 弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。
管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达 ,其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小 ,而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持续表达 ,或变化很小。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响 ,而不受其他机制调节。
管家基因高度保守并且在大多数情况下持续表达 ,因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。
内参基因通常是各种看家基因 ,在细胞内组成稳定性表达 ,有助于保持细胞的功能。
理想的内参基因应该满足以下条件：1, 不存在假基因(Pseudogene) ,以避免基因 DNA的扩增; 2,高度或中度表达 ,排除低表达; 3,稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞) ,而且其表达量是近似的 ,无显着性差别; 4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;5, 其稳定的表达水平与目标基因相似;6, 不受任何内源性或外源性因素的影响 ,如不受任何实验处理措施的影响.近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷 ,在不同类型的细胞和组织细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通常变异较大。
western 内参选择 大讨论
在western blot 实验中，内参的使用是个很重要的部分，看到很多站友对内参的选择经常有些疑问，鉴于此，希望能在一个帖子里面综合所有相关问题，展开讨论，共同学习。
我先提几个，抛砖引玉，希望大家继续。
1。
为什么一定需要内参？内参的重要性。
2。
常用的几种内参。
3。
不同的情况如何选择不同的内参。
支持一下！1：用内参照是为了评价你的各个上样孔内蛋白的总量是否基本一致，通常使用一些看家蛋白，比如β-actin、GAPDH等等。
这些蛋白在所有细胞中的表达量基本一致，所以用他们来作为你加样量的对照。
这样western结果中你的目的蛋白经过处理后发生变化，而内参的条带基本均匀一致。
这样才有说服力，表明的确是处理因素造成目的蛋白的变化而不是加样误差或是人为造成目的条带浓度的变化。
严格意义上说，内参事必须做的。
2：常用的内参有：b-actin，GAPDH，近2-3 年，更详细的研究发现，β-Tubulin (球管蛋白)，被广泛应用于Western Blotting，β－Tubolin分子量为55KD左右。
3：一般我们选择内参与要检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上。
因此你要知道你检测的蛋白的分子量来选择合适的内参！个人一些见解，供参考！内参的重要性，必要性：要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。
因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。
虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确，而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物，确实是有一定的不确定性的。
所以，严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用。
western-blot-内参
Western Blot内参要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。
因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。
虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确，而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物，确实是有一定的不确定性的。
所以，严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用。
特别是当实验出现问题时，借助参照体系很容易就可以查出问题所在，而不必抓耳挠腮怨天尤人。
良好的参照体系通常包括分子量Marker（用来确定蛋白条带对应的分子量大小），空白载体对照（如果是诱导表达体系还应该有诱导前的对照），已知量标准产物的正对照；另外还有内参。
内参是最容易被忽略的一项。
我们知道，要用Western Blot比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少，前提条件是等量的细胞上样，才有比较的基础。
特别表达量不高时，上样量的差别就很可能影响结果的分析。
所以你需要内参。
内参即是内部参照（Internal Control），对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins)，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。
在Western Blotting 实验中，除了需要进行蛋白抽提、蛋白定量、等量蛋白上样电泳、转膜、靶蛋白抗体孵育、显色等步骤以外，还需要进行内参的检测，以校正蛋白质定量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
在国外发表的文章中，Western Blotting 实验结果须进行内参校正已成为一种惯例。
目的蛋白 内参 整膜
目的蛋白内参整膜
目的蛋白、内参和整膜在实验中分别扮演不同的角色。
目的蛋白是实验中想要研究或追踪的特定蛋白质。
通过使用WB（Western Blot）等方法，可以对目的蛋白进行半定量分析，判断不同样品中目的蛋白表达含量的多少。
这取决于内参的标定。
内参即是内部参照，通常是在被检样本中高表达且表达水平相对稳定的蛋白。
在WB实验中，内参抗体是重要的参考，它帮助确定目的蛋白表达量的相对多少。
选择合适的内参在WB实验中是关键的因素。
常用的内参包括GAPDH、Tubulin 和Actin等，它们在各组织细胞中的表达相对稳定，常被用作对照物。
整膜是一种实验技术，可以用来提高膜的机械强度和耐用性，以防止在实验过程中膜发生变形或破裂。
通过整膜技术，可以延长膜的使用寿命并提高实验的可靠性。
以上信息仅供参考，可以查阅与目的蛋白、内参和整膜相关的专业文献或咨询专业人士，获取更全面准确的信息。
内参基因的概念
内参基因的概念 Document number：PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。
借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。
一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。
在进行基因研究的过程中,实时反转录 PCR也和传统的mRNA定量方法如 Northern b lot技术等一样, 要求使用参照基因以校正转录效率和 cDNA用量, 弥补制备过程中样本纯度和浓度的差别, 使不同样本之间目的基因的比较成为可能,以期获得真实可靠的结果。
大多数分析方法中这些差别可通过与内参照比较处理消除。
最普通的内参照是内源性参照基因,也叫管家基因。
管家基因：又称持家基因(house-keeping genes)生物体各类细胞中都表达，其产物是对维持细胞基本生命活动所必需的蛋白质编码的基因。
如微管蛋白基因、糖酵解酶系基因与核糖体蛋白基因等。
是为维持细胞基本生命活动所需而时刻都在表达的基因。
管家基因表达水平受环境因素影响较小，而是在个体各个生长阶段的大多数、或几乎全部组织中持续表达，或变化很小。
它的表达只受启动序列或启动子与RNA聚合酶相互作用的影响，而不受其他机制调节。
管家基因高度保守并且在大多数情况下持续表达，因此管家基因常被用于分子技术--多位点基因分析。
内参基因通常是各种看家基因，在细胞内组成稳定性表达，有助于保持细胞的功能。
理想的内参基因应该满足以下条件：1, 不存在假基因(Pseudogene)，以避免基因 DNA的扩增; 2,高度或中度表达，排除低表达; 3,稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞)，而且其表达量是近似的，无显着性差别; 4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;5, 其稳定的表达水平与目标基因相似;6, 不受任何内源性或外源性因素的影响，如不受任何实验处理措施的影响.近年来的研究发现：这些常用内参基因均存在缺陷，在不同类型的细胞和组织细胞增殖和器官发育的不同阶段体外培养各种实验条件等情况下它们的表达量通常变异较大。
内参即是内部参照
内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
常用的PCR内参有GAPDH 、β- actin 、18sRNA、28sRNA 、B2M、ACTB、SDHA、HPRT1、ARBP内参基因等正向引物（上游引物）是沿着负链进行不间断延长的反向引物（下游引物）是沿着正链进行一段段延长的正链是含有目的基因的那条链。
RT-PCR 为反转录RCR（reverse transcription PCR）和实时PCR（real time PCR）共同的缩写。
逆转录PCR，或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)，是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。
在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）来完成。
随后，DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的PCR。
原先的RNA模板被RNA酶H降解，留下互补DNA。
RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNA。
RT-PCR广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种RNA的含量。
（检测基因表达的方法，参见Northern Blot法。
RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。
常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒（avian myeloblastosis virus,AMV）反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒（moloney murine leukemia vrius,MMLV）反转录酶。
RT-PCR有时候也会指代实时PCR(real-time PCR)。
为了与逆转录PCR相区别，通常被写作“定量PCR”(quantitative PCR)或者RTQ-PCR(real-time quantitative PCR)。
内参
通常情况下，新闻内参呈送到有关部门后，相关人员会进行初步的筛选后，再呈请有关领导同志进行审阅。如领导同志认为某篇内参所报道的事实值得引起重视或应尽快进行处理，将对该内参进行批示，指示相关部门、人员进行办理，甚至亲自挂帅。
2
“新闻审判”（trial by newspaper）又名“媒介审判”（ trial by media），原初是西方新闻传播法中的一个概念，意指新闻报道超越法律规定，干预、影响审判独立和公正的现象，一些国家通过法律或者新闻职业道德规范来禁止和防范这类行为。
1内参，顾名思义就是内部参考。广义的内参可指任何机构搜集的供内部人员参考的信息资料。在我国，新闻内参特指新闻媒体向各级党政机关专门呈送的一种新闻报道，是新闻的一种特殊形式。与普通的新闻不同的是，新闻内参是一种不进行公开发布的报道。目前，我们所说的“内参”通常即指新闻内参。
[编辑本段]新闻内参的性质
王利明教授在其主编的《人格权法新论》一书中认为：隐私权是自然人享有的对其个人的与公共利益无关的个人信息、私人活动和私有领域进行支配的一种人格权。这种观点已被不少学者所认可，并被许多论文和著作所引用。
编辑本段隐私权的范畴
在我国现行法律中,只有《侵权责任法》第二条讲民事权益范围中包括了隐私权 根据我国国情及国外有关资料，下列行为可归入侵犯隐私权范畴： 1、未经公民许可，公开其姓名、肖像、住址和电话号码。 2、非法侵入、搜查他人住宅，或以其他方式破坏他人居住安宁。 3、非法跟踪他人，监视他人住所，安装窃听设备，私拍他人私生活镜头，窥探他人室内情况。 4、非法刺探他人财产状况或未经本人允许公布其财产状况。 5、私拆他人信件，偷看他人日记，刺探他人私人文件内容，以及将他们公开。 6、调查、刺探他人社会关系并非法公诸于众。 7、干扰他人夫妻性生活或对其进行调查、公布。 8、将他人婚外性生活向社会公布。 9、泄露公民的个人材料或公诸于众或扩大公开范围。 10、收集公民不愿向社会公开的纯属个人的情况。
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内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。
常用的PCR内参有GAPDH 、β- actin 、18sRNA、28sRNA 、B2M、ACTB、SDHA、HPRT1、ARBP内参基因等正向引物（上游引物）是沿着负链进行不间断延长的反向引物（下游引物）是沿着正链进行一段段延长的正链是含有目的基因的那条链。
RT-PCR 为反转录RCR（reverse transcription PCR）和实时PCR（real time PCR）共同的缩写。
逆转录PCR，或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR, RT-PCR)，是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。
在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。
由一条RNA单链转录为互补DNA(cDNA)称作“逆转录”，由依赖RNA的DNA聚合酶（逆转录酶）来完成。
随后，DNA的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖DNA的DNA聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的PCR。
原先的RNA模板被RNA酶H降解，留下互补DNA。
RT-PCR的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNA。
RT-PCR广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种RNA的含量。
（检测基因表达的方法，参见Northern Blot法。
RT-PCR的关键步骤是在RNA的反转录，要求RNA模版为完整的且不含DNA、蛋白质等杂质。
常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒（avian myeloblastosis virus,AMV）反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒（moloney murine leukemia vrius,MMLV）反转录酶。
RT-PCR有时候也会指代实时PCR(real-time PCR)。
为了与逆转录PCR相区别，通常被写作“定量PCR”(quantitative PCR)或者RTQ-PCR(real-time quantitative PCR)。
3实时PCR实时PCR(real-time PCR)，属于定量PCR（Q-PCR）的一种，以一定时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。
real time PCR 的定量使用荧光色素，目前有二种方法。
一种是在ds DNA中插入特异的荧光色素，例如SYBR Green荧光染料；另一种使用一种能与增幅DNA序列中特定寡核酸序列相结合的一种荧光探针（probe），如Taqman探针。
两种方法原理不同。
SYBR Green荧光染料游离时不发光，当反应体系中存在双链DNA时，SYBR Green与双链DNA结合，此时才发光。
Taqman探针带有一个荧光基团和一个淬灭基团，荧光基团连接在探针的5’末端，而淬灭基团则在3’末端。
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，T aq酶的5'－3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，此时荧光基团发出的荧光信号可以被检测到。
real time PCR 与reverse transcription PCR 相结合，能用微量的RNA来找出特定时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因。
这两种RT PCR的组合又被称之为“定量RT-PCR（quantitative RT-PCR）”RT-PCR技术相关试剂1oligo: 多聚体，相当于mRNA引物2AMV RT：禽类成髓细胞瘤病毒逆转录酶3MMLV RT：莫洛尼鼠白血病病毒逆转录酶4dNTPs：脱氧核苷酸5RNase：RNA水解酶6PCR Buffer：RT-PCR缓冲液7MgCl2：2价镁离子PCR各步骤的目的5.1预变性破坏DNA中可能存在的较难破坏的二级结构。
使DNA充分变性，减少DNA 复杂结构对扩增的影响，以利于引物更好的和模板结合，特别是对于基因组来源的DNA模板，最好不要吝啬这个步骤。
此外，在一些使用热启动Taq酶的反应中，还可激活Taq酶，从而使PCR反应得以顺利进行。
5.2三种循环8模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；9模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；10引物的延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。
5.3延伸时间原因11用PCR仪扩增时,(变性.退火,延伸)循环完成后,继续72度延伸了10分钟的原因：12延伸时间取决于待扩增DNA片段的长度。
（当然是在反应体系一定的条件下）例如，使用TaqDNA聚合酶，72度时的碱基掺入率为35-100bp/s，因此延伸速率为1kb/min。
13根据延伸速率推得，扩增1kb以内的DNA片段1min即可，而3-4kb则需要3-4min，依次照推。
通常在最后一轮要适当的将延伸时间延长至4-10min，这样做是使PCR反应完全以提高扩增产量。
14继续72度延伸了10分钟除了可以使PCR反应完全以提高扩增产量外，还有一个作用是：在用普通Taq酶进行PCR扩增时在产物末端加A尾的作用，可以直接用于TA克隆的进行。
5.4PCR引物的选择对靶序列中潜在的引物位点进行分析，这些位点应该不会形成同源多聚体机构，也没有明显的形成二级结构的趋势，不会自身互补，与基因组中的其他序列无显著的同源性。
15依据寡核苷酸引物与其靶序列形成杂合分子的熔解度的计算中提供的公式计算各引物的熔解温度。
16选择一对匹配完好的正向和反向引物。
两条引物的G+C含量相似，将产生一种大小和碱基组成合适的产物。
两条引物与所扩增片段的GC含量都应在40%-60%之间。
17对寡核苷酸的长度和/或位置进行细调。
使得引物的3‘末端核苷酸为G或C。
检查两条寡核苷酸之间有无明显的互补性。
作为一条经验性的规律，一条引物上不该含有三个连续的与另一条引物互补的核苷酸。
5.5注意事项18双链DNA的变性温度是由双链中C+G的含量决定的，C+G含量越高，模板DNA 的溶解温度就越高。
在选择的变性温度下，模板链越长变性所需时间就越长。
如果变性温度过低或变性时间过短，会使仅仅富含A+T区域变性。
当模板DNA的G+C含量超过55%的时需要更高的变性温度。
19复性过程采用的温度至关重要如果复性温度太高，寡核苷酸引物不能与模板很好的复性，扩增效率将会降低。
如果复性温度太低，引物将产生非特异性复性，从而导致非特异性的DNA片段的扩增。
复性通常在比理论计算的引物和模板的溶解温度低3—5℃的条件下进行。
20PCR扩增所需的循环数目决定于反应体系中起始的模板拷贝数以及引物延伸和扩增的效率。
一旦PCR反应进入几何级数的增长期，反应会一直持续下去，直至某一成分成为限制因素。
从这一点上来说，扩增产物中绝大多数应该是特异性的扩增产物，而非特异性的扩增产物应该低到难以检测到的程度。
用TaqDNA聚合酶（效率为0.7）在一个含有10的5次方个拷贝的靶序列的反应体系中进行30个循环后往往可以做到上述的理想情况。
RT-PCR的RNA如何定量设计内参引物，一般来说，是actin基因先确定循环数：设置不通的循环数，用反转录cDNA 为模板进行PCR扩增，以能扩出来条带为循环数均一化模板：不同体积的cDNA为模板，以确定的循环数为扩增循环数，进行PCR扩增，调节模板的量到扩增亮度一致时，cDNA 的量就一样了然后，再用你自己的引物进行扩增，就可以得到理想结果了RT-PCR 技术原理、步骤与注意事项RT-PCR 简介RT-PCR 的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的RNA。
RT-PCR 广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种RNA 的含量。
（检测基因表达的方法，参见Northern Blot 法。
）RT-PCR 有时候也会指代实时PCR(real-time PCR)。
为了与逆转录PCR 相区别，通常被写作“定量PCR”(quantitative PCR)或者RTQ-PCR(real-time quantitative PCR)。
实时PCR 实时PCR(real-time PCR)，属于定量PCR（Q-PCR）的一种，以一定时间内DNA 的增幅量为基础进行DNA 的定量分析。
real time PCR 的定量使用萤光色素，目前有二种方法。
一种是在ds DNA（双链DNA）中插入特异的萤光色素；另一种使用一种能与增幅DNA 序列中特定寡核酸序列相结合的一种萤光探针（probe）。
real time PCR 与reverse transcription PCR(反转录PCR) )相结合，能用微量的RNA 来找出特定时间、细胞、组织内的特别表达的遗传基因。
这两种RT PCR 的组合又被称之为“定量RT-PCR（quantitative RT-PCR）” RT-PCR 技术相关试剂oligo: 多聚体，相当于mRNA 引物AMV（M-MLV）：逆转录酶dNTP：脱氧核苷酸RNase：RNA 酶抑制剂PCR Buffer：RT-PCR 缓冲液MgCl2：2 价镁离子PCR 各步骤的目的（一）预变性：破坏DNA 中可能存在的较难破坏的二级结构。
使DNA 充分变性，减少DNA 复杂结构对扩增的影响，以利于引物更好的和模板结合，特别是对于基因组来源的DNA 模板，最好不要吝啬这个步骤。
此外，在一些使用热启动Taq 酶的反应中，还可激活T aq 酶，从而使PCR 反应得以顺利进行。
（二）变性--退火--延伸循环：①模板DNA 的变性：模板DNA 经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA 双链或经PCR 扩增形成的双链DNA 解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA 与引物的退火(复性)：模板DNA 经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA 单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA 模板--引物结合物在T aqDNA 聚合酶的作用下，以dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链。
（三）PCR 仪扩增循环后72 度延伸10 分钟用PCR 仪扩增时,(变性.退火,延伸)循环完成后,继续72 度延伸了10 分钟的原因： 1.延伸时间取决于待扩增DNA 片段的长度。