异基因造血干细胞移植植活状态的变性高效液相色谱检测研究的首次报告
异基因造血干细胞移植患者体内环孢素浓度测定及分析
异基因造血干细胞移植患者体内环孢素浓度测定及分析叶翀;李俊;徐涛;苏涌【摘要】目的：建立一种方便可行的环孢素A（ CsA）药物浓度测定方法，并对该院2012—2014年间异基因造血干细胞移植（ allo-HSCT）患者的CsA浓度监测结果加以分析，为临床使用CsA的有效性和安全性提供参考。
方法采用高效液相色谱法（HPLC），血样经预处理后采用Ultimate XB－C18色谱柱分离；流动相为乙腈—水（85∶15）；流速1．2 mL· min－1；柱温65℃；检测波长λ＝214 nm。
结果 CsA血药浓度在50～1000μg· L－1范围内，标准曲线线性关系良好（r＝0．9998），相对回收率为96．65％～101．82％，绝对回收率为91．78％～94．34％，日间及日内精密度RSD均小于4％。
监测allo－HSCT患者共44例，其中23例CsA平均血药浓度在目标浓度范围内（200～400μg· L－1）；累计检测635例次，其中430例次在目标浓度范围内（200～400μg· L－1）。
结论该方法方便、快速、可行，可用于临床CsA样本的测定。
allo－HSCT 患者体内CsA浓度与发生移植物抗宿主病（GVHD）、药品不良反应（ADR）概率有相关性，平均血药浓度小于200μg· L－1的患者组更易发生移植物抗宿主病（ GVHD），而平均血药浓度大于400μg· L－1的患者组更易发生药物相关ADR 反应，对allo－HSCT患者进行CsA浓度监测具有重要的临床意义。
%Objective To establish a convenient and feasible HPLC method for determination of cyclosporine A(CsA)level in blood and analyze the results of monitoring the concentration of cyclosporine A in the patients after allogeneic hematopoietic stem cell trans-plantation( allo-HSCT) in The First Affiliated Hospital Of Anhui Medical University from 2012 to 2014,which is used for studying the efficacy and safety in the clinic.Methods The CsAconcentrations were determined with HPLC method,the blood samples was separa-ted with column Ultimate XB-C18;The mobile phase was a mixture of water and acetonitrile with the ratio of 15∶85.Th e flow rate was 1.2 mL· min-1 .The wave length of UV for detection was 214 nm and the column temperature was maintained at 65℃.Results A good line relationship was obtained within the blood CsA level range from 50μg· L-1 to 2 000μg· L-1 ( r=0.999 8) .The relative re-covery of CsA was96.65%~101.82%and the absolute recovery of CsA was91.78%~94.34%.The RSD was less than 4%.44 pa-tients and 635 samples with allo-HSCT were measured.Effective blood concentration(200 ~400μg· L-1)was 23 patients and 430 samples.Conclusions The method is accurate,simple,sensitive and suitable for therapeutic monitoring of CsA.The concentration of CsA is related to the graft-versus-hostdisease( GVHD) and the adverse drug reaction( ADR). The patients whose average concentration les s than 200μg· L-1 are more likely to get the GVHD and the patients whose average concentration more than 400μg· L-1 are more likely to get the ADR.It is important to monitor the concentration of CsA for the patients after allo-HSCT in the clinic.【期刊名称】《安徽医药》【年(卷),期】2015(000)009【总页数】4页(P1675-1678)【关键词】高效液相色谱法;环孢素A;造血干细胞移植【作者】叶翀;李俊;徐涛;苏涌【作者单位】安徽医科大学药学院，安徽合肥 230032;安徽医科大学药学院，安徽合肥 230032;安徽医科大学药学院，安徽合肥 230032;安徽医科大学第一附属医院药剂科，安徽合肥 230022【正文语种】中文环孢素A(Cyclosporine A，CsA)是一种选择性作用于T淋巴细胞的强效免疫抑制剂，主要用于预防移植术后的移植物抗宿主反应或治疗多种自身免疫病。
变性高效液相色谱在微生物基因检测中的应用研究进展
摘
要 3 变性高效液相色谱 : ;-<1=>?2<@ A2@B%C-?D9?01<8- E2F>2G HB?901=9@?1IBJ K ;ACEH L 是一种可以对核酸片
段进行灵敏、 快速的分析， 并检测出单碱基错配及插入缺失的新技术， 在生命科学许多领域有广泛的应用 7 对 基因型分析等领域的应用研究进展进行了综述 7 ;ACEH 在致病微生物基因抗药性突变检测、 关键词 3 变性高效液相色谱 ； 突变检测； 基因型分析 ;ACEH； 中图分类号： M!’( 文献标识码： N 文章编号： &$$!%!+(! : #$$" L O$%$$!"%$(
$9;*2)(*3 ;-<1=>?2<@ A2@B C-?D9?01<8- E2F>2G HB?901=9@?1IBJ
: ;ACEH L OJS=-0S 9DD-? G2S89]-?J 1<G G-%
=-8=29< 9D @-<-=28 ]1?21=29< ^2=B B2@B S-<S2=2]2=J ^B28B 0152<@ =B-0 109<@ 188>?1=- =-8B<9.9@2-S D9? S2<@.<>8.-9=2G- I9.J09?IB2S0S7 ;ACEH SJS=-0S 1?- D>..J 1>=901=-GK ?9_>S=K ]-?S1=2.- 1<G 89S= -DD-8=2]-7 N 0>.% =2=>G- 9D 1II.281=29<S 1?- _-2<@ >S-G 2< _29S82-<8-S7 ,B- G-=-8=29< 9D G?>@ ?-S2S=1<8- 0>=1=29< 1<G @-<9=JI2<@ 9D 028?9_21. @-<- 1?- ?-]2-^-G7 <#= >+2?;3 ;-<1=>?2<@ A2@B C-?D9?01<8- E2F>2G HB?901=9@?1IBJ : ;ACEH L ‘ 0>=1=29< G-=-8=29<‘ @-<9=JI2<@ （ /".$ *+"$%+$ 9$8$0’+,K #$$"K &$ : # L 3 $!" a $!*） 在分子病毒学研究和重大传染性疾病诊断 中，对微生物样本进行分析检测占有极其重要地 位 7 传统微生物检测鉴定主要依靠培养 7 这种方 法不仅耗时严重，而且许多微生物 : 如厌氧微生 甚至不能够人工培养 7 物 L 对培养条件要求苛刻， 近年来， 为避免传统方法的种种局限， 我们开始应 用基因检测技术，进行临床和环境中的复杂微生 物样品分析 7 这对重大疾病的诊断，传染性疾病 治疗方案的制定等工作具有极其重要意义 7 而变
西罗莫司用于异基因造血干细胞移植的安全性观察
儿中有反复 喘鸣史 ， 湿疹史 ， 家族哮 喘史 者 ， 结合临床症状确
诊 为婴 幼儿哮喘 。另外有 ３ 例患儿 既未 出过湿疹 ， 又无家族 史且是 首次喘鸣 ， 提示 没有湿疹和首次喘鸣者也可有气道可 逆性阻塞现象 ， 密切 观察婴幼儿 哮喘 的发 生 ， 取积极预 应 采 防性措施或早期治疗 。 本组 １ ８例患儿 吸人 支气管舒张剂后 ， ｒ１ ＦＩ Ｖ Ｅ ，Ｅ无 明显改 善 ，可能 以呼 吸道感 染为主 ， Ｐ’ ／Ｅ、 Ｐ ＦＶ Ｅ ＇ 气道炎性 渗出 、 黏膜充血水肿 、 炎性 分泌物增 多等使气 道管 腔狭窄 ， 故吸人支气管舒张剂后肺功 能无 明显 改善。提示 他
婴幼儿反复喘息与哮喘关系密切 ， 过进行 支气管 舒张 通 试验 ， 为婴幼儿哮喘的诊断 、 可 鉴别诊断等提供客观依据 。 本
特点 。 支气管舒张剂是缓解气道痉挛 的药物 ， 其中 １ ４例患儿
吸人支气管舒张剂后 Ｔ Ｔ Ｆｒ 、 Ｐ ＦＶ Ｐ Ｅ ｆＥ Ｖ Ｅ ／Ｅ改善率超过 １％。 ５ 这与哮喘患儿存在气道高反应 ， 气道受到特异性或非特异性 刺激物刺激 ， 气道 痉挛 为主以及 黏膜 肿胀 等因素导致气道阻 塞有关 ， 因此 在吸人支气管舒 张剂后能 较好地扩 张 ， 些患 这
１ 统计学方法 ． ４
采用 Ｓ Ｓ Ｐ Ｓ进行结果分析 。计量资料以均
数－ ｔ － 标准差（ ｔ ） －５ 表示 ， － ２组数据 比较采用 ｔ 检验 ， Ｐ＜００ 以 ． ５ 作为判断差别有统计学意义 的标准 。
２ 结 果
１ 一般资料 ． １
我 院 ２０ ０ ５年 １ 月—２ ０ １ ０ ７年 １ ０月行 ａ ｏ ｌ— ｌ
２２ Ｒ ． Ｓ Ｌ部 分不 良反应 与血药浓 度 的关 系 共有 １ ９例患 者 ５ ５例 次进 行 过 Ｓ Ｌ全 血 谷浓 度 监测 ，Ｒ Ｒ Ｓ Ｌ全 血谷 浓度
异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床研究的开题报告
异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床研究的开题
报告
目前，异基因造血干细胞移植已成为治疗恶性血液病的一种有效手段。
然而，临床上依然存在一定的风险和挑战，比如移植物抗宿主病、移植后免疫抑制状态等等。
本研究旨在系统评价异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病的效果和安全性，并探讨其影响因素。
研究方法包括以下几个方面：
1. 文献检索：根据遴选标准，从Pubmed、Cochrane、Embase等数据库中检索相关临床研究，确保研究范围完全覆盖。
2. 数据提取：依据纳入标准对检索结果进行筛选，进行数据提取。
对于重复研究结果，需要判断其质量，对于质量较高的研究进行纳入分析。
3. 数据分析：对纳入的研究进行定量分析，包括计算异基因造血干细胞移植的总体效应量、异质性和置信区间等指标。
同时，结合研究的基本信息和结局，检验异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病效果的异质性。
除此之外，还需要关注异基因造血干细胞移植的安全性问题。
研究要求纳入的研究需要提供移植后并发症的信息。
对于发生并发症的病例，需要进行逐一检查，包括检查移植物抗宿主病发生率、移植后感染频率等。
最后，对纳入的研究，结合研究对象、时间、地区、样本量等因素，探讨异基因造血干细胞移植效果的影响因素，为临床工作提供科学依据。
治疗相关性白血病异基因造血干细胞移植疗效分析
Efficacy analysis of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation on therapy-related leukemia Zhang Shuqin, Fei Xinhong, Wen Hongxia, Liu Yuanyuan, Cheng Haoyu, Zhang Weijie, Wang Jingbo Department of Hematology, Aerospace Central Hospital, Beijing 100049, China Corresponding author: Wang Jingbo, Email: dpwangjingbo@
2 结果
2.1 — 般 资 料 14例 患 者 原 发 病 的 类 型 ：急性曱-幼粒细胞n 血
病 [急 性 髓 系 白 血 病 （AML)-M,]2 例 ，子宫绒毛膜癌 2 例 ，骨 肉 瘤 2 例 ，急 性 淋 巴 细 胞 内 血 病 （ALL) 1 例 ， 乳 腺 癌 1 例 ，结 肠 癌 1 例 ，子 宫 颈 癌 1例 ，混合型畸胎 瘤 1例 ，侵 袭 性 葡 萄 胎 1 例 ，肝 癌 1 例 ，霍奇金淋巴瘤 (HL)1例 ：原发病的治疗：白血病和妇科肿瘤患者均 接 受 化 疗 ，其他实体瘤患者均接受手术及化疗，淋巴 瘤患者均接受放化疗及自体干细胞移棺(表1) 2 . 2 造血重建情况
【Abstract】 Objective To investigate the clinical efficacy of allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT) on therapy-related leukemia (TRL). Methods The clinical data of 14 patients with TRL who received allo-HSCT in Aerospace Central Hospital from April 2012 to February 2020 were retrospectively analyzed, and the therapeutic efficacy and survival status were also analyzed. Results Of the 14 patients, 5 were males and 9 were females; the median age was 35 years old (12-59 years old). There were 12 patients with acute myeloid leukemia, 1 patient with chronic lymphocytic leukemia/small cell lymphoma, and 1 patient with acute lymphoblastic leukemia. At the time of transplantation, 4 patients achieved hone marrow complete remission, 3 patients achieved bone marrow partial remission, and the remaining 7 patients had no remission. Five patients received HLA-matched sibling transplantation, 9 patients received haplotype transplantation, and they all received myeloablative pretreatment schemes. All 14 patients were successfully implanted; the median engraftment time of granulocyte was 16 d (10-24 d), and the median engraftment time of platelet was 13 d (10-34 d). Grade I - II acute graft - versus - host disease (GVHD) occurred in 7 patients, chronic GVHD occurred in 6 patients, and grade HI intestinal GVHD occurred in 2 patients. The median follow up time was 32 months (4-97 months). Among 14 patients, 5 patients died. Conclusion The allo-HSCT can improve the prognosis and long-term survival rate of TRL patients.
血液科新技术与研究进展分享
血液科新技术与研究进展分享近年来，随着科技的不断发展和医学研究的不断深入，血液科领域也取得了许多令人振奋的新技术和研究成果。
这些新技术和进展为血液病的诊断、治疗和预防提供了更为有效的手段，为患者的健康带来了福音。
本文将分享一些血液科领域的新技术和研究进展。
第一部分：血液病的基因检测与个体化治疗随着基因测序技术的成熟，血液病的基因检测和个体化治疗成为可能。
通过对患者血液中的基因进行高通量测序，可以快速准确地检测到与血液病相关的基因异常。
同时，基于这些基因异常的个体化治疗也得以实现。
例如，某些白血病患者存在染色体易位，通过分子靶向药物干预可以达到较好的治疗效果。
第二部分：造血干细胞移植技术的进展造血干细胞移植是治疗血液病的重要手段之一。
近年来，该技术在移植来源、移植前处理以及移植后抗排斥等方面都有了新的进展。
例如，由于同胞造血干细胞移植的限制，异基因造血干细胞移植逐渐成为主流。
同时，移植前处理方面的研究也取得了一定进展，使得移植后的抗排斥反应得以显著减少。
这些技术的改进大大提高了患者的移植成功率和生存率。
第三部分：体外人工合成血液的研究进展体外合成血液是一项具有革命性意义的研究领域。
目前，研究人员已成功合成了红细胞和血小板，这些合成的血液成分在一定程度上可以替代捐献血液。
相较于传统的输血方式，合成血液可以大大减少与供血者匹配的困难和感染传播的风险，从而提高血液输注的安全性。
然而，由于体外合成血液目前仍处于实验室阶段，其在临床应用中的可行性和安全性还需要深入的研究和验证。
第四部分：免疫治疗在血液病中的应用免疫治疗是近年来血液科领域研究的热点之一。
该治疗方法通过激活或抑制免疫系统，增强患者的免疫应答或对抗血液疾病。
例如，单克隆抗体治疗在某些类型的白血病中已经取得了显著的疗效。
此外，免疫细胞治疗也在多种血液病治疗中显示出潜力。
不过，免疫治疗在实际应用中还面临许多挑战，如副作用控制、免疫耐受等问题亟待解决。
干细胞移植治疗产生高滴度抗核抗体1例报道及文献复习
若能重新采集患者及家系成员血样,可以考虑使用分辨率较高的高效液相色谱法对异常血红蛋白含量进行检测.因此将血红蛋白电泳和基因诊断相结合,才有利于检出更多的异常血红蛋白突变型,基因检测结果能指导电泳结果进行正确解读.４㊀结㊀㊀论㊀㊀本研究首次报道了α珠蛋白基因突变型H bM i l e (H B A２:c．８２G＞C,C D２７:G l u＞G l n),丰富了我国和人类血红蛋白突变谱.通过对表型进行初步分析,该突变不产生明显临床症状,但是由于云南是地中海贫血和异常血红蛋白病高发区,异常血红蛋白突变有较大概率产生复合杂合子,因此其临床危害性和人群发生率有待于继续研究.参考文献[１]S R I V O R A K U N H,S I N G HA K,F U C HA R O E N G,e t a l．AL a r g eC o h o r t o fH e m o g l o b i nV a r i a n t s i nT h a i l a n d:M oＧl e c u l a rE p i d e m i o l o g i c a lS t u d y a n d D i a g n o s t i cC o n s i d e r aＧt i o n[J]．P L o SO n e,２０１４,９(９):e１０８３６５．[２]L I N M,WA N G Q,Z H E N G L,e t a l．P r e v a l e n c ea n d m oＧl e c u l a r c h a r a c t e r i z a t i o n o f a b n o r m a l h e m o g l o b i n i n e a s t e r nG u a n g d o n g o fs o u t h e r n C h i n a[J]．C l i n G e n e t,２０１２,８１(２):１６５Ｇ１７１．[３]庞丹凤,罗元标．全自动毛细管血红蛋白电泳在地中海贫血筛查中的作用[J]．中国优生与遗传杂志,２０１２,２０(７):３６Ｇ３７．[４]秦良谊．我国异常血红蛋白发生率㊁分布及遗传多态性[J]．医学研究通讯,２００３,３２(１２):１２Ｇ１４．[５]H EJ,Z E N G X,Z HA N G Y,e t a l．P r e v a l e n c e o f h e m o g l oＧb i nE i nY u n n a nP r o v i n c e o f S o u t h w e s tC h i n a[J]．H e m aＧt o l o g y,２０１６,２１(１):５４Ｇ５９．[６]葛世军．不稳定血红蛋白H bR u s h的血液学表型和基因型分析[J]．中华医学遗传学杂志,２０１７,１(３４):１５Ｇ２０．[７]G E L LD A,F E N G L,Z H O U S,e t a l．Ac i sＧp r o l i n e i nαＧh e m o g l o b i n s t a b i l i z i n gp r o t e i nd i r e c t s t h e s t r u c t u r a l r e o rＧg a n i z a t i o no fαＧh e m o g l o b i n[J]．JB i o lC h e m,２００９,２８４(４３):２９４６２Ｇ２９４６９．[８]C H I H C HU A N L,HA I N A N T,HW E I Y U E N L,e ta l．H e m o g l o b i nS h u a n g f e n g(a l p h a２７(B８)G l u s u b s t i t u t i n gf o rL y s):an e w u n s t a b l eh e m og l o b i nv a r i a n t[J]．H e m oＧg l o b i n,１９８１,５(７Ｇ８):６９１Ｇ７００．[９]李文瑞,叶敏南,彭琪,等．１２８９８例全自动血红蛋白电泳检测结果分析[J]．国际检验医学杂志,２０１５,３６(４):４３８Ｇ４３９．[１０]莫宗平,张玲,喻长顺,等．异常血红蛋白８１例基因分析[J]．广东医学,２０１２,３３(３):３３８Ｇ３４１．(收稿日期:２０１８Ｇ１１Ｇ１０㊀修回日期:２０１８Ｇ１２Ｇ３０)个案分析干细胞移植治疗产生高滴度抗核抗体１例报道及文献复习∗张乃丹１,２,谢其冰３,武永康１ә(１．四川大学华西医院实验医学科,四川成都６１００４１;２．德阳市人民医院检验科,四川德阳６１８０００;３．四川大学华西医院风湿免疫科,四川成都６１００４１)㊀㊀关键词:抗体,抗核;㊀干细胞移植;㊀移植物抗宿主病;㊀贫血,再生障碍性;㊀病例报告D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７３Ｇ４１３０．２０１９．０９．０３６中图法分类号:R４４６．６２;R５５６．５文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０１９)０９Ｇ１１５０Ｇ０３文献标识码:C㊀㊀抗核抗体(A N A)是临床应用最多的自身免疫标志物,而间接免疫荧光技术被认为是筛查A N A有效㊁灵敏和综合性的方法.阳性荧光模型可提示参与反应的细胞核抗原定位,并有助于鉴别诊断.本研究随访了１例异基因造血干细胞移植治疗(a l l oＧH S C T)再生障碍性贫血１年后产生A N A的患者,目前为移植术后４年５个月,患者A N A表现为高滴度核仁型,现报道如下.１㊀临床资料㊀㊀患者,男,３２岁,已婚,汉族,乙型肝炎病毒携带者.４年前患者门诊检查血常规:血小板计数７ˑ１０９L－１,白细胞０．６０ˑ１０９L－１.入院后骨髓活检:造血细胞增生极低下,三系均低,细胞形态未见明显异常,网状纤维不增加.病理诊断:重型再生障碍性贫血.０５１１ 国际检验医学杂志２０１９年５月第４０卷第９期㊀I n t J L a bM e d,M a y２０１９,V o l．４０,N o．９∗基金项目:四川省科技厅项目(２０１６J Y００３５);四川省卫健委项目(１６P J３２６).ә㊀通信作者,EＧm a i l:v i p w y k＠１６３．c o m.㊀㊀本文引用格式:张乃丹,谢其冰,武永康．干细胞移植治疗产生高滴度抗核抗体１例报道及文献复习[J]．国际检验医学杂志,２０１９,４０(０９):１１５０Ｇ１１５２．先后予抗感染㊁成分输血㊁口服环孢素㊁雄激素等治疗２个月,血常规检测无改善.患者与其胞弟人类白细胞抗原(H L A )配型全相合,在完善a l l o ＧH S C T 前检查中检测A N A 为阴性.乙型肝炎病毒(H B V )D N A定量(H B V ＧD N A )＜１．００E＋０３I U /m L .给予贺普丁口服预防H B V 活跃,行肠道准备后给予环磷酰胺(３g ˑ４d )联合抗胸腺细胞球蛋白(１２．５g ˑ５d)预处理化疗.１周后行同胞供者外周血干细胞采集术２次,并分别于当天输注给患者(计数C D ３４阳性细胞总数２４７．５ˑ１０６个,即４．２８ˑ１０６个/k g).移植后给予地塞米松㊁环孢素联合甲氨蝶呤预防移植物抗宿主病(G VH D ),同时给予促造血㊁成分输血等支持治疗.骨髓抑制期患者出现广泛细菌和真菌感染,给予抗生素对症治疗后症状逐渐改善,术后３０d 于四川大学法医鉴定中心行异基因骨髓移植成活监测结果显示,外周血D N A 样本２２个S T R 位点分析显示已转为供者源造血,患者血象好转后出院.患者出院后血液科门诊随访,移植术后１年检测A N A 阳性,滴度１ʒ１００.之后门诊多次长期复查A N A ,结果持续阳性,且滴度为１ʒ１０００,患者A N A 移植前后核型㊁滴度及临床表现随时间变化情况见表１.目前,患者为移植术后４年５个月,出现远端肢体皮肤增厚和色素沉着,肝脏酶学监测指标轻度异常等G VH D 的临床表现.表１㊀㊀患者A N A 滴度移植前后随时间的变化及临床表现情况项目正常值检测时间移植前第８１天移植后第３６０天移植后第１１９２天移植后第１４９６天移植后第１６７８天A N A (滴度)阴性阴性１ʒ１００１ʒ１０００１ʒ１０００１ʒ１０００荧光模型无无核仁型核仁型核仁型核仁型斑点型周边型细胞质型细胞质型谷丙转氨酶(U /L )＜５０２０４６９９３６１９谷草转氨酶(U /L )＜４０１７３８４９４８２８碱性磷酸酶(U /L )５１~１３５６２３０６１３２８９１０５谷氨酰转肽酶(U /L )＜６０２３９６０５４６１８１１患者临床表现无无无皮肤损害皮肤损害皮肤损害２㊀讨㊀㊀论㊀㊀本例患者的特点为３２岁男性:(１)重型再生障碍性贫血;(２)同胞供者H L A 全相合a l l o ＧH S C T 术后;(３)移植前A N A 阴性,移植１年后检测到A N A ,且持续表现为高滴度;(４)移植后出现慢性G V H D 的临床表现;(５)H B V 携带者.目前,大量临床资料已证实了a l l o ＧH S C T 在血液系统难治性疾病中的重要性和有效性,然而通过随访观察本研究A N A 阴性的移植患者术后１年开始产生核仁型A N A ,推测新移植的T 淋巴细胞刺激诱导了移植受体产生新的同种异型抗体,与患者移植后出现肝功能和皮肤损害可能具有相关性.目前,国内文献罕有相似病例报道.而在国外文献中,A K A Y 等[１]报道,对１８例硬皮样G VH D 患者和１５例苔藓样对照组进行了评估.所有患者均接受了H L A 全配型同胞供者异基因移植,在诊断出硬皮样G V H D 后进行了自身抗体的筛选,其中６例患者A N A 检测阳性,A N A 阳性与硬皮样G V H D 的进展具有相关性,与本例患者相似.已有研究证实,供体T 淋巴细胞在H L A 全相合的a l l o ＧH S C T 术后可介导免疫失调并导致G VH D [２Ｇ４];在肝移植患者术后使用免疫抑制剂长期治疗的研究表明,抑制剂的免疫抑制活性决定了T 淋巴细胞激活和增殖的损伤,从而使肝移植患者的细胞和体液免疫在长期使用药物后不平衡.同时,作为外源抗原的移植物可刺激和激活患者的免疫反应[５].因此,患者自身的免疫平衡会因为外源器官和免疫抑制剂的使用而受到重新调节.已有文献报道,肝移植患者长期服用免疫抑制剂诱导了核仁型荧光模型的产生[６].考虑到本例患者为H B V 携带者,虽然移植前H B V ＧD N A 和A N A 均为阴性,但对本例患者T 淋巴细胞出现免疫失调的原因是否与H B V 有关,尚需更多相关研究资料证实.核仁型荧光模型与系统性硬化症的相关性及在诊断和预后中的潜在作用已得到了大量研究证实[７Ｇ１０].本例患者血清A N A 主要荧光模型为核仁型,因此,本例患者a l l o ＧH S C T 术后出现硬皮样临床表现可能与移植后出现高滴度核仁型A N A 有关.因此,由于A N A 可在相关疾病临床表现前出现,异基因干细胞移植术后出现持续A N A 时应考虑可能与患者１５１１ 国际检验医学杂志２０１９年５月第４０卷第９期㊀I n t J L a bM e d ,M a y ２０１９,V o l ．４０,N o ．９的器官损害相关;并对患者采取相应的临床干预措施,以预防或缓解慢性G VH D的发生,达到延长患者生存时间和提高生活质量的目的.参考文献[１]A K A Y B N,S A N L IH,T O P C U O G L U P,e t a l．N a i l f o l d c a p i l l a r y a b n o r m a l i t i e s a r e p r e v a l e n ti n s c l e r o d e r m o i d g r a f tＧv e r s u sＧh o s t d i s e a s e a n d r e a d i l y d e t e c t e dw i t h d e r m aＧt o s c o p y[J]．B r JD e r m a t o l,２０１０,１６２(５):１０７６Ｇ１０８２．[２]MO L I N AB,G O N Z A L E Z V I C E N T M,H E R R E R O B,e t a l．K i n e t i c sa n dr i s kf a c t o r so fr e l a p s ea f t e ra l l o g e n e i c s t e m c e l lt r a n s p l a n t a t i o ni n c h i l d r e n w i t hl e u k e m i a:A l o n gＧt e r mf o l l o wＧu p s i n g l ec e n t e rs t u d y[J]．B i o lB l o o d M a r r o w T r a n s p l a n t,２０１９,２０１９,２５(１):１００Ｇ１０６．[３]G R O E G E R M,G A G E L MA N N N,WO L S C H K EC,e t a l．L o n gＧT e r mr e s u l t so f p r o p h y l a c t i cd o n o r l y m p h o c y t e i nＧf u s i o n s f o r p a t i e n t sw i t hm u l t i p l em y e l o m a a f t e r a l l o g e n eＧi c s t e mc e l l t r a n s p l a n t a t i o n[J]．B i o l B l o o dM a r r o wT r a n sＧp l a n t,２０１８,２４(７):１３９９Ｇ１４０５．[４]梁利杰,周健,张龑莉,等．异基因造血干细胞移植治疗合并粒细胞肉瘤的髓系白血病九例分析[J]．中华内科杂志,２０１８,５７(３):２１６Ｇ２１９．[５]K UWA N A M,O K A Z A K IY,I K E D A Y．S p l e n i cm a c r oＧp h a g e s m a i n t a i nt h ea n t iＧp l a t e l e ta u t o i m m u n er e s p o n s ev i au p t a k e o f o p s o n i z e d p l a t e l e t s i n p a t i e n t sw i t h i m m u n e t h r o m b o c y t o p e n i c p u r p u r a[J]．JT h r o m bH a e m o s t,２００９,７(２):３２２Ｇ３２９．[６]WU Y,C A IB,T A N GJ,e t a l．T a c r o l i m u sM a y i n d u c e t h e p r o d u c t i o n o f n u c l e o l a r a n t iＧn u c l e a r a n t i b o d y i n l i v e r t r a n s p l a n t p a t i e n t s[J]．JG a s t r o i n t e s t i nL i v e rD i s,２０１１,２０(３):２６７Ｇ２７０．[７]K R Z Y S Z C Z A K M E,L IY,R O S SSJ,e t a l．G e n d e ra n d e t h n i c i t y d i f f e r e n c e s i nt h e p r e v a l e n c eo f s c l e r o d e r m aＧr eＧl a t e da u t o a n t i b o d i e s[J]．C l i n R h e u m a t o l,２０１１,３０(１０):１３３３Ｇ１３３９．[８]C E R I B E L L IA,S A T O H M,C HA NEK．An e w i m m u n oＧp r e c i p i t a t i o nＧr e a lt i m e q u a n t i t a t i v e P C R a s s a y f o ra n t iＧT h/T oa n da n t iＧU３R N Pa n t i b o d y d e t e c t i o ni ns y s t e m i c s c l e r o s i s[J]．A r t h r i t i sR e sT h e r,２０１２,１４(３):R１２８．[９]闫洪敏,王志东,朱玲,等．多种来源造血干细胞移植治理重型再生障碍性贫血[J]．中国组织工程研究与临床康复,２０１１,１５(１０):１８８４Ｇ１８８８[１０]吴楠,陈嘉榆,黄振倩,等．异基因外周血造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血[J]．中国现代医学杂志,２００３,１３(１８):７６Ｇ７７(收稿日期:２０１８Ｇ０６Ｇ２０㊀修回日期:２０１８Ｇ０９Ｇ２８)(上接第１１４７页)病依然严重威胁人类的健康.在目前全自动粪便分析仪等自动化仪器在临床工作中被普遍使用,在提高工作效率的同时,也提高了检验结果的精密度和准确度,但与之相反的是,随着自动化程度的提高,检验人员的寄生虫形态学的辨识能力却呈现下降的趋势.临床实习作为人体寄生虫学习中的重要的一环,让学生在实习期间掌握寄生虫的形态学也显得尤为重要.带习教师应不断总结经验,结合自身的优势和临床的需要,开展一套行之有效的人体寄生虫实习带教的方法,不断提高医疗教学水平,为培养能适应现代化社会的实用型医学检验专业人才而努力[１３].参考文献[１]诸欣平．人体寄生虫学[M]．８版．北京:人民卫生出版社,２０１３．[２]唐小牛,赵金红,湛孝东,等．医学寄生虫标本库建设的探讨[J]．基础医学教育,２０１５,１７(６):５０３Ｇ５０５．[３]孙慧,彭飞,刘年猛．医学检验专业寄生虫学标本考试结果分析及探讨[J]．基础医学教育,２０１８,２０(３):１９４Ｇ１９６, [４]杜宇,苏建荣,于保荣,等．人体寄生虫检验课程教学方法改革的探索[J]．中国病原生物学杂志,２０１４,９(１２):２Ｇ３．[５]黄冬悦,周文杰,邹盛杰,等．通过参加美国病理学家学会能力验证活动提高实验室寄生虫检验水平[J]．临床检验杂志,２０１７,９(３５):７００Ｇ７０３．[６]MA R K W L,W I L L I AM D N．G i a r d i aa n dc r y p t o s p o r i d iＧu mi n r a wa n d f i n i s h e dw a t e r[J]．J AWWA,１９９５,８７(９):５４Ｇ６１．[７]黄玉霞,邓三鹰,黄倩,等．大便镜检中形态相似和少见寄生虫的形态特征及鉴别[J]．四川医学,２０１３,３４(５):７３０Ｇ７３２．[８]农子军,李云萍,江丽萍,等．医学检验专业临床寄生虫学考试模式改革探讨[J]．基础医学教育,２０１２,１４(６):４０３Ｇ４０５．[９]刘耀宝,曹俊,周华云,等．江苏省境外输入性疟疾疫情分析及防控策略探讨[J]．中国血吸虫病防治杂志,２０１３,２５(１):４４Ｇ４７．[１０]于振华,王福勇,魏冬冬,等．１３８例输入性恶性疟治疗效果观察[J]．中国血吸虫病防治杂志,２０１４,２６(６):６６９Ｇ６７１．[１１]朱蓉,许静．我国境外输入性血吸虫病的疫情现状与防控思考[J]．中国血吸虫病防治杂志,２０１４,２６(２):１１１Ｇ１１４．[１２]刘明远,刘全,方维焕,等．我国的食源性寄生虫病及其相关研究进展[J]．中国兽医学报,２０１４,３４(７):１２０５Ｇ１２２４．[１３]王建成．关于«临床寄生虫学与检验»教学的几点思考[J]．检验医学与临床,２０１６,１３(１０):１４４１Ｇ１４４２．(收稿日期:２０１８Ｇ１１Ｇ０８㊀修回日期:２０１８Ｇ１２Ｇ２６)２５１１ 国际检验医学杂志２０１９年５月第４０卷第９期㊀I n t J L a bM e d,M a y２０１９,V o l．４０,N o．９。
异基因造血干细胞移植治疗慢性粒细胞白血病的疗效及预后因素分析
１ ２ 方法 ．
１３ 统计 学方法 ．
采用 Ｓ Ｓ １． 计软 件 。采用 Ｐ Ｓ３０统
Ｋ ｐａ— ｅｅ 生存模 型评 估 患 者 长 期 生 存 状 况 ， ａｌ Ｍ ｉ ｎ ｒ 生 存 率 的 比较 采 用 Ｌｇｒｎ ｏ ａｋ检 验 ， 因 素 分 析 采 用 多
中位 时间为 １ （ ３ ） 无关 全 相合 供 者 Ｈ Ｃ ４ｄ７～ ２ｄ ； ＳＴ 患者及 单倍 型 Ｈ Ｃ Ｓ Ｔ患 者 移植 后 中性 粒 细 胞 ＞０ ５ ． ×１ Ｌ的 中位 时 间分 别为 １ ｄ ７～ ０ｄ １ （ ０／ １ （ ３ ）、 ｄ １ ３ １
象 、Ｂ Ａ Ｏ血型、 性染色体及短 串联重复序列判断植 入情 况 。通 过 门诊 随 访 结 合 电话 随 访 ， 止 Ｅ期 截 ｊ
２０ ０ ９年 ７月 １日。
（ Ｃ １ 例。诊断到移植 时间≤１ ８ ， 年 Ｂ ）１ 年 ６例 ＞１
１ ８例 ， 中位 时 间为 ５５个 月 。７ ． ８例 行 ＨＬ 同胞 全 Ａ 相合 ＨＳ Ｔ １ 行无 关 全相 合供 者 Ｈ Ｃ １ 行 Ｃ ，３例 Ｓ Ｔ，３例
性 ＧＨ Ｖ Ｄ患者 。多 因素 Ｃ ｘ回归分析显示 ， ｏ 疾病状态 、 移植类 型 、 急性 Ｇ Ｈ Ｖ Ｄ的严重程度是异基 因 Ｈ Ｃ Ｓ Ｔ患者 长期
生存 的独立影响因素。结论 慢性期且有 Ｈ Ａ相合 同胞供者 的 Ｃ Ｌ患者行 ａｏＨ Ｃ Ｌ Ｍ ｌ ． Ｓ Ｔ可获得较 高长期生存率 。 ｌ
１１ 临床资 料 ．
选 择 ２０ ０ １年 １ ～ ０ ８年 １ 月 ２０ ２月
在 我 院接受 ａｏＨ Ｃ ｌ — Ｓ Ｔ治 疗 的 Ｃ ｌ ＭＬ患 者 １４例 ， ０ 男 ７ ４例 、 ３ 女 ０例 ， 龄 ９～ ２岁 、 年 ６ 中位 年龄 ３ ． ３ ５岁 。 Ｃ ＭＬ慢 性期 （ Ｐ ８ Ｃ ）３例 ， 速期 （ Ｐ １ 加 Ａ ）０例 ， 变 期 急
检测异基因造血干细胞移植后嵌合体的新方法探究
检测异基因造血干细胞移植后嵌合体的新方法探究摘要】目的应用短串联重复序列．聚合酶链反应（ＳＴＲ．ＰＣＲ）半定量方法检测异基因造血干细胞移植后嵌合体。
方法给１０例接受移植的患者行移植后嵌合体检测，采集外周血提取ＤＮＡ，对９个ＳＴＲ位点行聚合酶链反应扩增，扩增完成后行聚丙烯酰胺凝胶电泳及硝酸银染色显影，再计算嵌合率。
结果１０例患者均检测到供者细胞，８例达到完全嵌合（ＣＣ），２例形成混合造血（ＭＣ）。
结论ＳＴＲ．ＰＣＲ结合凝胶电泳成像分析技术是一种敏感、准确、可靠、经济的嵌合体半定量检测方法。
２０世纪９０年代以来，造血干细胞移植（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ＨＳＣＴ）技术取得飞速发展，现已成为治疗恶性血液病、遗传性疾病等的主要手段之一。
随着ＨＳＣＴ应用范围的扩大，移植效果日益得到重视，移植后的检测也将成为ＨＳＣＴ研究中不可缺少的一部分［１］。
短串联重复序列（ｓｈｏｒｔｔａｎｄｅｍｒｅｐｅａｔ，ＳＴＲ）是近年来发现的，广泛存在于基因组中的ＤＮＡ长度多态性片段，它由２～６个碱基构成一个在长度上呈串联重复排列的核心序列。
有学者将ＳＴＲ应用于ＨＳＣＴ后植入证据的检测，结果显示ＳＴＲ基因位点检测可用于判断移植效果、预防复发、实行临床早期干预治疗等。
本文我们运用的ＳＴＲ．ＰＣＲ结合聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色以及凝胶成像分析技术可以计算出嵌合率。
我们对１０例接受ＨＳＣＴ的患者进行了动态嵌合体的监测，根据嵌合结果，为患者的临床治疗，预后提供依据。
１资料与方法１．１病例资料：对象为２０１１．２０１３年在东南大学附属中大医院血液科接受ａｌｌｏ．ＨＳＣＴ的患者１０例（男８，女２），年龄８～５３岁（中位年龄２５岁）。
１．２预处理方案及ＧＶＨＤ的防治：预处理用改良的Ｂｕ／ＣＹ预处理方案，即阿糖胞苷，白消安，环磷酰胺，司莫司汀，抗胸腺细胞球蛋白。
ＧＶＨＤ预防采用环孢霉素Ａ、麦考酚酸酯和短程甲氨蝶呤方案。
异基因造血干细胞移植技术临床应用质量控制指 标
异基因造血干细胞移植技术临床应用质量控制指标异基因造血干细胞移植技术是一种极具前景的治疗方法，它的成功与否与许多因素有关。
为了保证此项技术的临床应用安全有效，需要对其进行严格的质量控制。
下面将从多个方面介绍异基因造血干细胞移植技术的质量控制指标。
一、供体选择和筛查供体的选择和筛查是确保移植成功的必要条件。
为了减少移植后的排斥反应，必须对供体进行仔细的筛查，包括ABO血型不相容、HLA配型不匹配等方面。
此外，供体的健康状态也是重要因素之一。
只有经过全面的检测和筛查，才能选择最适合的供体。
二、干细胞源的优选干细胞源的品质直接影响移植的成功率。
首先要考虑的是干细胞的来源，包括骨髓、外周血和脐带血等。
在选择时，需要注意干细胞的数量、质量和贮存时间。
同时，需要对来源进行严格的筛查和检测，确保源头的纯净和安全。
只有选取高质量的干细胞源，才能保证移植的顺利实施。
三、采取适当的预处理预处理是移植前不可忽视的一环。
预处理的目的是减少供体细胞数量，降低供体对宿主的免疫反应，提高干细胞的移植成功率。
常用的预处理手段包括化疗、放疗等。
在选择预处理方案时，需根据干细胞类型和患者病情，选择最适合的方案。
四、细胞输注过程控制在整个细胞输注过程中，对细胞的浓度、速度和温度等要求十分严格。
在输注开始前，需要对细胞进行质控和纯化处理，以确保细胞的品质和数量的高质量。
输注过程中，应严格控制细胞的浓度和速度，同时确保室温的恒定维持，以保证细胞在整个过程中的品质不受影响。
五、移植后的监测和护理移植后的监测和护理同样至关重要。
移植后的患者需要经过长时间的康复过程，期间需要专业的医护人员进行全程护理和监测。
临床上最常用的方法是进行白细胞计数和评估宿主对供体的免疫反应。
对于发现异己排异反应的患者，要立即采取相应措施，包括制定针对性的治疗方案和预防措施等。
综上所述，异基因造血干细胞移植技术的质量控制始终是临床应用的中心环节之一。
只有在每个环节都进行严格的质控，才能保证移植的安全有效。
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文章编号(Article ID ):1009-2137(2005)01-0009-07・论著・异基因造血干细胞移植植活状态的变性高效液相色谱检测研究的首次报告王昱,潘凯枫,陆道培北京大学血液病研究所北京大学人民医院,北京100044摘要 异基因造血干细胞移植后动态检测供者嵌合状态对判断移植效果和实施临床早期干预治疗具有重要意义。
在临床上已有多种方法用于植活检测,本研究用变性高效液相色谱(DHPLC )技术结合聚合酶链反应扩增短串联重复序列(STR 2PCR )检测造血干细胞移植植活状态的特点及可靠性。
用非亲缘个体的系列DNA 混合体在体外检测此测定方法的可行性和半定量结果的准确性。
结果表明,体外模拟混合嵌合体检测实验,显示扩增前供者DNA 嵌合百分率与扩增后供受者DHPLC 色谱峰峰面积比值呈直线相关,最小检出DNA 百分比为5%。
用该方法分析51例移植对的结果显示:45例均至少有2个可以区分彼此的有信息位点(另外5例无移植前受者标本,1例为同卵双生双胞胎);39例与荧光标记多重PCR 扩增STR 结合毛细管电泳方法进行对照,准确性为100%;29例与性染色体FISH 分析,27例与特殊基因标记的分析结果一致;所有病例均检测到完全供者细胞嵌合状态(FDC );对3例患者观察到临床复发的同时,检测到供者嵌合体的比例明显下降,其中2例为混合嵌合体,1例转变为受者自身型。
在此基础上,我们将该方法首次用于对8例人类白细胞抗原(HLA )配型不同2单倍型亲缘供者干细胞及无血缘关系脐带血混合移植患者植活情况的动态检测。
结果显示,8例混合移植患者STR 2PCR 检测结果均为FDC ,来源均为亲缘供者。
结论:用DHPLC 技术结合短串联重复序列具有快速、经济、无污染和自动化高等特点,用于检测异基因造血干细胞移植物植活状态是可靠的。
关键词 异基因造血干细胞移植;短串联重复序列;变性高效液相色谱;嵌合体中图分类号 R457.7;R730.4文献标识码 AFirst R eport on Assessment of the Status of Engraftment After Allogeneic H ematopoietic Stem Cell T ransplantation by Using Denaturing High 2performance Liquid ChromatographyW A N G Y u ,PA N Kai 2Feng ,L U Dao 2PeiInstit ute of hematology ,The People Hospital of Peki ng U niversity ,Beiji ng 100044,Chi naAbstract Monitoring engraftment of donor cells after allogeneic hematopoietic stem cell trans plantation (allo 2HSCT )is supposed to be important for the early diagnosis of graft failure or relapse of malignancy.Several techniques have been re 2ported for this purpose.PCR 2based assays analyzing polymorphic short tandem repeats (STR )as markers are attractive because they are sensitive and can be performed rapidly.The intent of this study was to test a novel approach for assess 2ment of donor engraftment using denaturing high 2performance liquid chromatography (DHPLC )combined with STR 2PCR.The feasibility of this assay and the accuracy of semi 2quantitative results were tested in 2vit ro by using serial DNA mixtures from unrelated individuals.The results showed that dilution ex periments of the mock chimerism sam ple revealed a clear correlation between the percentage of donor or recipient DNA and the proportion of allele peak areas ,with the limit of detection for a minor DNA percentage being 5%.Discrimination between donor and reci pient was possible in all pa 2tients analyzed (n =51)except for 5patients whose pre 2transplant samples were not available and identical twins in one case.STR results were the same as values obtained b y capillary electrophoresis combined with fluorescence labeling multi 2ply PCR.Results were also com pared with data obtained with FISH analysis in a subgroup of patients receiving grafts from sex 2mismatched donors or with PCR 2detectable disease 2specific gene products analysis.The results of the microsatel 2lite analysis correlated well with the corres ponding clinical findings.Full donor chimerism (FDC )were detected in all pa 2tients ;decreasing values of donor chimerism were detected concomitantly with the appearance of relapse of disease in 3pa 2tients.Samples from eight patients receiving HLA mismatched 2haploidentical trans plants from related donors together with cord blood trans plants from unrelated donors were analyzed by this method.The results showed all 8patients achie 2ved FDC derived from related donors.It is concluded that this novel a pproach allows a rapid ,sensitive ,economical ,auto 2通讯作者:王昱,住院医师.电话:(010)68792788.E 2mail :ywyw3172@ 2004-03-03收稿;2004-10-26接受・9・中国实验血液学杂志 Journal of Ex perimental Hem atology 2005;13(1):9-15mated and non2isotopic STR2PCR testing,thus provides a reliable alternative for assessment of the status of en graftment after allo2HSCT.K ey w ords allogeneic stem cell trans plantation;short tandem repeats;denaturing high2performance liquid chromato2 graphy;chimerismJ Ex p Hem atol2005;13(1):9-15目前,临床上用于判断异基因造血干细胞移植(allo2 HSCT)植活状态的常规方法包括:观察外周血像恢复情况,分析红细胞血型转换,HLA分型,细胞遗传学改变,异常基因标记及微卫星DNA序列分析。
移植的成效与供者细胞在受者体内的植入情况,即嵌合体的形成有关。
移植后动态检测供者嵌合状态对判断移植效果,实施临床早期干预治疗尤为重要1。
聚合酶链反应扩增短串联重复序列(STR2 PCR)已经成为国际推行的检测供受嵌合状态的金标准。
本研究首次报告变性高效液相色谱(DHPLC)结合聚合酶链反应扩增短串联重复序列(STR2 PCR)检测移植后植活状态,并首次用于HLA配型不同2单倍型亲缘供者造血干细胞及无血缘关系脐带血混合移植的检测。
变性高效液相色谱(DHPLC)是近几年发展起来的高通量、用于筛选基因突变和单核苷酸多态性(SN P)的一门技术,同时也可用于短串联重复序列的检测2-5。
该方法具有快速、经济、可靠和自动化高等特点,已广泛用于基因突变筛查和SN P的分析。
目前,国外也有报道用DHPLC检测短串联重复序列及微卫星不稳定性,国内外目前尚无应用DHPLC技术检测供者嵌合状态的报道。
本研究用DHPLC结合STR2PCR技术分析病例,其结果与荧光标记多重PCR扩增STR结合毛细管电泳方法进行对照,准确性为100%,证明该方法用于检测异基因造血干细胞移植物植入状态是可靠的,现报告如下。
材料方法标本采集临床标本采自2001年11月26日至2003年12月11日间在北京大学人民医院进行异基因造血干细胞移植的51例病人及其供者的外周血,术前采集供者和受者外周血,术后8天到600天不等采集受者外周血。