运动心脏重塑后降钙素基因相关肽的特征研究
人降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析
人降钙素基因相关肽(CGRP)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T2 ng/L -60 ng/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本降钙素基因相关肽(CGRP)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人降钙素基因相关肽(CGRP)水平。
用纯化的人降钙素基因相关肽(CGRP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入降钙素基因相关肽(CGRP)，再与HRP标记的降钙素基因相关肽(CGRP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的降钙素基因相关肽(CGRP)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人降钙素基因相关肽(CGRP)浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
降钙素原研究进展
降钙素原研究进展降钙素原（procalcitonin, PCT）于1981年由Jacobs等[1]发现，1993年Assicot 等[2]发现败血症患者血液中其浓度明显升高，因此逐渐引起重视。
近几年来，临床医师尝试应用PCT作为机体感染所引起系统炎性反应综合症（SIRS）的一个敏感性指标，并用于鉴别细菌感染与非细菌感染的鉴别诊断，取得了一定的进展。
现就PCT的生物学特性及临床应用前景作一综述。
1PCT基因及分子结构PCT是降钙素（calcitonin，Calc）的前体之一，与降钙素基因相关肽（calcitonin gene related peptide, CGRP）、胰岛淀粉样多肽（amylin）、肾上腺髓质素（adrenomedullin）、降钙素及其前体均属于CAPA蛋白家族。
[3,4]该族蛋白均由100个左右氨基酸组成，含有2个半胱氨酸残基，从而形成一个二硫键。
[5,6]CAPA 家属蛋白分别由Calc I~IV基因编码。
Calc-I基因所编码PCT，该基因位于染色体11p15.4，高度保守，且在不同种属动物间具有同源性。
人与大鼠及小鼠的Calc-I 基因结构相似，具有74.5％及73.6％的同源性。
[7-11]人类Calc-I基因全长约8kb，目前已克隆出约2kb（X02330，Homo sapiens mRNA）。
Calc-I基因含6个外显子，由5个内含子所分隔，外显子I～IV经转录后拼接为Calc-I mRNA，I、II、III、V及VI经转录拼接为CGRP-α mRNA（图1）。
在Calc-I基因的增强子区有TATA盒结构或Sp1结合区，转录调节因子NFκB、AP-1的结合位点，以及c-AMP反应元件（CERB）及Ras反应元件（RREB-1）结合区。
[12-14]Calc-I基因的转录水平的调节目前尚不明确，有研究表明：[14,15]cAMP能明显增强Calc-I基因的转录，而Ras与启动子区RREB-1结合区相互作用，可诱导细胞分化，并产生不同的PCT mRNA。
降钙素基因相关肽对神经系统的作用研究
海南医学2005年第16卷第7期降钙素基因相关肽Caicitonin gene reiated peptide CGRP是一种含有37个氨基酸的神经肽广泛分布于中枢外周神经系统及其他组织作为一种新型神经肽在神经系统疾病的发生过程中有着重要的作用本文对近年来CGRP对神经系统作用的研究进展作一综述1CGRP的舒血管作用及机制1.1CGRP作为一种内源性舒血管神经肽在三叉神经脑血管系统内浓度较高对全身血管有不同程度的扩张作用但在脑心血管的作用更为显著实验及临床研究证实CGRP具有很强的血管扩张改善缺血脑的脑血流量其脑血流量增加30%~80%而无明显副作用[1] Nozaki[2]实验证明CGRP血管舒张反应呈现不同程度的剂效依赖性即适当加大CGRP注入剂量时反应增强浓度低则效应缓慢但持续时间长其作用强于SP VIP等其它血管扩张介质1.2CGRP的舒血管作用机制CGRP舒血管作用的两种机制目前已有较明确的解释[3]CGRP作用于内皮细胞上的受体通过cAMP途径增加细胞内钙离子浓度上调一氧化氮合酶NOS产生NO内皮细胞产生的NO直接穿过细胞膜活化平滑肌内可溶性鸟苷酸环化酶sGC通过环磷酸鸟苷cGMP通路活化蛋白激酶G PKG后者作用于Ca2+ ATP酶使细胞内游离钙离子减少从而舒张平滑肌在另一些血管CGRP也可能通过前列环素PGI2活化cAMP/蛋白激酶A PKA途径发挥舒血管作用CGRP也可不经过内皮直接作用于VSMC上的受体通过cAMP活化PKA或通过活化三磷酸腺苷ATP敏感的钾通道K+ATPChannei促进钾离子外流抑制钙内流最终减少细胞内游离钙离子浓度产生舒张效应2GCRP的神经保护作用及抑制神经元凋亡的部分机制2.1体外实验证实CGRP能促进海马神经元的生长发育而且对大鼠海马脑片脑缺氧损伤具有明显的保护作用延缓不可逆损伤的发生提高复氧后脑片功能的恢复率[4]动物实验证实[5]CGRP具有神经保护功能对减轻脑缺血再灌注脑组织的损伤有显著作用脑缺血可激活一些在细胞凋亡过程中起协同作用的基因及其表达产物通过对促细胞凋亡基因和抑细胞凋亡基因的调控发挥着重要的作用[4]近年来对CGRP的抑制神经元凋亡机制有了较深入的研究2.1.11PKC是Ser/Thr蛋白激酶Nishizuka1997日本首先从鼠脑细胞质中发现受SD及Ca2+激活属钙调节酶[7]在缺血状态下细胞中PKC的活化可引起癌基因c-fos和c-jun的表达引起神经元坏死或凋亡邢雪松等[8]采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺血再灌注模型采用免疫组织化学SABC法及显微图像分析检测海成及皮质内PKC的表达结果注射CGRP后大鼠缺血再灌注海马CAI区及顶叶皮质内PKC阳性产物平均灰度值明显高于缺血再灌注组P<0.01而且与神经生长因子NGF有协同作用NGF可以增强CGRP的表达刺激CGRP的合成[9]共同发挥神经元保护作用2.1.2c-fos和jun基因属早期快速反应基因家族又称即早基因immedi-ateiy eariy gene IEG正常情况下表达水平很低难于用免疫组化方法检测当中枢神经组织受到撞击性刺激或缺血缺氧时c-fos基因快速反应张辉[10]等研究提示脑挫伤c-fos基因表达与损伤程度和损伤时间有关因此c-fos表达时相可以作为临床推测受伤时间和严重程度的指标之一实验观察到[11]经CGRP孵育的海马神经元缺氧后fos-IR阳性胞核数比对照组明显减少fos-IR阳性胞核的平均光密度也比较对照组明显降低表明CGRP对缺氧后海马神经元c-fos表达有明显抑制作用2.1.3细胞凋亡是受多基因调控的主动过程其中抗凋亡基因bac-2在对抗细胞凋亡中起重要作用bac-2的高度表达可减少脑缺血时神经元的凋亡[18]花放等[13]在大鼠全脑缺血再灌注模型上采取颈动脉直接注入CGRP应用免疫组化学染色方法观察其对缺血再灌注脑组织Bc1-2蛋白表达的影响结果CGRP组大脑皮质及海马区bc1-2蛋白的表达较降钙素基因相关肽对神经系统的作用研究许刚1!黄新2,审校"黄勤2#1$广西中医学院!广西南宁530011;2$广西中医学院瑞康医院神经外科%关键词降钙素基因相关肽脑血管神经细胞凋亡偏头痛颅内感染痛觉传递神经免疫中图分类号!R741文献标识码!A作者简介许刚1978男文章编号10036350200507015003综述!"#海南医学2005年第16卷第7期全脑缺血再灌注级明显增加P<0.01说明CGRP可上调缺血再灌注脑组织bcl-2蛋白的表达2.1.4AP l作为一种转录因子可被短暂性全脑缺血激活与缺血性损伤机制有关[l4]从缺血引起的早期细胞内外信号改变到最终的细胞死亡或存活存在着若干信号通路其中转录因子AP l是连接这类通路的重要环节之一张璐等[l5]采用EMSA法经颈动脉直接注入CGRP对缺血后大鼠CAI区的AP-ID-NA活性进行观察发现CGRP能不同程度的减轻再灌注72h和7d的神经元损伤CAI区存活细胞数目较NS组明显增加P<0.05CGRP能明显提高缺血后海马CAI区AP l的DNA结合活力提示CGRP的神经保护作用可能与其调节AP l的DNA结合活力有关2.l.5P38是一种分子量为38KD 的钙结合糖蛋白在神经元胞体合成后主要转运到轴突终末特异性分布于突触前囊泡膜上通过测定特异性免疫反应产物的平均灰度值在光镜水平对P38含量进行间接定量从而推测突触数量的变化[16]丁晓慧等[17]采用暂时夹闭双侧颈总动脉法制作大鼠脑缺血再灌注模型经右侧颈内动脉注入CGRP采用单克隆抗P38抗体免疫组织化学染色及显微图像方法研究CGRP对大鼠再灌注海马内P38的影响结果注射CGRP组阳性产物明显高于缺血再灌注组P<0.01表明CGRP可上调缺血再灌注海马神经元P38表达证实了CGRP对缺血神经组织的恢复作用且提示可能与调节突触的可塑性有关3CGRP与偏头痛的关系研究表明偏头痛发作与头颅血管周围组织产生的血管活性物质特别是与三叉神经血管系统的CGRP含量变化有关沈君等[18]通过对降钙素基因相关肽与偏头痛的关系研究发现偏头痛发作时颈外静脉血中CGRP含量较肘静脉血中CGRP含量明显增高典型偏头痛较非典型偏头痛增高更显著表明发作期三叉神经节的激活及颅脑血管传入神经通路的活动增强致神经肽局部释放增加提示偏头痛发作与三叉神经血管系统被激活CGRP强烈扩血管作用及致痛作用密切相关4颅内感染对CGRP的影响近年来CGRP在中枢神经系统感染的病理生理过程中的变化逐渐受到重视张育才等[19]研究发现于兔脑池内注射内毒素后脑组织脑脊液和血浆中CGRP含量均呈显著升高12~24小时达高峰说明CNS炎症情况下CNS和周围组织CGRP表达增强脑组织和脑脊液CGRP含量最高时脑含水量增多亦达高峰临床证实小儿[20]CNS感染急性期血浆和脑脊液CGRP含量呈显著升高且GCS!8分者脑脊液CGRP升高更明显显示病情愈严重CGRP释放愈多其机制可能是CGRP导致脑血管过度扩张引起脑血流自动调节障碍脑血流过多血管通透性增加5CGRP与痛觉传递的关系有人推测CGRP与痛觉传递密切相关[21]在脊髓水平CGRP能促进痛觉信号的传递脊髓蛛网膜下腔注射CGRP可使痛阈降低有研究表明CGRP可促进SP的释放而有利于痛觉的传递脑内注射CGRP可提高痛阀纳洛酮不能阻断这种作用表明脑内CGRP的镇痛作用不依赖于内源性鸦片肽镇痛系统6CGRP与神经免疫CGRP对多种免疫功能均有调节作用CGRP调节内毒素激活的巨噬细胞的多种功能抑抑制致炎细胞因子肿瘤坏死因子!和白介素12的产生双相调节白介素6的产生小剂量增加大剂量抑制增加CXC趋化因子KC和巨噬细胞炎症蛋白2以及一氧化氮和前列腺素的产生[22]Sakuta[23]也证明CGRP有调节T B淋巴细胞的功能并且免疫细胞也能合成和释放神经肽CGRP7结语CGRP和神经系统疾病有着十分广泛且重要的相关性然而CGRP受体广泛作用机制复杂许多机制尚未完全明了且神经系统疾病的病理生理过程也十分复杂因此研究二者作用的相互关系及机制对认识神经系统疾病的病理生理过程及指导治疗有着十分重要的意义参考文献l杨希秀,李玉华,李鲁生,等.缺血性脑血管病患者血浆ET,CGRP的含量变化及临床意义[J].放射免疫学杂志,2003,l6(5):268-270.2Nozaki K,Okamoto s.vemura Y.et ai.vascuiar re-iaxation properties of caicitonin gene-reiated peptideand vasoactive intestinai poiypeptide in subarachnoidhae morrhage[J].J Neurosurg,l990,72:792-797.3Wimaiawansa SJ.Caicitonin gene-reiated peptideand its receptors:moiecuiar gengetics,physioiogy,pathophysioiogy,and thereapeutic potentiais[J].En-docr Rev,1996,17:533-585.4王福庄,丁爱石,陈嘉,等.降钙素基因相关肽对低氧下海马脑片突触功能的保护作用[J].生理学报,1994,46(6):529-538.5花放,方秀斌,张璐,等.降钙素基因相关肽对大鼠全脑缺血再灌注脑组织的保护作用[J].卒中与神经疾病,2002,9(6):331-334.6Takai Y,Kishimoto A,Inouc M,et ai.Studics on acyctic nuciotide independent protein kinase and itsproenzyme in mamaaiian tissue[J].J Bioi Chem,1997,152:7603-7609.7D'Cruz BJ,Fertig KC,Fiiiano AJ,et ai Hypothermicreperfusion after cardiac arrest augments brain de-rived neurotrophic factor activation[J].J CerebBiood Fiow Metab,2002,22(7):843-85l.8邢雪松,曹德寿,刘晓湘,等.CGRP和NGF对全脑缺血再灌注大鼠脑组织PKC表达的调节作用[J].解剖科学进展,2004,l0(l):50-53.9Supow it SC,Zhao H,Dipette DJ.Nerve growth fac-tor enhances caicitonin gene-reiated peptide expres-sion in the spontaneousiy hypertesive rat[J].Hyper-tension,2001,37:728-732.10张辉,李卫东,薄爱华,等.Fos蛋白在脑挫伤皮质和海马中表达的研究[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2004,13(1):110-113.11丁爱石,王福庄,杨宏,等.降钙素基因相关肽对大鼠海马培养神经元c-fos表达的影响[J].中国神经医学杂志,1997,4(3)110-114.12Lawrence MS,Mciaughiin JR,Sun GH,et ai.Her-pes simpiex virai vectors expressing bci-2areneuroprotective when deiivered after a stroke[J].JCereb Biood Fiow Metab,1997,17:740-744.13花放,方秀斌,张璐,等.CGRP和NGF对大鼠全脑缺血再灌注脑组织Bc1-2蛋白表达的影响[J]脑与神经疾病杂志,2002,10(5):269-274.14Yoneda Y,Azuma y,Inoue K,et ai.Positive cor-reiation between proionged potentiation of bindingof doubie-stranded digonucieotide probe for thetranscription factor API and resistance to transientforebrain ischemia in gerbi hippocampus[J].Neu-roscience,1997,79(4):1023-1037.15张璐,沈霞,崔桂云,等.降钙素基因相关肽对大鼠全脑缺血再灌注后海马CAI区活化蛋白SIDNA结合活性的影响[J].徐州医学院学报,2003,23(l):l3-l6.!"!<海南医学2005年第l6卷第7期l6Masiiah E,Terry RD,Aiford,et ai.Ouantitative im-munohistochemistry of synaptophysin in human neo-cortex:an aiternative method to estimate density of presynaptic terminais in paraffin sections .His-tochem Cytochem,l990,38(6):837.l7丁晓慧,花放,刘文瑞,等.CGRP对大鼠缺血再灌注后海马内突触体素表达的影响 .解剖科学进展,2000, 6(4);358-360.l8沈君,傅萱,喻学红,等.降钙素基因相关肽与偏头痛关系的研究 .临床神经病学杂志,l999,l2(5):300-30l.l9张育才,张宇鸣,汤定华,等.家兔内毒素性脑水肿降钙素基因相关肽的表达 .中华儿科杂志,l999,37(l0):60l-603.20张育才,张宇鸣,汤定华,等.中枢神经系统感染患儿血浆和脑脊液降钙素基因相关肽和内皮素的检测.中国危重病急救医学,l999年ll(30:l78-l79.2l Christensen M D,Huisebosch C E.Spinnai cord in-jury and anti NGF treatment resuits in changes inCGRP density and distribution in the dorsai horn inthe rat .Exp Neuroi,l997,l47(2):463-475.22Tang Y,Han C,Wang X.roie of nitric oxide andprostagiandins in the protentiating effects of caici-tonin gene-reiated peptide on iipopoiysaccharide-in-duced interieukin-6reiease from mouse peritoneaimacrophages .Immuoiigy,l999,96:l7l-l75.23Sakuta H,Znaba K,Muramatsu S.caicitonin gene-reiated peptide enhance cytokine-induced IL-6production by Fibrobiasts .Ceiiuiar Immunoiogy,l995,l65:20-25.卵巢癌发病率较高?死亡率占妇科肿瘤之首?大多数发现于晚期?5年生存率仅为30%?如何做到早期诊断是亟待解决的问题O CAl25是存在于胚胎发育过程体腔上皮细胞的大分子糖蛋白 l O CA7214是由两种单克隆抗体CC49和B72.3所定义的肿瘤相关糖蛋白?它是一种高分子量的糖蛋白复合物?MD>l000KD 2 ?主要在胃肠道恶性肿瘤表达?其次在卵巢和乳腺恶性肿瘤中也有增高O两种标志物目前已广泛应用于临床?我们用电化学发光免疫测定法测定血清CAl25和CA7214水平?以探讨其对卵巢癌诊断的价值Ol材料和方法联合检测血清CAl25和CA72!4对卵巢癌诊断的价值黄文成!黄玲莎!赵惠柳!王英!朱波!李佩章"广西医科大学附属肿瘤医院!广西南宁53002l#摘要目的探讨联合检测血清CAl25和CA7214的含量对卵巢癌的临床诊断的价值O方法卵巢癌患者58例\卵巢良性肿瘤患者48例及健康妇女50例的血清样品?用电化学发光免疫测定法测定CAl25和CA7214含量O结果与卵巢良性肿瘤组和健康妇女组相比?卵巢癌患者血清CAl25和CA7214的含量和阳性率明显升高(P<0.0l)?2项标志物的阳性率分别是79.3%和60.3%?联合检测阳性率为89.6%O结论联合检测CAl25和CA7214对卵巢癌的诊断具有重要临床价值O关键词卵巢癌;CAl25;CA7214;电化学发光中图分类号"R737.3l文献标识码"AThe value of combined detection of serum CAl25and CA72-4in the diagnosis of the ovarian carcinomaHUANG Wen-cheng,HUANG Ling-sha,ZHAO Huiiiu,et ai(Affiiiated Cancer hospitai of Guangxi Medicai University,Nanning53002l,China)Abstract Objective To study the vaiue of combined detection of the serum ieveis of CAl25and CA72-4in the diagnosis of the ovarian carcinoma.Methods Serum ieveis of CAl25and CA72-4in58patientswith ovarian carcinoma,48patients with benign ovarian tumor and50normai controis were measured by Eictro-chemiiuminescence immuno-assay(ECLIA).Results The ieveis of CAl25and CA72-4in ovarian carcinomagroup were significantiy higher than those in benign ovarian tumor and normai controi groups(P<0.0l).Sensitiv-ities of CAl25and CA72-4were79.3%and60.3%,respectiveiy.Sensitivity of combined detection of twokinds tumor markers was89.6%.Conclusions The combined detection of CAl25and CA72-4were of impor-tant ciinicai vaiue in the ovarian carcinoma.Key words Ovary cancer;CAl25;CA72-4;ECLIA作者简介:黄文成(l97l1ll)?男?壮族?广西桂平市人?主管技师?学士O文章编号:l00316350(2005)0710l52102临床检验!"#~~降钙素基因相关肽对神经系统的作用研究作者：许刚， 黄新， 黄勤作者单位：许刚(广西中医学院,广西,南宁,530011)， 黄新,黄勤(广西中医学院瑞康医院神经外科)刊名：海南医学英文刊名：HAINAN MEDICAL JOURNAL年，卷(期)：2005,16(7)被引用次数：3次1.杨希秀;李玉华;李鲁生缺血性脑血管病患者血浆ET,CGRP的含量变化及临床意义[期刊论文]-放射免疫学杂志 2003(05)2.Nozaki K;Okamoto s;vemura Y vascular relaxation properties of calcitonin gene-rrelated peptide and vasoactive intestinal polypeptide in subarachnoid hae morrhage[外文期刊] 19903.Wimalawansa SJ Calcitonin gene-related peptide and ita receptors:moleculargengetics,physiolgy,pathophysiolgy,and thereapeutic potentials 19964.王福庄;丁爱石;陈嘉降钙素基因相关肽对低氧下海马脑片突触功能的保护作用 1994(06)5.花放;方秀斌;张璐降钙素基因相关肽对大鼠全脑缺血再灌注脑组织的保护作用[期刊论文]-卒中与神经疾病 2002(06)6.Takai Y;Kishimoto A;Irouc M Studics on a cyctic nuclotide independent protein kinase and its proenzyme in namaalian tissue 19977.D'Cruz BJ;Fertig KC;Filiano AJ Hypothermic reperfusion after cardiac arrest augments brain derived neurotrophic factor activation 2002(07)8.邢雪松;曹德寿;刘晓湘CGRP和NGF对全脑缺血再灌注大鼠脑组织PKC表达的调节作用[期刊论文]-解剖科学进展 2004(01)9.Supow it SC;Zhao H;Dipette DJ Nerve growth factor enhances calcitonin gene-related peptide expression in the spontaneously hypertesive rat[外文期刊] 2001(2)10.张辉;李卫东;薄爱华Fos蛋白在脑挫伤皮质和海马中表达的研究[期刊论文]-中国组织化学与细胞化学杂志 2004(01)11.丁爱石;王福庄;杨宏降钙素基因相关肽对大鼠海马培养神经元c-fos表达的影响 1997wrence MS;Mclaughlin JR;Sun GH Herpes simplex viral vectors dxpressing bcl-2 are neuroprotective when delivered aft er a stroke 199713.花放;方秀斌;张璐CGRP和NGF对大鼠全脑缺血再灌注脑组织Bcl-2蛋白表达的影响[期刊论文]-脑与神经疾病杂志2002(05)14.Yoneda Y;Azuma y;Inoue K Positive correiation between prolonged potentiation of binding of double-stranded digonucleotide probe for the transcription factor API and resistance to transient forebrain ischemia in gerbi hippocampus[外文期刊] 1997(04)15.张璐;沈霞;崔桂云降钙素基因相关肽对大鼠全脑缺血再灌注后海马CAI区活化蛋白&IDNA结合活性的影响[期刊论文]-徐州医学院学报 2003(01)16.Masliah E;Terry RD;Alford Quantitative immunohistochemistry of synaptophysin in human neocortex: an alternative method to estimate density of presynaptic terminals in paraffin sections 1990(06)17.丁晓慧;花放;刘文瑞CGRP对大鼠缺血再灌注后海马内突触体素表达的影响[期刊论文]-解剖科学进展 2000(04)18.沈君;傅萱;喻学红降钙素基因相关肽与偏头痛关系的研究 1999(05)19.张育才;张宇鸣;汤定华家兔内毒素性脑水肿降钙素基因相关肽的表达[期刊论文]-中华儿科杂志 1999(10)20.张育才;张宇鸣;汤定华中枢神经系统感染患儿血浆和脑脊液降钙素基因相关肽和内皮素的检测[期刊论文]-中国危重病急救医学 1999(03)。
降钙素基因相关肽与疼痛相关研究进展
降钙素基因相关肽与疼痛相关研究进展降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP）是1982年发现的由37个氨基酸组成的多功能神经肽，广泛存在于人体各系统中，主要存在于背根神经节（dorsal root ganglion,DRG）和三叉神经（trigeminal ganglion,TG）的C和Aδ感觉纤维中，约有65%～80%的DRG 神经元表达CGRP，多属于中小型神经元。
CGRP主要定位于初级传入神经末端，在二级神经元胞体中几乎没有CGRP的存在，背根神经节神经元是脊髓CGRP的唯一来源。
CGRP分为两种形式，即α-CGRP和β-CGRP，CGRP受体复合物由三种独立的蛋白质组成：G蛋白偶联受体（G-protein couped receptor,GPCR）、降钙素受体样受体（calcitonin receptor-liker eceptor,CLR）和一种具有配体结合特异性的辅助蛋白受体活化修饰蛋白1（receptor activity modifying protein,RAMP1）。
经典的CGRP受体拮抗剂是含有残基8-37的C末端片段，它结合但不激活受体。
2020年国际疼痛学会（The International Association for the Study of Pain,IASP）将疼痛定义更新为是一种与实际或潜在的组织损伤相关的不愉快的感觉和情绪情感体验，或与此相似的经历。
疼痛是个重大的公众健康问题，目前关于疼痛的管理和治疗仍未达到理想效果。
由于疼痛的病理和机制具有多样性和复杂性，尽管目前疼痛治疗方式多种多样，其中包括中医疗法、认知疗法、药理、介入和手术等，但依然面临不良反应多、疗效欠佳等诸多挑战。
了解疼痛的细胞和分子机制对于疼痛的预防和治疗至关重要，针对这些细胞和分子机制靶向治疗很可能是发展有效的疼痛疗法的关键。
随着人们对CGRP受体结构及功能日益深入的了解，CGRP在参与疼痛方面的作用正在逐渐受到重视，抗CGRP通路的单克隆抗体作为一种新的治疗和预防偏头痛靶向方法，在机制上具有特异性，是一种很有希望的新治疗策略。
心血管活动的调节实验报告
心血管活动的调节实验报告人体在不同的生理状况下，各器官组织的代谢水平不同，对血流量的需要也不同。
机体的神经和体液机制可对心脏和各部分血管的活动进行调节，从而适应各器官组织在不同情况下对血流量的需要，协调地进行各器官之间的血流分配。
一、神经调节心肌和血管平滑肌接受自主神经支配。
机体对心血管活动的神经调节是通过各种心血管反射实现的。
（一）心脏和血管的神经支配1.心脏的神经支配支配心脏的传出神经为心交感神经和心迷走神经。
（1）心交感神经及其作用：心交感神经的节前神经元位于脊髓第1-5胸段的中间外侧柱，其轴突末梢释放的递质为乙酰胆碱，后者能激活节后神经元膜上的N型胆碱能受体。
心交感节后神经元位于星状神经节或颈交感神经节内。
节后神经元的轴突组织心脏神经丛，支配心脏各个部分，包括窦房结、房室交界、房室束、心房肌和心室肌。
在动物实验中看到，两侧心交感神经对心脏的支配有所差别。
支配窦房结的交感纤维主要来自右侧心交感神经，支配房室交界的交感主要来自左侧心交感神经。
在功能上，右侧心交感神经兴奋时以引起心率加快的效应为主，而左侧心交感神经兴奋则以加强心肌收缩能力的效应为主。
心交感节后神经元末梢释放的递质为去甲肾上腺素，与心肌细胞膜上的β型肾上腺素能受体结合，可导致心率加快，房室交界的传导加快，心房肌和心室肌的收缩能力加强。
这些效应分别称为正性变时作用、正性变传导作用和正性变力作用。
刺激心交感神经可使心缩期缩短，收缩期室内压上升的速率加大；室内压峰值增高，心舒早期室内压下降的速率加大。
这些变化还有利于心室在舒张期的充盈。
交感神经末梢释放的去甲肾上腺素和循环血液中的儿茶酚胺都能作用于心肌细胞膜的β肾上腺素能受体，从而激活腺苷酸环化酶，使细胞内cAMP的浓度升高，继而激活蛋白激酶和细胞内蛋白质的磷酸化过程，使心肌膜上的钙通道激活，故在心肌动作电位平台期Ca2+的内流增加，细胞内肌浆网释放的Ca2+也增加，其最终效应是心肌收缩能力增强，每搏作功增加。
运动训练对降钙素基因相关肽影响研究
Ｋ ｙｗｏ ｄ ： ｉ ｅｕｎｙｉｔ ｓｙｔ ｎｎ ；ｃｌ ｔ ｎｇｎ —ｒｌｅ ｅｔ ｅ（ Ｇ Ｐ ； ｆ ｃ ｅ ｒｓ ｈｇ ｆ ｑｅｃ ｅ ｉ ａ ｇ ａ ｉ ｎ ｅｅ ｅ ｔ ｐｐ ｄ Ｃ Ｒ ） ｅｅｔ ｈ ｒ ｎ ｎ ｔ ｒｉ ｉ ｃｏ ｉ ａｄ ｉ 中 图分 类 号 ： ８４ Ｇ ０ 文 献 标 识 码 ： 文章 编 号 ：０５— ２６ ２ ０ ）９ ０ ０ ３ Ａ １０ ０ ５ （０ ９ ０ — ０７—
运 动训练对 降钙 素基 因相关肽 影 响研 究
Ｉ ｆｕ ｎ ｅ ｏ ｈ ｅ ｉ ａ ｎ ｎ ｎ Ｃａ ｃｔ ｎ ｎ Ｇｅ ｅ— ｒ ｌ ｔ ｄ Ｐｅ ｔｄ ｎ ｌ ｅ ｃ ｆＡｔ ｌ ｔｃ Ｔｒ ｉ ｉ ｇ ｏ ｌｉｏ ｉ ｎ — ｅａ ｅ ｐ ｉ ｅ
李 志宏
ＬＩＺｈ ・ ｏ ｇ ｉ—ｈ ｎ
运动对降钙素基 因相关肽 （ Ｇ Ｐ 的影 响 已有 一些 学者 ＣＲ） 对此作 了尝试性研究 ， 指出运动 可促进 Ｃ Ｒ Ｇ Ｐ的释放 ， 而对 然
于运动 中 Ｃ Ｒ Ｇ Ｐ的变 化 规 律 及 过 度 训 练 乃 至 运 动 疲 劳 时 ＣＲ Ｇ Ｐ的变化情况研究较少 ， 本实验采用跑 台和游泳两种 训练
摘
要： 目的 ： 究 高强度 多课 次运动 动 练对 降钙 素基 因相 关肽 含 量 变化 的影 响及 其 可 能机 制 ， 应 用 降钙 素 研 ｌ 为
基 因相关肽监 测过度训练提供一定参考。研 究方法： 采用跑台和游泳训练方法建立 Ｓ Ｄ大鼠力竭运动模型 ， 动 态观察降钙素基因相关肽含量变化。研究结果 ： 跑台训练组和游泳训练组 Ｎ Ｙ含量均呈递增趋势， 中运动 Ｐ 其 １ 时组 明显 高 于对照 组 ， 动 ４周组 则 明显低 于对 照组 ， 跑 台训 练 组 比游泳 训练 组 降钙 素基 因相 关肽 含 量 小 运 且 变化更明显。结论 ： 运动可使 降钙素基因相关肽含量产生一 系列变化 ， 不同运动项 目对降钙素基 因相 关肽 但 含 量 影响 不 同 ， 宜运 动 强度 和运 动 时 间可促进 降钙 素基 因相 关肽 含 量升 高， 之 则减 少。 且适 反
降钙素基因相关肽
一降钙素基因相关肽(CGRP)是由降钙素Cal/CGRP基因表达，是具有强大的扩张血管作用的生物活性多肽。
它不仅改善血流动力学，在全身血压、局部血流灌注等调控中具有重要作用，而且具有拮抗内皮素-1（ET-1）的血管收缩效应，调节T、B淋巴细胞功能，并可能参与了内毒素休克和细胞凋亡的发病机制。
降钙素基因相关肽(CGRP)在痛觉的产生、传导和调节等方面可能起着重要作用二引物设计step by step1、在NCBI上搜索到目的基因，找到该基因的mRNA，在CDS选项中，找到编码区所在位置，在下面的origin中，Copy该编码序列作为软件查询序列的候选对象。
2、用Primer Premier5搜索引物①打开Primer Premier5，点击File-New-DNA sequence, 出现输入序列窗口，Copy目的序列在输入框内（选择As），此窗口内，序列也可以直接翻译成蛋白。
点击Primer，进入引物窗口。
②此窗口可以链接到“引物搜索”、“引物编辑”以及“搜索结果”选项，点击Search按钮，进入引物搜索框，选择“PCR primers”，“Pairs”，设定搜索区域和引物长度和产物长度。
在Search Parameters里面，可以设定相应参数。
一般若无特殊需要，参数选择默认即可，但产物长度可以适当变化，因为100～200bp的产物电泳跑得较散，所以可以选择 300～500bp.③点击OK，软件即开始自动搜索引物，搜索完成后，会自动跳出结果窗口，搜索结果默认按照评分（Rating）排序，点击其中任一个搜索结果，可以在“引物窗口”中，显示出该引物的综合情况，包括上游引物和下游引物的序列和位置，引物的各种信息等。
④对于引物的序列，可以简单查看一下，避免出现下列情况： 3’不要出现连续的3个碱基相连的情况，比如GGG或 CCC，否则容易引起错配。
此窗口中需要着重查看的包括：Tm 应该在55～70度之间，GC％应该在45％～55％间，上游引物和下游引物的Tm值最好不要相差太多，大概在2度以下较好。
降钙素基因相关肽
1 CGRP的组成和影响因素
降钙素基因相关肽是目前已知在体内作用最强的扩张血管活性多肽，与降钙素（Calcitonin,Cal）来自一个共同的基因。1983年，Rosenfeld等首次应用DNA重组技术在小鼠甲状腺髓样癌C细胞中发现CGRP。1984年，Morris等证实在人体中有GCRP，经小鼠Cal基因克隆证实，Cal和CGRP具有相同的基因片段。在人体，Cal/CGRP基因均位于于11号染色体短臂上，由6个外显子和5个内含子组成。按结构可分为CGRPα和CGRPβ两类。CGRP由37个氨基酸组成，多肽的1、7位氨基酸以二硫键相连，C端为苯丙氨基酸残基。人（h）和大鼠（r）CGRP有4个氨基酸不同，hCGRPα和hCGRPβ有3个氨基酸不同，rCGRPα和rCGRPβ有一个氨基酸不一致。CGRP肽链C端与受体识别有关，而肽链的N端二硫键与生物活性有关。
关键词 降钙素基因的相关肽；内皮素-1；淋巴细胞
近年研究表明，血管内皮细胞和支配血管的神经末梢，在体内可以产生多种血管活性物质，它们在全身血压、局部血流灌注及细胞增殖等调控中具有重要意义。本文对近年来降钙素基因相关肽（Calcitonin gene related peptide,CGRP）拮抗ET-1和免疫调节等作用作一综述。
摘要 降钙素基因相关肽(CGRP)是由降钙素Cal/CGRP基因表达，是具有强大的扩张血管作用的生物活性多肽。它不仅改善血流动力学，在全身血压、局部血流灌注等调控中具有重要作用，而且具有拮抗内皮素-1（ET-1）的血管收缩效应，调节T、B淋巴细胞功能，并可能参与了内毒素休克和细胞凋亡的发病机制。
用放射配基结合实验分析小鼠淋巴细胞CGRP受体的功能特征，结果表明125I-[His10]CGRP结合纯化T、B淋巴细胞受体的解离常数Kd，分别是0.807±0.168nmol/L和0.387±0.072nmol/L,ED50=8Pmol/L，此值何以比受体Kd值低得多的原因不清楚。不过，这可能与CGRP延长受体G蛋白调节亚单位作用有关，G蛋白与受体cAMP的产生有关；或者可能与CGRP抑制受体磷酸二酯酶（该酶能反映cAMP的消耗程度）活性有关。另外，经受体竞争试验表明125I-[His10]CGRP与小鼠淋巴细胞CGRP受体结合不能被P物质、Cal或神经肽Y阻断，说明T，B淋巴细胞上存在具有生物效应的高亲和力CGRP受体，这为研究CGRP调节T、B细胞功能提供了依据[10]。
降钙素基因相关肽在缺血和运动预适应中对心肌保护作用的研究
的神经纤维内， 其分布不均匀 ， 心房高于心室， 右心房 高于左心房 ， 心外膜高于心 内膜。在血管 ， 含 Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ 的神 经纤 维 主要 分 布在血 管外 膜和 中层交 界处 ， 末梢
深入 到平 滑肌层 和 血管 内膜 ， 在血管 壁 内形 成 网状 。 在心 血管 系统 中广 泛 分 布着 Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ的 特 异性 受
性剪 接在 不 同组织 中翻译 出不 同的多肽 物质 ， 如在 ห้องสมุดไป่ตู้
状腺翻译 为 降钙 素 ， 而 在 神经 系 统 则 生成 Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ 。
Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ由 ３ ７个 氨基 酸残基 组成 ， 包括 ０ 【 、 Ｂ两 种亚 型 ，
分别 由不同基因编码 ， 两者具有相似的生物活性。其 中Ｏ ｔ — Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ来 源 于 ｃ ｔ ／ ｃ ｇ ｒ ｐ基 因选 择 性 剪 接 的 产 物 ， 主要 在 中枢神 经 系 统 或 周 围神 经 系 统 表 达 ， Ｂ — Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ 在１ １ 号染色体短臂上。人和鼠的 Ｃ Ｇ Ｒ Ｐ均含有 Ｏ ｔ 、 Ｂ
反复再灌注会加重心肌损伤的看法 ， 人们一直在寻找 Ｉ Ｐ的机制和触发方法 ， 为临床治疗冠心病提供参考 ， 目前 已有药物预适应、 温度预适应和 Ｉ Ｐ等。短期 大 强度 的运 动 会 造 成 心肌 的 相 对 缺 血 ， 也 会 产 生 类 似
Ｉ Ｐ样 的 保 护 心肌 的作 用 即 运动 预适 应 （ ｅ ｘ ｅ ｒ ｃ ｉ ｓ ｅ ｐ ｒ ｅ — ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ， Ｅ Ｐ ） ， 这 已得 到 国内外学 者 的认 同。Ｉ Ｐ对
自１ ９ ８ ６年 发 现 缺 血 预 适 应 （ ｉ ｓ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ｐ ｒ ｅ ｃ ｏ ｎ ｄ ｉ — ｔ ｉ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ， Ｉ Ｐ ） 以来 ， 改变 了人 们一 直 认 为 的反 复 缺 血 和
CGRP神经纤维在不同穴区的分布_崔晶晶景向红
CGRP神经纤维在不同穴区的分布崔晶晶,吴美玲,徐东升,景向红,白万柱(中国中医科学院针灸研究所,北京100700)【摘要】目的研究降钙素基因相关肽(CGRP)神经纤维在大鼠不同穴区局部组织中的分布特征。
方法大鼠经心脏灌流后取下“内庭”、“足三里”、“伏兔”穴区局部组织,制成20 μm厚组织切片,经CGRP荧光免疫组织化学方法染色后,用鬼笔环肽和核酸特异性荧光染料DAPI进行组织化学复染,再使用共聚焦显微镜进行观察和记录。
结果在“内庭”、“足三里”、“伏兔”穴区局部组织中看到CGRP阳性神经纤维分布在真皮和皮下组织,主要集中在血管样结构周围,其数量以“内庭”穴区居多、“足三里”和“伏兔”穴区依次减少。
结论本研究表明CGRP阳性神经纤维是穴区局部组织中的重要成分,其数量从肢体远端穴区到近端穴区依次减少。
这一形态学结果提示CGRP阳性神经纤维可能在针灸始动环节中发挥局部作用,并且针刺肢体远端的穴位可能获得更强的针感。
【关键词】穴位;降钙素基因相关肽;鬼笔环肽;神经纤维The Distribution of CGRP Nerves in Different Acupoints CUI Jing-jing, WU Mei-ling, XU Dong-sheng, JING Xiang-hong, BAI Wan-zhu. Institute of Acu-moxibustion, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China【Abstract】Objective To investigate the distribution of calcitonin gene related peptide (CGRP) nerve fibers in local tissues of different acupoints in the rats. Methods The local tissues of acupoints “Neiting”(ST 44), “Zusanli” (ST 36) and “Futu” (ST 32) were dissected from the rat that was perfused through the heart, cut at the thickness of 20 μm, and then the sections were st ained using CGRP fluorescent immunohistochemical method, and further stained with phalliodin and DAPI. After that, the samples were observed and recorded with a laser confocal microscope. Results CGRP positive nerve fibers were detected in the dermis and subcutaneous layers of local tissues of acupoints ST 44, ST 36 and ST 32, in which CGRP positive nerve fibers mainly concentrated around the vessel-like structure. The number of CGRP positive nerve fibers were observed mostly in area of ST 44, and reduced in those of ST 36 and ST 3 2 in turn. Conclusion Our findings demonstrate that CGRP nerve fiber is an important element in local tissues of different acupoints, and the number of CGRP nerve fibers decreases from the distal acupoint to the proximal acupoint on the limb. These morphological evidences imply that CGRP nerve fibers may play a local role in the initial step of acupuncture, meanwhile, the more distal location on the limb acupoint is, the more sensitive the acupoint is to acupuncture stimulation.【Key words】Acupoint; Calcitonin gene related peptide (CGRP); Phalliodin; Nerve fiber【中图分类号】R2-03 【文献标志码】 A穴区结构中的组织成分是针灸发挥效应的物质基础[1-2]。
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运动心脏重塑后降钙素基因相关肽的特征研究1潘珊珊，潘孝贵，孙晓娟上海体育学院运动科学学院，上海（200438）E-mail：panshanshan@摘要：为系统研究运动心脏降钙素基因相关肽（CGRP）释放、储备、合成和基因表达特征，雄性SD大鼠分为耐力训练组（E组）和对照组（C组）。
E组经10周跑台训练建立运动心脏动物模型48 h后，各组抽取半数动物进行力竭运动。
酶联免疫法测量血清CGRP 含量，放射免疫法测量心肌CGRP含量，免疫组织化学法和实时荧光定量PCR分别检测背根神经节CGRP免疫反应和mRNA表达。
结果表明：（1）E组血清CGRP、心肌CGRP含量和背根神经节CGRP免疫反应显著增加，但基因表达显著降低。
（2）与C组显著不同，E组力竭运动后血清CGRP显著提高，心肌含量减少，基因表达轻度上调。
因此，运动心脏重塑后CGRP合成、储备和分泌增强，但基因表达下调。
力竭运动时运动心脏CGRP基因表达稳定，释放能力强。
关键词：耐力训练，降钙素基因相关肽，心脏重塑，大鼠，动物实验中图分类号：G804 文献标识码：A1. 引言运动心脏的形成不仅仅是由于血流动力学超负荷导致的心肌细胞体积增大及相应亚细胞结构改变的简单过程，而是在神经-体液调节下，一系列的代谢、结构、功能诸方面的重建过程[1]。
心脏神经支配研究[2]表明，心脏不仅存在着胆碱能神经和肾上腺素能神经，还存在着丰富的肽能神经。
降钙素基因相关肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）是肽能神经末梢释放的重要递质之一，是目前已知最强的舒血管活性物质，是心脏重塑的重要调节物质[3]。
经长期的耐力训练后，心脏和血液CGRP显著升高，提示CGRP可能参与运动诱导的心脏重塑。
目前，运动与CGRP的研究主要集中在心脏和血液CGRP含量，这些研究结果不能全面和系统地反映运动对CGRP的影响，而且对CGRP合成及CGRP mRNA 表达的主要部位－背根神经节（DRG）的研究鲜有报道。
本研究在运动心脏动物模型的基础上，应用酶联免疫、免疫组织化学、放射免疫、荧光定量PCR等技术，对运动心脏CGRP 的释放、储存、合成及基因表达进行系统的研究，以探讨CGRP在运动心脏适应性重塑过程中的作用，为阐明运动心脏重塑的调节机制提供更新的理论和实验支持。
2. 实验对象与方法2.1 运动心脏动物模型的建立健康雄性SD大鼠（上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供），体重205±12 g。
随机分为耐力训练组(E组，n=33)，对照组(C组，n=33)，常规分笼喂养，室温22°±2 ℃，湿度45%±10%，光照12 h/d，标准啮齿类饲料饲养，自由饮食。
E组按照Powers[4]方案建立运动心脏动物模型。
动物跑台为DSPT-202型动物跑台（中国杭州段氏制造）。
2.2 力竭运动干预建模成功48 h后，各组随机抽取半数动物进行连续3d的力竭性运动，以观察运动心1本课题得到教育部高等学校博士学科点专项科研基金资助课题（20040277001）和上海市教育委员会科研项目（07ZZ119）的资助。
脏CGRP的反应。
动物5 min热身后，逐渐增加跑台坡度至6°，速度至30 m/min，然后维持在该运动强度，直至力竭。
力竭标准为连续10次以上滞留在跑道的后段，光电声刺激无效[5]。
2.3 取材与测试力竭运动后即刻，所有大鼠戊巴比妥钠麻醉动物（40 mg/kg，腹腔注射），腹主动脉取血，静置后取血清，－20 ℃保存。
取血后，部分大鼠经左心室灌注固定，制备DRG常规石蜡切片。
其余大鼠迅速取心脏和胸腰段DRG 8只，液氮保存，转-70℃低温冰箱保存。
酶联免疫法(ELISA)测定血清CGRP浓度（试剂盒由Cayman USA提供）。
基本步骤：用洗涤缓冲液洗板5次；倒立滴定板，甩去液体；按照预先设计的规格加标准品和样品100µl；每孔加显色剂100µl乙酰胆碱酶试剂，4℃避光孵育24小时；翻转滴定板，轻轻甩去液体，洗涤缓冲液洗3次；每孔加Ellman氏试剂200µl，暗室，室温振荡60分钟；置酶标仪上，410 nm读数，自动打印结果；根据设计好的程序或标准曲线，推算样本中CGRP 含量。
仪器为680型酶标仪（美国Bio-Rad伯乐公司）。
放射免疫法（非平衡法）测定心室肌CGRP含量（试剂盒由解放军总医院科技开发中心放射免疫研究所提供）。
取-70℃冷冻的左心室心肌组织100~200 mg，放入0.1N1ml冰醋酸研磨，在电动匀浆器10000 r/min匀浆2-3次，4 ℃，3000 rpm低温离心15min，取上清-20℃保存。
测定时用0.1M的PBS 5倍稀释，以调节pH值。
按要求依次加样后，充分混匀，室温放置-20min后，4℃3500rpm离心25min，取上清液，在γ计数器上测定CPM数。
通过预先编制的程序，直接给出CGRP浓度。
γ计数器为SN-697全自动双探头放射免疫γ计数器（上海中科核电子仪器厂）。
免疫组织化学法（SABC法）观察背根神经节CGRP免疫反应产物的分布和表达（CGRP primary antibody由Santa Cruz公司提供，SABC试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司），严格按相应试剂盒说明书进行。
主要步骤为：切片脱蜡至水；3％H2O2 室温孵育10 min，阻断内源性过氧化物酶活性；滴加复合消化液室温湿盒孵育10 min，暴露抗原；滴加正常兔血清封闭液室温湿盒孵育20 min，减少非特异性背景染色；滴加一抗（1:400山羊抗人CGRP）4℃湿盒内孵育48h；滴加生物素化的二抗（兔抗山羊Ig G），37℃湿盒内孵育20 min；加试剂SABC 37℃湿盒内孵育20 min；DAB显色；脱水，透明，封片。
应用计算机图像分析系统（Image-pro Plus，USA Media Cybernetics）测量CGRP免疫反应表达面积、平均光密度。
随机选取5张心脏和背根神经节CGRP免疫组化阳性反应切片，在同一放大倍数下，每张切片在光镜下随机选5个视野，每组共测25个视野。
荧光定量RT-PCR法检测背根神经节CGRP mRNA表达。
背根神经节液氮研磨，总RNA 提取(异硫氰酸胍法)，逆转录后，进行荧光定量PCR。
根据GenBank进行引物设计，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。
CGRP和GAPGH（内参基因）引物序列和扩增片段分别为：CGRP（5’-3’），上游GGA GCA GGA GGA GGA ACA GG，下游 CTT CAG AGC CCA CAT TGG TG，扩增片段长度为161 bp；GAPGH（5’-3’），上游TGC TGA GTA TGT CGT GGA GTC，下游TGC TGA CAA TCT TGA GGG AG，扩增片段长度为173bp。
反应体系25µl，其中含5×RT-PCR Buffer5.0µl，250mMMg2+0.3µl，10mM dNTP0.75µl，10µM上游引物0.5µl，10µM下游引物0.5 µl，25×EvaGreen1.0µl，10-3×Calibration1.0µl，5U/µl HS-Ex- Taq0.25µl，ddH2O 14.7 µl，模板(cDNA)1.0µl。
反应程序：95℃90s，95℃，5s，58℃30s ，83℃10s，第2步和第3步循环40次。
每个循环在56℃监测荧光信号的强度。
定量PCR检测在LightCycler System荧光PCR仪（RG-3000, Roche Diagnostics, Switzerland）上进行。
2.4 统计处理采用SPSS 11.5统计软件分析。
独立样本t检验，结果以表示，P<0.05为显著性水平，P<0.01为高度显著性水平。
3. 实验结果3.1 心脏重量与心脏/体重比10周耐力训练后，C组体重增加明显，与E组比较，有高度显著性差异（P<0.01），但心脏重量没有明显差异。
心脏重量与体重比(也称心系数)是反映心肌肥大的常用参数。
本研究结果表明，E组心系数显著大于C组(P＝0.01)，升高了9.67％（见表1），提示运动心脏模型建立成功。
表1 大鼠体重、心脏重量和心系数结果组别n 体重（g）心脏重量（mg）心系数（mg/g）C组33 476.02±37.24 1775.00±208.44 3.93±0.41E组33 401.97±42.57** 1666.22±275.90 4.31±0.71 **∗∗与C组比较P＜0.013.2 力竭运动前后血清和心肌CGRP含量由表2可知，与C比较，安静状态下E组血清和心室肌组织CGRP浓度显著升高（P<0.05或0.01）。
力竭运动后，C组血清和心室肌CGRP含量没有显著变化，而E组血清CGRP 含量显著提高（P<0.01），心室肌CGRP含量显著降低（P<0.05）。
表2 力竭运动前后血清和心肌CGRP含量的变化组别血清CGRP含量（pg/ml）心肌CGRP含量(pg/mgprot)力竭运动前88.83±13.01（n=16）75.69±40.69(n=7)C力竭运动后106.48±9.48（n=17）116.96±42.38(n=8)力竭运动前117.45±11.92 ＃（n=16）238.76±144.78＃＃(n=8)E力竭运动后 238.36±26.01 ＃＃∗∗（n=17）137.37±82.60∗(n=8)＃与C组比较, P＜0.05, ＃＃P＜0.01; ∗与力竭运动前比较, P＜0.05, ∗∗P＜0.013.3 力竭运动前后背根神经节CGRP免疫反应阳性产物分布及表达的变化胸腰段DRG免疫组织化学染色结果表明，CGRP免疫阳性产物为棕褐色，大多分布在胞浆内，在细胞核周围区较多，在许多神经纤维内可以看到呈串珠状分布的CGRP颗粒。
呈CGRP免疫阳性反应的神经元主要中、小神经元（图1）。
以PBS代替一抗，未见CGRP 阳性神经元，也无CGRP免疫阳性反应物。
C组背根神经节CGRP免疫反应阳性神经元数量较少，大部分淡染，偶见强染色（图1 A）。
E组大鼠背根神经节CGRP免疫反应阳性神经元数量显著多于C 组，深染（图1 B ）。